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ALGUNAS CARACTERSTICAS FUNCIONALES DE


LAS COMUNIDADES BACTERIANAS DEL MUCUS
ASOCIADO A TEJIDOS SANOS Y CON SNDROME
DE BANDA AMARILLA EN Montastraea annularis
ARTICLE in INTERCIENCIA JANUARY 2004
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Adriana Garcia

Aldo Croquer

Central University of Venezuela

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Nora Malaver
Central University of Venezuela
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ALGUNAS CARACTERSTICAS FUNCIONALES


DE LAS COMUNIDADES BACTERIANAS DEL MUCUS ASOCIADO
A TEJIDOS SANOS Y CON SNDROME DE BANDA AMARILLA
EN Montastraea annularis
Adriana Garca, Aldo Crquer y Nora Malaver

RESUMEN
Se caracterizaron y compararon algunas propiedades funcionales de las comunidades bacterianas asociadas a la capa
de mucopolisacridos en tejidos sanos y enfermos con banda
amarilla del coral Montastraea annularis. Tres colonias con
este sndrome fueron seleccionadas y se colect una muestra de
mucus asociado a tejidos normales y afectados de cada individuo, succionando cuidadosamente la superficie de cada colonia
con jeringas estriles de 5ml. Se tomaron muestras de agua a
1m encima de cada colonia en frascos esterilizados de 10ml.
Las muestras se trasladaron al laboratorio en cavas con hielo
para el aislamiento de cepas bacterianas (48h) con mtodos
microbiolgicos estndar. Se seleccionaron aleatoriamente 25
cepas de cada muestra para realizar pruebas bioqumicas y estudiar las caractersticas de las comunidades bacterianas
heterotrficas en cada compartimiento. Se estudi la hidrlisis

Introduccin
Las bacterias son importantes componentes del medio
ambiente arrecifal. En condiciones naturales contribuyen a
la produccin de carbono
(Ducklow, 1990), al reciclaje
de nutrimentos (D'Elia y
Wiebe, 1990) y representan
fuentes de alimento para una
gran variedad de organismos
de los arrecifes (Sorokin,
1990). No obstante, cuando
las condiciones ambientales
cambian como resultado de
algn disturbio, natural o antrpico, estas bacterias y especialmente las que se encuentran asociadas a la capa
de mucopolisacridos de los

corales escleractnidos, pueden convertirse en patgenos


potenciales, capaces de desencadenar epidemias en diferentes organismos arrecifales
(Peters, 1997; Rohwer et al.,
2001).
En las ltimas dcadas se
ha reportado un incremento
significativo en la incidencia
de enfermedades infecciosas
en comunidades arrecifales
del Caribe (Goreau et al.,
1998; Richardson, 1998; Weil,
2001; Weil et al., 2002; Croquer et al., 2003). Segn
Harvell et al. (1999, 2002).
Este incremento puede estar
relacionado con diversos factores que han cambiado las
caractersticas ambientales en

de azcares, degradacin de citrato, lpidos y protenas, reduccin de nitratos y actividad uresica, y crecimiento aerbico y
anaerbico. Las caractersticas funcionales de cada comunidad
se compararon mediante anlisis de agrupamiento. Las comunidades bacterianas asociadas al mucus de tejidos enfermos tuvieron mayor proporcin (60%) de bacterias capaces de degradar lpidos y protenas, y mostraron alta actividad uresica
(40%) comparada con las muestras de agua (10%). Ms del
70% de las cepas estudiadas redujeron nitratos a nitritos y
crecieron en condiciones aerbicas y anaerbicas. La alta actividad lipoltica y proteoltica, y la gran proporcin de bacterias capaces de desdoblar rea en el mucus asociado a tejidos
enfermos pudieran estar relacionadas con el desarrollo del sndrome de banda amarilla y con la mortandad de tejidos en
colonias enfermas.

los arrecifes, entre los que se


pueden mencionar los cambios climticos globales que
han ocasionado el incremento
de la temperatura del agua, el
incremento en la intensidad y
frecuencia de eventos como el
Nio (Glynn y Colgan, 1992;
Rosemberg y Ben-Haim,
2002), el transporte de patgenos a travs de las aguas
de lastre de los barcos que
atraviesan el Canal de Panam, lo que representa la conexin de provincias biogeogrficas separadas por millones de aos y nuevos patgenos en contacto con nuevos
hospedadores (Harvell et al.,
1999, 2002), y la prdida de
la calidad del agua debida a

la introduccin frecuente de
nutrientes y aguas servidas en
los arrecifes (Tomascik y
Sanders, 1987; Connell,
1997). Estos factores probablemente han contribuido a
incrementar la susceptibilidad
de los hospedadores y a amplificar la virulencia de los
patgenos (Ritchie et al.,
2001).
Las enfermedades que
afectan a corales escleractnidos han sido reconocidas
como importantes fuentes de
mortandad en los arrecifes.
Sin embargo, solo en algunos casos se ha logrado
identificar los agentes causales de dichas enfermedades,
como por ejemplo la enfer-

PALABRAS CLAVE / Bacterias de Corales / Bacteriologa / Banda Amarilla / Biologa Marina /


Recibido: 22/09/2003. Modificado: 08/12/2003. Aceptado: 17/12/2003

Adriana Garca. Licenciada en


Biologa, Universidad Central
de Venezuela (UCV). Estudiante de Maestra en Ciencias
Biolgicas, Universidad Simn
Bolvar (USB), Venezuela. Direccin: Departamento de Bio-

loga de Organismos, USB.


Apartado Postal 89000, Caracas 1080, Venezuela. e-mail:
adriana@intecmar.usb.ve
Aldo Crquer. Licenciado en
Biologa, UCV. Estudiante de
Doctorado en Ciencias Biol-

JAN 2004, VOL. 29 N 1

gicas, USB. Investigador Asociado, Fundacin Cientfica


Los Roques. Direccin:
Intecmar, USB. Apartado Postal 89000, Caracas 1080, Venezuela. e-mail:
croquer@telnet.net.ve

0378-1844/04/01/039-07 $ 3.00/0

Nora Malaver. Doctora en Ecologa, UCV. Directora, Instituto


de Zoologa Tropical, Facultad
de Ciencias, UCV. e-mail:
nmalaver@strix.ciens.ucv.ve

39

SUMMARY
Some biochemical properties of bacterial communities associated with mucopolysaccharides were described and compared
in both healthy and diseased tissues of the coral Montastraea
annularis attacked by the yellow blotch disease. Three colonies
affected by this syndrome were selected. For each colony, a
sample of mucus associated to normal and diseased tissues was
carefully taken with a 5ml syringe. Water samples were collected
in 10ml sterilized flasks, 1m away from each colony. Samples
were transported in ice coolers for posterior isolation (48 h) of
bacteria using standard microbiology methods. Eight biochemical
tests (sugar and starch fermentation, citrate, protein and lipid
degradation, nitrate reduction, urease reaction and aerobicanaerobic growth), were performed for each of the 25 bacterial

colonies randomly selected from each sample. The biochemical


features of these bacterial communities were compared by cluster analysis. Bacterial communities associated with the mucopolysaccharide layer of diseased tissues showed a higher percentage (60%) of bacteria able to degrade both proteins and lipids. These bacteria also showed an important capacity to use
urea (40%) as compared to water bacterial communities (10%).
Most bacteria (70%) isolated from all samples were able to reduce nitrates to nitrites and growth in aerobic and anaerobic
conditions. The ability of bacteria to degrade proteins, lipids and
urea in the mucopolysaccharide layer might be related with the
mechanisms that produce the tissue mortality observed in the
yellow blotch syndrome.

RESUMO
Se caracterizaram e compararam algumas propriedades
funcionais das comunidades bacterianas associadas capa de
mucopolisacridos em tecidos sos e enfermos com banda
amarela do coral Montastraea annularis. Trs colnias con esta
sndrome foram selecionadas e colectou-se uma amostra de mucus associado a tecidos normais e afetados de cada individuo,
succionando cuidadosamente a superfcie de cada colnia com
seringas estreis de 5ml. Se tomaram amostras de gua a 1m
encima de cada colnia em frascos esterilizados de 10ml. As
amostras se trasladaram ao laboratrio em caixas trmicas com
gelo para o isolamento de cepas bacterianas (48h) com mtodos
microbiolgicos estndar. Se selecionaram aleatoriamente 25
cepas de cada amostra para realizar provas bioqumicas e
estudar as caractersticas das comunidades bacterianas
heterotrficas em cada compartimento. Se estudou a hidrlisis

medad de banda negra


(Antonius, 1973; Rtzler y
Santavy, 1983), la plaga
blanca (Denner et al., 2003)
y en el caso de los octocorales la aspergiliosis (Nagelkerken et al., 1997; Smith
et al., 1998). El sndrome de
banda amarilla (SBA) es uno
de los ms ampliamente distribuidos en todo el Caribe.
Segn Goreau et al. (1998),
ste fue reportado por primera vez en 1990 por Hayes
y Bush, asociado a corales
blanqueados en las islas Caimn. No obstante, segn
Bruckner (2002), la primera
observacin fue realizada
por Reeves (1994) en los cayos de Florida. Ha sido observado afectando a ms de
10 especies (Garzn-Ferreira
et al., 2001) en la mayor
parte de las regiones de la
cuenca del Caribe (Bruckner,
2002; Weil et al., 2002).
Ataca principalmente a las

40

especies del complejo


Montastraea annularis (M.
annularis, M. faveolata y M.
franksi; Garzn-Ferreira et
al., 2001). Se caracteriza por
producir la mortalidad progresiva de los tejidos afectados, los cuales comienzan a
palidecer y finalmente sufren
necrosis (Figura 1). A pesar
de su amplia distribucin y
de la mortalidad que produce sobre las colonias afectadas, hasta la fecha no se conoce con certeza la causa de
la mortandad de los tejidos
(Green y Bruckner, 2000).
Cervino et al. (2001) encontraron una disminucin significativa en el ndice
mittico de las zooxantelas
asociadas a tejidos enfermos
con SBA, concluyendo que
el patgeno putativo podra
afectar a las zooxantelas y
producir de manera indirecta
la mortandad del tejido de
coral.

de acares, degradao de citrato, lpidos e protenas, reduo


de nitratos e atividade uresica, e crescimento aerbico e anaerbico. As caractersticas funcionais de cada comunidade se
compararam mediante anlise de agrupamento. As comunidades
bacterianas associadas ao mucus de tecidos enfermos tiveram
maior proporo (60%) de bactrias capazes de degradar lpidos e protenas, e mostraram alta atividade uresica (40%) comparada com as amostras de agua (10%). Mais de 70% das cepas estudadas reduziram nitratos a nitritos e cresceram em
condies aerbicas e anaerbicas. A alta atividade lipoltica e
proteoltica, e a grande proporo de bactrias capazes de
desdobrar reia em mucus associado a tecidos enfermos
puderam estar relacionadas com o desenvolvimento da sndrome
de banda amarela e com a mortandad de tecidos em colnias
enfermas.

Figura 1. Colonia de Montastraea annularis afectada por el sndrome de banda amarilla. El tejido sano esta separado por un aro de
tejido plido el cual avanza produciendo la necrosis y prdida de
tejido vivo (base de la colonia). Foto cortesa de E. Weil

Existen evidencias que sugieren que la composicin y


las caractersticas funciona-

les de las comunidades bacterianas asociadas al mucus


de tejidos sanos de corales

JAN 2004, VOL. 29 N 1

cambian significativamente
en condiciones de estrs fisiolgico (Ritchie y Smith,
1995). La comparacin de
las caractersticas funcionales de comunidades bacterianas asociadas al agua, y a
las bacterias presentes en la
capa de mucopolisacridos
de tejidos sanos y enfermos
podra representar una herramienta til para el posterior
aislamiento e identificacin
de patgenos potenciales. En
este sentido, si se conocen y
describen los principales
cambios que ocurren en estas comunidades y adems
se identifican las cepas bacterianas cuyo potencial bioqumico difiera de las bacterias asociadas a tejido sano,
podran seleccionarse algunos morfotipos para realizar
posteriores experimentos de
re-infeccin que cumplan
con los postulados de Koch.
Si las comunidades bacterianas asociadas al mucus de
tejidos sanos, enfermos con
SBA y agua son diferentes,
se esperara que el potencial
bioqumico de cada una de
estas comunidades fuese de
igual forma distinto. El objetivo de este trabajo fue
analizar de forma comparativa algunas caractersticas
funcionales de las comunidades bacterianas asociadas al
agua y al mucus de los tejidos sanos y afectados por el
SBA de la especie constructora de arrecifes M. annularis.
rea de Estudio
El presente trabajo se realiz en el Parque Nacional
Archipilago de Los Roques
(PNALR), un complejo arrecifal situado a 110km al
norte del puerto de La
Guaira, Venezuela, entre
1158'36'' y 1144'30''N, y
entre 6633'30'' y 6657'27''O
(Hung, 1985; Garca et al.,
2002). El PNALR es la formacin coralina ms importante de Venezuela. Es un
sistema arrecifal con caractersticas ocenicas, coberturas coralinas ubicadas entre
17 y 38%, y poca influencia
continental
(Zubillaga,

2001). Este sistema arrecifal


es considerado como uno de
los ms importantes de la
regin del Caribe en trminos de diversidad y cobertura coralina, con valores ubicados entre 40 y 70% (Weil,
2002).
Materiales y Mtodos
A fin de comparar las caractersticas funcionales de
las comunidades bacterianas
asociadas al mucus de tejidos sanos, de tejidos afectados por el SBA y del agua
cercana a las colonias del
coral Montastraea annularis
Ellys & Solander, 1786
(Cnidaria, Scleractinea), se
realizaron pruebas bioqumicas relacionadas con la capacidad de degradacin de
diferentes substratos por parte de las comunidades bacterianas asociadas a cada uno
de los compartimientos mencionados.
Recoleccin de las muestras
para cultivos bacteriolgicos
Las muestras fueron recolectadas en el arrecife costanero del cayo de Dos Mosquises Sur, ubicado al SO
del
archipilago,
a
1148'03''N y 6653'30''O. Se
seleccionaron tres colonias
de M. annularis con signos
de SBA, ubicadas a 5m de
profundidad. Las muestras se
recolectaron evitando la remocin de sedimentos en el
agua y el depsito sobre la
superficie de la colonia. El
orden de recoleccin de
muestras fue de agua circundante primero, luego de mucus asociado a tejido enfermo y finalmente de mucus
asociado a tejido sano.
Las muestras de agua se
colectaron con frascos estriles de 10ml, los cuales se
abrieron y llenaron completamente a 1m por encima de
cada colonia. Las muestras
de mucus asociados a tejido
sano y enfermo se extrajeron
succionando cuidadosamente
la superficie de las colonias
con jer ingas estriles de
5ml, evitando la produccin

JAN 2004, VOL. 29 N 1

excesiva de mucus de las


colonias seleccionadas. Las
muestras de mucus sobre tejido con signos de SBA fueron colectadas sobre el rea
intermedia de la banda, entre
tejido necrtico y sano,
mientras que las muestras de
mucus en los tejidos aparentemente sanos se colectaron
a 30cm de las reas afectadas. Una vez colectadas, las
muestras fueron almacenadas
en hielo y trasladadas al laboratorio donde fueron procesadas en las prximas 2448h.
Aislamiento de las cepas
bacterianas
Las muestras de mucus
del tejido y de agua de las
tres colonias fueron colocadas, por separado, en fiolas
estriles y homogeneizadas
al ser sometidas a agitacin
manual por 30seg. A partir
de cada muestra se realizaron diluciones seriadas (1:10
y 1:100), en solucin salina
peptonada (SSP). Posteriormente, se sembraron por inclusin alcuotas de 1ml de
las muestras sin dilucin,
1:10 y 1:100 por triplicado
en agar nutritivo (AN) colocados en placas de Petri
(Garassini, 1962, 1967; Harrigan y McCance, 1968).
Las placas de AN fueron incubadas a temperatura ambiente por 48h.
Luego del perodo de incubacin, se llev a cabo el
conteo y aislamiento de todas las colonias de bacterias,
de cada triplicado, y se reportaron como unidades formadoras de colonias bacterianas (UFC). Cada UFC fue
repicada para obtener cepas
puras de acuerdo a procedimientos microbiolgicos estndar (Garassini, 1962;
1967; Harrigan y McCance,
1968). Para cada triplicado,
fueron seleccionadas 25 cepas al azar, utilizando una
tabla de nmeros aleatorios.
Se obtuvo una muestra representativa de 75UFC, por
cada colonia de M. annularis, 25 del tejido sano, 25
del tejido enfermo y 25 del
agua circundante.

Caracterizacin funcional
de las comunidades
bacterianas heterotrficas
(pruebas bioqumicas)
Para cada cepa seleccionada en cada compartimiento,
se aplicaron 8 pruebas bioqumicas (Tabla I). La seleccin de estas pruebas se realiz en funcin de la composicin qumica del mucus
de los corales escleractnidos, reproduciendo alguna
de las fuentes de carbono
que frecuentemente se encuentran en el mucus. ste
representa un aporte importante de carbono y energa;
tales como hidratos de carbono, lpidos, protenas y
otros compuestos nitrogenados, los cuales son utilizados por las bacterias
heterotrficas asociadas a la
capa de mucopolisacridos
de los escleractnidos
(Ducklow y Mitchell, 1979a,
b). Adems, las pruebas seleccionadas son comunes en
el estudio de la caracterizacin bioqumica de las comunidades bacterianas asociadas al mucus de tejidos
sanos y enfermos de corales
(Ritchie y Smith, 1995), as
como tambin en la caracterizacin bioqumica de patgenos de enfermedades de
corales (Denner et al.,
2003).
Anlisis estadsticos
Con la finalidad de determinar la similitud o disimilitud de los grupos funcionales aislados a partir de cada
uno de los compartimentos
(agua, tejido sano y enfermo) se aplic un anlisis de
agrupamiento de distancias
eucldeas (vecino ms cercano). Para ello se construyeron matr ices con valores
asignados de 1 (cepas que
respondieron positivamente a
la prueba), 2 (cepas que respondieron negativamente), 3
(cepas con capacidad de hidrlisis total de almidn), 4
(cepas con hidrlisis parcial
de almidn), 5 (cepas facultativas) 6 (cepas aerbicas) y
7 (ce pas anaerbicas). A
partir de estas matrices se

41

TABLA I
PRUEBAS BIOQUMICAS EMPLEADAS PARA LA CARACTERIZACIN FUNCIONAL
DE LAS COMUNIDADES BACTERIANAS
Prueba bioqumica

Medio empleado

Identificacin positiva

Referencia

Fermentacin azcares

Agar hierro de Kligler

Precipitacin de sulfuro ferroso negro

(MacFaddin, 1980)

Hidrlisis de almidn

Agar Nutritivo y Agar Almidn

Cambio de azul oscuro a claro


(hidrlisis total) y pardo rojizo
(hidrlisis parcial)

(Harrigan y McCane, 1968)

Degradacin de citrato

Agar Citrato

Incremento alcalinidad, cambio


del medio de verde a azul

(MacFaddin, 1980)

Reduccin de nitrato

Agar Nitrato

Cambio a rosado claro o rojo intenso

(MacFaddin, 1980)

Reaccin de ureasa

Caldo Urea

Produccin de amonio,
cambio de amarillo a rosa claro

(MacFaddin, 1980)

Licuefaccin gelatina
(actividad proteoltica)

Agar Gelatina

Medio se licua, pierde consistencia

(MacFaddin, 1980)

Actividad lipoltica

Tween (80)

Precipitacin de sales de Ca y Mg,


color opaco en el medio.

(MacFaddin, 1980)

Crecimiento de anaerbios
estrictos y facultativos

Caldo Tioglicolato

Crecimiento bacteriano en el medio

(Merck, 1994)

generaron diagramas de
agrupacin por columnas
(comparacin de substratos
independientemente del compartimiento: tejido sano, enfermo y agua) y diagramas
de agrupacin por filas
(comparacin entre cada
compartimiento: tejido sano,
enfermo y agua).
Resultados
En la Tabla II se muestra
el porcentaje de UFC capaz
de degradar cada uno de los
substratos utilizados. La mayor parte de las cepas aisladas del mucus de tejidos sanos, enfermos y agua se caracterizaron por ser capaces
de crecer en el medio de
tioglicolato en condiciones
aerbicas y anaerbicas. Por
su parte, de las fuentes de
N 2, el nitrato fue ms utilizado. Entre 38 y 96% de las
cepas aisladas fueron capaces de reducirlo a nitritos,
mientras que para la rea
los porcentajes oscilaron entre 0 y 8%. Con relacin a
los carbohidratos la fuente
de C ms utilizada fue el almidn, independientemente
del compartimiento observado (tejido sano, enfermo y
agua), con porcentajes que
oscilaron entre 0 y 24%. La
glucosa y la lactosa fueron

42

poco utilizadas por las cepas


aisladas de los tejidos sanos
y el agua (0-4%), y ms utilizadas por las cepas asociadas a los tejidos enfermos
(0-20%). La actividad
lipoltica y proteoltica de
las bacterias se present en
los tres compartimentos analizados, pero mayoritariamente en el mucus asociado
a tejido enfermo al igual
que la capacidad de degradar el citrato como nica
fuente de C.
En la Figura 2 se muestran
los porcentajes de las colonias de bacterias aisladas ca-

paces de utilizar las distintas


fuentes de C y N 2 en cada
compartimiento estudiado. En
el tejido enfermo el porcentaje de utilizacin de glucosa
(69%), lactosa (67%) y almidn (40%) fue mayor comparado con el mucus extrado
de tejido sano y en el agua.
Asimismo, la actividad proteoltica (38%) y lipoltica
(40%) en el mucus extrado
del tejido enfermo fue mayor
que en tejido sano y agua.
La misma tendencia se observ en la utilizacin de
citrato como nica fuente de
C, donde cerca del 60% de

las colonias bacterianas asociadas al mucus de tejido enfermo fueron capaces de utilizarlo. Con relacin a las
fuentes de N 2 , en el mucus
del tejido enfermo se observ
una mayor actividad uresica
(40%) comparado con el
agua (10%), mientras que la
capacidad de reducir nitratos
fue similar (33%) en los tres
compartimientos. La proporcin de cepas bacterianas capaces
de
crecer
en
tioglicolato fue similar (33%)
entre los distintos compartimientos, indistintamente de
las condiciones de anaerobio-

TABLA II
PORCENTAJE DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) OBTENIDOS PARA
CADA UNO DE LOS COMPARTIMENTOS ANALIZADOS
Proporcin de UFC (%)

Tejido Sano
Sustratos
Glucosa
Lactosa
Almidn
Citrato
Nitrato
rea
Gelatina
Tween(80)
Tioglicolato
Produccin de SH2

C1

C2

4
4
0
16
56
8
12
20
100

0
0
16
16
80
0
0
20
92

20

Tejido Enfermo

Agua circundante

C1

C2

C3

C1

C2

C3

4
4
8
8
80
4
12
0
100

0
0
4
4
38
4
0
36
100

20
20
20
64
92
4
28
32
92

4
0
24
8
92
8
12
8
92

0
0
12
16
64
0
4
8
100

4
4
8
4
96
4
4
16
92

0
0
4
0
88
0
8
8
96

16

C3

C1, C2 y C3 identifican a las tres colonias de corales a las que se aplicaron las pruebas.

JAN 2004, VOL. 29 N 1

Figura 2. Potencial bioqumico expresado en porcentajes (%), de las


cepas bacterianas asociadas al mucus de tejido sano (TS, n= 25) y
enfermo (TE, n= 25) de Montastraea annularis y al agua circundante (A, n= 25) en diferentes sustratos.

sis. Finalmente, la proporcin


de cepas productoras de sulfuro de hidrgeno fue menor
en tejido enfermo.
En la Figura 3 se muestran
los resultados del anlisis de
agrupamiento por substratos
suministrados a las cepas
bacterianas independientemente del compartimiento del
que fueron aisladas. Con relacin a los carbohidratos, el
uso de lactosa y glucosa fue
similar entre las comunidades
bacterianas analizadas. El almidn fue el nico hidrato
de carbono que se diferenci
del grupo de los azcares en
funcin de su preferencia.
Por su parte, tanto el citrato
como el Tween 80 se agruparon en el mismo nodo, indicando un porcentaje similar
de cepas bacterianas capaces
de utilizar estos sustratos. En
cuanto a las fuentes de N2, el
nitrato y la rea se ubicaron
en posiciones diferentes del
espacio representado en el
anlisis de agrupamiento, indicando que las comunidades
bacterianas asociadas al mucus de tejido enfermo y sano
y el agua se diferenciaron en
funcin del uso de estos
sustratos. La mayor diferencia entre los substratos administrados, independientemente
de los compartimentos muestreados, fue obtenida para el
tioglicolato y el nitrato, los
cuales se diferenciaron visiblemente de las restantes
fuentes de C.
En la Figura 4 se muestran
los resultados del anlisis de
agrupamiento por substratos
suministrados para cada una

de las comunidades bacterianas asociadas al mucus tejido


sano, enfermo y agua. El
crecimiento en los medios de
tioglicolato y nitrato fue similar para los tres compartimientos y se diferenci de
las restantes fuentes de C suministradas. De forma similar
el uso de glucosa y lactosa
fue similar entre las comunidades bacterianas asociadas
al mucus de tejido sano, enfermo y agua. Por su parte,
la actividad lipoltica, proteoltica, la capacidad de degradar polisacridos como el almidn y de utilizar citrato
fue similar para las
comunidades bacterianas asociadas a tejidos sanos y agua y
se diferenci de las
comunidades asociadas a tejidos con signos de SBA.

Figura 3. Anlisis de agrupamiento por fuentes de carbono y substratos utilizados por las cepas bacterianas aisladas. GLU: glucosa,
LAC: lactosa, GAS: produccin de gas, ALM: almidn, CIT: citrato,
NIT: nitrato, GEL: gelatina, TW80: Tween 80, TIO: tioglicolato.

sica, y por degradar citrato.


La capacidad de crecer en
condiciones aerbicas y
anaerbicas y de utilizar nitrato fue comn para las comunidades bacterianas asociadas a los compartimientos
analizados (tejido sano, enfermo y agua), lo cual evidencia el potencial funcional
de la comunidad bacteriana
en el ciclo del N2 (reduccin
de nitratos a nitritos). Con
relacin a la capacidad de

degradar carbohidratos, la
preferencia entre cada una de
las comunidades bacterianas
no fue clara, en especial en
el caso de la glucosa y la
lactosa, en general la mayor
parte de las bacterias aisladas
del mucus de tejidos sanos,
enfermos y agua fueron capaces de crecer en dicho medio de cultivo.
Las bacterias y otros microorganismos viven asociados al mucus producido por

Discusin
Las comunidades
bacterianas asociadas
al mucus de tejidos
sanos, enfermos (con
signos de SBA) y el
agua resultaron funcionalmente diferentes con respecto a la
capacidad de utilizar
algunos substratos
como fuentes de C y
energa. Las comunidades bacterianas
asociadas al mucus
de tejidos enfermos
se caracterizaron por
presentar una mayor
actividad lipoltica,
proteoltica y ure-

JAN 2004, VOL. 29 N 1

Figura 4. Anlisis de agrupamiento por compartimientos (mucus de tejido


sano, enfermo y agua) y sustratos (n= 3 colonias de coral). SAN: aislados
bacterianos del mucus de tejido sano, ENF: aislados bacterianos del mucus
de tejido enfermo, AGU: aislados bacterianos del agua circundante, GLU:
glucosa, LAC: lactosa, GAS: produccin de gas, ALM: almidn, CIT: citrato,
NIT: nitrato, GEL: gelatina, TW80: Tween 80, TIO: tioglicolato.

43

los corales, as como tambin


a sus tejidos (Schiller y
Herndl, 1989; Saffo, 1992;
Paul et al., 1996; Rohwer et
al., 2001). El mucus producido por estos organismos posee cantidades significativas
de polisacridos (hexosa,
pentosa, glucosa y galactosa),
protenas y lpidos, entre
otros componentes, ofreciendo substratos ideales para el
crecimiento bacteriano (Pascal y Vacelet, 1981). No obstante, la estructura de las comunidades bacterianas puede
cambiar dependiendo de las
condiciones ambientales y el
estado fisiolgico del animal
(Rohwer et al., 2001). Por
ejemplo, durante el da el tejido de los corales representa
un medio ambiente caracterizado por altos niveles de saturacin de O 2, debido a la
actividad fotosinttica de las
zooxantelas que se encuentran alojadas en el gastrodermo, mientras que en la
noche las condiciones pueden
ser diferentes, con menores
niveles de O 2 en los tejidos
(Lesser, 1997). Por lo tanto,
las bacterias asociadas a estos ambientes se encuentran
adaptadas a rpidos cambios
micro-ambientales siendo capaces de utilizar diferentes
substratos para su metabolismo en las condiciones que
prevalecen en un momento
determinado (Ducklow y
Mitchell, 1979b; Ritchie y
Smith, 1997).
Ducklow y Mitc hell
(1979a) demostraron que las
respuestas fisiolgicas de las
bacterias asociadas al mucus
de los corales se encuentran
estr echamente ligadas al
estatus metablico del coral
hospedador. La condicin fisiolgica de los corales es
extremadamente variable y
las caractersticas funcionales de las comunidades bacterianas pueden variar inclusive entre especies de coral
que se ubican en distintas
zonas del arrecife (Ritchie y
Smith, 1997). Los factores
ambientales que intervienen
regularmente en la dinmica
de los sistemas coralinos
(sedimentacin, temperatura,
calidad de luz, salinidad,

44

etc.) pueden inducir incrementos en la produccin de


mucus, eventos de blanqueamiento y mortalidad parcial
sobre las colonias coralinas
(Kushmaro et al., 1996).
Ritchie y Smith (1995), propusieron que los cambios
ambientales que producen
alteraciones en el estatus fisiolgico de los corales,
como en el caso del blanqueamiento, pueden producir
cambios significativos en la
composicin y abundancia
de las comunidades bacterianas asociadas a las capas de
mucopolisacridos de los corales. sto a su vez podra
conducir a patologas capaces de producir la mortalidad parcial de los tejidos.
En el caso especfico del
SBA, el tejido comienza a
decolorarse y posteriormente
se produce necrosis, llevando
a la muerte del rea afectada
y con el tiempo, en algunos
casos, de toda la colonia.
Cervino et al. (2001) encontraron una disminucin significativa de la densidad de zooxantelas y del ndice mittico de las mismas en reas
afectadas por SBA. Esto conduce a la prdida de ms de
90% del C, el cual es obtenido a partir de la actividad
fotosinttica de estas algas.
Las diferencias en la densidad de zooxantelas reportada entre los tejidos sanos y
enfermos con SBA, podran
generar los cambios observados en las caractersticas funcionales de las comunidades
bacterianas asociadas al mucus presente en tejidos sanos,
enfermo y agua. En este estudio se evidenci un alto
porcentaje de bacterias con
metabolismo facultativo (uso
de rutas metablicas aerbicas y/o anaerbicas). Ritchie
y Smith (1997) encontraron
que las comunidades bacterianas normalmente asociadas
a las especies M. annularis y
Diploria strigosa eran capaces de oxidar ms eficientemente compuestos complejos
como el Tween 80 y el
Tween 40 en comparacin
con comunidades bacterianas
asociadas a otras especies de
coral.

Como se mencion anteriormente el porcentaje de


cepas bacterianas con capacidad lipoltica y proteoltica
(degradacin de Tween 80 y
gelatina) increment en ms
de 10% en tejidos afectados
por SBA. Estos resultados
sugieren que las bacterias
asociadas al tejido enfermo
hacen un mayor uso de
fuentes de C provenientes de
lpidos y protenas del mucus, lo que podra estar relacionado con el deterioro de
los tejidos.
Asimismo, las bacterias
asociadas al mucus de tejido
con SBA presentaron una
alta actividad uresica. Denner et al. (2003) observaron
un comportamiento similar
para Aurantimonas coralicida, el patgeno de la enfermedad de plaga blanca. En
este trabajo se relacion la
actividad uresica con el mecanismo que produce la
mortalidad de los tejidos generado por dicha enfermedad
En cuanto a la preferencia
en la degradacin de citrato,
Ritchie y Smith (1995) mencionan que las bacterias asociadas a la enfermedad de
banda blanca (EBB) mostraron preferencia por los cidos ctricos, los cuales son
intermediarios metablicos en
los ciclos del glioxilato y del
cido tricarboxlico. Por su
parte, el cido actico, el DL-lctico y el metilpirvico,
los cuales son substratos comunes para bacterias sulforeductoras, tambin fueron
preferidos por las bacterias
aisladas de los tejidos afectados por EBB (Ritchie y
Smith, 1995).
El anlisis de las caractersticas metablicas de las
comunidades bacterianas apenas comienza a ser utilizado
en el estudio de las enfermedades que afectan a corales
escleractnidos (Ritchie y
Smith, 1995; Denner et al.,
2003). Los cambios en las
caractersticas metablicas
normales de las comunidades
bacterianas, esto es, en la
preferencia de utilizacin de
fuentes de C y otros sustratos, podra ser una respuesta a cambios ambienta-

les, a la introduccin de algn patgeno o tambin un


indicativo del estado fisiolgico del hospedador (Ritchie
y Smith, 1995). La identificacin de cepas bacterianas
cuyas habilidades bioqumicas difieran de las caractersticas metablicas de la comunidad presente en mucus de
los tejidos sanos, podra facilitar la seleccin de patgenos potenciales en experimentos de reinfeccin, lo que
contribuira a su identificacin a travs de los postulados de Koch.
En conclusin, las caractersticas metablicas de las
comunidades asociadas al
agua y al mucus presente en
tejidos sanos y enfermos con
SBA, fueron diferentes. Las
comunidades bacterianas asociadas al SBA se caracterizaron por presentar una mayor
proporcin de bacterias capaces de degradar citrato y con
actividad lipoltica y proteoltica en comparacin con las
comunidades bacterianas asociadas al mucus de los tejidos sanos y agua. La capacidad de reducir nitratos a
nitritos y de crecer en condiciones aerbicas o anaerbicas fue una caracterstica comn de las comunidades bacterianas asociadas a los compartimientos analizados. Se
requiere de ms estudios que
exploren el uso de otras
fuentes de C para una mejor
caracterizacin bioqumica de
las comunidades bacterianas
normales, lo que contribuira
a detectar de forma ms precisa los cambios que en stas
ocurren cuando se presenta el
SBA. Es necesario identificar
las cepas que difieran del
comportamiento natural de
las comunidades bacterianas
en mucus de tejido sano, y
posteriormente incluirlas en
experimentos de reinfeccin
que satisfagan los postulados
de Koch.
AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen a


Sheila Marques por su contribucin en los muestreos de
campo, a Juan Carlos Fernndez y la Fundacin Cientfica

JAN 2004, VOL. 29 N 1

Los Roques por el apoyo


logstico prestado, a Ernesto
Weil por la facilitacin de
material fotogrfico y bibliogrfico, a Jess Ramos y
Andreina Arias del IZT, UCV
por su ayuda en el trabajo
microbiolgico, a Pablo Mata,
Melchor, Francisco, Jess y
Alex, de la Estacin de Biologa Marina de Dos Mosquises
Sur, por su apoyo en las campaas de muestreo, y al Instituto Nacional de Parques Nacionales (INPARQUES).
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