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EFECTO DE DOS DILUTORES Y CINCO CONCENTRACIONES DE EXTRACTO DE

PIA (Ananas commosus) SOBRE LA FILANCIA Y LAS CARACTERSTICAS


MICROSCPICAS DEL SEMEN DE LLAMAS (Lama glama).
Effect of two expanders and five concentration of pineapples (Ananas commosus) on the
filancy and the microscopic characteristics of llama (Lama glama) semen.
Delgado, P.A. *1 Choque, E. 2
1

Profesor Investigador Reproduccin Animal Medicina Veterinaria y Zootecnia-Universidad


Pblica de El Alto. Bolivia.
2
Investigador Independiente, trabajo de tesis en Reproduccin Animal INZ-T-UCB.

RESUMEN
Uno de los principales problemas en la manipulacin y conservacin del semen de llama y
alpaca es la alta viscosidad (filancia) del plasma seminal, que impide el aprovechamiento del
material gentico de los animales de buenas caractersticas productivas. Por esta razn se han
planteado los siguientes objetivos: Determinar el efecto de dos dilutores y cinco concentraciones
de extracto pia sobre la filancia del semen, la motilidad y la vitalidad de espermatozoides de
llamas. El trabajo de investigacin se realiz en los laboratorios de la carrera de Ingeniera
Zootcnica de la UAC-T-UCB Se realiz la coleccin de 120 muestras de semen de 12 llamas,
valorndose la filancia con un filanciometro. La exposicin del semen de llama a 75, 80 y 100
% de extracto de pia en dos dilutores, muestra un tiempo promedio de eliminacin de la filancia
del semen de llama de 50 segundos. La utilizacin de 75 y 80% de extracto de pia ayuda a que
los espermatozoides logren una motilidad de superior a 84% y un porcentaje de espermatozoides
vivos mayor al 90% superior a los otros tratamientos (P<0.05) tanto en el dilutor Tris y Citrato
respectivamente, Una exposicin a 100% de extracto de pia reduce la motilidad a 79.79% y la
vitalidad a 87,4%. Esto puede deberse a la excesiva cantidad de bromelina que se pone en
contacto con los espermatozoides. Las concentraciones de 50, 75, 80, y 100% de jugo de pia
son efectivas en liberar completamente a los espermatozoides de la viscosidad seminal de llama.
Usando extracto de pia puro (100%) pareciera afectar negativamente a la motilidad y la
cantidad de espermatozides vivos.
Palabras clave: Filancia, llamas, viscosidad seminal, motilidad y vitalidad espermtica.
______
*1Responsable de Investigacin.
E-mail address *1: pedro.delgado@fulbrightmail.org
1.

INTRODUCCIN

Uno de los principales problemas en la manipulacin y conservacin del semen de llama y


alpaca es la alta viscosidad (filancia) del plasma seminal, que impide el aprovechamiento del
material gentico de los animales de buenas caractersticas productivas, lo que impide
completamente la utilizacin de programas de inseminacin artificial para el mejoramiento
1

gentico. Por lo que se han planteado: Determinar el efecto de dos dilutores y cinco
concentraciones de extracto pia sobre la filancia del semen, sobre la motilidad y la vitalidad de
espermatozoides de llamas.
2.

MATERIALES Y MTODOS

El trabajo de campo y laboratorio se realiz en los previos de la Carrera de Zootecnia de la


UAC-T-UCB ubicado a 72 km de la ciudad de La Paz, entre las coordenadas 17 35 a 18 17
de Latitud Sur y 68 20 a 69 08 de Longitud Oeste y a una altura de 3854 msnm. Se utilizaron
12 llamas machos mayores a 3 a 4 aos de edad de la raza Q`ara y 2 llamas hembras vacas. Se
prepar los dilutores de acuerdo a Delgado (2010).
2.1. Preparacin de tratamientos de extracto de pia y dilutor
Para obtener el jugo de pia, se quit la cascara, luego fueron cortados en lonjas, los trozos de
pias fueron colocados en un vaso precipitado de 250 mL para colectar jugo de pia,
posteriormente este jugo fue filtrado con un microfiltro de 0.2-0.8 m para ser almacenando en
recipientes cerrados de 20 mL en el interior del refrigerador a 5 C. El semen de llama se
colecto ala tcnica desarrollada por Quispe y Delgado (2011).
Tabla 2. Niveles de concentracin de extracto de pia y dilutor
Extracto de Pia
Dilutor Tris
Total (L)
Concentraciones (%)
(L)
Citrato (L)
25
125
375
500
50
250
250
500
75
350
150
500
80
400
100
500
100
500
500

Fuente. Readecuacin en base a bibliografa y apuntes de Delgado 2010.


Se midi el efecto de cinco concentraciones (25%, 50%, 75%, 80%, 100%) de extracto de pia
y los dos dilutores (Tris y Citrato) sobre la: Reduccin de la filancia a los 0seg, 10 seg, 25 seg,
50 seg y 1 min, utilizando para esta medicin un filanciometro diseado por Delgado (2010), el
porcentaje de motilidad y de espermatozoides vivos. Para el anlisis de los datos obtenidos se
us el diseo completamente al azar con arregl bifactorial.
3.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

3.1. Determinacin del efecto de dilutores y concentraciones de extracto de pia sobre la


filancia del semen de llama
Los resultados anlisis de varianza para 0, 25, 50 y 60 seg presentan diferencias altamente
significativas (P<0.001) para el factor concentraciones, mientras que el factor dilutor no
present diferencias significativas (P>0.05), tampoco entre la interaccin de estos factores
(P>0.05), los datos presentaron un coeficiente de variacin menor al 18% en todos los anlisis.
2

Se determin que a partir de 75 % de concentracin de extracto de pia, elimina la filancia de


la plasma seminal del semen de llama, en un tiempo promedio de 50 segundos,
Mardonez y Delgado (2012), mencionan que la bromelina disgrega la viscosidad (filancia)
semen de llama en un promedio de 5 minutos, ms rpido estadsticamente que las dems
enzimas (colagelasa, ficina, pptidas y papana) (7 minutos en promedio).
Bravo (2000), obtuvo la destruccin de la viscosidad en alpacas y llamas en un 100 y 99, 89 y
59, 88 y 36, 55 y 68%para colagenasa, fibrinolisina, hialuronidasa y tripsina respectivamente,
una vez que las muestras se pusieron en contacto con las enzimas disminuye la viscosidad y el
efecto es irreversible.
Con el 75% de jugo de pia se logr reducir rpidamente la filancia del semen. La bromelina
tiene la propiedad de catalizar o hidrolizar cada enlace peptdico, generando una molcula de
agua por cada enlace roto (Wiseman, 1985). La accin de una enzima como la bromelina se
potencia si la temperatura y el pH son ptimos, lo cual puede haber ocurrido en la presente
investigacin pues el semen estaba a un promedio de 38 C. Eliecer (2003) en su investigacin
determina que la bromelina es una glicoprotena del grupo de las cistein-proteasa, acta de
preferencia sobre los aminocidos bsicos y aromticos de las protenas.
3.1.1.

Determinacin del efecto de dos dilutores y cinco concentraciones de extracto


de pia sobre la motilidad espermtica

El porcentaje de motilidad espermtica fue estadsticamente diferente (P=0.0013), entre las


cinco concentraciones de extracto de pia, sin embargo el factor dilutores y la interaccin entre
concentraciones y dilutores no presentaron diferencias significativas (P=0.3700 y P=0,8844
respectivamente), el coeficiente de variacin fue de 6,15 %. La concentracin de 75 % de
extracto de pia, utilizando el dilutor Tris, ayudo a los espermatozoides a presentar un 86 % de
motilidad espermtica. La comparacion de promedios de Duncan, nos muestra que la utilizacion
de 100 % de extracto de pia sin diluir de alguna manera tuvo un efecto negativo sobre la
motilidad espermatica (79,79 %). Concentraciones superiores a 75 parecieran afectar
negativamente a la motilidad espermtica.
Mardonez y Delgado (2011), mencionan que en la motilidad espermtica por efecto de seis
enzimas fue de 90, 89 y 87 % para bromelina, papaina y proteasa respectivamente, datos que
fueron superiores a la motilidad presentada por el uso de las otras tres enzimas (86, 85 y 84 %
para la ficina, colagenasa y peptidasa respectivamente). Blanco (2009), encontr que los
espermatozoides sometidos con enzimas papana, proteasa, colagenasa, peptidasa y peptidasa 5
mg, presentaron una motilidad de 97.75, 97.36, 96.61, 94.57, y 75.21 % respectivamente.
Bravo (1999), determin una media de la motilidad del semen en alpacas de 68.2 % y 66.6 %
en llamas. De acuerdo a este autor la colagenasa no influye significativamente en la motilidad
del semen en cambio fibrinolisina, hialuronidasa y tripsina tuvieron un efecto negativo
significativo (P< 0.05). Tambin se menciona que en llamas y alpacas los espermatozoides no
muestran movimientos progresivos, incluso despus de los cinco minutos de adicin de enzimas.
3

3.1.2. Efecto de dos dilutores y cinco concentraciones de extracto de pia sobre el


porcentaje de espermatozoides vivos de llama.
El porcentaje de vitalidad espermtica fue estadsticamente diferente (P=0.0043), entre las cinco
concentraciones de extracto de pia, pero el factor dilutores y la interaccin entre
concentraciones y dilutores no presentaron diferencias significativas (P=0.2490 y P=0,7269
respectivamente), el coeficiente de variacin fue de 5,23 %. Otra vez se nota que la
concentracin de 75 % de extracto de pia, utilizando el dilutor Tris, ayudo a los
espermatozoides a presentar un 92,1 % de motilidad espermtica. La comparacion de promedios
de Duncan, nos muestra que la utilizacion de 100 % de extracto de pia sin diluir de alguna
manera tuvo un efecto negativo sobre el porcentaje de espermatozoides vivos (87,4 %).
Bravo (2000), menciona el porcentaje de espermatozoides vivos fue menor (P<0.05) en el semen
tratado con colagenasa, fibrinolisina, hialuronidasa y la tripsina. La media de espermatozoides
vivos fue 74.9% en alpacas y 73.3 % en llamas. Blanco (2009), en su investigacin con efecto
de enzimas en la vitalidad present resultados en papana, proteasa, colagenasa y peptidasa y
peptidasa 5 mg. (98,20, 98,61, 97,16, 88,76, y 72,47% respectivamente) los datos encontrados
en el presente trabajo de investigacin estn dentro de los rangos mencionados por este autor.
El alto porcentaje de espermatozoides vivos en las concentraciones de 75 y 80 % de extracto de
pia y el dilutor Tris, posiblemente se dan porque en el estracto de pia la enzima bromelina no
daa a los espermatozoides, solo acta sobre las mucoproteinas rompiendo enlaces de pptidos
y adems contiene azucares que hace que exista mayor cantidad de espermatozoides vivos.
4.

CONCLUSIONES

Las concentracin de 50, 75, 80, y 100% de jugo de pia son efectivas en liberar completamente
a los espermatozoides de la viscosidad seminal de llama. Usando extracto de pia 75% se logra
liberar totalmente a los espermatozoides de la filancia seminal en 25 a 50 segundos. La
disgregacin total de la filancia del semen de llama con la concentracin desde 50 a 75% de
extracto de pia combinada con el dilutor TRIS favorece la motilidad espermtica hasta 86% y
un 92,1% de espermas vivos.
5.

BIBLIOGRAFA

Bravo, P.W., Ccallo, M., Garnica, J., 2000. The effect of enzymes on semen viscosity en Llamas
and Alpacas. Small Ruminant Research;. 38: 91-95.
Delgado, P., 2010. Manual de Procedimientos de laboratorio para coleccin procesamiento y
cultivo in vitro de gametos. 1ra ed La Paz: INZ-T-UCB.
Quispe, C., Delgado, P., 2011. Rev Inv Zoot. Bolivia. Desarrollo de tres protocolos de coleccin
de semen en llamas (Lama glama) en el departamento de la paz -Tesis de grado Universidad
Catlica Boliviana San Pablo UAC Tiahuanacu.
Mardonez, J., Delgado, P. 2012. Efecto de seis enzimas sobre las caractersticas macro microscpicas en semen de llama (Lama glama). Resumenes VI congreso mundial de
camlidos Chile, 2012.
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