CITOTOXICIDAD DE ALGINATOS DENTALES

PITHON, M. M.; DOS SANTOS, R. L.; MARTINS, F. O. & ROMANOS, M. T. V.

Citotoxicidad de alginatos dentales. Int. J. Odontostomat., 4(3):303-308, 2010.
RESUMEN: El alginato o hidrocoloide irreversible, es uno de los materiales de impresin
ms aceptados y utilizados en odontologa. Sin embargo, algunas substancias existentes
en estos materiales pueden ser txicas. El objetivo de este estudio fue evaluar la
citotoxicidad de los alginatos para aplicaciones dentales. Fueron evaluados 14 alginatos
diferentes: Jeltrate, Jeltrate Plus, Jeltrate Chromatic, Alga Gel, Printer Gel, Ava Gel, New
Print, Kromopan 100, Tropicalgin, Cavex Orthotrace, Hydrogum, Orthoprint, Cavex Color
Change y Qualitygel. Tambin se utilizaron tres grupos de control tambin se utilizaron en
este estudio: grupo control positivo (C+) que consiste en clulas de detergente Tween 80,
el grupo de control negativo (C-) que consiste en PBS, y el grupo de clulas de control
(CC) que consiste de las clulas no expuestas. Despus de la manipulacin de los
materiales de acuerdo a las instrucciones del fabricante, las muestras fueron hechas
mediante el uso de anillos de silicona. A continuacin, las muestras se sumergieron en
medio mnimo esencial de Eagle (MEM) durante 2 minutos, seguido de la eliminacin de
los sobrenadantes y el contacto con los fibroblastos L929. En caso de contacto con el
medio, las clulas fueron incubadas durante 24 horas ms en 100ml de tincin roja neutra
al 0,01%. Las clulas se incubaron nuevamente durante 3 horas para que la tincin pueda
ser absorbida. Despus de este perodo, las clulas fueron fijadas y el recuento de clulas
viables se realiz mediante un espectrofotmetro (BioTek, Winooski, Vermont, EE.UU.) a
la longitud de onda de 492 nm. Los resultados demostraron diferencias estadsticamente
significativas entre los grupos de CC y C- en relacin con los dems (p<0,05). No se
observaron diferencias estadsticas entre los grupos Jeltrate Plus y Hydrogum, entre
Jeltrate y los grupos Jeltrate Chromatic, Printer Gel, Tropicalgin y Qualitygel, y entre
Jeltrate Chromatic y los grupos Alga Gel, Ava Gel, New Print, Kromopan 100, Cavex
Orthotrace, Hydrogum, Orhtoprint y Cavex Color Change. Se puede concluir, con base en
los resultados de este estudio, que todos los materiales de alginato son citotxicos.
PALABRAS CLAVE: citotoxicidad, materiales de impresin dental, tcnicas de cultivo
celular

INTRODUCCION
El alginato es un material de impresin clasificada como un hidrocoloide irreversible fcil
de manejar, permitiendo una buena reproducibilidad detalle adems de ser barato y
cmodo para el paciente (Anusavice, 2005). Por lo tanto, un material tal se utiliza en gran
medida en odontologa. Sin embargo, a pesar de su fcil manipulacin, impresiones
dentales perfectas utilizando alginato no son siempre alcanzadas por los estudiantes sin
experiencia, lo que a menudo requiere procedimientos repetidos (Samuel et al., 1995).
Sin embargo, se sabe que el polvo del alginato puede comprender algunos metales
pesados y partculas de silicio y causar algn riesgo de toxicidad tanto para practicante
y/o paciente. Entre estos metales, se puede citar el plomo, que est presente en los
polvos de alginato a mejorar sus propiedades elsticas en gelificacin a pesar de a veces
ser encontrado como impureza (Braga et al., 2007).
Bsicamente, la intoxicacin con alginato se produce a travs de la inhalacin del polvo
por el paciente y practicante, la ingesta accidental por el paciente, y absorcin por la
mucosa oral en los casos de repetidos procedimientos de impresin (Braga et al., 2005;
Braga et al., 2007; Sydiskis y Gerhardt, 1993).
Durante el procedimiento de impresin, el alginato se deja en estrecho contacto con la
mucosa oral durante aproximadamente 2 minutos, y este tejido es altamente
vascularizado y tiene un gran potencial de absorcin. Por lo tanto, repetidos
procedimientos de impresin pueden causar un cierto grado de la citotoxicidad para el
paciente en funcin de la composicin del material. (Braga et al., 2007; Samuel et al.).
Los alginatos se diferencian entre s de acuerdo con los componentes presentes en su
formulacin. Basndose en esta premisa, el objetivo del presente estudio fue evaluar la
citotoxicidad en cultivos de clulas utilizando diferentes materiales de alginato para la
aplicacin dental y para verificar la hiptesis de que las diferentes formulaciones de
alginato promueven diferentes reacciones celulares.
MATERIAL Y MTODO
Cultivo celular. La lnea celular utilizada para este estudio fue fibroblastos L929 de ratn
obtenidos de la American Coleccin de Cultivos Tipo (TCC, Rockville, MD) y cultivadas en
medio esencial mnimo de Eagle (MEM)(Cultilab, Campinas, So Paulo, Brasil). El cultivo

celular fue suplementado con 2mM de L-glutamina (Sigma, St. Louis, Missouri, EE.UU.),
50 mg / ml de gentamicina (Schering Plough, Kenilworth, Nueva Jersey, EE.UU.), 2.5mg /
ml de fungizona (Bristol-Myers-Squib, Nueva York, EE.UU.), 0,25 mM de solucin de
bicarbonato de sodio (Merck, Darmstadt, Alemania), 10 mM de HEPES (Sigma, St. Louis,
Missouri, EE.UU.), y 10% de suero fetal bovino (FBS) (Cultilab, Campinas, So Paulo,
Brasil), a continuacin, se mantiene a 37 C en 5% de CO2 medio ambiente.
Alginatos estudiados. El total de la muestra consisti en 14 alginatos dentales de
diferentes fabricantes y divididos en 14 grupos de la siguiente manera: Jeltrate (Dentsply,
Petrpolis, Brasil, Lote 971 244), Jeltrate Plus (Dentsply, Petrpolis, Brasil, lote 017484A),
Jeltrate Cromtica (Dentsply, Petrpolis, Brasil, Lote 955 069), Alga Gel (Tecknew, Ro de
Janeiro, Brasil, Lote 08276), Gel de impresora (Euronda, Mag, Brasil, Lote 012 \ 06), Ava
Gel (Dentsply, Petrpolis, Brasil, lote 024471A), New Print (Tecknew, Ro de Janeiro,
Brasil, Lote 08063), Kromopan 100 (Lascoal, Firenze, ltalia, Lot 0157372182.105),
Tropicalgin (Zhermack, Rovigo, ltalia, Lot C302240), Cavex Orthotrace (Cavex,
Neoderland, Lote 080 910), Hydrogum (Zhermack, Rovigo, ltalia, Lot C302025), Orthoprint
(Zhermack, Rovigo, ltalia, Lote 72251), Cavex color Cambio (Cavex, Neoderland, Lote
080715), y Qualitygel (Calidad Dent, So Jos dos Campos, Lot 654.338).
Preparacin de la muestra. Para la preparacin de la muestra, el material fue
manipulado durante 1 minuto utilizando caucho cuenco y una esptula de plstico de
acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Despus de la homogeneizacin
adecuada, el alginato se insert en los anillos de silicio (4mm de dimetro x 4mm de
altura) hasta completar la gelificacin (Fig. 1).
Controles. Para verificar la respuesta de las clulas a la extremas situaciones, otros 3
grupos se incluyeron en el estudio: Grupo CC (control de clulas), que consiste en clulas
no expuestas a cualquier material; Grupo C + (control positivo), que consiste en Tween 80
(polioxietileno-20-sorbitn); y el Grupo C- (control negativo), solucin de PBS que consiste
(Solucin salina tamponada con fosfato) en contacto con las clulas.
La evaluacin de la citotoxicidad de los Materiales. Los materiales fueron esterilizados
previamente mediante la exposicin a la luz ultravioleta (Labconco, Kansas, Missouri,
EE.UU.) durante 1 hora. Seguido, tres muestras de cada material se colocaron en placas
de 24 pocillos que contienen MEM Eagles (Cultilab, Campinas, So Paulo, Brasil). La
cultura medio se reemplaz con medio fresco cada 24 horas, y los sobrenadantes se

recogieron despus de 24, 48, 72, y 168 horas (7 das) para el anlisis de la toxicidad a
clulas L929. Los sobrenadantes se colocan en un 96-as la placa que contiene una sola
capa de clulas L929 y despus se incubaron a 37C durante 24 horas en 5% de CO2
medio ambiente. Despus del perodo de incubacin, la viabilidad celular se determin
usando la tcnica de "tinte de absorcin" descrito por Neyndorff et al. (1990), que fue
ligeramente modificado. Despus del perodo de incubacin de 24 horas, 100 l de 0,01%
de solucin de tincin de rojo neutro (Sigma, St. Louis, Missouri, EE.UU.) se aadi al
medio dentro de cada pocillo de las placas, y stas se incubaron durante 3 horas a 37C
para permitir que el colorante penetre en el saln las clulas. Despus de este perodo,
las clulas se fijaron utilizando 100 l de la solucin de formaldehdo al 4% (Reagen, Ro
de Janeiro, Brasil)) en PBS (NaCl 130 mM; 2 mM KCl; 6 mM Na 2HPO42H2O; 1 mM
K2HPO4, pH=7,2) durante 5 minutos. A continuacin, 100 l de solucin de cido actico al
1% (VETEC, Ro de Janeiro, Brasil) con 50% de metanol (Reagen, Ro de Janeiro, Brasil)
se aadieron al medio para eliminar el colorante. La absorcin se midi despus de 20
minutos utilizando un espectrofotmetro (BioTek, Winooski, Vermont, EE.UU.) a una
longitud de onda de 492 nm.
Anlisis estadstico. El anlisis estadstico se realizado mediante el uso de un software
SPSS v.13.0 (SPSS Inc., Chicago, EE.UU.), y medios y las desviaciones estndar se
calcularon para el anlisis estadstico descriptivo. Los valores para la cantidad de clulas
viables fueron sometidos a anlisis de la varianza (ANOVA) para determinar si encontrar
diferencias significativas entre los grupos, y prueba de Tukey se aplic a partir de
entonces.
Fig 1. Las muestras preparadas antes de la evaluacin de citotoxicidad

RESULTADOS
Los resultados no mostraron diferencias estadsticas entre Jeltrate Plus y Hydrogum,
entre Jeltrate y Jeltrate cromtica, Grupos Gel, Tropicalgin y Qualitygel impresora, y entre
Jeltrate cromtica y Alga Gel, Ava Gel, New Print, Kromopan 100, Cavex Orthotrace,
Hydrogum, Orhtoprint y Cavex cambio de color grupos (Tabla I).
Por otro lado, hubo diferencias estadsticas entre los grupos CC y C- en relacin a otros.
Con respecto a la viabilidad celular, Jeltrate Plus era el material que muestra el porcentaje
ms alto de clulas viables en comparacin con otros grupos, seguido por Hydrogum
(51,1%), Orthoprint (48,4%), Nueva Impresin (46,2%), Kromopan 100 (44,2%), Cavex
Orthotrace (44%), Cavex cambio de color (43,9%), Ava Gel (42,8%), Alga Gel (41,6%),
Jeltrate Cromtico (38%), Gel de impresora (30,4%), Tropicalgin (27,1%), Jeltrate (26,3%),
y Qualitygel (25%).
Tabla I. Anlisis estadstico con medias y desviaciones estndar para los grupos
estudiados.

M. Cel = valores medios de la cantidad de clulas viables; SD = Estndar Desviacin;

Clulas viables% V.C = porcentuales; Stat = Mismas letras significan ninguna diferencia
estadstica.
DISCUSIN
El alginato es, sin duda, uno de los materiales ms aceptados y utilizados en odontologa.
Fabricantes producen un polvo de alginato que contiene varios compuestos para
diferentes objetivos. Sin embargo, muchas sustancias tales como zinc, bario, cadmio,
plomo, silicatos, y fluoruros se aaden a sus formulaciones con el fin de mejorar la fsica,
qumica, y propiedades mecnicas, siendo una causa de preocupacin en trminos de
toxicidad (de Freitas, 1980).
Segn Sydiskis y Gerhardt, la lata alginato afecta la reproduccin de la clula. Es decir,
esta sustancia puede no ser lo suficientemente txico para matar a las clulas, pero
puede inhibir el crecimiento celular, afecta al menos a la funcin normal de las clulas. El
significado clnico de este efecto es que un solo en contacto con el material puede no
causar sntomas clnicos, mientras que los contactos repetidos pueden afectar a la
viabilidad celular y en consecuencia causar retraso alrgica o reaccin txica. Por lo tanto,
el presente trabajo dirigido a evaluar la citotoxicidad de alginatos dentales en celular
cultivadas.
El uso de cultivos celulares ha sido ampliamente empleado como parte de una serie de
pruebas recomendadas para evaluar el comportamiento biolgico de materiales puestos
en contacto con los tejidos humanos (la Estrella, 2005; Jorge et al., 2004; Santos et al.,
2008). En el presente estudio, la citotoxicidad de alginatos dentales se evalu a travs de
pruebas citotxicos realizadas con el ratn fibroblastos L929 clulas, un mtodo utilizado
en gran medida en varios funciona la evaluacin de la citotoxicidad de materiales para uso
en odontologa (Alcaide et al, 2008;. Donadio et al., 2008; Feizzadeh et al., 2008; Jin et
al., 2008).
La evaluacin de dos minutos adoptada en este estudio se bas en el tiempo mximo en
el que el alginato se deja en contacto con la mucosa oral durante el procedimiento de
impresin, como recomienda el fabricante. Las muestras se mantuvieron en contacto con
el medio de cultivo durante este perodo de 2 minutos, y los sobrenadantes fueron luego
puestos en contacto con las clulas. Las muestras no se colocan directamente sobre las

clulas porque el contacto mecnico entre ellos podra daar las clulas segn lo sugerido
por Costa et al. (2001).
Los resultados obtenidos mostraron que todos materiales de los alginatos son
citotoxicidad en comparacin con el control grupos (CC y C-).
Se encontr que el alginato Jeltrate Plus tiene el mayor porcentaje de clulas viables
(62,6%), mientras Uno Jeltrate el ms bajo (26,3%). Los otros alginatos teniendo
resultados intermedios.
La citotoxicidad de las clulas menor observado en el alginato Jeltrate Plus puede
explicarse por la ausencia de plomo en este material, un hallazgo tambin corroborado
por Samuel et al. (1995), cuando estudiaron los compuestos existentes en alginatos
cuantitativamente

cualitativamente.

Por

el

contrario,

Samuel

et

al.

Fundar

aproximadamente 0,004 mg / g de plomo en el tradicional Jeltrate, que tambin podra ser

un factor que explica la viabilidad celular baja participacin de este material.
Con el fin de evaluar la respuesta de las clulas a extremas situaciones, se incluy un
grupo control positivo (C +) en este estudio para causar dao celular. El material utilizado
en el grupo de control positivo era un agente tensioactivo no inico (Tween), un agente
txico para las membranas biolgicas (Rege et al., 2002), Este tensioactivo no inico
consiste en steres de cidos grasos de sorbitol de polietileno, que es caracterizado para
estimular la secrecin de protenas en microorganismos (Stutzenberger, 1992), para
alterar tanto la morfologa y la superficie de la pared de las clulas (Domingues et al.,
2000). Como era de esperar, el grupo de control positivo mostraron alta toxicidad, siendo
estadsticamente diferente en comparacin con los otros grupos (p<0,05).
Por otro lado, el grupo de control negativo utiliza una solucin de PBS (solucin salina
tamponada con fosfato), un reconocido agente no txico, a fin de evaluar slo el efecto
fsico sobre las clulas como ninguna otra sustancia se puso en contacto con las clulas.
Como era de esperar, se observ citotoxicidad baja y no hubo diferencia estadstica
encontrada.
Tambin hay que destacar que un xito en odontologa clnica no implica la tcnica de
slo el dominio, sino que tambin requiere la aplicacin de las normas de bioseguridad y
la atencin a lo local y sistmicas consecuencias producidos por los materiales dentales
siendo utilizado. Estos posibles efectos citotxicos deben estar evaluados con el fin de
mejorar la seguridad para un determinado material dental.

En las conclusiones basadas en los resultados obtenidos, se puede concluir que se han
encontrado en todos los materiales de alginato a ser potencialmente txico para las
clulas. Es importante seleccionar materiales de baja citotoxicidad antes de la adquisicin
de nuevos productos