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TINCIONES Y COLORANTES

La observacin y examen de las bacterias se puede


realizar de dos maneras fundamentales:
1. Observando los microorganismos vivos sin teir
Deteccin
Movilidad
Observar cambios citolgicos
2. Observando las clulas fijadas, teidas con colorantes

Las bacterias vivas, en suspensin acuosa tienen


propiedades pticas similares a las del agua, y por
lo tanto, son difciles de observar con el microscopio
de campo claro
La principal dificultad es la falta de contraste entre
la clula y el medio que la rodea.
El modo ms simple de aumentar el contraste
es la utilizacin de colorantes.

Para muchos fines es preferible evitar la coloracin


debido a que frecuentemente altera y mata a las
clulas.
La coloracin de las bacterias tiene como fines:
* Aumentar el contraste: distincin de forma y tamao
* Diferenciar grupos bacterianos por su reaccin frente
a determinados colorantes
* Revelar la presencia de distintas estructuras internas

Mecanismos de coloracin:
La coloracin celular y tejidos son una combinacin
de fenmenos fsicos y qumicos
Fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis
La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos
y viceversa indica que hay reaccin qumica:
intercambio inico

Colorantes
Compuestos orgnicos que contienen radicales
cromforos (nitrito y azo) y anxocromos (hidroxilo
y amino)
Cromforos: imparten la propiedad cromgena
Anxocromos: permiten que el colorante se una
con el tejido

Los colorantes utilizados son sales en las que el


anin o el catin es el responsable del color.

La clula bacteriana tiene una dbil carga negativa


cuando el medio externo tiene un pH cercano a la
neutralidad.

Frotis
Impronta

Si se desea simplemente aumentar el contraste


de las clulas para microscopa, son suficientes
los procedimientos que usan un solo colorante
(bsico: azul de metileno, cristal violeta, safranina
o fucsina fenicada) llamados de Tincin Simple.
Cuando a una preparacin bacteriana se le aplica
un colorante cido tal como eosina o nigrosina, este
no se une a las clulas cargadas negativamente,
pero si se deposita alrededor de ellas quedando as
un fondo coloreado donde contrastan las clulas
incoloras. Tincin Negativa.

Mtodos que no tien de igual modo todas las


clulas, es el proceso denominado
Tincin Diferencial.
Consta de una tincin primaria y una tincin de
contraste (otro colorante).

Tincin de Gram
Basndose en su reaccin a la tincin, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos: grampositivas
y gramnegativas
Tiene gran importancia en taxonoma bacteriana ya
que indica diferencias fundamentales de la pared
celular de las distintas bacterias.

Puede proporcionar tres tipos de informacin til:


Dirige la identificacin de las especies
Seleccin emprica de antibiticos
En ciertas muestras clnicas la observacin de
algunos tipos morfolgicos es prcticamente
diagnstica

Tincin de Gram
Gram Positivas

Cristal Violeta
(1 min)

Clulas violeta

Gram Negativas
Clulas violeta
Se forma el complejo
CV-I. Continan violeta

Yodo lugol
(1 min)

Se forma el complejo
CV-I. Continan violeta

Alcohol
(30 seg)

Se deshidratan las paredes


celulares. Se contraen los poros.
Disminuye la permeabilidad. El
complejo CV-I no sale de las
clulas que continan teidas de
color violeta.

Eliminacin por extraccin de


grasas de las paredes celulares.
Aumenta la porosidad. El
complejo CV-I se separa de la
clula.

Safranina
(1 min)

Clulas no decoloradas; quedan


teidas de color violeta.

Clulas decoloradas; se tien de


color rojo.

Para explicar el mecanismo de tincin de Gram


se han propuesto varias hiptesis fundadas en
la naturaleza qumica de las paredes celulares
Pared Gram+
Capa densa y uniforme de 200 a 800
Compuesta por: cidos teicoicos, polisacridos,
protenas (pocas veces), glucopptidos (50% del
peso seco)

Pared Gram Capa interna delgada 20 a 30 (cubierta por capas


externas de densidad menor)
Compuesta por: lipopolisacridos, lipoprotenas, protenas
glucopptidos (10% del peso seco)

Tincin Acido-Resistente
Tincin diferencial que demuestra la resistencia
de la clula a ser decolorada por los lcalis y
alcohol.
Propiedad cido-resistente est relacionada con
su alto contenido en lpidos.
Teir el frotis en caliente, decolorar con alcohol
cido (no se decoloran los cidos resistentes),
teir con colorante de contraste.

Coloracin de estructuras
Esporas
Flagelos
Cpsula