1.

INTRODUCCIN A MEMBRANAS BIOLGICAS

1. Mencione las caractersticas comunes de las membranas biolgicas. Describa el modelo de mosaico
fluido.
(1.1) Las membranas son estructuras con forma de hoja. Su espesor vara de 6 a 10 nm.
(1.2) Consisten principalmente de lpidos y protenas. El cociente de lpidos a protenas vara de 1:4
a 4:1. Tambin contiene carbohidratos que estn unidos a los lpidos y a las protenas.
(1.3) Los lpidos de membrana son molculas relativamente pequeas que tiene una parte
hidrofbica y otra hidroflica. Estos forman hojas bimoleculares cerradas en el medio acuoso. Estas
bicapas de lpidos son barreras al flujo de las molculas polares y son disolventes de las protenas
integrales de membrana.
(1.4) Las protenas especficas median las distintas funciones de las membranas. Las protenas
sirven como bombas, canales, receptores, transductores de energa y enzimas. Las protenas de
membrana estn embebidas en la bicapa de lpidos, la cual proporciona un ambiente adecuado para su
accin.
(1.5) Las membranas son ensamblajes no covalentes. Las protenas y los lpidos estn unidos por
muchas interacciones no covalentes de tipo cooperativo.
(1.6) Las membranas son asimtricas. Las dos caras de una membrana son diferentes.
(1.7) Las membranas son estructuras fluidas. Las molculas de los lpidos se difunden rpidamente
en el plano de las membranas, como las protenas, a menos que estn ancladas por interacciones
especficas. Por el contrario, las protenas no rotan a travs de la membrana. Las membranas pueden ser
consideradas como soluciones en dos dimensiones de lpidos y protenas orientadas.
(1.8) La mayora de las membranas estn polarizadas elctricamente, con el interior negativo
(tpicamente -60 milivolts). El potencial de membrana juega un papel clave en el transporte, conversin de
energa y excitabilidad.
(1.9) Una pequea proporcin de los lpidos de las membranas interaccionan especficamente con
determinadas protenas y pueden ser esenciales para la funcin de stas. Algunas protenas estn unidas
covalentemente a los lpidos.
2 (a) Por qu se dice que las membranas son barreras de permeabilidad altamente selectivas, y no
barreras impermeables?
Por que contienen canales y bombas, que son sistemas de transporte (protenas alostricas) que
regulan la composicin inica y molecular del medio intracelular; los canales permiten que los iones fluyan
rpidamente a travs de las membranas en una direccin termodinmicamente favorable (cuesta abajo), y
las bombas, por el contrario, usan una fuente de energa como el ATP o la luz para impulsar el transporte de
molculas cuesta arriba. Algunos canales son operados por ligandos (receptor de acetilcolina) y otros
como los de sodio y potasio son operados por cambios de voltaje (despolarizacin de la membrana).
(b) Cmo controlan las membranas el flujo de informacin entre las clulas y el medio ambiente?
Las membranas contienen receptores especficos para estmulos externos. En los siguientes
procesos, el evento primario es la deteccin de una seal por un receptor especfico en una membrana: el
movimiento de una bacteria hacia el alimento, la respuesta de una clula blanco a la insulina y la percepcin
de la luz. A su vez, algunas membranas generan seales, que pueden ser qumicas o elctricas, como en la
transmisin del impulso nervioso
(c) Mencione los dos procesos de conversin de energa mas importantes que se llevan a cabo en sistemas
membranales.
La fotosntesis se lleva a cabo en la membrana interna de los cloroplastos, y la fosforilacin oxidativa
se lleva a cabo en la membrana interna de la mitocondria.
(d) Explique en que consiste el hecho de que las membranas son estructural y funcionalmente asimtricas y
que importancia tiene en su funcin.
Las superficies externa e interna de todas las membranas biolgicas conocidas tienen diferentes
componentes y diferentes actividades enzimticas. Un ejemplo claro es la bomba que regula la
1

concentracin de iones sodio y potasio en la clula. Esta bomba est orientada para que bombee iones
sodio hacia afuera de la clula y iones potasio al interior de la misma.
Adems el ATP debe estar del lado interior de la clula para impulsar la bomba. La ouabana, un inhibidor
especfico de la bomba, es efectivo solo si se localiza afuera de la clula. Las protenas de membrana. Esta
asimetra es preservada porque la protenas de membrana no rotan de un lado de la membrana a otro. Los
lpidos tambin estn distribuidos asimtricamente como consecuencia de su modo de biosntesis, pero su
asimetra no es completamente absoluta, excepto en el caso de los glicolpidos.
3 (a) Cul es la clasificacin de los lpidos de membrana?
1. FOSFOLPIDOS,

2. GLICOLPIDOS,

3. ESTEROLES

(b) Cmo se clasifican los fosfolpidos?

A. Glicerofosfolpidos (contienen glicerol)
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilcolina, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol,
difosfatidilglicerol (cardiolipina).
A1. Lpidos ter: alquil acil glicerofosfolpidos, plasmalgenos.
B. Esfingomielina (no contienen glicerol)
Ceramida es su unidad estructural fundamental
Su cabeza polar es fosfocolina o fosfoetanolamina.
(c) De dnde se derivan los fosfolpidos?
Se derivan del glicerol (fosfoglicridos), o de la esfingosina (un alcohol mas complejo).
(d) Cmo estn formados los glicerofosfolpidos? Dibuje su estructura general.
Del esqueleto de glicerol, de dos cadenas de cidos grasos y de un alcohol fosforilado.
(e) Dibuje la estructura del cido palmtico y del cido oleico.
Los cidos grasos en los fosfolpidos contienen normalmente un nmero par de cidos grasos (de 14
a 24): 16 y 18 los mas comunes, de cadena no ramificada (en animales), la configuracin del doble enlace
es casi siempre cis, la longitud y el grado de instauracin de las cadenas de cidos grasos en los lpidos de
membrana afectan mucho la fluidez de las membranas. Pueden ser saturados o insaturados.
4 (a) Mencione 5 residuos de alcohol de los fosfoglicridos:
serina, etanolamina, colina, glicerol e inositol: estn esterificados al grupo fosfato del fosfatidato.
(b) Cul es el nico fosfolpido de membrana que no se deriva del glicerol y cul es su estructura general?
La esfingomielina, es una amino alcohol que contiene una larga cadena hidrocarbonada no saturada
y que tiene unido a su grupo amino un residuo de cido graso.
cadena hidrocarbonada-

esfingosina-o-NH2-cido graso

fosforilcolina

(c) Cmo se clasifican los glicoesfingolpidos (esfingolpidos cuya cabeza polar son carbohidratos?
Estos compuestos tienen 1 o mas azcares en su cabeza polar, conectados directamente al OH del C-1.
NO CONTIENEN FOSFATO. Su clasificacin es la siguiente:
A. Cerebrsidos
1. Glucocerebrsidos
2. Galactocerebrsidos
3. Sulftidos
2

B. Globsidos
Oligosacridos neutros de ceramida
C. Ganglisidos
Oligosacridos cidos de ceramida
GM3, GM2, GM|
1. cerebrsidos (monosacridos de ceramida)
2. sulftidos (sulfatos de nonosacrido ceramida)
3. globsidos (oligosacridos neutros de ceramida)
4. ganglisidos (oligosacridos cidos de ceramida que contiene cido silico). Este azcar es Nacetilneuraminato o N-glicolilneuraminato. Estos azcares cidos se denominan cidos silicos. Sus
esqueletos de carbonos son sintetizados a partir de fosfoenolpiruvato (C3) y N-acetilmanosamina 6fosfato (unidad C6).
En la clulas animales, los glicolpidos se derivan de la esfingosina. El grupo amino del esqueleto de
esfingosina est acilado por un cido graso, como en la esfingomielina. Los glicolpidos difieren de la
esfingomielina en el tipo de la unidad que est enlazada al grupo hidroxilo primario del esqueleto de
esfingosina. En este caso estn unidos uno o mas residuos de azcar (en vez del residuo de fosforilcolina).
El glicolpido mas simple es cerebrsido, en el cual hay solo un residuo de azcar (glucosa o galactosa).
Los ganglisidos son glicolpidos mas complejos que tiene una cadena ramificada de varios
residuos de azcar (hasta 7).
Las tres partes principales son:
cadena hidrocarbonada-

esfingosinacido graso

azcar (glucosa o galactosa)

(d) Cul es la unidad hidrofbica e hidroflica de los siguientes lpidos de membrana: fosfoglicridos,
esfingomielina, glicolpidos y colesterol?
LPIDO DE MEMBRANA UNIDAD HIDROFBICA

UNIDAD HIDROFLICA

Fosfoglicrido
Esfingomielina

Alcohol fosforilado
Fosforilcolina

Glicolpido
Colesterol*

Cadena de cidos grasos

Cadena de cido graso y cadena
hidrocarbonada de esfingosina
Cadena de cido graso y cadena
hidrocarbonada de esfingosina
Toda la molcula, excepto un grupo OH

Uno o mas residuos de azcar

Un grupo OH en C-3

*Los esteroles se clasifican as:

Colesterol
Estigmaesterol y -Sitoesterol
Ergoesterol

(animales);
(plantas)
(hongos y levaduras)

5. (a) Cules son las actividades biolgicas de las fosfolipasas, cules se han aislado y cul es su
especificidad?
Las fosfolipasas tienen dos papeles principales. Muchas de ellas son enzimas digestivas que estn
presentes en alta concentracin en los jugos intestinales, secreciones bacterianas y venenos. Las
fosfolipasas estn agrupadas de acuerdo a su especificidad. Las fosfolipasas hidrolizan preferencialmente
3

sustratos que estn localizados en la bicapa de la membrana, micelas o partculas de lipoprotenas. Las
fosfolipasas que se han aislado son la A1, A2, C y D.
(b) Cules son las molculas con actividad biolgica que se liberan como consecuencia de la actividad
de las fosfolipasas A2 y C?
Las fosfolipasas tambin generan molculas seal altamente activas o sus precursores inmediatos.
P.e. la fosfolipasa A2 libera araquidonato, un precursor de los eicosanoides: prostaglandinas, leucotrienos
y tromboxanos .
Los eicosanoides son derivados del cido araquidnico, un cido graso poliinsaturado 20:4 (5,8,11,14) del
cual toman su nombre (eikosi = veinte) con una gran variedad de acciones extremadamente potentes
parecidas a las hormonas. En varios tejidos de los animales vertebrados. A diferencia de las hormonas, los
eicosanoides no se transportan entre tejidos en la sangre, sino que actan en los tejidos en donde se
producen. Se sabe que esta familia de compuestos est involucrada en la funcin reproductiva, en la fiebre,
en la inflamacin, y el dolor asociado con dao o enfermedad; en la formacin de cogulo sanguino y en la
regulacin de la presin sangunea, en la secrecin cida gstrica y en muchos otros procesos patolgicos o
fisiolgicos en el humano.
Todas las prostaglandinas contienen un anillo de carbonos de 5 miembros. Su nombre se deriva del tejido
en donde se reconocieron por primera vez: la glndula prosttica. Se han descrito las PGE (solubles en ter)
y las PGF (solubles en amortiguador de fosfato, del sueco fosfat). Actan en muchos tejidos aumentando la
concentracin intracelular de AMPc.
Algunas PG estimulan la contraccin del msculo liso del tero durante la labor de parto o la
menstruacin.
Afectan el flujo sanguneo a rgano especficos y la respuesta de ciertos tejidos a epinefrina y
glucagon.
Un tercer grupo de prostaglandinas elevan la temperatura corporal (produciendo fiebre) y causando
inflamacin, lo que desencadena dolor.
Los tromboxanos se aislaron primero de las plaquetas sanguneas (trombocitos) tienen un anillo de seis
miembros con un enlace ter. Son producidas por las plaquetas y actan en la formacin del cogulo
sanguneo y en la reduccin del flujo sanguneo al sitio del cogulo.
Los leucotrienos, encontrados primero en los leucocitos, contienen tres dobles enlaces conjugados. Son
seales biolgicas poderosas, por ejemplo, inducen la contraccin del recubrimiento muscular de los
conductos del aire al pulmn. La sobreproduccin de leucotrienos, causa ataques de asma. La fuerte
contraccin del msculo liso de los pulmones que ocurre durante el choque anafilctico es parte de la
reaccin alrgica potencialmente fatal en individuos con hipersensibilidad a la picadura de las abejas,
penicilina u otros agentes.
La fosfolipasa C libera dos mensajeros en la cascada de fosofinostidos (diacilglicerol y fosfatidilinositol
4,5, bifosfato). El IP3 induce la liberacin de calcio secuestrado en compartimientos celulares, lo que dispara
la activacin de una serie de enzimas dependientes de calcio, en respuesta a la seal hormonal. El
diacilglicerol se une y activa a la protena cinasa C, que une grupos fosfato a varias protenas intracelulares,
con la consecuente activacin de las mismas.
6. (a) Describa la importancia biolgica de los lpidos ter.
Algunos animales y organismos unicelulares son ricos en lpidos ter, en los cuales una de las dos
cadenas acilo est unida al glicerol en enlace ter y no ster.
Las cadenas unidas por enlace ter pueden estar saturadas, como en los alquil-acil-glicerofosfolpidos,
o puede contener un doble enlace entre losC-1 y C-2, como en los plasmalgenos.
El corazn de los vertebrados est especialmente enriquecido de lpidos ter; aproximadamente la mitad
de los lpidos del corazn con lpidos ter. Las membranas de las bacterias haloflicas, de los protistas
ciliados, y de ciertos invertebrados, tambin contienen una alta proporcin de lpidos ter. Su significado
funcional en estas membranas es desconocidos; quiz confieran resistencia a las fosfolipasas que rompen
los cidos grasos unidos en enlace ster.
Aproximadamente un 20% de los glicerofosfolpidos de los mamferos son plasmalgenos. El porcentaje
exacto vara de especie a especie y de tejido a tejido en una organismo dado. Mientras que los
4

plasmalgenos comprenden solamente el 0.8% de los fosfolpidos en el hgado de humanos, representan el

23% en el tejido nervioso de humanos.
Los alquil-acil-glicerofosfolpidos son menos abundantes que los plasmalgenos; por ejemplo, de todo el
glicero fosfosfolpido etanolamina contenido en el corazn de humanos, el 59% son plasmalgenos y el 3.6%
son alquil-acil-glicerofosfolpidos. Sin embargo, de todo el glicero fosfosfolpido etanolamina de los eritrocitos
de bovino, el 75% son del tipo alquil-acilo.
Al menos un lpido ter, el factor activador de plaquetas, es una hormona importante. Se libera de los
basfilos y estimula la agregacin de plaquetas y la liberacin de serotonina de las plaquetas.. Ejerce una
variedad de efectos sobre el hgado, msculo liso, corazn, tero y pulmn y juega un papel importante en la
respuesta inflamatoria y alrgica.
(b) Describa brevemente la importancia biolgica de las esfingomielinas.
La esfingomielina se parece a la fosfatidilcolina en sus propiedades generales, en la estructura
tridimensional y en la ausencia de carga neta en su grupo polar. Las esfingomielinas estn presentes en las
membranas plasmticas de las clulas animales; la hoja de mielina que rodea y asla los axones de las
neuronas mielinadas es una buena fuente de esfingomielinas.
(c) Describa brevemente la importancia biolgica de los glicoesfingolpidos.
cerebrsidos. Son los glicoesfingolpidos mas simples. El galactocerebrsido, que est en
concentracin mas alta en las membranas de las clulas neuronales del cerebro, tiene un grupo -Dgalactosa. El glucocerebrsido, que tiene en vez -D-glucosa, est presente en las membranas de otros
tejidos. El glucocerebrsidos, aunque poco comn, es precursor de globsidos y ganglisidos.
Los residuos de galactosa de algunos galactocerebrsidos estn sulfatados en su posicin C3 para
formar compuestos inicos como los sulftidos.
Los ganglisidos forman son los glicoesfingolpidos mas complejos. Se han caracterizado cerca de 60
ganglisidos. Los ganglisidos son componentes principales de las membranas de la superficie celular y
constituyen una fraccin significativa de los lpidos del cerebro. Tambin estn presentes en otros tejidos en
menor proporcin.
Los ganglisidos tiene un gran significado mdico y fisiolgico. Sus carbohidratos complejos, que se
extienden mas all de la superficie de la membrana celular, actan como receptores especficos para
ciertas hormonas de naturaleza glicoproteica de la pituitaria. Tambin son receptores para toxinas
protenicas bacterianas, como la toxina del clera. Hay mucha evidencia de que los ganglisidos son
determinantes especficos del reconocimiento clula-clula, por lo que probablemente tengan un papel
importante en el crecimiento y diferenciacin de los tejidos as como en la carcinognesis.
Los esfingolpidos son los determinantes de los grupos sanguneos A, B, y O en humanos. El
ganglisido GM1, el cual, indudablemente juega un papel valioso en las clulas animales que lo contienen, es
el punto de unin de la toxina del clera en las membranas celulares.
7 (a) Qu estructuras pueden adoptar en un medio acuoso los fosfolpidos y glicolpidos de acuerdo a su
estructura qumica? Micelas y bicapas
(b) Por qu los fosfolpidos y los glicolpidos tienden a formar en el agua mas fcilmente bicapas que
micelas?
Sus dos cadenas de cidos grasos son demasiado voluminosas para estar dentro de la micela. Por el
contrario, las sales de los cidos grasos, tienden a formar micelas porque contienen solo una cadena
hidrocarbonada.
(c) Describa la formacin de una bicapa de lpidos incluyendo las fuerzas que favorecen su formacin y que
la estabilizan.
Es un proceso de autoensamblaje. Es un proceso rpido y espontneo en el agua. Las interacciones
hidrofbicas son las principales fuerzas conductoras en la formacin de bicapas de lpidos. Adems hay
fuerzas de atraccin de van der Waals entre las cadenas hidrocarbonadas. Estas fuerzas favorecen el
5

empaquetamiento de las colas. Finalmente, hay atracciones electrostticas y puentes de hidrgeno entre las
cabezas polares y las molculas de agua. As, las bicapas de lpidos, estn estabilizadas por un conjunto
completo de fuerzas que median las interacciones moleculares en los sistemas biolgicos.
(d) Cules son las consecuencias de que una bicapa lipdica sea una estructura no covalente cooperativa?
Las bicapas lipdicas son estructuras cooperativas; se mantienen unidas mediante muchas
interacciones no covalente que las refuerzan, el agrupamiento se favorece por las fuerzas de van der Waals.
Estos factores energticos tienen tres consecuencias:
1) Las bicapas lipdicas tienen una tendencia espontnea a ser extensas,
2) las bicapas lipdicas tienden a cerrarse sobre s mismas, de tal manera que no existan extremos
con cadenas hidrocarbonadas expuestas, lo que da por resultado la formacin de un compartimiento y
3) las bicapas lipdicas se autoreparan, puesto que un orificio en la bicapa es energticamente
desfavorable.
8 (a) Cmo se ha estudiado la permeabilidad de la bicapa de lpidos a los iones y a las sustancias polares?
Se ha estudiado en dos sistemas: las vesculas lipdicas (liposomas) y las bicapas planas. Los
liposomas son compartimientos acuosos encerrados por una bicapa de lpidos. Se pueden formar al
suspender un lpido adecuado, tal como fosfatidilcolina, en un medio acuoso.
Esta mezcla es sonicada (agitada por ondas sonoras de alta frecuencia) para producir una dispersin
de vesculas cerradas de un tamao muy uniforme. Estas vesculas son tiles no solo para estudios de
permeabilidad, sino para introducir sustancias impermeables a las clulas.
La estructura de las bicapas planas se puede construir a travs de un hoyo de 1 mm en una divisin
entre dos compartimientos acuoso. Se pueden formar de la siguiente manera; un pincel fino se sumerge en
una solucin formadora de membranas, tal como fosfatidilcolina en decano. La punta del pincel se coloca en
el hoyo de particin entre los dos medios acuosos. La membrana en forma de bicapa plana constituida por
fosfatidilcolina, se forma en pocos minutos.
(b) Cmo se pueden analizar (separar) las protenas de membrana?
Por medio de electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS.
(c) Cmo se ha demostrado que muchas protenas de membrana se encuentran embebidas o atraviesan la
bicapa de lpidos?
Por microscopa electrnica de criofractura y grabado y por marcaje con compuestos radiactivos que
reaccionan con las cadenas laterales de las protenas. En la tcnica de criofractura, una muestra de
membrana se congela rpidamente a una temperatura cercana a la del nitrgeno lquido (-196C). Esto
inmoviliza la muestra para las manipulaciones subsecuentes. La muestra se fractura con un microtomo fro,
lo que con frecuencia rompe la bicapa en monocapa. La membrana se cubre con una capa delgada de
carbn, sombrendola (cubrindola por sedimentacin evaporativa bajo vaco) con platino, y removiendo
toda la materia orgnica por tratamiento con cido. Tal rplica metlica puede ser examinada por
microscopa electrnica.
En la tcnica de congelacin-grabado, la superficie externa de la membrana adyacente al rea rota
revelada por criofractura puede tambin ser visualizada al sublimar primer (grabar) a -100C, algo del hielo.
Las micrografas electrnicas de crio-grabado de la mayora de las membranas biolgicas muestran una
cara interna de la fractura salpicada con partculas globulares de 50 a 85 que estn distribuidas al azahar.
Estas partculas corresponden a protenas de membrana, como se demuestra por su desaparicin cuando la
membrana es tratada con proteasas antes de la congelacin. Las membranas de mielina (que tiene un
contenido de protenas muy bajo) y los liposomas (compuestas solo de lpidos) tienen lisa la cara interna de
la fractura.
Los compuestos etilacetimidato (EA) e isoetionilacetamidato (IEA) reaccionan con los grupos amino
libres de las protenas. Solo EA difunde a travs de la membrana. La comparacin del patrn de marcaje con
6

estos dos compuestos revela si una protena dada se expone solo en la superficie externa o en la interna.
Las protenas marcadas con ambos reactivos, estn expuestas a ambos lados de la misma (cruzan toda la
membrana).
(d) Cmo se ha demostrado que las protenas de membrana plasmtica tienen difusin lateral?
Se fusionaron clulas de ratn en cultivo con clulas humanas por tratamiento con virus Sendai para
producir una clula hbrida llamada heterokarin. Se marcaron las protenas de membrana de las clulas
ratn y humano con marcadores fluorescentes diferentes (verde y rojo).
El marcaje se hizo con anticuerpos dirigidos a las protenas de ratn y humano, respectivamente,
conjugados con molculas fluorescentes de los colores ya mencionados. Despus de una fusin, las
protenas de ambas especies aparecen completamente separadas, pero despus de 40 min a 37C se lleva
a cabo una difusin de las protenas de tal manera que ahora la fluorescencia verde y rojo est distribuida
homogneamente (entremezcladas).
La adicin de sustancias que inhiben la sntesis de protenas no disminuye la velocidad del proceso,
pero s lo hace la disminucin de la temperatura a 15C.
(e) En que consiste el movimiento flip-flop (transversal) de los fosfolpidos de membrana?
La transferencia de una molcula de un lpido a travs de la bicapa, un proceso denominado difusin
transversa o flip-flop, es un evento extremadamente raro porque se requiere que los grupos con cabeza
polar de los lpidos pasen a travs de la bicapa de lpidos. La vida media de estos cambios es de al menos
varios das.
Por el contrario, los lpidos son altamente mviles en el plano de la bicapa (difusin lateral). Este
movimiento se puede cuantificar por la velocidad de recuperacin de fluorescencia despus de la
fotodecoloracin. Un grupo fluorescente se une especficamente a un componente de la bicapa y un pulso
intenso de lser enfocado en una rea muy pequea (3 m2) es usado para destruir (blanquear) el
fluoroforo.
La velocidad a la cual el rea blanqueada recupera su fluorescencia, medida por microscopa de
fluorescencia, indica la velocidad a la cual la molculas con y sin fluorescencia difunden lateralmente hacia
dentro y hacia afuera del rea blanqueada, respectivamente. La bicapa de lpidos puede difundir la longitud
de una bacteria ( 1 m) en 1 segundo.
(f) Explique por qu este movimiento transversal no se ha observado en las protenas de membrana y que
consecuencias funcionales tiene.
La barrera de energa libre que tienen que vencer las molculas de protenas para tener movimiento
transversal es muy grande. La consecuencia es que la asimetra de la membrana se mantiene durante
largos perodos de tiempo.
9 (a) Explique como se controla la fluidez de las membranas.
El grado de fluidez depende de la composicin de lpidos y de la temperatura. A bajas temperaturas,
existe poco movimiento de lpidos y la bicapa est casi en forma cristalina (paracristalina). Arriba de una
temperatura, que es caracterstica para cada membrana, los lpidos pueden sufrir movimiento rpido. La
temperatura de transicin del estado paracristalino slido al fluido depende de la composicin de lpidos de
la membrana. A una mayor proporcin de cidos grasos saturados, es mayor la temperatura de transicin
del estado slido al fluido de la membrana.
El contenido de esteroles de una membrana es tambin un determinante importante de la
temperatura de transicin. La estructura planar rgida del ncleo de esteroles, insertado entre las cadenas
laterales de cidos grasos, tiene dos efectos sobre la fluidez: abajo de la temperatura de transicin slidofluido, la insercin de esteroles previene el empaquetamiento altamente ordenado de las cadenas de acil
graso y as favorece la fluidez de la membrana. Arriba de la temperatura de transicin, el sistema de anillo
rgido de los esteroles, reduce la libertad de movimiento de las cadenas acil graso vecinas para moverse por
7

rotacin alrededor de los enlaces carbono-carbono y as reduce la fluidez de la bicapa. Los esteroles tienden
a moderar los extremos de ambos estados de la membranas que los contienen.
El estado slido se favorece por la presencia de residuos de cidos grasos saturados y por la longitud
de la cadena. En los procariontes, la fluidez se regula por la variacin del nmero de dobles enlaces y por la
longitud de la cadena de cidos grasos. En los eucariontes, el colesterol es un regulador clave de la fluidez.
Los microorganismo y las clulas animales en cultivo regulan su composicin de lpidos para lograr una
fluidez constante bajo varias condiciones de crecimiento. Por ejemplo, cuando se cultivan a baja
temperatura, las bacterias sintetizan una mayor proporcin de cidos grasos no saturados que cuando se
cultivan a altas temperaturas. Como resultado de lo anterior, las membranas de las bacterias cultivadas a
bajas o altas temperaturas, tienen el mismo grado de fluidez.
(b) De que molculas en la membrana forman parte los carbohidratos y como se unen a stas?
Las membranas de los eucariontes contienen normalmente de 2 a 10% de carbohidratos los cuales
forman parte de los glicolpidos y de las glicoprotenas. Los CHOS de las glicoprotenas de las membranas
estn unidos al nitrgeno amida de la cadena lateral de la asparagina (unido a N) o al tomo de oxgeno de
la cadena lateral de la serina o la treonina (unido a O).
El azcar unido directamente a estas cadenas laterales es normalmente N-acetilglucosamina o Nacetilgalactosamina.
(c) Cmo se puede demostrar que los residuos de carbohidratos en las membranas estn en la parte
exterior de las mismas.
Por tcnicas especficas de marcaje. Las lectinas, protenas de plantas con alta afinidad para residuos de
azcar, son herramientas valiosas para este propsito. Por ejemplo, la concanavalina A se une a los
residuos internos y no reducidos de alfa-manosilo, mientras que la aglutinina de germen de trigo se une a los
residuos terminales de N-acetilglucosamina. Estas lectina se pueden visualizar rpidamente al microscopio
electrnico si se conjugan con marcadores densos a los electrones como ferritina, una protena de 460 kd y
un centro de cerca de 4000 iones Fe+3.
La concanavalina A se une especficamente a la superficie externa de la membrana del eritrocito y no a la
parte citoslica. Los estudios de unin de una amplia variedad de lectinas a muchas clases de membranas
han demostrado que los residuos de azcar de los glicolpidos y glicoprotenas de membrana estn siempre
localizadas en el lado extracelular de las membranas plasmticas. Los residuos de carbohidratos de las
glicoprotenas de las membranas ayudan a mantener el carcter asimtrico de las membranas biolgicas.
10 (a) Cules son las caractersticas de la glicoforina A?
Es una protena de la membrana de eritrocitos constituida por una sola cadena polipeptdica de 131
residuos de aa que tiene unidas 16 unidades de oligosacridos. Fue la primera protena integral de
membrana que se secuenci.
Cul es su contenido de carbohidratos? 60%
De cuntas partes esta constituida? De tres partes:
(1) Una regin amino terminal de 72 residuos de aa localizada en la parte extracelular de la
membrana la cual contiene todas las unidades de CHOS,
(2) Una regin media hidrofbica de 19 residuos de aa la cual est enterrada en el centro
hidrocarbonado de la membrana, y
(3) una regin carboxilo terminal de 40 residuos de aa rica en cadenas polares y ionizables y que
est en el lado citoslico de la membrana.
Qu tipo de carbohidrato predomina? cido silico
A qu aminocidos estn unidos los residuos de carbohidratos?

De las 16 unidades de carbohidratos (Aprox 100 residuos de carbohidratos) quince de ellas estn
unidas a la serina o treonina y 1 de ellas est unida al grupo amida de la cadena lateral de la asparagina.
Qu caractersticas le da a los glbulos rojos? Una cubierta aninica e hidroflica, que los capacita para
circular sin adherirse a otras clulas y paredes de los vasos
(b) Describa la manera de predecir exactamente las hlices transmembrana a partir de la secuencia de
aminocidos de la protena.
La presencia de un segmento de 19 residuos de aa altamente polar en la glicoforina A sugiri que
este segmento de la protena atraviesa la bicapa de lpidos y que est doblado en forma de alfa-hlice. Con
polipptidos sintticos se ha demostrado que las hlices alfa son mas estables en un medio no polar que en
el agua, la cual compite con los enlaces de hidrgeno que estabilizan a la alfa-hlice entre los grupo imino y
carbonilo.
Un enfoque para identificar las hlices transmembranales es preguntar si el segmento helicoidal
postulado prefiere estar en un ambiente hidrofbico o en el agua. Entonces hay que calcular el cambio de
energa libre cuando un segmento helicoidal es transferido del interior de la membrana al agua. Por ejemplo,
la transferencia de la hlice de poli-L-Arg del interior de una membrana al agua debe ser altamente favorable
(-12.3 kcal/mol de Arg en la hlice), mientras la transferencia de una hlice de poli-L-Phe sera desfavorable
(+3.7 kcal/mol de Phe en la hlice).
El centro hidrocarbonado de la membrana es tpicamente 30 de ancho, la cual puede ser
atravesada por una hlice alfa de los 20 residuos. Se puede tomar la secuencia de protenas y calcular el
cambio de energa libre en la transferencia de una alfa-hlice de los residuos 1 a 20 del interior de la
membrana al agua. Los mismos clculos pueden hacerse para los residuos 2 a 21, 3 a 22 y as
sucesivamente hasta que lleguemos hasta el fin de la secuencia. El ancho de 20 aminocidos escogido para
este clculo se la llama ventana.
Para la glicoforina A, una grfica de cambio de energa libre contra la posicin del primer residuo en
la ventana muestra un mximo bien definido de +40 kcal/mol cuando el residuo 73 es el primero en la
ventana. Esta grfica de hidropata identifica correctamente la hlice transmembrana de la glicoforina. En
general, un pico de +20 kcal o mas en una grfica de hidropata basada en una ventana de 20 residuos
indica que un segmento polipeptdico pudiera ser una hlice que atraviesa una membrana. Por este criterio,
la glicoforina A tiene solamente una hlice que cruza la membrana, lo que concuerda con hallazgos
experimentales.

2. TRANSPORTE A TRAVS DE MEMBRANAS

1 (a) Cules son los tipos de transporte en las membranas biolgicas?
I. NO MEDIADO. Ocurre por difusin simple (sin protena acarreadora o transportadora). p.e. agua, oxgeno,
nitrgeno y metano
II. MEDIADO
(1). Transporte pasivo.
(1.1) Difusin facilitada. Glucosa permeasa de los eritrocitos, intercambiador cloro-bicarbonato de los
eritrocitos.
(1.2) Ionforos y porinas. Valinomicina, monensina y gramicidina.
(2). Transporte activo.
(2.1). Primario: Energa: ATP, luz, oxidacin. Ejemplos: H+ ATPasa (membrana plasma, plantas),
NaK ATPasa (membrana plasmtica, animales), ATPasa de Ca+2 y ATPasa de H+-K+ .
(2.2). Secundario: Gradiente de iones; AA y azcares (impulsado por sodio en intestino); lactosa
(impulsado por H+, bacterias) (permeasa de lactosa).
(b) Cmo podemos distinguir entre transporte activo y transporte pasivo?
Depende del cambio en energa libre de las especies transportadas. Cuando el G es positivo, el
proceso de transporte es activo y cuando el G es negativo el proceso de transporte es pasivo. El transporte
activo requiere una entrada acoplada de energa libre, mientras que el transporte pasivo ocurre
espontneamente.
(c). Cules son las clases generales de sistemas de transporte mediado de acuerdo a la
(c1) estequiometra del proceso.
(c1.1) Uniporte y (c1.2). Cotransporte: a) simporte y b) antiporte, y
(c2) al carcter elctrico del ion transportado.
(c2.1) electroneutro cuando hay una neutralizacin de cargas simultnea, ya sea por el simporte de iones
con carga opuesta o por el antiporte de iones con carga similar y
(c2.2) electrognico cuando el proceso de transporte resulta en la separacin de cargas.
(d) Cules son los papeles de los sistemas de transporte especficos?
(d1) Regular el volumen celular y mantener el pH intracelular y la composicin inica en un rango
muy estrecho para proporcionar un medio ambiente favorable para la actividad enzimtica.
(d2) Extraer y concentrar los combustibles metablicos y los bloques constructores del medio
ambiente y eliminar las sustancias txicas.
(d3) Generar gradientes inicos que son esenciales para la excitabilidad de nervios y msculo.
2 (a) Describa el funcionamiento del acarreador de glucosa de eritrocitos.
El transporte de glucosa a los eritrocitos tiene las siguientes caractersticas que los diferencian del
transporte no mediado y que comprueban que es mediado por un nmero limitado de protenas:
(1) velocidad y especificidad; el transporte de glucosa en los eritrocitos es cuatro rdenes de magnitud
mayor que el valor calculado en una bicapa sinttica de lpidos, mientras que el valor de manitol es similar en
ambos sistemas;
(2) cintica de saturacin; demuestra que hay un nmero saturable de sitios para realizar el transporte;
(3) susceptibilidad a la inhibicin competitiva; muchos compuestos parecidos a la glucosa inhiben el
transporte, el compuesto 6-0-benzil-D-galactosa muestra una conducta tpica de inhibicin competitiva y
(4) susceptibilidad a la inhibicin qumica; el tratamiento de los eritrocitos con HgCl2, el cual reacciona con
los grupos SH de las protenas y as inactiva a muchas enzimas. causa la desaparicin rpida del flujo
saturable de glucosa y la constante de permeabilidad se aproxima a la del manitol.
Es una glicoprotena de PM 55 kDa que tiene cuatro dominios principales:
10

(1) un conjunto de 12 segmentos hidrofbicos en forma de hlice que atraviesan la membrana y que se
piensa forman un cilindro hidrofbico que rodea un canal hidroflico a travs del cual la glucosa es
transportada;
(2) un dominio citoplsmico grande y muy cargado localizado entre las hlices 6 y 7;
(3) un dominio externo, pequeo que contiene carbohidratos localizado entre las hlices 1 y 2, y (4) un
dominio COOH terminal citoplsmico relativamente grande. Esta protena constituye el 2% de las protenas
de los eritrocitos.
El transporte de glucosa aparentemente toma lugar cuando la glucosa se une a la protena en un lado
de la membrana, seguido por un cambio conformacional que cierra el primer sitio, mientras expone el
segundo. Parece que todas las protenas transportadoras estn situadas asimtricamente a travs de la
membrana y que alternan entre dos estados conformacionales en los cuales los sitios de unin al ligando
estn expuestos, a su vez en lados alternos de la membrana.
Esta protena de eritrocitos se conoce como GLUT1 y se expresa en la mayora de los tejidos,
aunque en hgado y msculo, los tejidos que transportan activamente glucosa, est presente solo en
pequeas cantidades. Se han identificado al menos otros 4 transportadores de glucosa, GLUT2 a GLUT5
que tiene de un 40 a un 65% de homologa a GLUT1 y que tiene diferente distribucin en los tejidos. Por
ejemplo GLUT2, es prominente en clulas pancreticas (las cules secretan insulina en respuesta a un
aumento en la [glucosa] y en hgado (donde su defecto produce la enfermedad de almacenamiento de
glucgeno tipo I). El GLUT4 est presente principalmente en las clulas musculares y del tejido adiposo.
La distribucin de estos transportadores correlaciona con la respuesta de estos tejidos a la insulina. El
transporte de glucosa en hgado no es sensible a insulina, mientras que el msculo y el tejido adiposo toman
glucosa cuando son estimulados por insulina.
Despus de 15 minutos de la administracin de insulina, el transporte mximo (J max) para el
transporte masivo mediado de glucosa a stas clulas aumenta de 6 a 12 veces, mientras que la Km
permanece sin cambio. La captacin de glucosa retorna a lo normal 20 min a 2 horas despus de la
remocin de insulina. Los inhibidores de la sntesis de protenas no inhiben este proceso. En el estado basal,
las clulas musculares y del tejido adiposo almacenan transportadores de glucosa en las membranas de
vesculas internas. Despus de la estimulacin con insulina, stas vesculas se fusionan con la membrana
plasmtica, un proceso conocido como exocitosis
(b) Describa el sistema de cotransporte de Cl- y HCO3- (intercambiador de aniones).
Este es otro sistema de difusin facilitada, un intercambiador aninico, el cual es esencial para el
transporte de CO2 de los tejidos a los pulmones El CO2 de desecho liberado, de los tejidos que respiran al
plasma sanguneo, entra a los eritrocitos, donde se convierte en HCO3- por la enzima anhidrasa carbnica.
El bicarbonato regresa al plasma para transportarse a los pulmones.
En los pulmones, el bicarbonato regresa a los eritrocitos donde se convierte en CO2 Se le conoce
como intercambiador cloro-bicarbonato, protena intercambiadora de aniones o banda 3. Protena integral de
membrana de 103 kD, cruza la membrana probablemente 12 veces, a diferencia del transportador de
glucosa, este es bidireccional. El movimiento acoplado de ambas especies inicas es obligatorio. No es
electrognico (no hay una ganancia neta de cargas elctricas en ningn lado de la membrana). Este
intercambiador consiste de un dominio amino-terminal hidroflico.
(c) Describa el sistema de transporte de los ionforos y la porina.
Los ionforos son molculas orgnicas de diferentes tipos, muchos de los cuales son antibiticos de
origen bacteriano, que aumentan mucho la permeabilidad de las membranas a iones especficos. Los
ionforos pueden ser acarreadores (valinomicina y monensina) o formadores de canales (gramicidina A). Los
acarreadores aumentan la permeabilidad de la membrana a su ion unindolo, difundindolo a travs de la
membrana y liberando el ion al otro lado.
Los formadores de canales forman canales transmembrana o poros, a travs de los cuales los iones
pueden difundir. La valinomicina es una molcula cclica compuesta de la siguiente secuencia que se repite
11

3 veces: cido L-lctico-L-valina-cido D-hidroxiisovalrico-D-valina. La valinomicina es un acarreador de

potasio.
La gramicidina es un pptido compuesto por 15 aminocidos, algunos tienen la forma D y otros la L.
Dos cadenas de este pptido forman un tnel por donde pasan iones catinicos. La manera en que se
distingue experimentalmente si un antibitico es un acarreador o forma un tnel es estudiando la sensibilidad
del fenmeno a la temperatura: mientras que los acarreadores son altamente sensibles, los formadores de
canales son poco sensible, aunque en ambos casos el incremento de la temperatura aumenta el transporte
de los iones.
3 (a) Cmo se puede calcular el cambio de energa libre para
(a1) especies sin carga y (a2) especies con carga?
Es el cambio de energa libre requerida para transportar una especie del lado 1 en donde est
presente en una concentracin c1 al lado 2 donde est presente en una concentracin c2
(a) G = RTln(c2/c1)
(b) G = RTln(c2/c1) + ZF V
Para una especie cargada se est considerando el potencial elctrico a travs de la membrana. La
suma de las concentraciones y los trminos elctricos se llama potencial electroqumico Z = carga elctrica
de las especies transportadas, V = potencial en volts a travs de la membrana; F = constante de Faraday
(23.062 kcal/V mol).
(b) Calcule el G para el transporte de una molcula no cargada
(b1) de c1 = 10-3 mM a c2 = 10-1 mM y
(b2) de c1 = 10-1 mM a c2 = 10-3 mM. Indique si el transporte es pasivo o activo. T = 25oC (298oK).
(b1) = 1.987 x 298 x ln(10-1/10-3), R = cal/moloK.
= + 2.7 kcal/mol (es positivo, entonces el transporte es activo).
La sustancia se transporte de una concentracin menor a una mayor.
(b2) = 1.987 x 298 x ln(10-3/10-1)
= - 2.7 kcal/mol (es negativo, entonces el transporte es pasivo).
La sustancia se transporta de una concentracin mayor a una menor.
4. Cules son los tres tipos generales de ATPasas de transporte?
4.1. ATPasas tipo P. (se fosforilan reversiblemente como parte de su ciclo de transporte). Tienen
homologa de secuencia, especialmente cerca del residuo Asp que se fosforila. Todas se inhiben por el
vanadato, un anlogo de fosfato,. Son protenas integrales de membrana que cruzan la membrana varias
veces. Ejemplos: Na+K+ (eucariontes superiores), H+K+ (clulas que secretan cido), H+ (Neurospora, plantas
superiores), Ca+2 (de plasma de eucariontes superiores y retculo endoplsmico de clulas de msculo
animal).
4.2. ATPasas tipo V. (V es por vacuola) Esta es una clase de ATPasas de transporte que es
responsable de acidificar los compartimientos intracelulares de muchos organismos. Dentro de las vacuolas
de plantas superiores y hongos, el pH se mantiene muy abajo por este tipo de ATPasas. Las ATPasas tipo V
tambin son responsables de la acidificacin de lisosomas, endosomas, el complejo de Golgi y las vesculas
secretoras en las clulas animales. Estas ATPasas no sufren fosforilaciones y desfosforilaciones cclicas y
no son inhibidas por ouabana o vanadato. Su papel es el de crear un pH bajo en el compartimiento para
activar proteasas y otras enzimas hidrolticas.
4.3. ATPasas tipo F (La F en el nombre se origin en su identificacin como factores acoplantes de
energa) Juegan un papel central en las reacciones de conservacin de energa en bacterias, mitocondrias y
cloroplastos. Catalizan el paso transmembrana reversible de los protones impulsado por la hidrlisis del
ATP. El flujo de los protones a travs de la membrana para disipar el gradiente de concentracin se
acompaa de sntesis de ATP a partir de ADP y Pi (la inversa de la hidrlisis del ATP). Por lo tanto el
12

nombre mas apropiado es la ATP sintetasa. En algunos casos, la formacin del gradiente de protones es
impulsada por una fuente de energa diferente al ATP, como la oxidacin de sustratos o la luz del sol.
5 (a). Cmo se genera el gradiente inico de Na+ y K+ a travs de la membrana celular?
Se genera por medio la bomba de Na+K+. Esta protena bombea de manera activa K+ al interior de la
clula y Na+ al exterior de la clula. De esta manera se mantiene una alta concentracin de K+ y un baja
concentracin de Na+ en el interior de la clula en relacin con el medio extracelular. Esta protena requiere
de ATP, de hecho solo hidroliza ATP si el Na y el K estn presentes. Se denomin Na+K+ ATPasa.
Ecuacin: ATP + H2O --> ADP + Pi + H+
(b) Cul es la localizacin de la bomba de NaK ATPasa en la membrana celular?
La bomba consiste de 2 clases de subunidades (112 kD) y (aprox 40 kD), asociadas en la
membrana como un tetrmero de composicin 22. Ambas subunidades son protenas integrales de
membrana. El extremo extracelular de la subunidad a contiene los sitios para la unin a cardiotnicos y la
parte intracelular los sitios de unin para el ATP. La subunidad contiene cadenas de oligosacridos en su
parte extracelular
(c) Dnde se localizan los centros de unin para el ATP, los iones y los inhibidores en la Na+K+ ATPasa?
Se determinaron por estudios en los fantasmas de eritrocitos.
(c1) El sodio debe estar adentro y el potasio afuera para que se active la ATPasa y para que se transporten
los iones.
(c2) El ATP es un sustrato efectivo para la ATPasa y la bomba solo cuando esta fuente de energa est
dentro de la clula.
(c3) Los esteroides cardiotnicos inhiben la bomba y la ATPasa solo cuando estn localizados fuera de la
clula.
(c4) El vanadato inhibe la bomba y la ATPasa slo cuando est localizado dentro de la clula
(d) Cules son algunos de los posibles mecanismos involucrados en el funcionamiento de la Na+K+ATPasa?
El ATP fosforila a la ATPasa slo cuando el Na+ y el Mg+2 estn presentes. El intermediario
fosforilado se hidroliza entonces cuando el K+ est presente. Tambin la bomba interconvierte, al menos,
dos diferentes conformaciones E1 y E2 lo cual produce 4 estados conformacionales E1, E1-P, E2-P y E2 . Se
transportan 3 Na y 2 K por ATP hidrolizado. La bomba genera una corriente elctrica a travs de la
membrana (es electrognica).
(e) Es posible que la bomba hidrolice ATP cuando los iones no se transportan?
No, la hidrlisis del ATP y el transporte de Na y K estn estrechamente acoplados como otros
proceso biolgicos: flujo de electrones y sntesis de ATP, hidrlisis de ATP y contraccin muscular. Es
posible que la bomba sintetice ATP cuando el flujo de iones se invierte al alterar las concentraciones de Na y
K en el medio extracelular de los eritrocitos
(f) Cules son las caractersticas del modelo de la Na K ATPasa?
Tres Na+ son tomados del medio intracelular (E1), la protena se fosforila (E2), la protena sufre
eversin y libera al Na+, toma K del medio extracelular, se desfosforila (1) y libera al potasio al medio
intracelular
(g) D dos ejemplos de esteroides cardiotnicos y su mecanismo de inhibicin.
La Digitoxigenina y la ouabana, son derivados de plantas y tienen una profunda influencia sobre la
funcin del corazn (aumentan la fuerza de contraccin cardaca). El anillo de lactona insaturado en la
conformacin en C-17 y el grupo OH en C-14 y una fusin cis de los anillos C y D son esenciales para su
13

actividad inhibitoria. Estos compuestos inhiben las reacciones de desfosforilacin de la NaK ATPasa, slo si
el esteroide est localizado en la parte extracelular de la membrana. Estabilizan la forma E2-P de la bomba.
La inhibicin de la bomba de NaK por los digitlicos conduce a un mayor nivel de sodio dentro de la
clula. La disminucin en el gradiente de sodio produce una menor extrusin de calcio por el intercambiador
sodio-calcio. El aumento subsecuente en el calcio intracelular aumenta la fuerza de contraccin del msculo.
6 (a) Cmo se bombean del citosol los iones calcio?
El Ca+2 es un segundo mensajero que dispara numerosas respuestas celulares incluyendo la
contraccin muscular, la liberacin de neurotransmisores y el rompimiento del glucgeno. El Ca+2 es un
activador importante del metabolismo oxidativo. La [Ca+2] en los espacios extracelulares (aprox 1500 mM) es
de 4 rdenes de magnitud mayor que en el citosol (0.1 mM). Este gradiente de [ ] es mantenido por el
transporte activo de Ca+2 a travs de la membrana plasmtica, el retculo endoplsmico (retculo
sarcoplsmico en el msculo), y la membrana interna mitocondrial.
La membrana plasmtica y el retculo endoplsmico contienen una ATPasa de Ca+2 que bombea
activamente al Ca+2 fuera del citosol a expensas de la hidrlisis del ATP. Su cintica es muy similar a la de la
NaK ATPasa. Se ha estudiado mas intensamente la ATPasa de calcio del retculo endoplsmico debido a su
abundancia. Constituye mas del 80% de las protenas integrales y abarca 1/3 del rea de superficie de la
membrana
(b) Cul es la relacin estructural y funcional de la ATPasa de calcio con la de NaK?
Las grficas de hidrofobicidad sugieren que la ATPasa de calcio tiene el mismo patrn de hlices
transmembrana que la ATPasa de NaK. Un residuo de aspartato es fosforilado transitoriamente por ATP en
una reaccin dependiente de calcio, despus se hidroliza este intermediario fosforilado (no requiere calcio).
El ciclo para la extrusin del ATP es el siguiente: El calcio se une a la protena del lado citoslico (E1), se
fosforila y cambia de conformacin a E2 de tal manera que el calcio se extruye, se desfosforila y regresa a la
conformacin E1. En resumen las similitudes entre ambas ATPasas son las siguientes:
1. La enzima existe en dos conformaciones: E1 y E2,
2. La fosforilacin favorece a E2 y la desfosforilacin favorece a E1,
3. Los sitios de unin de los iones se invierten (se vuelven de dentro hacia afuera) y su afinidad para Ca+2
cambia mas de 1000 veces en la transicin de E1 a E2,
4. Se forma el intermediario aspartil fosfato E-P. La secuencia de 10 residuos que contiene al aspartato es
idntica en ambas bombas.
5. El vanadato inhibe al transporte de Ca+2 y a la ATPasa estabilizando la forma E2.
6. La transicin de E2 a E1 es acelerada por el ATP.
7. (a) Describa el transporte activo secundario (TAS).
El gradiente de iones formado por el transporte primario de Na+ o H+, impulsado por la luz, oxidacin,
o hidrlisis de ATP puede en s mismo proveer la fuerza conductora para el cotransporte de otros solutos.
Muchas clulas contienen sistemas de transporte que acoplan el flujo espontaneo cuesta abajo de H+, o Na+
al bombeo simultneo cuesta arriba de otro ion, azcar o aminocido.
(b) Cmo est involucrado el flujo de sodio en el transporte de azcares y aminocidos dentro de la clula
animal (TAS)?
En las clulas epiteliales intestinales la glucosa y ciertos aminocidos son cotransportados por el
sodio usando el gradiente de sodio establecido por la NaK ATPasa (simporte). Si el movimiento es en la
misma direccin es simporte y si es en direccin opuesta es antiporte. El sodio es eliminado posteriormente
por la bomba de NaK. En muchas clulas la glucosa entre por difusin facilitada por medio de un
transportador de glucosa. Este sistema simporte de glucosa dependiente de sodio es bloqueado por
Phlorizin, (solo si se une a la superficie externa del transportador) mientras que el sistema de transporte
uniporte de glucosa (independiente de sodio) es inhibido por citocalasina B (solo si se une del lado
citoplsmico del transportador)
14

Muchas clulas animales tienen un sistema antiporte que bombea simultneamente 1 ion Ca+2 al
exterior de la clula y permite la entrada de 3 iones Na+. Este sistema permite que la clula tenga bajas
concentraciones de calcio requeridas para su funcin normal. El papel del Na+ en los sistemas simporte y
antiporte como los descritos requiere un continuo bombeo de Na+ para mantener el gradiente de Na+
transmembrana. De manera clara, la bomba de NaK ATPasa es un elemento central en muchos procesos de
cotransporte
(c) Explique como el flujo de protones puede impulsar algunos proceso en las bacterias (TAS).
La galactosido permeasa de E. coli permite la acumulacin del disacrido lactosa a niveles de 100
veces mayores que en el medio externo de crecimiento. La E. coli tienen normalmente un gradiente de
protones a travs de su membrana plasmtica producido por metabolismo que produce energa, los protones
tienden a fluir espontneamente de regreso a la clula para disipar este gradiente. La bicapa de lpidos es
impermeable a los protones, pero la galactosido permeasa proporciona una ruta para que los protones
regresen, y la lactosa es acarreada simultneamente a la clula en la protena simporter (permeasa). La
acumulacin endergnica est acoplada al flujo exergnico de protones; el cambio de energa libre total para
el proceso acoplado es negativo.
8. La concentracin de Na+ dentro de una clula es aproximadamente 12 mM, la cual est baada por el
plasma con una concentracin de Na+ de 145 mM.
El potencial transmembrana tpico de una clula es de -0.07 V (adentro negativo en relacin al
exterior). Cul es la energa libre para el transporte de 1 mol de Na+ fuera de la clula a 37oC? NOTA
cuando un ion positivo es transportado desde el lado negativo de la membrana al lado positivo, el signo del
potencial de membrana es positivo. Cuando es transportado hacia el lado negativo, el signo es negativo.
G = RTln(c2/c1) + ZF V
R = 1.987 x 10-3 kcal mol-1 oK-1 (8.315 x 10-3 kJ mol-1 oK-1).
Faraday = 23.062 kcal mol-1 V-1 (96.5 kJ mol-1 V-1).
c1 = 12 mM, c2 = 145 mM
G = 1.987 x 10-3 kcal/mol oK (310oK) ln(145/12) + (+1)(23.012 kcal mol-1 V-1)(+0.07 V).
G = 0.61597 ln12.06 + (+1)(23.012 kcal mol-1 V-1)(+0.07 V).
G = 0.61597 (2.49) + 1.61084.
G = 1.53377 + 1.61084.
G = 3.14461 kcal/mol (13.157 J/mol).
G = + 3.1 Kcal/mol (+13.1 kJ/mol).
9. El jugo gstrico (pH 1.5) es producido por el bombeo de cido clorhdrico desde el plasma (pH 7.4) hacia
el estmago.
(a) Calcule la energa requerida para concentrar los H+ en un litro de jugo gstrico a 37oC. R = 8.315 x 10-3
kJ/mol oK.
(a) Los protones se bombea de la sangre a un pH de 7.4 (c1) hacia el jugo gstrico a un pH de 1.5 (c2). c1=
3.981x10-8, c2 = 3.1x10-2
G = RTln(c2/c1)
G = (8.315 x 10-3 kJ/mol oK)(310.15 oK)ln(3.1x10-2/3.98x10-8)
G = 2.5789 ln 793969.8
G = 2.5789 (13.59) G = + 35.0349 kJ/mol (8.37 kcal/mol)
Si consideramos la carga se tendra que agregar el factor +1(23,012 kcal)(+0.07) = 1.61 kcal (6.75 kJ)

15

(b) Bajo condiciones celulares, cuntas moles de ATP deben ser hidrolizadas para proporcionar esta
cantidad de energa? (La energa libre de la hidrlisis del ATP bajo condiciones celulares es
aproximadamente -58 kJ/mol). Nota: no tome en cuenta el calculo por la carga.
Si la hidrlisis de 1 ATP libera 58 kJ/mol, cuntas moles deben hidrolizarse para liberar 35.03 kJ) R =
0.6040 mol ATP
La ATPasa de H+K+ es estimulada por la histamina por un proceso mediado por receptor cuyo
segundo mensajero es el AMPc. De tal manera que la cimetidina (Tagamet), un bloqueador de los
receptores de histamina (inhiben competitivamente la unin de histamina a sus receptores), es una
droga muy usada en el tratamiento de la lcera pptica.
10. Calcule la energa libre para el transporte simultneo de 3 moles de Na+ y 2 moles de K+ por el sistema
de la NaK ATPasa, tomando en cuenta las siguientes concentraciones:
[Na+]
[K+]
Potencial electroqumico
Dentro clula
14 mM
157 mM
-50 mV
Fuera clula
143 mM
4 mM
NOTA, cuando un ion positivo es transportado desde el lado negativo de la membrana al lado positivo, el
signo del potencial de membrana es positivo. Cuando es transportado hacia el lado negativo, el signo es
negativo). El sodio se bombea de adentro (c1) hacia afuera (c2) de la clula, el potasio se bombea de afuera
(c1) hacia adentro (c2) de la clula
Para Na+: c1 = 14 mM, c2 = 143 mM
G = 1.987x10-3 (298.13) ln (143/14) + (+1)(23.062) (+0.05)
G = 0.59213ln 10.2143 + 1.15
G = 0.59213 (3.67) + 1.15
G = 1.37598 kcal/mol + 1.15
G = 2.53 kcal/mol Para tres iones sodio G = 2.53 x 3 = 7.59 kcal/mol
Para K+: c1 = 4 mM, c2 = 157 mM (Atrctilsido y cido bongkreico)
G = 1.987x10-3 (298.13) ln (157/4) + (+1)(23.062) (-0.05)
G = 0.59213ln 39.25 -1.15
G = 0.59213 (3.67) - 1.15
G = 2.173 - 1.15 cal/mol
G = 1.02
Para dos iones potasio G = 1.02 x 2 = + 2.04 Kcal/mol
Gtotal = + 7.59 Kcal/mol + 2.04 Kcal/mol
G = 9.63 Kcal/mol

16

3. ACCIN HORMONAL
1. Defina lo que es una hormona y haga una clasificacin de acuerdo a la distancia que hay entre el sitio de
accin y el sitio de sntesis.
Una hormona es un mensajero qumico y se puede clasificar en autocrina, paracrina y endocrina
cuando la hormona acta sobre la misma clula que la produce, sobre clulas vecinas o cuando ingresa al
torrente circulatorio para actuar sobre clulas muy distantes, respectivamente.
(b) Haga una clasificacin breve de las hormonas en base a su naturaleza qumica.
(b1) molculas derivadas de aminocidos: epinefrina y tiroxina,
(b2) polipptidos y protenas: oxitocina, insulina, glucacon, vasopresina, hormona estimulante de la tiroides,
(b3) hormonas esteroides: (derivadas del colesterol): cortisol, aldosterona, testosterona, y
(b4) eicosanoides (derivadas del cido araquidnico, un cido graso poliinsaturado de 20 carbonos):
prostaglandinas, leucotrienos y tromboxanos.
(c) Cmo se pueden clasificar los mecanismos generales de transduccin hormonal?
(c1) La cascada de la adenilato ciclasa y AMPc,
(c2) La guanilato ciclasa de membrana y soluble.
(c3) La cascada de los fosfoinostidos, inositol trifosfato y canales de calcio y diacilglicerol que activa a una
protena cinasa;
(c4) actividad de tirosina cinasa de algunos receptores (insulina y muchos factores de crecimiento);
(c5) receptores intracelulares cuyo complejo con la hormona aumenta la transcripcin a nivel nuclear
(hormonas esteroides y tiroideas).
(d) Quin sintetiza y degrada al AMPc?
La adenilato ciclasa de membrana a expensas del ATP y teniendo como subproducto al PPi. Es
degradado por la fosfodiesterasa (citoslica).
(e) Por qu el AMPc recibe el nombre de segundo mensajero?
El AMPc se forma dentro de la clula en respuesta a la unin de la hormona con su receptor en la
membrana plasmtica, lo que activa a la adenilato ciclasa. La hormona no penetra a la clula, sino que
activa a la adenilato ciclasa cuando se une a su receptor. De esta manera la hormona es el primer
mensajero y el AMPc es el segundo mensajero.
(f) Qu efecto tendran sobre los niveles de AMPc la cafena y la teofilina?
Los aumentaran porque inhiben a la fosfodiesterasa.
(g) Mencione 4 ejemplos de hormonas que usan al AMPc como segundo mensajero:
Epinefrina, glucacon, hormona estimulante del folculo, noreprinefrina, hormona paratiroidea, y vasopresina.
2 (a) Mencione algunos efectos metablicos del AMPc.
Aumenta la degradacin de combustibles de almacenamiento, aumento la secrecin de cidos por la
mucosa gstrica, conduce a la dispersin de grnulos de pigmentos de melanina, y disminuye la agregacin
de las plaquetas.
(b) Explique cmo se acoplan los receptores con la adenilato ciclasa.
Por medio de las protenas G.
(c) Cuntas y cules son las subunidades de las protenas G acopladas a la adenilato ciclasa (AC)?
Dos tipos diferentes de protenas G se unen a la AC:
(c1) La Gs (estimulatoria) que estimula a la AC y tienen 3 subunidades: de 45 kD, de 35 kD y de 7 kD.
La subunidad -GTP es la que activa a la AC y
17

(c2) La Gi (inhibitoria) que inhibe a la AC y tiene 3 subunidades: (41 kD) y las y ya mencionadas para
Gs.
(d) Cul de las subunidades es la que se une a la AC? La subunidad .
3. (a) Cul es el papel del GTP en la activacin de la adenilato ciclasa?
La unin de la hormona al receptor cataliza el intercambio de GTP por GDP en la protena G lo cual
conduce a la disociacin de la subunidad y el dmero . De esta manera el complejo subunidad -GTP se
libera y se une a la AC. La hidrlisis posterior del GTP permite la reasociacin de las tres subunidades para
formar el complejo inactivo protena G-GDP.
(b) Cul sera el efecto de la inhibicin de la actividad de GTPasa de la protena G sobre los niveles de
AMPc?
Los aumentara ya que esta inhibicin causara que la adenilato ciclasa estuviera permanentemente
activa.
(c) Cmo acta la toxina del clera?
La toxina colrica (del Vibrio cholerae) es una protena que consta de una subunidad y 5
subunidades . Cuando la subunidad entra a las clulas hay una modificacin covalente en Gs y se
cataliza la transferencia de 1 unidad ADP-ribosa del NAD+ a una cadena lateral de una arginina especfica
de la subunidad de Gs.
Esta ADP-ribosilacin bloquea su capacidad para hidrolizar a GTP unido y por lo tanto daa el
mecanismo de desactivacin y mantiene a la protena G en forma activa. As la AC permanece activada,
incluso en ausencia de la hormona. El nivel de AMPc es anormalmente alto lo que estimula el transporte
activa de iones y provoca una fuerte irrupcin de iones sodio y agua en el tubo digestivo.
(d) Describa brevemente la topologa del receptor -adrenrgico en la membrana celular.
La epinefrina (adrenalina) activa a la adenilato ciclasa cuando se une al receptor -adrenrgico, una
protena transmembranal (membrana plasmtica) de 64 kD. Tiene un conjunto de 7 hlices
transmembranales, 2 unidades de oligosacridos estn localizados en la parte extracelular de la
membrana plasmtica, un lazo en el lado citoplasmtico participa en la activacin de las protenas G.
La fosforilacin de mltiples residuos de serina en el extremo carboxilo impide la interaccin del receptor
con la protena G.
4 (a) En que consiste el fenmeno de desensibilizacin de los receptores?
Consiste en la fosforilacin por una cinasa especfica en mltiples lugares impidiendo al complejo
hormona receptor catalizar el intercambio GTP-GDP y por consiguiente bloquea la transmisin de la seal.
La desfosforilacin restaura la capacidad para activar a la protena G.
(b) Cul es el mecanismo por medio del cual el AMPc activa a la protena cinasa?
La protena cinasa tienen dos subunidad: 1 reguladora que puede unirse al AMPc y dos catalticas.
En ausencia de AMPc las subunidades reguladoras y catalticas forman un complejo R2C2 que es
enzimticamente inactivo. La unin del AMPc a cada una provoca la disociacin del complejo R2C2 en una
subunidad R2 y dos subunidades C.
Estas subunidades catalticas libres son enzimticamente activas. As la unin del AMPc a las
subunidades reguladoras suprime la inhibicin de las subunidades catalticas en donde el AMPc acta como
un efector alostrico.
(c) Describa el sistema de la guanilato ciclasa.
Esta enzima cataliza la reaccin GTP - GMPc + PPi . Como la AC, la guanilato ciclasa est unido a
una seal biolgica especfica a travs de un receptor de membrana. El dominio extracelular de la guanilato
ciclasa cumple el papel de receptor de hormona. Esto est directamente acoplado al dominio citoslico a
travs de un dominio que cruza la membrana, el cual puede ser el sistema receptor de factor auricular
natriurtico (ANF o atriopeptina) - guanilato ciclasa. As, las actividades del sitio de unin de la hormona, el
18

dominio transmembrana y la guanilato ciclasa estn contenidas en la misma cadena polipeptdica. El ANF es
liberado por las clulas de la aurcula del corazn cuando aumenta el volumen sanguneo. Es transportado al
rin pro la sangre, el ANF activa a la guanilato ciclasa en las clulas de los tbulos colectores y as resulta
en un aumento de GMPc, el cual dispara la excrecin renal de Na+ y, consecuentemente de agua. La
prdida de agua reduce el volumen sanguneo, y as contrarrestando el estmulo inicial que conduce a la
secrecin de ANF.
El msculo liso vascular tambin tiene un receptor de ANF-guanilato ciclasa; cuando este receptor es
estimulado causa vasodilatacin, lo cual reduce la presin sangunea.
Un sistema similar receptor-guanilato ciclasa en la membrana plasmtica de las clulas epiteliales
intestinales es activado por una endotoxina bacteriana (n pequeo pptido) producido por E. coli. La
elevacin resultante en GMPc produce una disminucin en la reabsorcin de agua por el epitelio intestinal,
produciendo la diarrea caracterstica de la accin de la toxina.
Una segunda enzima de la guanilato ciclasa diferente es una protena citoslica asociada con el
grupo hemo. Esta enzima es activada por su ligando natural xido ntrico (NO), y por varios vasodilatadores compuestos tales como la nitroglicerina y nitroprusiato - usado en el tratamiento de la enfermedades
cardacas. Los nitrovasodilatadores se rompen espontneamente, produciendo NO.
El No es producido a partir de arginina por una oxidasa de funcin mixta dependiente de Ca+2, la
sintasa de NO, presente en muchas clulas de mamferos. El NO difunde de sus clulas de origen a las
clulas vecinas en donde se une al grupo hemo de la guanilato ciclasa y activa a la enzima para producir
GMPc. En el corazn el GMPc disminuye la fuerza de contraccin al estimular la bomba de iones que
mantiene una baja concentracin de Ca+2 citoslico. Esta relajacin del msculo cardaco tambin es
producida por las tabletas de nitroglicerina tomadas parta aliviar la angina, el dolor causado por la
contraccin del corazn deprivado de O2 debido al bloqueo de las arterias coronarias.
El NO es inestable y su accin es breve; dentro de segundos de su formacin, el NO sufre
degradacin a nitrito o nitrato. Debido a que se convierte lentamente a NO, la nitroglicerina produce una
relajacin de largo plazo del msculo cardaco.
Se piensa que la mayora de las acciones del GMPc son mediada por una protena cinasa
dependiente de GMPc, tambin conocida como cinasa G. Esta enzima est distribuida ampliamente en los
eucariontes; ciertos tejidos de mamferos, incluyendo el msculo y el cerebro, son ricos en esta enzima. Esta
constituida por un dominio cataltico y un dominio regulatorio en una sola cadena polipeptdica (Mr aprox 80
kD). La secuencia de dominio cataltico es homloga con la subunidad C de la protena cinasa A, y el
dominio regulatorio se parece a la subunidad R de la enzima dependiente de AMPc. La unin del GMP a la
protena cinasa G provoca que el dominio auoinhibitorio abandone el sitio de unin del sustrato, permitiendo
que la enzima fosforile protenas con residuos de Ser y Tir rodeados por la secuencia consenso apropiada.
Las protenas cinasas A y F reconocen diferentes secuencias consenso y por lo tanto regulan diferentes
protenas.
(d) Explique la va de formacin del inositol trifosfato y del diglicrido y sus efectos biolgicos.
La unin de la hormona con su receptor especfico estimula el intercambio GTP por GDP en la
protena Gp. El complejo GTP-Gp estimula a las fosfolipasa C (enzima de membrana). Esta ltima enzima
hidroliza al fosfolpido de membrana fosfatidil inositol 4,5 bifosfato en inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol.
El IP3 se une a su receptor especfico en el retculo endoplsmico para liberar al Ca+2 secuestrado.
El diacilglicerol y el Ca+2 activan a la protena cinasa C en la superficie de la membrana plasmtica.
La fosforilacin de las protenas por la protena cinasa C produce la respuesta celular a la hormona. Algunos
efectos biolgicos son: Glicogenlisis en clulas hepticas, secrecin de histamina en mastocitos,
contraccin de msculo liso, agregacin de plaquetas, y secrecin de insulina por islotes pancreticos.
5 (a) Cul es la estructura y funcin de la calmodulina?
Es una protena de 17 kD y funciona como un detector de calcio en casi todas las clulas
eucariticas. Consiste en dos lbulos globulares similares unidos por una hlice a larga. Cada lbulo
contiene dos centros de unin al calcio. Es miembro de una gran familia de protenas que unen Ca+2, que
incluye troponina, la cual dispara la contraccin muscular en respuesta a un aumento en la [Ca+2].
Cuando el Ca+2 se eleva a 1 m, la unin del calcio induce un cambio conformacional en la calmodulina. En
este estado, la calmodulina se asocia con una gran cantidad de protenas y modula su actividad. Una
isoenzima de la fosfodiesterasa de nucletidos cclicos que degrada al AMPc es una enzima dependiente de
Ca+2/calmodulina.
19

La influencia de un segundo mensajero (Ca+2) sobre el nivel de otro (AMPc) es tpico de muchos
sistemas de transduccin; existe un entrecruzamiento y retroalimentacin entre varias sistemas de una
clula, produciendo una complejidad adicional en las seales que en la mayora de los casos no se ha
entendido completamente.
Normalmente la [Ca+2] se mantiene muy abajo (<10-7 M) por la acin de las bombas de Ca+2 en el
retculo endoplsmico, mitocondria y membrana plasmtica. Algunos estmulos hormonales producen la
entrada de calcio a travs de canales especficos para el Ca+2 en la membrana plasmticas o la liberacin
del Ca+2 secuestrado en el RE o en la mitocondria y as elevando la [Ca+2] y disparando la respuesta celular.
Una forma en la cual el Ca+2 dispara las respuestas celulares es por la activacin de una variedad de
enzimas dependientes de Ca+2 incluyendo otra cinasa, la cinasa de protenas dependiente de Ca+2/CM.
La subunidad regulatoria de esta enzima es CM. Cuando aumenta el Ca+2 intracelular en respuesta a un
estmulo, esta cinasa fosforila y as regula a otras enzimas. La CM es una de las subunidades de la
fosforilasa b cinasa y de la sintetasa del NO, las cuales son activadas por Ca+2.
(b) Cul puede ser la utilidad de los ionforos de calcio?
Los ionforos pueden atravesar la bicapa lipdica porque tienen una superficie hidrofbica. Se pueden
usar para introducir Ca+2 en clulas y orgnulos. Muchas respuesta fisiolgicas que normalmente se
desencaden por la unin de hormonas a receptores de la superficie celular pueden tambin conseguirse
usando ionforos de Ca+2 para elevar el nivel de Ca+2 citoplasmtico.
De forma similar, la concentracin de Ca+2 no unido en una clula se puede hacer muy baja introduciendo un
quelante especfico para Ca+2 (EGTA).
(c) Explique los efectos metablicos de la insulina y su mecanismo de accin.
La insulina promueve proceso anablicos e inhibe otros catablicos en msculo, hgado y tejido
adiposo. Aumenta la velocidad de sntesis de glucgeno, cidos grasos y protenas. Estimula la gliclisis
induciendo la formacin de monmeros para la sntesis de macromolculas. Promueve la entrada de
glucosa y de algunos otros azcares y aminocidos en las clulas musculares y adiposas. Inhibe proceso
catablicos como la degradacin de glucgeno y de grasa.
Disminuye la gluconeognesis disminuyendo el nivel de enzimas tales como piruvato carboxilasa
y fructosa 1,6 bifosfatasa. Muchos de los efectos de la insulina son opuestos a los inducidos por
adrenalina y glucacon ya que estas hormonas indican que la glucosa es escasa, mientras que la insulina
indica que la glucosa es abundante.
La insulina acta unindose a receptores en la membrana plasmtica de las clulas blanco. La
elevada afinidad de la insulina por su receptor es esencial, ya que el nivel de insulina en sangre es muy bajo.
El receptor de insulina es una glicoprotena intrnseca de membrana que consiste en dos cadenas y dos
unidas por 3 puentes disulfuro.
El receptor activado de la insulina es una enzima que cataliza la fosforilacin de residuos de tirosina
en protenas blanco. Los dominios de tirosina cinasa del receptor estn localizados en la parte citoplasmtica
de las cadenas .
Los centros de unin de la insulina estn en las cadenas en la parte extracelular de la membrana.
La unin de insulina promueve la actividad tirosina cinasa del receptor (autofosforilacin) y el receptor
activado es una enzima que fosforila a protenas blanco que van a ejercer su efectos metablicos.
(d) Explique como actan las hormonas esteroides y tiroideas.
Los efectos primarios de las hormonas esteroides tales como el estradiol, progesterona y cortisona se
centran sobre la expresin gentica y no sobre las actividades enzimticas o sobre los proceso de
transporte, estas hormonas deben penetrar en las clulas blanco para ejercer sus efectos. Su principal lugar
de accin es el ncleo de la clula y no la membrana plasmtica.
El complejo hormona-receptor migra hasta el ncleo de la clula y se une a puntos especficos en el ADN.
Los receptores de hormonas esteroides tienen una regin de unin al ADN rica en residuos de cistena, Arg
y Lis.
En esta regin tienen secuencias Cis-X2-Cis que probablemente formen proyecciones dactilares que
se unan a metales que se ajustan bien para unirse a secuencias especficas de ADN como se ha
20

demostrado por el factor de transcripcin III una protena reguladora que activa la expresin del gen del ARN
ribosmico 5 S. Las hormonas esteroides unidas a sus receptores actan como intensificadores de la
transcripcin.
6 (a) Cmo funciona el receptor de acetilcolina de las sinapsis (punto de conexin entre dos neuronas) de
los vertebrados?
Este receptor juega un papel esencial en el paso de una seal de una neurona a la siguiente. Cuando
la seal elctrica llevada por la neurona presinptica alcanza el extremo sinptico de la clula, el
neurotransmisor acetilcolina es liberado al espacio sinptico. La acetilcolina se difunde rpidamente a travs
del espacio hasta la neurona postsinptica, donde se une con gran afinidad al receptor de acetilcolina.
Esta unin induce un cambio en la estructura del receptor, abriendo un canal transmembrana en la
protena. Los cationes del fluido extracelular, presentes a una mayor concentracin que en el citosol de la
neurona postsinptica, fluyen a travs del canal abierto hacia la clula y as despolarizando (disminuyendo el
gradiente electroqumico transmembrana) de la clula postsinptica.
El receptor de acetilcolina permite el paso de Na+ y K+ con igual facilidad, pero otros cationes y
aniones son incapaces de pasar a travs de este receptor.
Inicialmente, la membrana plasmtica de la neurona presinptica est despolarizada, con el interior
negativo, resultado de la accin de la bomba de NaK.
(1) Un estmulo a esta neurona produce una disminucin del potencial de accin a lo largo del axn. La
apertura de un canal de sodio operado por voltaje, permite la entrada de sodio y la despolarizacin local
resultante causa que se abran otros canales de sodio adyacentes y as sucesivamente.
(2) cuando esta onda de despolarizacin alcanza la punta del axn, los canales de calcio operados por
voltaje permiten la entrada de calcio a la neurona presinptica.
(3) La entrada de calcio dispara la exocitosis del neurotransmisor acetilcolina al espacio entre las neuronas
(4) la acetilcolina se une a su receptor en la membrana plasmtica de la neurona postsinptica causando
que el canal de iones operado por el ligando, que es parte del receptor, se abra.
(5) El Na y K extracelular entran a travs de este canal, despolarizando la clula postsinptica. La seal
elctrica ha pasado as a la clula postsinptica y se mover a lo largo del axn a una tercera neurona por la
misma secuencia de eventos
(b) Explique el efecto de glicina y el cido -aminobutrico (GABA) sobre los canales de cloro.
La glicina y el GABA aumentan la permeabilidad de la membrana postsinptica al ion cloro. Un
aumento en la conductancia del cloro conduce a la hiperpolarizacin de la membrana, lo cual aumenta el
umbral para disparar un potencial de accin. La glicina y el GABA sirven como transmisores inhibitorios en el
SNC.
El GABA es formado por la descarboxilacin del glutamato en una reaccin catalizada por glutamato
descarboxilasa. El piridoxal fosfato es el grupo prosttico de esta descarboxilasa. El GABA es inactivado por
la transaminacin a succinato semialdehdo, el cual es oxidado a succinato. El receptor GABA del cerebro es
un tetrmero con estructura 22. La subunidad de 53 kd contiene un sitio de unin para barbiturato y otras
drogas que afectan el SNC. La subunidad de 57 kd une GABA.
Los perfiles de hidrofobicidad sugieren que cada subunidad tiene cuatro hlices transmembranales.
El poro de 6 est formado por la conjuncin de al menos una hlice de cada una de las cuatro
subunidades. El agrupamiento de las cadenas laterales cargadas positivamente en el extremo del poro
hacen al canal altamente sensible a los aniones.
El receptor de glicina tiene una estructura similar. Su subunidad que une estricnina se parece mucho
a la subunidad que une al receptor de GABA. Adems, esta subunidad del canal activado por glicina y
ambas subunidades del receptor de GABA exhiben una identidad de secuencia de 25% con el receptor
nicotnico de acetilcolina.
(c) Explique como se sintetizan los eicosanoides.
Las prostaglandinas, los tromboxanos y los leucotrienos se denomina en conjunto eicosanoides
debido a que contienen 20 carbones (eikosi es la palabra griega para veinte). Se sintetizan a partir del
cido araquidnico por accin de las enzimas lipooxigenasa (leucotrienos) o ciclooxigenasa
(prostaglandinas y tromboxanos).
21

Las principales clases de PG se denominan PGA a PGI, un subndice denota el nmero de dobles
enlaces C-C fuera del anillo, Las PGs con dos dobles enlaces, tal como PGE2, son derivadas del
araquidonato; los otros dos dobles enlaces se pierden en la formacin del anillo de 5 miembros.
Los leucotrienos, encontrados primero en los leucocitos, contienen tres dobles enlaces conjugados,
de aqu su nombre. Los tromboxanos son compuestos relacionados con un anillo de 6 miembros. Los
eicosanoides son hormonas locales debido a su corta vida. Estos compuestos alteran la actividad de las
clulas que los sintetizan y las clulas vecinas.
La naturaleza del efecto puede variar de un tipo de clula a otro, en contraste con las acciones mas
uniformes de las hormonas globales como insulina y glucagon. Se ha estudiado el mecanismo de accin de
PGE1 sobre la liplisis. La PGE1 a concentraciones nanomolares inhibe la liplisis y el aumento del AMPc
inducida por epinefrina y glucagon en las clulas adiposas, pero no inhibe la liplisis inducida por dibutiril
AMPc, un anlogo de AMPc, liposolube.
Se concluye que esta PG inhibe a la AC de los adipocitos. Otros efectos de las PGs son la
estimulacin de la inflamacin, la regulacin del flujo sanguneo a rganos particulares, el control del
transporte de iones a travs de la membrana y la modulacin de la transmisin simptica. El cido
araquidnico necesario para la sntesis de los eicosanoides proviene de los fosfolpidos de la membrana por
accin de una fosfolipasa.
La aspirina inhibe la biosntesis de las prostaglandinas inactivando a la PG sintetasa.
Especficamente, la aspirina (acetil salicilato) inhibe la actividad de la ciclooxigenasa de la enzima
acetilando el grupo amino terminal de esta subunidad. Las PGs aumentan los efectos inflamatorios,
mientras que la aspirina los abate. La aspirina es un potente agente antiinflamatorio porque inhibe el primer
paso de la sntesis de las PG.

22

4. METABOLISMO, CONCEPTOS BSICOS Y VISIN DE CONJUNTO.

1. (a) Cmo puede definir metabolismo?
Como la suma de todas las transformaciones qumicas que ocurren en una clula u organismo, las cuales
se llevan a cabo en una serie de reacciones consecutivas catalizadas por enzimas que constituyen las vas
metablicas.
El metabolismo es el proceso global a travs del cual los sistemas vivos adquieren y utilizan la
energa libre que necesitan para realizar varias funciones. Los organismos vivos no estn en
equilibrio, sino que requieren un influjo continuo de energa libre para mantener el orden en un universo
inclinado al desorden mximo.
Ellos realizan esto acoplando las reacciones exergnicas de la oxidacin de los nutrimentos a los
procesos endergnicos requeridos para mantener el estado vivo tales como la realizacin de trabajo
mecnico, el transporte activo de molculas contra gradientes de concentracin y la biosntesis de molculas
complejas.
Cmo obtienen los organismos vivos esta energa libre? y cul es la naturaleza del proceso de
acoplamiento de energa? Los fottrofos (plantas y ciertas bacterias) adquieren la energa libre del sol a
travs de la fotosntesis, un proceso en el cual la luz impulsa un proceso endergnico entre el CO2 y el H2O
para formar carbohidratos.
Los quimitrofos obtienen su energa libre por la oxidacin de compuestos orgnicos (carbohidratos,
lpidos y protenas) obtenidos de otros organismos, en ltima instancia, fottrofos.
Esta energa libre est acoplada frecuentemente a reacciones endergnicas a travs de la sntesis de
intermediarios de compuestos fosfato de alta energa tal como el ATP.
Cada uno de los pasos consecutivos en una va metablica produce un cambio qumico especfico y
pequeo, usualmente la remocin, transferencia o adicin de un tomo especfico, grupo funcional o
molcula.
En esta secuencia de pasos (la va), un precursor es convertido en un producto a travs de una serie de
intermediarios metablicos (metabolitos). El trmino metabolismo intermediario se aplica frecuentemente a
las actividades combinadas de todas las vas metablicas que interconvierten precursores, metabolitos, y
productos de bajo peso molecular (excluyendo macromolculas).
(b) Cul es la diferencia entre anabolismo y catabolismo?
Catabolismo es la fase degradativa del metabolismo, en la cual las molculas de nutrimentos orgnicos
(carbohidratos, grasas y protenas) se convierten en productos terminales mas simples y pequeos (p.e.
cido lctico, CO2 y NH3).
Las vas catablicas liberan energa libre, parte de la cual es conservada en la formacin de ATP y en los
acarreadores reducidos de electrones (NADH y NADPH).
En el anabolismo, tambin llamado biosntesis, los precursores pequeos y simples se ensamblan en
molculas mas complejas y grandes como lpidos, polisacridos, protenas y cidos nucleicos.
Las reacciones anablicas requieren de energa libre generalmente en la forma de energa libre de
hidrlisis del ATP y del poder reductor de NADH y NADPH. En general las vas catablicas son
convergentes y las anablicas son divergentes.
(c) Cules son las etapas en la extraccin de energa de los alimentos?
En la primera etapa, las grandes molculas en los alimentos se hidrolizan en unidades pequeas. Las
protenas se hidrolizan a sus 20 aminocidos constituyentes, los polisacridos a azcares simples como
glucosa, y las grasas se hidrolizan a glicerol y cidos grasos.
No se genera energa til en este proceso.
En la segunda etapa, estas molculas numerosas y pequeas son degradadas a una unidad simple que
juega un papel central en el metabolismo.
La mayora de los compuestos producto de la hidrlisis de las macromolculas, se convierten en la unidad
acetilo de acetil CoA. Se genera una pequea cantidad de ATP en esta etapa comparado con el obtenido de
la oxidacin completa de la unidad acetilo de acetil CoA.
23

La tercera etapa consiste del ciclo del cido ctrico y la fosforilacin oxidativa que son las vas finales
comunes de la oxidacin de molculas de combustible. La acetil CoA introduce las unidades de acetilo al
ciclo de Krebs, donde se oxidan completamente a CO2.
Se transfieren cuatro pares de electrones (tres al NAD+ y uno al FAD) por cada grupo acetilo que es
oxidado. Entonces el ATP es generado cuando los electrones fluyen de las formas reducidas de estos
acarreadores al O2 en un proceso llamado fosforilacin oxidativa.
Mas del 90% del ATP producido por la degradacin de los alimentos se produce en esta etapa.
(d) Cules son algunas razones por las que las vas catablicas y anablicas son diferentes?
La sntesis y degradacin simultnea de un compuesto dado en la clula sera un proceso que consumira
mucha energa y sin un propsito claro. Lo anterior es prevenido por la regulacin independiente de las vas
catablicas y anablicas, para que cuando una ocurra, la otra est suprimida.
Esta regulacin no ocurrira si ambas vas estuvieran catalizadas por el mismo conjunto de enzimas. La
inhibicin de una enzima involucrada en el anabolismo inhibira la secuencia de reacciones en la direccin
anablica.
Las vas catablicas y anablicas que conectan los mismos extremos, pueden emplear muchas de las
mismas enzimas, pero invariablemente al menos uno de los pasos est catalizado por enzimas diferentes en
las direcciones catablica y anablica, y estas enzimas son los sitios de la regulacin independiente.
Es tambin comn que las vas catablicas y anablicas de un compuesto tomen lugar en
compartimientos celulares diferentes (P.e. sntesis y degradacin de cidos grasos en citosol y matriz
mitocondrial, respectivamente).
(e) Explique tres maneras de regulacin de las vas metablicas:
(e1) Enzimas alostricas que son capaces de cambiar su actividad cataltica en respuesta a
moduladores estimulatorios o inhibitorios. En muchos casos, la primera enzima de una va, es inhibida
alostricamente por el producto final de la va.
La inhibicin de la aspartato transcarbamilasa por citidina trifosfato es un ejemplo muy conocido de
inhibicin por retroinhibicin.
(e2) En los organismos superiores existe un segundo nivel de regulacin metablica que es la regulacin
hormonal. Estas son mensajeros qumicos que son liberados por un tejido y que estimulan o inhiben un
proceso en otro tejido.
La hormonas sirven para coordinar las actividades metablicas de diferentes tejidos, y sus acciones y
efectos son generalmente en una escala de tiempo mayor que las de los efectores alostricos.
Ejemplos de regulacin hormonal son la degradacin de glucgeno por epinefrina, la cual aumenta la
concentracin intracelular de AMPc y calcio lo cual modifica la actividad de la glucgeno fosforilasa (por
fosforilacin covalente reversible) y la insulina que promueve la entrada de glucosa a algunas clulas.
(e3) Regulacin de la concentracin de la enzima. Esta es el resultado de un balance entre la
velocidad de sntesis y la de degradacin. El nivel de la mayora de las enzimas se ajusta principalmente por
cambios en la velocidad de transcripcin de sus genes.
La lactosa induce un aumento de mas de 50 veces en la velocidad de sntesis de -galactosidasa, una
enzima requerida para el rompimiento de este disacrido.
(f) Mencione en resumen cuatro caractersticas de las vas metablicas.
(f1) Son irreversibles. Tienen cambios grandes de energa libre negativa. Son muy exergnicas y la
reaccin continua hasta terminarse, lo cual le da direccin a la misma. Por esa razn las vas catablicas y
anablicas no son idnticas.
(f2) Tienen un paso comprometido. Aunque las vas metablicas son irreversibles, la mayora de las
reacciones que la componen funcionan cercano al equilibrio. Al principio de cada va, s/e, hay generalmente
una reaccin irreversible (exergnica) que compromete el intermediario y produce la continuacin de la va.
(f3) Estn reguladas.
(f4) En las clulas eucariontes las vas metablicas se llevan a cabo en sitios celulares especficos.
2. (a) Cmo puede definir energa libre?
24

La energa que puede hacer trabajo durante una reaccin a presin y temperatura constante.

(b) Qu es el Go y cmo se puede calcular el Go de una serie de reacciones acopladas?

El Go es el cambio de energa libre estndar (cuando la concentracin inicial de cada componente es
1.0 M, el pH es 7.0 y la temperatura 25C). Se suman algebraicamente los valores individuales de Go de
cada reaccin y el resultado es el Go para la suma de todas las reacciones. Es un criterio de
espontaneidad de las reacciones bioqumicas.
(c) Defina G y explique cmo se puede calcular el G y el Go de una reaccin bioqumica partiendo
de la constante de equilibrio?
G = Cambio de energa libre en condiciones celulares (no estndar)
G = Go + RT ln [A] [B]/[C] [D]
Go = -RT ln Keq
En negritas estn las condiciones actuales del sistema.
(d) Cul es la diferencia entre G y Go?
G es el cambio de energa libre en condiciones celulares y el Go es el cambio de energa libre en
condiciones estndar. Cada reaccin qumica tiene un valor caracterstica el cual puede ser positivo,
negativo o cero, dependiendo de la constante de equilibrio de la reaccin.
El valor de Go es un valor caracterstico y constante, pero el G de una reaccin qumica dada es una
funcin de la concentracin y la temperatura que prevalecen durante la reaccin y que no son
necesariamente condiciones estndar. El G de una reaccin que procede espontneamente al equilibrio es
siempre negativo, llega a ser menos negativo cuando la reaccin procede, y cero al punto final de equilibrio,
indicando que la reaccin no puede hacer mas trabajo.
(e) Cmo se puede calcular la constante de equilibrio a partir del Go? Keq = 10- Go/RT

(f) Cul es la relacin entre la constante de equilibrio y el Go?

Cuando Keq es

Go es

Empezando con componentes 1 M de la reaccin

> 1.0
1.0
< 1.0

Negativo
Cero
Positivo

Procede hacia adelante

Est en equilibrio
Procede en reversa

3. (a) Cules son las dos reacciones de hidrlisis del ATP por medio de los cuales se puede liberar
energa libre?
(a1) ATP (ADP + Pi), Go = -7.3 kcal/mol
(a2) ATP (AMP + PPi), Go = -7.7 kcal/mol

(b) Cul es el G de la hidrlisis del ATP? G -12.5 kcal/mol

(c) Qu reaccin cataliza la enzima adenilato cinasa (miocinasa)?
ATP + AMP = ADP + ADP. Esta enzima interconvierte ATP, AMP y ADP, esto permite regresar el AMP
al ciclo ATP-ADP.

(d) Cul es la estabilidad del PPi en condiciones celulares y su Go?

Ninguna, se hidroliza inmediatamente y el valor de su Go es -8.0 kcal/mol.

(e) Qu reacciones cataliza la enzima nuclesido difosfocinasa (difosfato cinasa)?
NTP + NDP NDP + NTP, p ej. ATP + GDP GTP + ADP.
25

(f) Qu reaccin cataliza la enzima nuclesido monofosfato cinasa?

ATP + NMP ADP + NDP. Es una reaccin similar a la adenilato cinasa, pero usa otros nucletidos
monofosforilados como sustrato (en vez de AMP).
4 (a) De manera general, mencione en que reacciones se sintetiza y se consume el ATP.
Se sintetiza durante la oxidacin de molculas de combustible o durante la fotosntesis y se consume
durante el movimiento, transporte activo, biosntesis, amplificacin de seales y almacenamiento de la
informacin gentica.
(b) Mencione algunos compuestos fosforilados que tengan un Go menor y otros que tengan un Go
mayor que el ATP. Cul es el significado prctico de esto?
Go menor: Glucosa 1 P (-5.0), Glucosa 6 P (-3.3) y glicerol 3 P (-2.2) y un Go mayor: fosfoenolpiruvato
(-14.8), carbamil P (-12.3), acetil-P (-10.3), creatina-P (-10.3), pirofosfato (-8.0).
El significado es que el ATP puede sintetizarse a partir de compuestos con un Go mayor a este (el grupo
fosfato del ADP puede recibir un P de otro compuesto) y por otro lado el ATP puede donar un grupo fosfato
para formar los grupo con un Go menor.
(c) Explique cmo el acoplamiento de una reaccin termodinmicamente desfavorable puede convertirse
en una favorable cuando se acopla a la hidrlisis de ATP.
Al sumar algebraicamente los valores de Go de la reaccin en cuestin con el valor del ATP se obtiene
un Go negativo (una reaccin que procede espontneamente en la direccin en la que est escrita). As, la
hidrlisis del ATP desplaza el equilibrio de las reacciones acopladas por un factor de 108.
Generalmente la reacciones en las que est acoplada la hidrlisis del ATP y que estn sealadas por una
sola flecha, representan un proceso de 2 pasos, en los cuales parte de la molcula del ATP, ya sea un grupo
fosfato o el AMP, es transferido y unido covalentemente a la molcula del sustrato o a un residuo de
aminocido en la enzima lo que aumenta el contenido de energa libre del sustrato o de la enzima.
En el segundo paso, el residuo que contiene el fosfato transferido en el primer paso, es desplazado
generando Pi o AMP.
5. Problemas 1, 2, 3 del CAP 13.
6. Problemas 4, 5 y 7 del Cap 13.
7. (a) Cules son los acarreadores de electrones en las reacciones de xido-reduccin? NADH y FADH2

(b) Cul es el tipo de reacciones en donde el acarreador de electrones es el NAD+ y el FAD?

El NAD+ es el aceptor de electrones en reacciones donde se forma un grupo ceto y el FAD es el aceptor de
electrones en reacciones en donde se forma una doble ligadura.

(c) Cuntos electrones son transferidos a estas molculas y en que parte de estas se lleva a cabo la
reaccin de xido-reduccin?
En el primer caso, un tomo de hidrgeno (ion hidruro) del sustrato se transfiere directamente al NAD+,
mientras que el otro (protn) aparece en solucin. Los dos electrones perdidos por el sustrato son
transferidos al anillo de nicotinamida.
En el segundo caso, el FAD, al igual que el NAD+ puede aceptar dos electrones. Sin embargo, a diferencia
del NAD+, el FAD acepta los dos tomos de hidrgeno del sustrato (el ion hidruro y el protn). La parte
reactiva del FAD es el anillo de isoaloxazina.

(d) Cul es la diferencia estructural y funcional entre el NADH y el NADPH?

El NADPH tiene esterificado un grupo fosfato al OH en la posicin 2 del anillo de ribosa. El NADPH (a
diferencia del NADH) se usa preferentemente en los procesos anablicos.
26

8. (a) Cul es el acarreador universal de grupos acilo? Coenzima A

(b) Que molculas acarrean:
(1) grupos fosforilo, ATP
(2) electrones, NADH, NADPH, FADH2 y FMNH2
(3) acilo, coenzima A y lipoamida
(4) aldehdo, tiamina pirofosfato
(5) CO2, biotina
(6) unidades de 1 carbono, tetrahidrofolato
(7) grupos metilo, S-adenosilmetionina
(8) glucosa, uridina difosfato glucosa y
(9) fosfatidato? citidina difosfato diacilglicerol.

9. (a) Cules son las vitaminas hidrosolubles precursores de las siguientes coenzimas?:
tiamina pirofosfato (TPP), tiamina o vitamina B1;
FAD y FMN, riboflavina o vitamina B2;
NAD, nicotinato o niacina;
piridoxal fosfato, piridoxina, piridoxal y piridoxamina (vitamina B6);
coenzima A, pantotenato;
tetrahidrofolato, folato y
biotina unida covalentemente a la carboxilasa, biotina

(b) Mencione el proceso metablico principal de las vitaminas liposolubles E, K, D y A.

La vitamina K se requiere para realizar el proceso normal de coagulacin, participa en la carboxilacin de
residuos de glutamato para producir -carboxiglutamato, lo cual lo hace un quelante de calcio mucho mas
fuerte.
La vitamina A o retinol, es el precursor del retinal, un grupo sensible a la luz en la rodopsina y otros
pigmentos visuales. Una deficiencia de esta vitamina conduce a ceguera nocturna. Adems, los animales
jvenes requieren vitamina A para el crecimiento. El cido retinoico, el cual contiene un grupo carboxilato
terminal en lugar del alcohol terminal del retinol, activa la transcripcin de genes especficos que median el
crecimiento y el desarrollo.
El metabolismo el calcio y del fsforo est regulado por una hormona derivada de la vitamina D. Una
deficiencia de vitamina D produce un deterioro en la formacin del hueso en los animales en crecimiento.
La infertilidad en las ratas es una consecuencia de la deficiencia de vitamina E (-tocoferol). Esta vitamina
protege a los lpidos insaturados de membrana de la oxidacin.

27

5. CARBOHIDRATOS
1. (a) De la definicin de carbohidrato.
Son aldehdos o cetonas con mltiples grupos hidroxilo o compuestos que producen tales sustancias por
hidrlisis. Forman la mayora de la materia orgnica en la tierra debido a sus mltiples papeles en todas
las formas de vida.
(b)Cules son las funciones de los carbohidratos?
(b1) Como almacn de energa, combustibles e intermediarios metablicos; almidn y glucgeno,
ATP y glucosa 6 P.
(b2) Los azcares ribosa y desoxirribosa forman parte de la estructura del ADN y ARN
(b3) Los polisacridos son elementos estructurales de las paredes celulares de bacterias y plantas y en
el exoesqueleto de los artrpodos.
(b4) los CHOS estn unidos a muchas protenas y lpidos. Por ejemplo, las unidades de azcar de la
glicoforina proporciona a los eritrocitos una cubierta aninica altamente polar.

(c) Cmo se clasifican los carbohidratos?

Monosacridos, azcar simple que consiste de una sola unidad de polihidroxialdehdo o cetona
(glucosa);
oligosacridos, cortas cadenas de unidades de monosacridos unidas por enlaces glicosdicos
(disacridos y cadenas de mas de tres unidades) y
polisacridos, largas cadenas, lineales o ramificadas, con cientos o miles de unidades de
monosacridos.

(d) Cmo se calcula el nmero de ismeros de un compuesto?

Con la frmula 2n, donde n es el nmero de carbones asimtricos de la molcula.
(e) Qu es un enantimero y un epmero? De un ejemplo de cada uno.
Un enantimero es un compuesto que es imagen especular de otro, p.e. D y L gliceraldehdo, un epmero
es un azcar que difiere del otro solo en la configuracin alrededor de un solo tomo de carbono; D-glucosa
y D-manosa son epmeros en C-2 y glucosa y galactosa son epmeros en C-4.
2 (a) Qu es un hemiacetal y un hemicetal intramoleculares?
Las formas predominantes de glucosa y fructosa en solucin no son cadenas abiertas, en vez, las
cadenas abiertas de estos azcares forman un anillo. En general un aldehdo puede reaccionar con un
alcohol para formar un hemiacetal.
El C-1 del adehdo en la forma de cadena abierta reacciona con el grupo hidroxilo C-5 para formar un
hemiacetal intramolecular. El anillo de 6 miembros que resulta se llama piranosa. De igual manera una
cetona puede reaccionar con un alcohol para formar un hemicetal, el grupo ceto C-2 en la forma de
cadena abierta de la fructosa puede reaccionar con el hidroxilo C-5 para formar un hemicetal
intramolecular.
(b) Que es un anmero?
Se refiere a las nuevas configuraciones que se producen cuando las formas abiertas de los
monosacridos se cierran para formar un anillo.
Para los azucares de la serie D dibujados como proyeccin de Haworth, la designacin significa que el
grupo hidroxilo unido al carbn 1 est abajo del plano del anillo, significa que est arriba del plano del
anillo. El C-1 es llamado tomo de carbn anomrico, y as las formas y son llamadas anmeros.
(c) Qu es mutarrotacin?
28

Se refiere a la interconversin en agua, de la -D-glucopiranosa y la -D-glucopiranosa a travs de la

forma de cadena abierta para dar una mezcla de equilibrio. Este fenmeno se puede detectar siguiendo los
cambios en la rotacin ptica
(d) Cul es la conformacin mas estable de los anillos de carbohidratos en forma de furano y de pirano?
La forma de silla de -D-glucopiranosa predomina sobre la forma de bote debido a que todas las
posiciones axiales estn ocupadas por tomos de hidrgeno
(e) Qu es un enlace glicosdico y como se puede formar?
El enlace O-glicosdico, se forma cuando un grupo hidroxilo de un azcar reacciona con el carbn
anomrico de otro. Los disacridos maltosa, lactosa y sacarosa estn formados por dos monosacridos
unidos covalentemente por este enlace.
La formacin del enlace glicosdico representa la formacin de un acetal de un hemiacetal (glucopiranosa)
y un alcohol (un grupo hidroxilo de una segunda molcula de azcar). Cuando un carbn anomrico llega
a estar involucrado en un enlace glicosdico no puede ser oxidado por iones cpricos o frricos. El
tomo de carbn anomrico de un azcar puede estar unido al tomo de nitrgeno de una amina por un
enlace N-glicosdico.
La importancia biolgica crucial de este tipo de enlaces glicosdicos en biomolculas muy importantes
como nucletidos, ARN y ADN. Los enlaces N-glicosdicos de casi todas la biomolculas naturales tienen la
configuracin .
3 (a) Mencione algunos intermediarios fosforilados de los carbohidratos:
Glucosa 6P, gliceraldehdo 3 P, dihidroxiacetona P.
Una de las estrategias de la gliclisis es formar intermediarios de 3 carbones que pueden transferir sus
grupos fosfato al ADP para lograr una sntesis neta de ATP.
La fosforilacin tambin sirve para darles una carga neta negativa a los azcares. Estos grupos fosfato
cargados negativamente pueden tener interacciones electrostticas fuertes con el sitio activo de algunas
enzimas y tambin impiden que estos azcares crucen espontneamente la barrera de lpidos.
Otra funcin de la fosforilacin es la creacin de intermediarios reactivos para la formacin de enlaces Oy N-glicosdicos.
(b) Qu es un disacrido y mencione tres ejemplos de los disacridos mas abundantes?
Son dos monosacridos unidos por un enlace O-glicosdico. Los tres mas abundantes son: sacarosa,
lactosa y maltosa.
(c) Cmo se sintetiza la sacarosa y la lactosa?
La sacarosa se sintetiza en el citosol. Un translocador de fosfato abundante media el transporte de triosas
fosfato de los cloroplastos al citosol en intercambio por fosfato. La fructosa 6 P formada de las triosas fosfato
une la unidad de glucosa de UDP glucosa para formar sacarosa 6 P. La hidrlisis del ster fosfato produce
sacarosa un azcar rpidamente transportable y movilizable que es almacenado en muchas clulas de
plantas como en la remolacha y en la caa de azcar.
(d) Cules son los principales polisacridos de reserva y estructurales y su estructura en el espacio?
El almidn y el glucgeno son los principales polisacridos de reserva en las plantas y se presenta y en
los animales, respectivamente. Ambos estn presentes en forma de grandes agregados o grnulos
intracelulares. Estn muy hidratados, debido a que contiene muchos grupos hidroxilo disponibles para
formar enlaces de hidrgeno con el agua. La mayor parte de las plantas tienen la capacidad de sintetizar
almidn, pero es especialmente abundante en los tubrculos como la papa y en las semillas como el maz.
De reserva: almidn (formado por amilosa, almidn de tipo no ramificado con enlaces -1,4 y la
amilopectina, una forma ramificada, con un enlace -1,6 por cada 24 a 30 enlaces -1,4 y as es como el
29

glucgeno, pero con menor grado de ramificacin). El peso molecular de las cadenas de amilosa varan de
unos pocos miles a 500,00. La amilopectina tambin tiene un alto peso molecular, cercano a 1 milln..
glucgeno (un polmero de glucosa muy ramificado, la cadena lineal est formada por enlaces -1,4 y
las ramificaciones son -1,6, una por cada 8 a 12 enlaces -1,4, de esta manera se aumenta la solubilidad
del glucgeno y hace mas disponibles a las unidades de azcar).
Est mas ramificado y en grnulos mas compacta que el almidn. Puede constituir hasta 7% del peso
hmedo del hgado. En los hepatocitos, el glucgeno se encuentra en grandes grnulos, los cuales son
acmulos de grnulos mas pequeos compuesto de molculas sencillas de glucgeno altamente ramificado
con un peso molecular promedio de varios millones.
Estos grnulos de glucgeno tambin contienen, unidos fuertemente, las enzimas responsables de la
sntesis y degradacin del glucgeno. Dado que cada ramificacin en almidn y en glucgeno termina con
un azcar no reductor (uno sin un carbn anomrico libre), stos polmeros tienen tantos extremos no
reductores como ramificaciones, pero solo un extremo reductor.
El glucgeno y el almidn que se ingieren en la dieta, son hidrolizados por -amilasas, enzimas en la
saliva y en el jugo intestinal que rompen los enlaces glicosdicos (1--->4) entre las unidades de glucosa.
dextrn (un polisacrido de almacenamiento en levaduras y bacterias, consiste solo de residuos de
glucosa, pero sus enlaces son principalmente -1,6 con ramificaciones ocasionales formadas por -1,2, 1,3 o -1,4.
Estructurales: la celulosa es uno de los compuestos orgnicos mas importantes en la biosfera, es un
polmero no ramificado de glucosa, unida por enlaces -1,4 lo que le permite formar cadenas rectas muy
largas.
La celulosa es una sustancia fibrosa, dura e insoluble en agua y que se encuentra en las paredes
celulares de las plantas, particularmente en stalks, stems, trunks y en las partes de madera de la planta.
Constituye mucho de la masa de la madera y casi todo el algodn es celulosa.
Es un homopolisacrido de 10,000 a 15,000 residuos de glucosa. Cada residuo de glucosa es unido
al siguiente por una rotacin de 180, y el tomo de oxgeno del anillo de uno est unido por puente de
oxigeno al grupo 3-OH del siguiente.
Las fibras son formadas por cadenas paralelas. Los enlaces -1,4 en glucgeno y almidn producen
una arquitectura molecular muy diferente. Se forma una hlice hueca en lugar de una cadena recta.
Estas diferencias de los enlaces y tienen una gran importancia biolgica. Las cadena recta formada por
el enlaces es ptima para la construccin de fibras que se caracterizan por una alta fuerza tensil. Por el
contrario, la hlice abierta formada por enlaces a es adecuada para la formacin de un azcar de
almacenamiento.
La celulosa no puede ser usada por la mayora de los animales como fuente de combustible almacenado,
debido a que las uniones 14 de la celulosa no son hidrolizados por la -amilasa. Las termitas digieren
rpidamente la celulosa (y por lo tanto la madera), pero solo debido a que contienen en su tracto intestinal
un microorganismo simbitico, Trichonympha, la cual secreta celulasa, una enzima que hidroliza los enlaces
14 de la celulosa.
Los hongos wood rot, tambin y las bacterias tambin secretan celulasa. El nico vertebrado capaz de
usar celulosa como alimento es el ganado y otros animales rumiantes (borregos, cabras, camellos y jirafas).
Los estmagos extras (rumen) contienen bacterias y protistas que secretan celulasa.
Otro polisacrido estructura es la quitina que consiste de residuos de N-acetilglucosamina unidos por
enlaces -1,4 lo que le permite formar largas cadenas rectas que tiene un papel estructural. As, la quitina
es como la celulosa excepto que el sustituyente en C-2 es un grupo amino acetilado, en lugar de un grupo
OH. Al igual que la celulosa, la quitina no es digerida por los vertebrados.
La quitina es el componente principal del exoesquelto duro de casi 1 milln de especies de artrpodos
(p.e. insectos y crustceos) y es posiblemente el segundo polisacrido mas abundante en la naturaleza,
despus de la celulosa.
4 (a) Cmo participan los carbohidratos en la estructura de la pared celular de las bacterias?
El componente rgido de las paredes de las clulas bacterianas es un heteropolmero de unidades de
N-acetilgalactosamina y cido N-acetilmurmico unidas por enlaces -1,4. Muchos de tales polmeros
30

lineales situados lado a lado en la pared celular, entrecruzados por pptidos cortos, la estructura exacta de
la cual depende de la especie bacteriana.
El peptidoglicano entrecruzado es degradado por la enzima lisozima, la cual hidroliza los enlaces
glicosdicos entre N-acetilgalactosamina y cido N-acetilmurmico, y matando de esta manera a las
bacterias.
(b) A qu aminocidos de las protenas se unen los oligosacridos para formar las glicoprotenas?
Formando enlaces O-glicosdicos con Ser y Thr y N-glicosdicos con el grupo amida de Asn.
(c) De algunos ejemplos del papel de los carbohidratos en el reconocimiento clula-clula.
La fertilizacin empieza con la unin de un esperma a un oligosacrido especfico sobre la
superficie del huevo. La adhesin de leucocitos a la cubierta de los vasos sanguneos daados y el
regreso de los leucocitos a su sitio de origen en los ndulos linfticos, ilustra la importancia de los
carbohidratos en los procesos de reconocimiento.
(d) Cmo participan los carbohidratos en la estructura de la matriz extracelular?
El espacio extracelular en los tejidos animales est lleno de un material parecido al gel, la matriz
extracelular, que tambin se conoce como sustancia basal, la cual mantiene unidas a las clulas de un
tejido y proporciona una va porosa para la difusin de los nutrimentos y oxgeno a las clulas
individuales. La matriz extracelular est compuesta de una red interconectada de heteropolisacridos y
protenas fibrosas.
Los heteropolisacridos, llamados glicosaminoglicanos, son una familia de polmeros lineales
compuestos de unidades repetitivas de disacridos. Uno de los dos monosacridos es siempre Nacetilglucosamina o N-acetilgalactosamina; el otro es, en la mayora de los casos un cido urnico,
usualmente cido glucornico.
En algunos glicosaminoglicanos, uno o mas de los hidroxilos del amino azcar es esterificado con
sulfato. La combinacin de estos grupos sulfato y los grupos carboxilato de los residuos de cido urnico le
dan a los glicosaminoglicanos una densidad de cargas negativas muy alta.
Para minimizar las fuerzas repulsivas, entre los grupos cargados vecinos, estas molculas asumen
una conformacin extendida en solucin. Una consecuencia de lo anterior es la viscosidad muy alta de las
soluciones de estas molculas largas y delgadas.
Los glicosaminoglicanos estn unidos a las protenas extracelulares para formar los proteoglicanos,
enormes agregados, en donde los polisacridos forman la mayora de la masa, frecuentemente el 95% o
mas.

31

6. GLICLISIS
1. (a) Defina gliclisis y fermentacin. Mencione el sitio celular en donde se llevan a cabo
Es la degradacin de una molcula de glucosa en una serie de reacciones catalizadas por enzimas para
producir dos molculas de piruvato. Se lleva a cabo en el citosol de los eucariontes. Durante las reacciones
secuenciales de la gliclisis se libera algo de la energa libre de la glucosa y se conserva en forma de ATP.
La gliclisis fue la primera va metablica que se dilucid y quiz es la mas entendida.
Es una va universal central del catabolismo de glucosa. A travs de esta va ocurre el flujo de carbonos
mas grande en la mayora de las clulas. En ciertos tejidos de mamfero y en ciertos tipos celulares
(eritrocitos, mdula renal, cerebro y esperma), la glucosa es la nica fuente o la fuente principal de
energa metablica a travs de la gliclisis.
Algunos tejidos de plantas que estn modificados para el almacenamiento de almidn (como los
tubrculos de las papas) y algunas plantas adaptadas para el crecimiento en reas regularmente inundadas
por agua (por ejemplo berro) obtienen la mayora de su energa de la gliclisis. Tambin muchos tipos de
microorganismos anaerbicos son dependientes enteramente de la gliclisis.
Fermentacin, es un trmino general que denota la degradacin anaerbica de glucosa u otro
nutrimento orgnico en varios productos (caractersticos de cada organismo) para obtener energa en la
forma de ATP.
Se piensa que el rompimiento anaerbico de glucosa es el mecanismo biolgico mas antiguo para
obtener energa de las molculas de combustible orgnico. Las enzimas glicolticas de los vertebrados son
muy similares en secuencia de aminocidos y estructura tridimensional a sus homlogas en levaduras y
espinacas.
El proceso de gliclisis difiere de una especie a otra solo en los detalles de su regulacin y en el destino
metablico subsecuente del piruvato formado.
(b). Cules son los destinos metablicos que puede tomar la glucosa dependiendo de la presencia o
ausencia de oxgeno y del tipo de clula?
(b1) En condiciones aerbicas el piruvato se descarboxila oxidativamente para producir el grupo acetil de
acetil Co-A, el cual se oxida completamente a CO2 por medio del ciclo de Krebs con la produccin
concomitante de poder reductor (en forma de NADH y FADH2) que va a alimentar la cadena de transporte de
electrones mitocondrial hasta la reduccin del oxgeno a agua con la produccin simultnea de ATP.
(b2) en condiciones anaerbicas el destino depende de las clulas en donde se est llevando a cabo. En
el msculo en actividad vigorosa, en los eritrocitos y en algunos microorganismos el piruvato es
reducido a lactato (fermentacin lctica). En algunos tejidos y tipos celulares (como retina, cerebro y
eritrocitos) la glucosa se convierte a lactato an en condiciones aerbicas.
(b3) El tercer destino principal del piruvato es su conversin anaerbica a etanol (fermentacin
alcohlica) y este proceso se lleva a cabo en algunos tejidos de plantas, en ciertos invertebrados, protistas
y microorganismos como la levadura de cerveza.

(c) Describa los tipos de reacciones involucrados en la gliclisis.

1. Transferencia de fosforilo. Un grupo fosforilo se transfiere del ATP a un intermediario glicoltico o
viceversa (4 reacciones). De estas dos son fosforilaciones a nivel de sustrato
2. Desplazamiento de fosforilo. Un grupo fosforilo es desplazado dentro de una molcula de un tomo de
oxgeno a otro (1 reaccin)
3. Isomerizacin. Una cetosa se convierte en aldosa o viceversa (2 reacciones).
4. Deshidratacin. Se elimina una molcula de agua (1 reaccin).
5. Ruptura aldlica. Se rompe un enlace carbono-carbono en una reversa de una condensacin aldlica. (1
reaccin)
2 (a) Cules son las caractersticas de las dos etapas en las que se divide la gliclisis?
32

Los primeros cinco pasos constituyen la fase preparatoria (primera etapa) y en esta se consumen dos
molculas de ATP/mol de glucosa y se producen 2 molculas de gliceraldehdo 3 fosfato (G3P); las enzimas
que utilizan el ATP son la hexocinasa y la fosfofructocinasa-1. En la segunda etapa las dos molculas de
G3P se oxidan completamente a piruvato y se producen 4 molculas de ATP por mol de glucosa inicial; las
enzimas que sintetizan ATP son fosfoglicerato cinasa y piruvato cinasa

(b) Cules son las 10 enzimas y los intermediarios involucrados en la conversin de glucosa a piruvato?
ENZIMA
Hexocinasa
Fosfoglucosa isomerasa
Fosfofructocinasa-1
Aldolasa
Triosa fosfato isomerasa
Gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa
Fosfoglicerato cinasa
Fosfoglicerato mutasa
Enolasa
Piruvato cinasa

TIPO DE REACCIN
Transferencia de fosforilo
Isomerizacin
Transferencia de fosforilo
Ruptura aldlica
Isomerizacin
Oxidacin y fosforilacin
Transferencia de fosforilo
Desplazamiento de fosforilo
Deshidratacin
Transferencia de fosforilo

SUSTRATO
Glucosa
Glucosa 6 fosfato
Fructosa 6 fosfato
Fructosa 1,6, bifosfato
Dihidroxiacetona fosfato
Gliceraldehdo 3 fosfato
1,3 bifosfoglicerato
3 Fosfoglicerato
2 Fosfoglicerato
Fosfoenolpiruvato
Piruvato

(c) Cuntos de stos son intermediarios monofosforilados y bifosforilados?:

mono: glucosa 6 fosfato, fructosa 6 fosfato, gliceradehdo 3 fosfato, dihidroxiacetona fosfato, 3
fosfoglicerato, 2 fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato; (total = 7)
bi: fructosa 1,6 bifosfato y 1,3 bifosfoglicerato. (total = 2)
3 (a) Escriba la ecuacin balanceada para la conversin de glucosa a piruvato, a lactato y a etanol.
S hay xido-reduccin neta
Glucosa + 2NAD+ + 2 ADP + 2 Pi ---> 2 piruvato + 2 NADH + 2 H+ + 2 ATP + 2 H20
No hay xido-reduccin neta
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi ----> 2 Lactato + 2 ATP
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi ----> 2 etanol + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

(b) Qu porcentaje de la energa contenida en la glucosa se libera en la conversin de glucosa a piruvato?

Esta ecuacin global se puede dividir en dos partes
(1) la conversin de glucosa a piruvato, la cual es exergnica
Glucosa + 2NAD+ 2 piruvato +2 NADH + 2H+ G1 = -146 kJ/mol
y (2) la formacin de ATP a partir de ADP y Pi la cual es endergnica
2ADP + 2Pi 2ATP + 2H2O G2 = 2(30.5 kJ/mol) = 61 kJ/mol
La suma algebraica de ambos procesos es de -85 kJ/mol
Esto es, bajo condiciones estndar o intracelulares, la gliclisis es un proceso esencialmente
irreversible, conducido hasta su fin por esta gran disminucin neta de energa libre.
Para calcular el porcentaje de energa contenido en la glucosa que se libera en la gliclisis hay que
dividir el valor de 146 obtenido anteriormente entre el cambio de energa estndar total liberado por la
glucosa cuando se oxida completamente (-2,840 kJ/mol) = 146/2,840 = 5.2%
33

Esto significa que las dos molculas de piruvato por la gliclisis an contienen la mayora de la
energa disponible biolgicamente de la molcula de glucosa, la cual puede extraerse por reacciones
oxidativas en el ciclo del cido ctrico.
(c) Qu es fosforilacin a nivel de sustrato?
La sntesis de ATP fuera de la fosforilacin oxidativa mitocondrial, por ejemplo la que se realiza en la
gliclisis por accin de las enzimas fosfoglicerato cinasa y piruvato cinasa.
4 (a) Cul es la diferencia entre la glucocinasa y la hexocinasa y cmo se regula esta ltima?
La hexocinasa cataliza la entrada de glucosa libre a la va glicoltica. La enzima presente en miocitos
tiene una alta afinidad por glucosa. La Km es de 0.1 mM.
La glucosa sangunea (4 a 5 mM) entra a los miocitos en donde alcanza una alta concentracin,
suficiente para saturar a la hexocinasa, por lo que acta a su mxima velocidad. La hexocinasa de
msculo es inhibida alostricamente por su producto, glucosa 6 fosfato. Cuando la concentracin de
glucosa 6 fosfato se eleva arriba de lo normal, la hexocinasa se inhibe temporal y reversiblemente,
establecindose as un balance con la velocidad de utilizacin.
Los mamferos tienen varias formas de hexocinasa, las cuales catalizan la conversin de glucosa a
glucosa 6 fosfato. La isoenzima predominante en hgado es la hexocinasa D o IV, tambin llamada
glucocinasa, la cual difiere en dos aspectos importantes de la hexocinasa del msculo. Primero, la
concentracin de glucosa, a la cual la glucocinasa alcanza la mitad de su saturacin, es mayor que la
concentracin normal de glucosa en sangre.
Esto es, la Km para la glucosa es de 10 mM mientras que su concentracin en sangre es de 5
mM. Debido a que la concentracin de glucosa en el hgado se mantiene a un nivel cercano al de la sangre
por un sistema de transporte eficiente, esta propiedad de la glucocinasa permite su regulacin directa por los
niveles de glucosa en sangre.
Cuando la concentracin de glucosa en sangre es alta, como sucede despus de una comida rica en
carbohidratos, el exceso de glucosa en sangre es transportado a los hepatocitos, donde la
glucocinasa la convierte en glucosa 6 fosfato. Por el contrario cualquier disminucin en la [glucosa] en
sangre conduce a una disminucin proporcional en la velocidad de fosforilacin de la glucosa en hgado. Por
lo tanto, el hgado usa glucosa a una velocidad significativa solo cuando la [glucosa] en sangre es alta. Este
efecto amortiguador de la glucosa en sangre por el hgado no ocurriera si la glucocinasa tuviera una Km baja
para glucosa, como es el caso de otras hexocinasas, las cuales estn saturadas completamente a niveles
fisiolgicos de glucosa.
Por otra parte, la Km baja de la hexocinasa es una buena eleccin para tejidos como el cerebro que
permite la fosforilacin de la glucosa an cuando las concentraciones de glucosa en sangre y tejido sean
peligrosamente bajas.
En segundo lugar, la glucocinasa no es inhibida por el producto de su reaccin, sino por el ismero
de este ltimo, fructosa 6 fosfato, el cual alcanza un equilibrio con glucosa 6-fosfato debido a la accin de
fosfoglucosa isomerasa. Tambin es activada por fructosa 1 fosfato.
La inhibicin y activacin de la glucocinasa por fructosa 6 fosfato y fructosa 1 fosfato est mediada
por una protena adicional, la protena regulatoria, la cual, cuando se une a la glucocinasa, la inhibe.
En resumen, la fructosa 6 P promueve la unin y la fructosa 1 P inhibe la unin de esta protena
regulatoria a la glucocinasa.
La fructosa, un monosacrido presente en muchas verduras, frutas y endulzantes promueve la
utilizacin heptica de la glucosa por un mecanismo indirecto. La fructuosa es convertida en el hgado
directamente a fructosa 1 fosfato, y la fructosa 1 fosfato aumenta la actividad de glucocinasa al
promover la disociacin de una protena inhibitoria sobre la glucocinasa.
Este puede ser un factor en el efecto adverso, por ejemplo, hipertrigliceridemia, asociado algunas
veces con el consumo excesivo de fructosa.
La glucocinasa es una enzima inducible. Esto significa que en varias condiciones fisiolgicas la
cantidad de la enzima aumenta o disminuye. Estos procesos de induccin o represin de la sntesis de una
enzima son procesos relativamente lentos, esto es, de varias horas.
34

La insulina aumenta la cantidad de glucocinasa al promover la transcripcin de su gen. En

otras palabras, una persona que consume grandes cantidades de carbohidratos tendr mayores cantidades
de glucocinasa en el hgado que una persona que no los consume.
El hgado, en el cual la glucocinasa ha sido inducida hace una gran contribucin a la disminucin de
los niveles circulantes de glucosa. La ausencia de insulina, hace que el hgado de los pacientes
diabticos est deficiente de glucocinasa a pesar de la alta concentracin de glucosa en sangre.
Y debido a esto, el hgado de los diabticos pierde capacidad amortiguadora de glucosa circulante.
(b) Cmo se regula la actividad de la fosfocructocinasa-1 (PFK-1)? Describa el papel de fructosa 6
fosfato, ATP, citrato y fructosa 2,6 bifosfato.
La glucosa 6 fosfato puede fluir va la gliclisis o a travs de una va secundaria oxidativa la cual se
describa mas adelante. La reaccin irreversible catalizada por PFK-1 es el paso que compromete a una
clula a usar glucosa por la va glicoltica.
Adems de los sitios de unin para sus sustratos, la fructosa 6 fosfato y el ATP, esta enzima
compleja tiene varios sitios regulatorios donde se unen activadores e inhibidores alostricos. El ATP no solo
es sustrato de la PFK-1, sino un producto final de la va glicoltica.
Cuando los niveles altos de ATP indican que la clula est produciendo ATP mas rpidamente de lo
que lo est consumiendo, el ATP se une a un sitio alostrico y disminuye la afinidad de la enzima por
su sustrato fructosa 6 fosfato. El ADP y el AMP, cuya concentracin aumenta cuando el consumo de ATP
supera su produccin, actan alostricamente para aliviar esta inhibicin por ATP. Estos efectos se
combinan para aumentar la actividad enzimtica, cuando la fructosa 6 fosfato, ADP o AMP aumentan, y para
disminuirla cuando aumenta el ATP.
El citrato, un intermediario clave en la oxidacin aerbica del piruvato tambin es un regulador
alostrico de PFK-1. Las altas concentraciones de ATP aumentan el efecto inhibitorio de ATP. En este caso,
como en varios otros, el citrato sirve como una seal intracelular de las necesidades celulares de energa y
de los intermediarios biosintticos.
Otro punto de control de esta enzima es el ejercido por el pH. Cuando este disminuye, la actividad de
PFKC-1 tambin disminuye. Este efecto inhibitorio impide que la formacin excesiva de lactato y una cada
brusca en el pH sanguneo.
El regulador alostrico mas importante de PFK-1 es fructosa 2,6 bifosfato, el cual activa la enzima.
La F2,6BP aumenta la afinidad de la enzima por F6P y disminuye el efecto inhibitorio de ATP. La F2,6BP se
forma por la fosforilacin de F6P, una reaccin catalizada por fosfofructocinasa-2 (PFK-2).
La F2,6BP es hidrolizada por una fosfatasa especfica, fructosa bifosfatasa 2 (FBPasa2). Lo
sorprendente es que ambas actividades enzimticas estn presentes en una sola cadena polipeptdica de
55 kd. Esta enzima bifuncional tiene un dominio regulatorio amino terminal, seguido por un dominio
cinasa y un dominio fosfatasa.
La PFK-2 se parece a PFK-1, mientras que la FBPasa2 se parece a la fosfoglicerato mutasa. La F6P
acelera la sntesis de F2,6BP e inhibe su hidrlisis. Por lo tanto, la abundancia de F6P conduce a una mayor
concentracin de F2,6BP y a un aumento de la actividad de la PFK-1. Este proceso se conoce como
estimulacin feedforward.
Adems, las actividades de PFK2 y FBPasa2 estn controladas recprocamente por fosforilacin en
un residuo nico de serina. Cuando la glucosa es escasa, el aumento del nivel sanguneo de glucacon
dispara la cascada de AMPc, lo que conduce a la fosforilacin de esta enzima bifuncional.
Esta modificacin covalente activa a la FBPasa2 e inhibe a la PFK2, disminuyendo as el nivel de
F2,6BP. Por el contrario, cuando la glucosa es abundante, la enzima pierde su grupo fosfato unido, lo cual
aumenta el nivel de F2,6BP y la velocidad de la gliclisis.
En el msculo, la PFK1 es controlada de manera diferente, la cinasa que cataliza la sntesis de
F2,6BP es estimulada, y no inhibida, por la fosforilacin inducida por AMPc. As, la epinefrina estimula
la gliclisis en msculo pero la inhibe en hgado.
(c) Cmo se controla la actividad de la piruvato cinasa?. Describa el papel de ATP, alanina, acetil CoA y
cidos grasos de cadena larga.

35

En los vertebrados hay al menos tres isoenzimas de piruvato cinasa, las que difieren un poco en su
distribucin en los tejidos y en la respuesta a moduladores. Las altas concentraciones de ATP inhiben
alostricamente a la PK, disminuyendo la afinidad de la enzima por su sustrato, PEP.
El nivel de PEP encontrado normalmente en la clula no es suficientemente alto para saturar a la
enzima, y la velocidad de la reaccin ser de acuerdo a la baja concentracin de PEP. La piruvato cinasa es
inhibida tambin por acetil-CoA y cidos grasos de cadena larga, ambos son importantes combustibles
del ciclo del cido ctrico. La acetil CoA es un producto terminal de la degradacin de cidos grasos,
aminocidos y glucosa.
Debido a que el ciclo del cido ctrico es una fuente de energa principal para la produccin de ATP,
la disponibilidad de estos otros combustibles reduce la dependencia de gliclisis en la produccin del ATP.
De tal manera que cuando la clula tiene altas concentraciones de ATP o cuando estn disponibles altas
cantidades de combustible para la respiracin que est acoplada a la produccin energa, la gliclisis es
inhibida por la disminucin de la actividad de PK.
Cuando la concentracin de ATP disminuye, la afinidad de PK por PEP aumenta, capacitando a
la enzima para catalizar la sntesis de ATP a pesar de la baja concentracin de PEP. El resultado es una alta
concentracin de ATP en el estado estacionario.
(d) Cul es la enzima clave en la regulacin de la gliclisis? La fosfofructocinasa-1.
5. Describa el concepto de vlvulas metablicas de las enzimas regulatorias.
Aunque no estn en equilibrio con sus alrededores, los organismos adultos existen generalmente en
un estado estacionario. Un influjo constante de combustible y nutrimentos y una liberacin constante de
energa y productos de desecho permite al organismo mantener una composicin constante.
Cuando el estado estacionario se altera por cambios en las condiciones externas o en el aporte de
combustible, la alteracin temporal en los flujos en las vas metablicas individuales dispara los
mecanismos regulatorios intrnsecos de cada va.
El efecto neto de todos estos ajustes es regresar al organismo al estado estacionario- para lograr la
homeostasis. Debido al papel central del ATP en las actividades celulares, existen enzimas catalticas sin
propiedades regulatorias que aseguran una alta concentracin de ATP en el estado estacionario. El
trmino alto en este contexto significa alto en relacin a sus productos de rompimiento: ADP y AMP.
El flujo a travs de cada va metablica depende de las actividades de las enzimas que
catalizan cada reaccin. Algunas de las enzimas en una va tal como la gliclisis, catalizan reacciones
esencialmente en equilibrio dentro de la clula, la actividad de tales enzimas es suficientemente alta que
el sustrato es convertido a producto tan pronto como el sustrato est presente.
El flujo a travs de este paso es esencialmente limitado por sustrato, esto es, determinado por la
concentracin instantnea del sustrato.
Otras reacciones celulares estn muy lejos del equilibrio. En la va glicoltica, la constante de
equilibrio para la reaccin catalizada por la fosfofructocinasa-1 es cercana a 250, pero el cociente de
accin de masas [fructosa 1,6 bifosfato] [ADP]/[fructosa 6 fosfato] [ATP] en el estado estacionario es de
0.04. La reaccin est muy lejos del equilibrio debido a que la velocidad de conversin de fructosa 6
fosfato a fructosa 1,6 bifosfato est limitada por la actividad de PFK-1.
El aumento en la produccin de fructosa 6 fosfato por las enzimas precedentes en la va glicoltica no
aumenta el flujo a travs de este paso, sino que conduce a la acumulacin de sustrato, fructosa 6 fosfato.
As la PFK-1 acta como una vlvula, regulando el flujo de carbono a travs de la gliclisis; aumentando la
actividad de esta enzima (por activacin alostrica, por ejemplo) aumenta el flujo total a travs de la va.
El flujo de metabolitos a travs de esta va est determinado, no por la accin de masas (por
concentraciones de sustrato y producto) sino por la apertura de esta vlvula enzimtica.
En cada va metablica hay, al menos, una reaccin que en la clula, est muy lejos del equilibrio
debido a la actividad relativamente baja de la enzima que lo cataliza.
La velocidad de esta reaccin no est limitada por disponibilidad de sustrato, sino solo por la
actividad de la enzima. Por lo tanto, se dice que esta reaccin est limitada por enzima, debido a que su
velocidad limita la velocidad de la secuencia total de reacciones, el paso se denomina paso limitante de la
velocidad en la va.

36

En general, estos pasos limitantes de la velocidad son reacciones muy exergnicas y son por lo
tanto irreversibles en condiciones celulares. Las enzimas que catalizan estos pasos exergnicos y
limitantes de la velocidad son comnmente los blancos de la regulacin metablica.
Adems de la regulacin enzimtica alostrica muy rpida dentro de las clulas individuales, los
organismos multicelulares usan seales hormonales para coordinar las actividades metablicas de
diferentes tejidos y rganos. La accin de hormonas altera las actividades de enzimas claves, dentro de
minutos o segundos.
Cuando las circunstancias externas cambian a largo plazo, por ejemplo cuando la persona cambia
de una dieta rica en grasa a una dieta rica en carbohidratos, el ajuste en el flujo a travs de las vas
especficas se lleva a cabo por medio del cambio en el nmero de molculas de enzimas regulatorias
especficas. Esto se acompaa por cambios en las velocidades relativas de sntesis y degradacin de las
enzimas.
6.Describa el mecanismo de accin de las enzimas hexocinasa, aldolasa, fosfoglicerato mutasa y
gliceraldehdo 3 fosfato (OPCIONAL).
Hexocinasa. La unin de la glucosa a esta enzima induce un gran cambio conformacional en esta
molcula. La hexocinasa consiste de dos lbulos, los cuales se acercan cuando la glucosa se une. La
glucosa induce una rotacin de 12 grados de un lbulo con respecto al otro, resultando en un movimiento de
la cadena polipeptdica de 8 .
La hendidura entre los dos lbulos se cierra y la glucosa, excepto su grupo 6 hidroximetilo, queda
rodeada de protena. El efecto de la glucosa sobre la hendidura es un ejemplo claro del papel del cambio
inducido (induced fit) en la accin de la enzima. Este cambio estructura inducido por la glucosa tiene, al
menos dos significados.
Primero, el medio ambiente de la glucosa, llega a ser no polar (hidrofbico), lo cual estimula la
donacin del grupo fosforilo terminal del ATP.
Segundo, el hecho de que la glucosa sea abrazada por la hexocinasa capacita a la enzima para
que discrimine al agua como sustrato. Si la hexocinasa fuera rgida, una molcula de agua, ocupando el sitio
del grupo hidroximetilo de la glucosa, atacara al grupo fosfato gamma del ATP.
En otras palabras, una cinasa rgida, sera necesariamente una ATPasa como una cinasa. La
actividad indeseable de ATPasa se previene haciendo a la hexocinasa activa solo cuando la glucosa cierra
la hendidura.
La piruvato cinasa, la fosfoglicerato cinasa y la fosfofructocinasa, tambin contiene
hendiduras entre los lbulos que se cierran cuando se une el sustrato. Es probable que el mecanismo
de cierre de la hendidura inducida por el sustrato, sea un mecanismo general de las cinasas.
Aldolasa. El mecanismo se explica mejor analizando la reaccin inversa catalizada por la aldolasa.
Una molcula de DHAP forma una base de Schiff protonada con un residuo de lisina especfico en el sitio
activo de la aldolasa.
En esta reaccin, un nuclefilo (el grupo amino) ataca el grupo carbonilo para formar un intermediario
tetradrico, el cual se deshidrata. La base de Schiff protonada juega un papel crtico en la catlisis.
Promueve la formacin del anin enolato de dihidroxiacetona fosfato sirviendo como un potente aceptor
de electrones (electron sink).
El anin enolato se condensa con el grupo aldehdo de gliceraldehdo 3 fosfato para formar una
base de Schiff protonada de fructosa 1,6 bifosfato. Esta base de Schiff se desprotona y se hidroliza para
producir fructosa 1,6 bifosfato y la enzima regenerada. La va de la ruptura de fructosa 1,6 bifosfato es
simplemente la reversa de la de su formacin.
Fosfoglicerato mutasa. Cataliza el desplazamiento reversible de un grupo fosfato entre un C2 y un
C3 del fosfoglicerato. La reaccin ocurre en dos pasos. Un grupo fosfato unido inicialmente a un residuo de
His en el sitio activo de la enzima es transferido al grupo hidroxilo en C2 de 3 fosfoglicerato, formando 2,3
bifosfoglicerato.
El fosfato en C3 del 2,3 bifosfoglicerato es transferido al mismo residuo de histidina de la enzima,
produciendo 2 fosfoglicerato y regenerando la enzima fosforilada. Debido a que la enzima est fosforilada
inicialmente por la transferencia de fosfato de 2,3 bifosfoglicerato, este compuesto funciona como un
37

cofactor; es requerido en pequeas cantidades para iniciar el ciclo cataltico, y se requiere continuamente
por el ciclo.
Esencialmente el mismo mecanismo es empleado por la enzima fosfoglucomutasa, que convierte
glucosa 1 fosfato a glucosa 6 fosfato. En esta reaccin, la glucosa-1,6 bifosfato sirve como un cofactor
esencial. Las mutasas son subclases de isomerasas, enzimas que interconvierten esteroismeros, o
ismeros estructurales o de posicin.
Otra molcula regulatoria que viene de la va glicoltica (adems de F2,6BP), es el 2,3BFG, un
controlador del transporte de oxgeno en los eritrocitos. Estas clulas tiene una alta concentracin de
2,3BPG (4 mM), en relacin con otras clulas que tiene solo pequeas cantidades. El 2,3BPG se une a la
desoxihemoglobina y en consecuencia altera la afinidad de la hemoglobina. Los eritrocitos sintetizan el
2,3BPG a partir de 1,3 BPG.
La enzima bifosfoglicerato mutasa cataliza la transferencia intramolecular de un grupo fosforilo de
C1 a C2 de 1,3 BPG. El 2,3 BPG resultante es hidrolizado a 3 PG por la enzima 2,3 bifosfoglicerato
fosfatasa. La velocidad de la gliclisis afecta la afinidad del oxgeno por la hemoglobina. A travs de la
mediacin de 2,3 BPG. En consecuencia, los defectos heredados de enzimas de la gliclisis alteran la
capacidad de la sangre para transportar oxgeno.
Por ejemplo, la concentracin de intermediarios glicolticos en los eritrocitos deficientes de
hexocinasa es menor que lo normal debido a que la hexocinasa cataliza la primera reaccin de la gliclisis.
Esto resulta en una disminucin de la concentracin de 2,3 BPG y por lo tanto en un aumento de la
afinidad de la hemoglobina por el oxgeno.
Por el contrario, una deficiencia de piruvato cinasa disminuye la afinidad de la hemoglobina por
el oxgeno, ya que aumenta la concentracin de 2,3BPG como resultado del bloqueo en la gliclisis en un
paso posterior al de la produccin de 2,3 BPG.
Gliceraldedo 3 fosfato deshidrogenasa. La conversin de un aldehdo en un acilo fosfato involucra
tanto la oxidacin como la fosforilacin.
La oxidacin requiere de la remocin de un ion hidruro. La remocin de un ion hidruro a partir del un
grupo aldehdo es energticamente muy costoso debido al carcter dipolar del grupo carbonilo: el tomo de
carbono del grupo carbonilo ya tiene una carga parcial positiva.
La remocin del ion hidruro se facilita enormemente al hacer el tomo de carbono menos positivo.
Esto se acompaa por la adicin de un nuclefilo.
El ion hidruro deja rpidamente el compuesto de adicin debido a que el tomo de carbono no
lleva mas una carga positiva. Adems, algo de la energa libre de oxidacin es preservada en el
intermediario acilo.
La adicin de ortofosfato a este intermediario acilo, produce un acil fosfato, el cual tiene una alta
transferencia de grupo.
En el caso de la enzima G3PD, el nuclefilo X- es el grupo sulfhidrilo del residuo de cistena del sitio
activo. El sustrato aldehdo reacciona con la forma ionizada de este grupo sulfhidrilo para formar un
hemitioacetal.
El siguiente paso es la transferencia de un ion hidruro a la molcula de NAD+ que est
fuertemente unida a la enzima. Los productos de esta reaccin son la coenzima reducida NADH y un
tioster, que es un intermediario rico en energa correspondiente al acilo intermediario mencionado antes. El
NADH se disocia de la enzima y otro NAD+ se une al sitio activo.
El ortofosfato ataca entonces al tioster para formar el 1,3 BPG, un donador de fosforilo de alto
potencial. Un aspecto crucial de la formacin de 1,3BPG a partir de G3P es que una reaccin
termodinmicamente desfavorable, la formacin de un acilo fosfato a partir de un carboxilato, es
impulsada por la reaccin termodinmicante, la oxidacin de un aldehdo.
Estas dos reacciones estn acopladas por el intermediario tioster, el cual preserva mucho de la
energa libre liberada en la reaccin de oxidacin. Aqu se ve el uso de intermediario covalente unido a la
enzima como un mecanismo de acoplamiento de energa.
7 (a) Explique cul es el efecto del arsenato, del piridoxal fosfato y del iodoacetato sobre la gliclisis.
El arsenato es un anlogo del fosfato y toma su lugar en la reaccin catalizada por la enzima
gliceraldehdo fosfato deshidrogenasa. Como consecuencia de lo anterior, se forma un compuesto inestable
38

(en vez del 1,3 bifosfoglicerato) que se hidroliza espontneamente, y por lo tanto no se forma ATP en este
paso.
Se dice que el arsenato es un desacoplante entre la oxidacin del sustrato y la sntesis del ATP y
la consecuencia es que en estas condiciones no hay sntesis neta de ATP en la gliclisis, aunque el flujo
a travs de esta va no se detiene.
El piridoxal fosfato no ejerce ningn efecto sobre la gliclisis. El iodoacetato modifica
covalentemente a la enzima gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa y de esta manera la inhibe
irreversiblemente. La modificacin consiste en la unin covalente de un grupo acetato a un grupo SH
esencial para la actividad de la enzima. El efecto es que el flujo a travs de la va se detiene
completamente.
(b) Que coenzimas son indispensables para la conversin de piruvato a etanol?
Tiamina pirofosfato (TPP) es una coenzima de la enzima piruvato descarboxilasa. Esta enzima
tambin requiere del ion Mg+2 .
(c) Cules iones metlicos son cofactores indispensables para la conversin de glucosa a lactato y de
glucosa a etanol?
De glucosa a lactato: Mg+2 y K+ (piruvato cinasa) y de glucosa a etanol, adems de los mencionados,
Zn+2 (deshidrogenasa alcohlica).
El sitio activo de la deshidrogenasa alcohlica contiene un ion zinc que est coordinado con los
tomos de azufre de dos residuos de cistena y un tomo de nitrgeno de un residuo de histidina.
Como en la carboxipeptidasa A, el Zn+2 polariza el grupo carbonilo del sustrato para estabilizar el estado
de transicin.
(d) Qu efecto tendra sobre la gliclisis anaerbica la inhibicin de la reaccin catalizada por la
lactato deshidrogenasa?
En condiciones anaerbicas, la inhibicin de esta reaccin tiene como consecuencia la inhibicin de la
gliclisis debido a que no se regenerara el NAD+ (que se regenera en la reduccin de piruvato a lactato) el
cual se requiere subsecuente en la reaccin catalizada por gliceraldehdo fosfato deshidrogenasa.
8 (a) Explique como pueden entrar a la va glicoltica otros monosacridos como fructosa, manosa y
galactosa. Mencione las enzimas adicionales que se requieren en cada caso.
La fructosa puede entrar por uno de dos caminos siguientes: (1) se puede fosforilar directamente por
hexocinasa para dar fructosa 6 fosfato, el cual es un intermediario glicoltico o (2) se puede fosforilar por
fructocinasa para dar fructosa 1 fosfato, el cual se rompe en gliceraldehdo y dihidroxiacetona fosfato
por la enzima fructosa 1 fosfato aldolasa.
La dihidroxiacetona fosfato se isomeriza a gliceraldehdo 3 fosfato por medio de la triosa fosfato
isomerasa y el gliceraldehdo se fosforila por medio de la enzima triosa cinasa para producir gliceradehdo
3 fosfato.
La afinidad de hexocinasa por glucosa es 20 veces mayor que por fructosa. Se forma poca fructosa 6
fosfato en el hgado debido a la abundancia de glucosa en relacin con fructosa en ese rgano
La manosa es fosforilada por hexocinasa a manosa 6 fosfato y despus es isomerizada a fructosa 6
fosfato por medio de fosfomanosa isomerasa.
La galactosa es fosforilada por galactocinasa para dar galactosa 1 fosfato. Este compuesto es
convertido en su epmero en C-4, glucosa 1 fosfato, por un conjunto de reacciones en las cuales uridina
difosfato funciona como a un acarreador, parecido a una coenzima, de grupos hexosa.
(b) Cmo afectara a la conversin de galactosa a glucosa la ausencia de NAD+?
La epimerizacin de la galactosa a glucosa ocurre cuando la primera se encuentra unida a UDP. La
configuracin del grupo hidroxilo en C-4 es invertida por la enzima UDP galactosa 4 epimerasa, la cual
contiene NAD+ fuertemente unido. Los estudios de fluorescencia han demostrado que este NAD+ se reduce
transitoriamente a NADH durante la catlisis.

39

El NAD+ acepta, probablemente, un tomo de hidrgeno unido al C-4 del azcar, y se forma un
intermediario 4-ceto. El NADH transfiere entonces el mismo tomo de hidrgeno al otro lado de C-4 para
formar el otro epmero. Por lo tanto, la ausencia de NAD+, impedira que se realizara esta reaccin.
(c) Qu es la galactosemia? (OPCIONAL).
Es una enfermedad gentica heredada en la cual se afecta el metabolismo de la galactosa. En la
forma mas comn de esta enfermedad la enzima UDP-glucosa:galactosa-4-epimerasa est defectuosa
genticamente, lo que previene la conversin de galactosa 1 P en glucosa 1 P.
Otras formas de galactosemia se originan por la deficiencia de galactocinasa o de UDP-glucosa-4epimerasa. Los nios afectados con galactosemia tienen problemas de crecimiento y se presenta vmito y
diarrea cuando se consume leche.
Es comn la hepatomegalia y la ictericia y en varios casos los pacientes sufren de retraso mental.
La galactosa en sangre se eleva mucho y esta aparece en orina. Un criterio de diagnstico es la ausencia
de la transferasa en los eritrocitos. Esta enfermedad se trata por la exclusin de la galactosa de la dieta.
Este tratamiento produce una regresin de casi todos los sntomas clnicos, excepto por la deficiencia
mental, la cual no es reversible.
Por el contrario, si se contina la ingestin de galactosa, puede ocurrir la muerte. El dao en la
galactosemia se debe a una acumulacin de sustancias txicas y no a la ausencia de un componente
esencial. Una de las sustancias txicas es el galactitol, el cual se forma por la reduccin de la galactosa.
9. Problemas 1,2 y 3 del Cap. 15.
10. Problemas 4,5 y 9 del Cap. 15
11. Problemas 10,11,12 del Cap. 15.
12. Qu enzima(s) de fermentacin alcohlica o lctica:
(1) Tiene un residuo de lisina especfico en el sitio activo que forma una base de Schiff protonada
cuando reacciona con el sustrato. Aldolasa.
(2) Sufre un cambio conformacional cuando se une a la glucosa. Hexocinasa.
(3) Requiere NAD+ para su actividad. Gliceraldehdo fosfato deshidrogenasa, lactato deshidrogenasa y
deshidrogenasa alcohlica.
(4) Es estimulada por fructosa 1,6 bifosfato e inhibida por ATP y alanina. Piruvato cinasa.
(5) Es estimulada por fructosa 2,6 bifosfato. Fosfofructocinasa-1.
(6) Catalizan reacciones irreversibles. Hexocinasa, fosfocructocinasa-1 y piruvato cinasa.
(7) Puede usar como sustrato arsenato en vez de fosfato. Gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa
(8) Usan como sustrato ATP. Hexocinasa, fosfocructocinasa-1.
(9) Catalizan reacciones de sntesis de ATP. Fosfoglicerato cinasa y piruvato cinasa.
(10) Tiene una cistena en su sitio activo, cuyo grupo SH es indispensable para su actividad.
Gliceraldehdo fosfato deshidrogenasa.
(11). Requieren de NADH. Deshidrogenasa alcohlica/Deshidrogenasa lctica.
(12). Requiere Zn+2. Deshidrogenasa alcohlica.
(13) Cataliza una reaccin de deshidratacin. Enolasa.
(14) Es inhibida por iodoacetato. Gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa.
(15) Requiere de FAD. Ninguna.
(16) Catalizan la isomerizacin cetosaaldosa o viceversa. Fosfohexosa isomerasa, Triosa fosfato
isomerasa.
(17) Es inhibida por glucosa 6 fosfato. Hexocinasa.
40

(18) Tiene una Km alta para glucosa y no es inhibida por glucosa 6 fosfato (isoenzima de la anterior).
Hexocinasa D o glucocinasa.
(19) Requiere tiamina pirofosfato (TPP). Piruvato descarboxilasa.
(20) Cataliza un rearreglo intramolecular de fosfato. Fosfoglicerato mutasa.
(21) Catalizan la formacin de compuestos con un Go mayor que el ATP. Gliceraldehdo 3 fosfato
deshidrogenasa y enolasa.
(22) Cataliza una reaccin de descarboxilacin. Piruvato descarboxilasa.
(23) Catalizan reacciones conocidas como fosforilaciones a nivel de sustrato. Fosfoglicerato cinasa y
piruvato cinasa.
(24) Catalizan la ruptura de un compuesto fosforilado de 6 tomos de carbono. Aldolasa.
(25) Cataliza la formacin de un anhdrido llamado acil fosfato. Gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa.
(26) Tiene una histidina en su sitio activo y requiere de cantidades catalticas de 2,3 bifosfoglicerato.
Fosfoglicerato mutasa.
(27) Catalizan reacciones de isomerizacin. Fosfohexosa (fosfoglucosa) isomerasa, triosa fosfato
isomerasa, fosfoglicerato mutasa.
(28) Requiere de potasio. Piruvato cinasa.
(29) Requieren de Mg+2. Hexocinasa, fosfohexosa isomerasa, fosfofructocinasa-1, fosfoglicerato cinasa,
fosfoglicerato mutasa, piruvato cinasa, piruvato descarboxilasa.
(30) Regenera el NAD+ para que contine la gliclisis anaerbica. Lactato deshidrogenasa y
deshidrogenasa alcohlica.
13. Explique en que consiste el Efecto Pasteur.
En los estudios de la fermentacin de glucosa por las levaduras, Pasteur descubri que, tanto la
velocidad como la cantidad total de glucosa consumida fueron muchas veces mayor bajo condiciones
anaerbicas que bajo condiciones aerbicas.
La cantidad de ATP de la va glicoltica bajo condiciones anaerbicas (2 molculas de ATP/mol de
glucosa) es mucho menor que el obtenido de la oxidacin completa de la glucosa (36 o 38 molculas de
ATP/mol de glucosa).
Esto es, aproximadamente 18 veces mas glucosa se debe consumir de manera anaerbica que de
manera aerbica.

41

7. CICLO DE KREBS
1. Cul es el mecanismo de reaccin del complejo piruvato deshidrogenasa? Indique
(A) la ecuacin balanceada y el sitio de la clula en donde se lleva a cabo esta reaccin y las del ciclo
de Krebs.
Piruvato + NAD+ + CoASH --------------Acetil CoA + NADH + CO2

G = -33-4 kJ/mol

Esta reaccin y las del ciclo de Krebs se lleva a cabo en la matriz mitocondrial. Es una reaccin de
descarboxilacin oxidativa e irreversible. El grupo carboxilo es removido del piruvato como una molcula
de CO2 y los dos carbonos restantes llegan a ser el grupo acetilo de AcCoA.
(B) La forma en que el piruvato ingresa a la mitocondria. Por medio de un simporte piruvato-H+
(c) Las enzimas y coenzimas que la forman y el nmero de copias de cada enzima
Enzima
Piruvato deshidrogenasa (E1)
Dihidrolipoil transacetilasa (E2)
Dihidrolipoil deshidrogenasa (E3)

Coenzima(s)
TPP
Lipoato, CoA
FAD, NAD

PM, subunidades
96,000
65,000-70,000
56,000

# subunidades por complejo

24
24
12

Tambin forman parte del complejo dos protenas: una protena cinasa y una fosfoprotena fosfatasa.
(D) el tamao de este complejo en relacin con el de un ribosoma.
El complejo de piruvato deshidrogenasa aislado de E. coli (Mr > 4.5 x 106) es de 45 nm de dimetro,
mayor que el de un ribosoma de procariontes (que es de 20-25 nm con un peso de 2-2.5 x 106 y ligeramente
mayor que el de un ribosoma de eucariontes de una masa de 4.2 x 106) y puede ser visualizado por el
microscopio electrnico.
(E) La secuencia de transformaciones que da lugar a la formacin de productos. Se lleva a cabo en
cuatro pasos:
E1. El piruvato se descarboxila despus de su reaccin con TPP. Esta reaccin es catalizada por la
enzima E1 del complejo
Piruvato + TPP -------- hidroxietil-TPP + CO2
Una caracterstica del TPP es que el tomo de carbono entre los tomos de nitrgeno y azufre en el
anillo de tiazol es mucho mas cido que la mayora de los grupos =CH-. Por lo tanto se ioniza para formar
un carbanin, el cual se combina rpidamente con el grupo carbonilo del piruvato.
El nitrgeno cargado positivamente del anillo de TPP acta entonces como un potente aceptor de
electrones para estabilizar la formacin de una carga negativa, la cual es necesaria para la
descarboxilacin, producindose el intermediario hidroxietil-TPP.
E2. El grupo hidroxietilo unido a TPP es oxidado para formar un grupo acetilo y transferido
concomitantemente a lipoamida. El oxidante en esta es el grupo disulfuro de lipoamida, el cual se
convierte en forma sulfhidrilo. Esta reaccin tambin es catalizada por la enzima E1, y el producto de la
misma es acetillipoamida y se regenera el carbanin de TPP.
E3. El grupo acetilo es transferido de acetillipoamida a CoA para formar acetilCoA. Esta reaccin es
catalizada por dihidrolipoil transacetilasa (E2). El enlace tioster rico en energa es preservado cuando el
grupo acetilo es transferido a CoA.
E4. La forma oxidada de lipoamida es regenerada por dihidrolipoil deshidrogenasa (E3). Dos electrones se
transfieren al grupo prosttico FAD de la enzima y luego al NAD+.
42

(F) la manera en que se regula la actividad del mismo.

Esta es una reaccin irreversible en los animales, lo que conduce a que stos sean incapaces de
convertir AcetilCoA en glucosa. La descarboxilacin oxidativa del piruvato a acetilCoA compromete los
tomos de carbono de la glucosa a dos vas principales: oxidacin a CO2 por el ciclo del cido ctrico,
con la generacin simultnea de energa, o la incorporacin de lpidos. Se regula de la siguiente manera:
La fosforilacin del componente piruvato deshidrogenasa inactiva al complejo. Esto es revertido por la
accin de una fosfatasa especfica.
Ambas enzimas estn unidas al componente transacetilasa (E2). Los cocientes NADH/NAD+,
acetilCoA/CoA o ATP/ADP altos promueven la fosforilacin y as la desactivacin del complejo. El piruvato
activa la deshidrogenasa al inhibir a la cinasa, mientras que el Ca+2 la activa al estimular a la fosfatasa.
De tal manera que el complejo piruvato deshidrogenasa es inactivado cuando la carga energtica es alta
y los intermediarios biosintticos estn elevados. Por el contrario, las hormonas como la vasopresina y los
agonistas 1-adrenrgicos estimulan la piruvato deshidrogenasa al elevar el Ca+2 citoslico, el cual a su
vez eleva el Ca+2 mitocondrial.
El calcio puede ingresar a la matriz mitocondrial en respuesta al potencial de membrana (adentro
negativo) y puede abandonar la mitocondria en intercambio por Na+ (intercambiador sodio-calcio).
La insulina tambin acelera la conversin de piruvato a acetilCoA estimulando la desfosforilacin.
2. Haga un bosquejo del ciclo de Krebs indicando:
(A) Las reacciones individuales con el cambio de energa libre estndar y la reaccin global balanceada,
Reaccin
AcetilCoA + OA +H2O -> Citrato + CoA + H+
Citrato >< cis-aconitato + H2O
cis-aconitato +H2O >< isocitrato
Isocitrato + NAD+ >< -CG + CO2 + NADH + H+

Enzima
Citrato sintetasa
Aconitasa
Aconitasa
Isocitrato
deshidrogenasa
+
-CG + NAD + CoA >< succinil CoA + CO2 + NADH -CG deshidrogenasa
+ H+
Succinil CoA + Pi + GDP >< succinato + GTP + CoA succinil CoA sintetasa
Succinato +FAD >< fumarato + FADH2
succinato
deshidrogenasa
Fumarato + H2O >< L-malato
Fumarasa
L-malato + NAD+ >< OA + NADH + H+
Malato deshidrogenasa

Gpo. prosttico
Fe-S
Fe-S
TPP, FAD,
Lipoico
FAD, Fe-S

G
-75
+2.0
-0.5
-2.0
-7.2
-0.8
0
-0.9
+ 7.1

(B) si se puede obtener sntesis neta de oxaloacetato en el ciclo de Krebs.

No es posible, ya que entran dos tomos de carbono en forma de acetilCoA y salen dos tomos de
carbono en forma de CO2.

(C) las reacciones del ciclo de Krebs en donde se produce CO2, NADH, FADH2 y GTP,
Se produce CO2 en las reacciones catalizadas por ICD (isocitrato -CG) y -CGD (-CG a succinil
CoA).
El NADH se produce en las reacciones catalizadas por ICD, -CGD y malato deshidrogenasa.
El FADH2 se produce en la reaccin catalizada por succinato deshidrogenasa.
El GTP se produce en la reaccin catalizada por succinil CoA sintetasa.

(D) la enzima que est unida a la membrana interna mitocondrial. Succinato deshidrogenasa.

43

(E) el complejo enzimtico que es muy parecido estructural y funcionalmente al complejo de la piruvato
deshidrogenasa.
-cetoglutarato deshidrogenasa.
(F) la enzima que tiene un centro hierro-azufre. Aconitasa/succinato deshidrogenasa
(G) La reaccin en donde se lleva a cabo una fosforilacin a nivel de sustrato,
succinil CoA + GDP + Pi succinato + GTP + CoA (Succinil Coa sintetasa)
(H) La reaccin que es inhibida por malonato. Succinato fumarato (succinato deshidrogenasa).
(I) La reaccin que es inhibida por fluorocitrato.
Aconitasa. El fluoroacetato est presente en la hojas de ciertas plantas venenosas de Africa, Australia y
Sudamrica. En s mismo tiene poco efecto txico sobre las clulas, sin embargo, las clulas lo convierten
enzimticamente en fluoroacetil-CoA y entonces a (2R,3R)-fluorocitrato, el cual inhibe a la aconitasa.
3. (a) Describa el mecanismo de accin de la citrato sintetasa (OPCIONAL).
Esta enzima cataliza la formacin de citril CoA, el cual se hidroliza a citrato y CoA. Esta enzima est
compuesta de dos subunidades idnticas de 49-kD. Cada sitio activo est localizado en una hendidura
entre el dominio pequeo y grande de una subunidad, adyacente a la interface de las subunidades. Se ha
demostrado, por estudios de cristalografa de rayos X de citrato sintetasa y sus complejos con varios
sustratos e inhibidores, que la enzima sufre un cambio conformacional muy grande durante la catlisis.
Primero se une el OA y despus la acetilCoA.
La unin del OA induce un gran rearreglo estructural lo que conduce a la creacin de un sitio de
unin para acetilCoA. La forma abierta de la enzima, en ausencia de ligando, se transforma en una forma
compacta o cerrada por la unin del OA.
(b) Por medio de que reaccin se sintetiza ATP a expensas del GTP sintetizado en el ciclo de Krebs?
Por medio de la enzima nuclesido difosfocinasa que cataliza la reaccin reversible GTP +ADP <-->
ATP + GDP. Esta enzima requiere de Mg+2 y tiene un Go de 0.0 kcal/mol.
4. (a) Cmo se regula la actividad del ciclo de Krebs? Mencione el papel y sitio de accin del ATP,
acetil CoA, NADH, succinil CoA y ADP.
El ATP inhibe las reacciones de piruvato deshidrogenasas, citrato sintetasa e isocitrato
deshidrogenasa.
La acetil CoA inhibe la reaccin de la piruvato deshidrogenasa
El NADH inhibe las reacciones de piruvato deshidrogenasa, citrato sintetasa y -cetoglutarato
deshidrogenasa.
El succinil CoA inhibe las enzimas citrato sintetasa y -cetoglutarato deshidrogenasa.
El ADP estimula las enzimas citrato sintetasa e isocitrato deshidrogenasa.
Adems, el Ca+2 estimula las deshidrogenasas de piruvato, isocitrato y -cetoglutarato, el citrato
inhibe a la citrato sintetasa, y los cidos grasos inhiben y el AMP, CoA y NAD+ estimulan alostricamente
la piruvato deshidrogenasa.
En resumen, la actividad de piruvato deshidrogenasa se inhibe cuando hay grandes cantidades de
combustible en la forma de cidos grasos y acetil CoA y cuando la concentracin de ATP y el cociente
[NADH]/[NAD+] son altos y se estimula cuando las demandas de energa son altas y se requiere un
mayor flujo de acetil-CoA al ciclo del cido ctrico.
Todas las modificaciones descritas anteriormente para piruvato deshidrogenasa de los vertebrados
son alostricas, y se complementan por un segundo nivel de regulacin, la modificacin covalente de las
protenas.
44

El complejo se inhibe por la fosforilacin reversible de un residuo de serina en una de las

subunidades de E1 (Piruvato deshidrogenasa). Adems de las enzimas E1, E2 y E3, el complejo Pir des
contiene dos protenas regulatorias cuyo nico propsito es regular la actividad del complejo. Una cinasa
de protena especfico fosforila y por lo tanto inactiva a E1, y una fosfatasa de fosfoprotena especfica
remueve el grupo fosfato por hidrlisis y por lo tanto activa a E1.
La cinasa es activada alostricamente por ATP: Cuando los niveles de ATP son altos, este
complejo se inactiva por fosforilacin de E1. Cuando el nivel de ATP disminuye, la actividad de la
cinasa disminuye y la accin de la fosfatasa remueve los fosfatos de E1 y as activando al complejo.
El complejo en las plantas est regulado primariamente por los niveles de NADH, aunque tambin
hay evidencia de la regulacin por fosforilacin reversible. En E. coli el complejo es regulado alostricamente
de una manera similar a lo que sucede en los vertebrados y la regulacin por fosforilacin no ocurre.
Las tres enzimas del ciclo que se regulan lo hacen principalmente por (el flujo a travs de la va est
gobernado):
(a) disponibilidad de sustrato,
(b) inhibicin por acumulacin de productos, y
(c) inhibicin por retroalimentacin alostrica de las primeras enzimas por intermediarios
posteriores del ciclo.
La disponibilidad de oxaloacetato y acetil CoA, sustratos de citrato sintetasa, vara con las
circunstancias metablicas y algunas veces puede limitar la velocidad de formacin del citrato. Las
deshidrogenasas de isocitrato y -cetoglutarato son inhibidas por cocientes [NADH]/[NAD+] elevados.
Los iones calcio, que en los vertebrados son la seal, para la contraccin y el aumento en la
demanda concomitante de ATP, activa ambas deshidrogenasas y al complejo
Bajo condiciones normales, las velocidades de la gliclisis y del ciclo del cido ctrico estn
integradas de manera que la cantidad de glucosa que se metabolice a piruvato depende de la cantidad de
combustible que requiere el ciclo de Krebs, en forma de grupos acetilo (de acetil CoA).
La velocidad de gliclisis est asociada a la velocidad del ciclo del cido ctrico no solo por la
inhibicin por altos niveles de ATP y NADH, los cuales son componentes comunes de ambas etapas de la
oxidacin de glucosa, la glicoltica y la respiratoria, sino tambin por citrato.
El citrato, producto de la primera etapa del ciclo, sirve como un inhibidor alostrico importante
de la fosfofructocinasa-1.
(b) OPCIONAL Cmo se regula la isocitrato deshidrogenasa en las bacterias?
El isocitrato tiene dos destinos principales en algunas plantas y bacterias. Cuando la energa se necesita,
se descarboxila oxidativamente a -CG. Por el contrario, cuando la energa es abundante, el isocitrato se
escinde a succinato y glioxalato. El ciclo del cido ctrico y el ciclo del glioxalato compiten por isocitrato en
este punto de ramificacin clave.
En tiempo de abundancia, la isocitrato deshidrogenasa es inactivada por fosforilacin, lo cual sirve para
derivar al isocitrato a la va del glioxilato para la formacin de intermediarios biosintticos. El mecanismo de
desactivacin es simple, la fosforilacin del residuo de serina 113 en el sitio activo bloquea
directamente la unin del isocitrato. La cinasa que fosforila a la isocitrato deshidrogenasa y la fosfatasa
que remueve el grupo fosfato estn en la misma cadena polipeptdica. Estas reacciones opuestas estn
catalizadas por el mismo sitio activo.
Sus velocidades estn reguladas recprocamente por varios metabolitos. El AMP, por ejemplo, activa a la
fosfatasa e inhibe a la cinasa.
5. (a) Qu significa que el ciclo de Krebs es una va anfiblica?
En los organismos aerbicos el ciclo del cido ctrico es una va anfiblica (sirve en procesos
catablicos y anablicos). No solo funciona en el catabolismo oxidativo de los carbohidratos, cidos
grasos y aminocidos, sino que tambin proporciona precursores para muchas vas biosintticas, como en
los ancestros anaerbicos.
45

(b) Qu productos se pueden sintetizar a partir de los intermediarios del ciclo de Krebs?
Por la accin de varias enzimas auxiliares, ciertos intermediarios del ciclo del cido ctrico,
particularmente oxaloacetato y -cetoglutarato, pueden ser removidos del ciclo para servir como
precursores de aminocidos. Aspartato y glutamato provienen de ellos, ya que tiene el mismo esqueleto de
carbones y pueden ser sintetizados por transaminacin simple.
A travs de aspartato y glutamato, los carbonos de OA y -CG son usados para construir otros aa y as
como nucletidos de purinas y pirimidinas. Tambin se ver como el OA es convertido en glucosa en
el proceso de gluconeognesis. Succinil Co-A es un intermediario central en la sntesis del anillo de
porfirinas del grupo hemo que sirven como acarreador de oxgeno (en hemoglobina y mioglobina) y de
electrones (en los citocromos).
Dado el nmero de productos biosintticos derivados de los intermediarios del CAC, este ciclo claramente
tiene un papel crtico, aparte de su funcin en el metabolismo productor de energa

(c) Qu es una reaccin anaplertica? De al menos dos ejemplos de este tipo de reacciones.
Cuando los intermediarios del ciclo del cido ctrico son removidos para servir como precursores
biosintticos, se esperara, que la disminucin resultante en la concentracin de estos intermediarios,
disminuya el flujo a travs del ciclo. Sin embargo, los intermediarios pueden reponerse por reacciones
anaplerticas.
Bajo condiciones normales, las reacciones por medio de las cuales los intermediarios del ciclo con
removidos y son repuestos estn en un balance dinmico, de tal manera que la concentracin de los
intermediarios del ciclo permaneces casi constantes.
piruvato carboxilasa. Piruvato + CO2 + ATP --< OA + ADP + Pi
Hgado. rin
fosfoenolpiruvato carboxicinasa. PEP + CO2 + GDP -< OA + GTP
Corazn, msculo esq.
fosfoeneolpiruvato carboxilasa. PEP + HCO3- -< OA + Pi
Plantas superiores, bacterias levaduras
+
enzima mlica. Piruvato + HCO3 + NAD(P)H < malato + NAD(P)
Eucariontes y procariontes.
(d) En que reaccin(es) anaplertica(s) la biotina es una coenzima, y cul es su mecanismo de accin?
En la de la piruvato carboxilasa. La biotina juega un papel clave en muchas reacciones de carboxilacin.
Esta vitamina es un acarreador especializado de grupos de 1-carbono en su forma mas oxidada: CO2.
Los grupos carboxilo estn unidos a la biotina en el grupo ureido dentro del sistema de anillo de biotina.
La piruvato carboxilasa est compuesta de cuatro subunidades idnticas, cada una contiene una
molcula de biotina unida covalentemente a travs de un enlace amida entre su cadena latera de valerato y
un grupo -amino de un residuo de lisina especfico en el sitio activo de la enzima; esta biotinlisina se llama
biocitina. La carboxilacin del piruvato procede en dos pasos:
1. Un grupo carboxilo derivado del HCO3- se une a la biotina.
2. El grupo carboxilo es transferido al piruvato para formar OA.
(e) Qu reacciones de la gliclisis, ciclo de Krebs o anaplerticas son inhibidas por avidina?
La biotina es una vitamina requerida en la dieta humano, es abundante en muchos alimentos y es
sintetizada por bacterias intestinales. La enfermedad por deficiencia es rara y es observada solo cuando se
ingieren grandes cantidades de huevo crudo.
Los huevos crudos contiene una gran cantidad de la protena avidina, la cual une a la biotina muy
fuertemente y previene su absorcin en el intestino. La avidina en la clara del huevo crudo puede ser un
mecanismo de defensa contra el crecimiento de las bacterias. Cuando los huevos son cocinados, la avidina
es desnaturalizada (y por lo tanto inactivada) junto con las otras protenas de la clara del huevo.
46

La reaccin que es inhibida la de la piruvato carboxilasa

6. (a) En que consiste el ciclo del glioxilato, cul es su ecuacin balanceada, en que parte de la clula se
lleva a cabo y cul es la diferencia con el ciclo de Krebs?
Muchas bacterias y plantas son capaces de crecer de acetato u otro componente que produzca
acetil CoA. Usan una va metablica que convierte unidades de 2 carbonos en una unidad de cuatro
carbonos (succinato) para la produccin de energa y biosntesis.
Esta secuencia de reacciones, llamada ciclo del glioxilato, esquiva los dos pasos de
descarboxilacin en el ciclo del cido ctrico. Otra diferencia clave es que las dos molculas de acetil CoA
entran por turno del ciclo del glioxilato, comparado con una en el ciclo del cido ctrico.
El ciclo del glioxilato, empieza con la condensacin de acetil CoA y oxaloacetato para formar
citrato, el cual es isomerizado a isocitrato. En lugar de descarboxilarse, el isocitrato es escindido por la
enzima isocitrato liasa a succinato y glioxalato.
Los pasos subsiguientes regeneran oxaloacetato a partir de glioxalato. La acetil CoA se condensa
con glioxalato para formar malato, en una reaccin catalizada por malato sintetasa, la cual se parece a la
citrato sintetasa. Finalmente, el malato es oxidado a OA, como en el ciclo del cido ctrico. La suma de las
reacciones es la siguiente
2 acetilCoA +NAD+ + 2H2O succinato + 2 CoA + 2NADH + 2H+
En las plantas, estas reacciones se llevan a cabo en los organitos llamados glioxisomas.
Las bacterias y plantas pueden sintetizar acetilCoA a partir de acetato y CoA por una reaccin
impulsada por ATP y que es catalizada por acetil CoA sintetasa.
Acetato + CoA + ATP acetil CoA + AMP + PPi
(b) Se puede considerar al ciclo del glioxalato como una reaccin anaplertica? Por qu?
Si se puede considerar una reaccin anaplertica ya que se sintetiza succinato, un intermediario del ciclo del
cido ctrico.
(c) OPCIONAL. Describa como se desarrolla el beriberi

47

8. FOSFORILACIN OXIDATIVA
1. (a) Defina fosforilacin oxidativa e indique donde se lleva a cabo este proceso en eucariontes y en
procariontes.
La sntesis de ATP impulsada por la transferencia de electrones al oxgeno, involucra la reduccin de
O2 a agua con electrones donados por NADH y FADH2, y ocurre de igual manera en la luz y en la oscuridad.
En los eucariontes se lleva a cabo en la mitocondria y en las bacterias en el citoplasma y membrana
celular.
(b) Cuntas molculas de ATP se sintetizan por la oxidacin de una molcula de NADH y de una
molcula de FADH2?
Se sintetizan tres molculas de ATP por cada NADH y dos molculas de ATP por cada molcula de
FADH2.
(c) Explique si se requiere de membranas intactas para que se lleve a cabo la fosforilacin oxidativa.
Porque la sntesis del ATP es impulsada por un gradiente de protones, el cual se genera por el
transporte de electrones y por la impermeabilidad de la membrana interna mitocondrial al paso de estos.
(d) Cules son las diferencias en permeabilidad de la membrana interna y de la membrana externa
mitocondrial?
La membrana externa mitocondrial es permeable libremente a la mayora de los iones y molculas
pequeas, mientras que la interna es impermeable a la mayora de los iones y molculas pequeas
incluyendo a los protones.
La permeabilidad de la membrana externa se debe a la presencia de una protena llamada porina que
forma canales transmembranales en la misma y que permiten el paso de molculas de peso molecular
menor a 5,000. Las nicas molculas que pasan por la membrana interna mitocondrial son aquellas para las
cuales existen transportadores especficos.
2. (a) Qu enzimas recolectan los electrones que van a alimentar la cadena de transporte de electrones y
de dnde se recolectan?
Las deshidrogenasas recolectan electrones de las reacciones de oxidacin del complejo de la piruvato
deshidrogenasa, del ciclo del cido ctrico, de la va de -oxidacin, y de los pasos oxidativos del
catabolismo de aminocidos. D ejemplos especficos de estas enzimas: Deshidrogenasas de piruvato, de
isocitrato, de -cetoglutarato, de malato o de gliceradehdo 3-fosfato, de lactato, de -hidroxiacil CoA, de
glutamato y de glucosa 6-fosfato.
(b) Que enzima cataliza la reaccin NADPH + NAD+ ---> NADH + NADP+?
Transhidrogenasa de nucletidos de piridina. Por medio de esta enzima, el NAD+ tambin puede
recolectar equivalentes reductores de sustratos de deshidrogenasas enlazados a NADP+. El NADH y el
NADPH son acarreadores de electrones que estn asociados reversiblemente con las deshidrogenasas.
(c) Cules son las tres maneras en que los electrones son transferidos por los grupos prostticos de los
acarreadores de electrones de la cadena respiratoria mitocondrial?
La cadena respiratoria mitocondrial consiste de una serie de acarreadores de electrones, la mayora de
los cuales son protenas integrales de membrana, con grupos prostticos capaces de aceptar y donar uno o
dos electrones. Cada componente de la cadena puede aceptar electrones del acarreador precedente y
transferirlos al siguiente en una secuencia especfica. Hay cuatro tipos de transferencia de electrones en los
sistemas biolgicos:
(1) transferencia directa de electrones como en la reduccin de Fe+3 a Fe+2;
48

(2) transferencia de un tomo de hidrgeno (H+ + e-);

(3) transferencia de un ion hidruro (:H-), el cual lleva dos electrones; y
(4) combinacin directa de un reductor orgnico con el oxgeno. Cada uno de los primeros tres tipos
ocurre en la cadena respiratoria. Algunas de las reacciones en estas secuencias son transferencias de 1
electrn y otras involucran la transferencia de dos electrones.
3. (a) Adems de las flavoprotenas y del NAD+, cules son los 3 tipos de acarrreadores de electrones
presentes en la cadena respiratoria? Describa brevemente cada uno de estos tipos.
(a1) Una benzoquinona hidrofbica (ubiquinona) y
(a2) dos tipos de protenas que contienen hierro (citocromos y protenas hierro-azufre).
La ubiquinona (tambin llamada coenzima Q o simplemente UQ) es una benzoquinona liposoluble con
una cadena isoprenoide lateral muy larga.
Los compuestos estrechamente relacionados plastoquinona (encontrado en los cloroplastos de las
plantas) y menaquinona (encontrado en las bacterias), juegan papeles anlogos al de la UQ, todos
acarrean electrones en cadenas de transferencia de electrones asociados a la membrana.
La UQ puede aceptar un electrn para llegar a ser el radical semiquinona UQH. ) o dos electrones para
formar el ubiquinol (UQH2) y. como las flavoprotenas es capaz de actuar en la unin de un donador de dos
electrones y un aceptor de un electrn. Debido a que UQ es pequea e hidrofbica, difunde libremente
dentro de la bicapa de lpidos de la membrana interna mitocondrial y puede transportar equivalentes
reductores entre otras molculas acarreadora de electrones menos mviles.
Los citocromos son protenas de la membrana interna mitocondrial, de la membrana de los tilacoides de
los cloroplastos y la membrana plasmtica de las bacterias que contiene hierro y que transportan electrones.
El color fuerte, caracterstico de los citocromos, es producido por el grupo prosttico hemo. Hay tres clases
de citocromos que se distinguen por sus diferencias en su espectro de absorcin de luz y que se designan
como a, b y c.
Cada tipo de citocromo en su estado reducido (Fe+2) tiene tres bandas de absorcin en el rango visible.
La banda de longitud de onda mas grande (la banda alfa) est cerca de los 600 nm en citocromo tipo a,
cerca de los 560 nm en el tipo b y cerca de los 550 en el tipo c.
El grupo hemo de los citocromos a y b est fuertemente unido, pero no en forma covalente a sus
protenas asociadas, los grupos hemos de los citocromos tipo c s estn unidos covalentemente a travs de
residuos de cistena. En algunas protenas de transferencia de electrones que contienen hierro, las
protenas hierro-azufre, el hierro est presente en forma no hmica (como en los citocromos) pero en
asociacin con los tomos de azufre inorgnico y/o los tomos de Cis en la protena.
Estos centros hierro-azufre van desde simples estructuras con un solo tomo de Fe (Fe-S) coordinado a
cuatro residuos de cistena a travs del azufre en el azufre en la cadena lateral de la cistena a centros Fe-S
mas complejos con dos o cuatro tomos de Fe. Estas protenas participan en transferencias de 1 electrn.
(b) Cuntos complejos de transporte de electrones estn presentes en la cadena respiratoria, cules
son stos, de donde a donde transportan los electrones y cules son sus grupos prostticos?
Son cuatro complejos y son:
Nombre complejo
I NADH deshidrogenasa
II Succinato deshidrogen.
III UQ-cit c oxidorreductasa
IV Citocromo oxidasa

Transporte eNADH y UQ
Succinato y U
UQ y cit c
Cit c y O2

PM y subunidades
850, >25
140, 4
13, 1
160, 6-13

Grupos prostticos
FMN, Fe-S
FAD, Fe-S
Hemo
Hemo, CuA y CuB

(c) Describa como se ha deducido el orden en el que actan los acarreadores de electrones en la
membrana interna mitocondrial. Se ha deducido de varias maneras
49

(c1): Se ha determinado experimentalmente el potencial de reduccin estndar. Uno espera que los
acarreadores funcionen en orden creciente de potencial de reduccin, debido a que los electrones
tienden a fluir espontneamente de acarreadores de bajo potencial a acarreadores de alto potencial (Eo). El
orden deducido por este mtodo es: NADH, UQ, Cit b, Cit c1, Cit c y Cit a+a3.
(c2) Cuando toda la cadena de acarreadores es reducida experimentalmente proporcionando una
fuente de electrones pero no un aceptor final (O2) y entonces el oxgeno se introduce rpidamente en el
sistema, la velocidad a la cual los acarreadores se oxidan (medido espectroscpicamente), muestra el orden
en el cual los acarreadores funcionan. El acarreador mas cerca del oxgeno (al final de la cadena) cede sus
electrones primero, el segundo acarreador del extremo es oxidado en seguida y as sucesivamente.
(c3) Los agente que inhiben el flujo de electrones a travs de la cadena se han usado en combinacin
con las determinaciones del grado de oxidacin del acarreador.
En la presencia de oxgeno y un donador de electrones, los acarreadores que funcionan antes del paso
inhibido se espera que estn totalmente reducidos, y aquellos que funcionan despus del bloqueo deben
estar totalmente oxidados. Usando varios inhibidores que bloquean al principio o al final de la cadena, se ha
deducido la secuencia entera. Es la misma que se dedujo de los dos enfoques anteriores.
(c4) el tratamiento suave de la membrana interna mitocondrial con detergentes permiti la resolucin
de los cuatro complejos acarreadores de electrones. Cada uno de estos complejos separados tiene su
composicin especfica y cada uno es capaz de catalizar la transferencia de electrones a travs de una
porcin de la cadena.
4 (a) Cmo se puede calcular el cambio de energa libre estndar con el potencial de reduccin?
Consideremos la reduccin de piruvato por NADH:
(a1) Piruvato + NADH+ + H+ <---> lactato + NAD+
El potencial de reduccin del par NAD+:NADH es -0.32 V, mientras que el potencial del par
piruvato:lactato es -0.19 V. Por convencin, los potenciales de reduccin se refieren a las reacciones
parciales escritas como reducciones: oxidante + e- --> reductor. De aqu:
(a2) Piruvato + 2H+ + 2e- ---> lactato

Eo = -0.19 V

(a3) NAD+ + H+ + 2 e- ----> NADH

Eo = -0.32 V

Para obtener la ecuacin global (a1) a partir de (a2) y (a3), necesitamos invertir la direccin de la reaccin
(a3) para que el NADH aparezca en el lado izquierdo de la flecha.
Haciendo esto, el signo de Eo debe tambin cambiarse y nos dar un valor de +0.32 V. Por lo tanto, la
suma algebraica de los potenciales de ambas reacciones colocadas en el sentido correcto es de -0.19+0.32
= +0.13 V. Con esta dato ya podemos calcular el Go para la reduccin del piruvato por NADH, usando la
siguiente frmula.
Go = -nFEo; en donde n es el nmero de electrones transferidos, F es una constante de
proporcionalidad llamada Faraday (23.06 kcal/Vmol), Eo est en volts y Go en kcal/mol.
Nota que Go es la cantidad de energa libre que puede obtenerse por mol de una transformacin,
mientras que Eo es la diferencia en el potencial entre dos estados. De aqu que Eo debe multiplicarse por
nF para determinar el cambio de energa libre. Para la reaccin ya mencionada, n=2, y
Go = -2x23.06x0.13; = -6 kcal/mol.
Un Eo positivo (pero un Go negativo) significa una reaccin exergnica bajo condiciones
estndar.
(b) Cul es el cambio de energa libre que se libera por el transporte de electrones a travs de toda
la cadena respiratoria?
Las reacciones parciales pertinentes son:
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(b1) O2 + 2H+ + 2 e- ----> H2O

Eo = +0.82 V
+
+
(b2) NAD + H + 2 e -----> NADH Eo = -0.32 V
Restando la reaccin (b1) de la reaccin (b2) nos da:
(b3) O2 + NADH + H+ <---> H2O + NAD+ Eo = 1.14 V
Go = -2x23.06x1.14; = -52.6 kcal/mol.

(c) Calcule el potencial de reduccin de la reduccin de piruvato por NADH:

Piruvato + NADH +H+ -----> lactato + NAD+ (Contestada en (a).

5 (a) Cul es el peso molecular, el nmero de subunidades del complejo NADH deshidrogenasa y las
reacciones que cataliza? Ver Tabla arriba y
Las reacciones son: NADH + H+ + FMN FMNH2 +NAD+
A continuacin, los electrones se transfieren a los centros FeS de la protena y estos a su vez a UQ para
dar UQH2.
La reaccin global es: NADH + H+ + UQ NAD+ + UQH2.
El amital (un barbiturato), la rotenona (un producto de las plantas usado comnmente como insecticida),
y el antibitico piercidina A inhiben el flujo de electrones de los centros Fe-S a la UQ
(b) Qu otro nombre recibe el complejo II (la nica enzima unida a membrana del ciclo de Krebs) y a
travs de que grupos prostticos de este complejo, pasan los electrones hasta llegar a la ubiquinona?
Succinato deshidrogenasa y las coenzimas son: FAD y centros hierro azufre. Los electrones pasan
del succinato al FAD, entonces a los centros FeS y a la UQ.
(c) Cmo transfieren sus electrones las enzimas acil CoA deshidrogenasa y glicerol 3 fosfato
deshidrogenasa a la UQ?
Otros sustratos de las deshidrogenasas mitocondriales tambin pasan los electrones a la cadena
respiratoria al nivel de UQ, pero no a travs del complejo II. El primer paso en la -oxidacin de graso acilCoA, catalizado por la flavoprotena acil-CoA deshidrogenasa, involucra la transferencia de electrones del
sustrato al FAD de la deshidrogenasa, entonces a una flavoprotena que transfiere electrones (ETFP), la
cual a su vez los pasa a la oxidorreductasa ETFP-ubiquinona.
Esta reductasa, una protena hierro-azufre tambin contiene un nucletido de flavina unido, pasa los
electrones a la cadena respiratoria reduciendo UQ en la membrana interna mitocondrial. Por otro lado, el
glicerol 3-fosfato puede ser convertido a dihidroxiacetona fosfato por la enzima glicerol-3 fosfato
deshidrogenasa (una flavoprotena localizada en la superficie exterior de la membrana interna mitocondrial)
que, al igual que la succinato deshidrogenasa y la acil-CoA deshidrogenasa canaliza los electrones a la
cadena respiratoria reduciendo a la UQ.
Esta enzima es la involucrada en la transferencia de los equivalentes reductores del citosol (NADH
producido en la gliclisis por la enzima gliceraldehdo fosfato deshidrogenasa) a la mitocondria en el msculo
esqueltico y en cerebro.
6. (a) Cules protenas componen el complejo III de transporte de electrones?
Este complejo se llama tambin complejo citocromo bc1 o ubiquinona citocromo c oxidorreductasa y
contiene los citocromos b562 y b566, citocromo c1, una protena FeS y al menos otras seis subunidades de
protenas.
El complejo III funciona como una bomba de protones; como un resultado de la orientacin asimtrica
del complejo, los protones producidos cuando UQH2 es oxidado a UQ son liberados al espacio
intermembrana, produciendo una diferencia transmembrana de concentracin de protones.
(b) Qu otro nombre recibe el complejo IV y cules son sus componentes?
Citocromo oxidasa y contiene los citocromos a y a3. Estos citocromos consisten de dos grupos hemo
unidos a diferentes regiones de la misma protena y son, por lo tanto, espectral y funcionalmente diferentes.
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La citocromo oxidasa contiene dos iones cobre, CuA y CuB que son cruciales en la transferencia de
electrones al oxgeno.
Este complejo ha evolucionado para realizar la reduccin del oxgeno por cuatro electrones sin
generar intermediarios reducidos incompletamente como perxido de hidrgeno o radicales libres hidroxiloespecies muy reactivas que daaran a los componentes celulares.
El flujo de electrones del citocromo c al O2 a travs del complejo IV causa el movimiento neto de
protones de la matriz al espacio intermembrana y as el complejo IV funciona como una bomba de
protones que contribuye a la fuerza protn motriz.
(c) A que nivel es inhibido el transporte de electrones por rotenona, amital, antimicina A, CN- y CO
(monxido de carbono)?
Rotenona y amital bloquean la transferencia del complejo NADH deshidrogenasa a la UQ;
antimicina A de UQH2 a citocromo c1, y CN-, azida y CO de la citocromo oxidasa al O2.
7 (a) Cul es la estructura de ATP sintetasa y su topologa en la membrana interna mitocondrial?
Esta compuesto de dos componentes principales (o factores), F1 y Fo. El subndice o en Fo denota que
es la porcin del complejo que le confiere sensibilidad a oligomicina, un potente inhibidor del complejo
enzimtico y as de la fosforilacin oxidativa. La porcin F1 tiene forma de esfera o de perilla, sobresalen de
la membrana interna mitocondrial, y estn colocadas de cara hacia el interior de la matriz.
Esta porcin es la que sintetiza ATP cuando est en la membrana interna mitocondrial y expuesta a un
gradiente de protones. Sin embargo en forma soluble, F1 hidroliza el ATP (cataliza la reaccin reversa que
cuando est en la membrana). F1 consiste de 5 clases de cadenas polipeptdicas con la estequiometra
33 y una masa de 378 kd. La fraccin Fo es el canal de protones del complejo y atraviesa la
membrana interna mitocondrial.
Consiste de 4 clases de cadenas polipeptdicas. La cadena de 8 kd, de la cual hay 6 por F1
probablemente forma el poro transmembrana para los protones. El tallo entre Fo y F1 varias protenas. Una
de ellas le da la sensibilidad a la oligomicina, un antibitico que bloquea la sntesis de ATP.
(b) Describa la manera en que la fosforilacin y la oxidacin estn acopladas. Explique la teora
quimiosmtica.
Peter Mitchel propuso en 1961 la hiptesis quimiosmtica que postula que el transporte de electrones y la
sntesis de ATP estn acoplados por un gradiente de protones en la membrana interna mitocondrial en vez
que por intermediarios covalentes de alta energa.
En este modelo, la transferencia de electrones a travs de la cadena respiratoria conduce al bombeo de
protones desde la matriz al otro lado de la membrana mitocondrial. La [H+] llega a ser mayor en el lado
citoslico y se genera concomitantemente un potencial elctrico.
Mitchel postul que esta fuerza protn motriz impulsa la sntesis de ATP por el complejo ATPasa. En
esencia, el evento de conservacin de emerga inducido por el transporte de e- es la generacin de una
fuerza protn motriz a travs de membrana interna mitocondrial. Las evidencias que apoyan este modelo
son:
(b1) El transporte de electrones genera un gradiente de protones a travs de la membrana interna
mitocondrial. El pH afuera es 1.4 unidades menor que adentro, la fuerza protn motriz p (en volts)
consiste de la contribucin del potencial de membrana (Em) y la contribucin del gradiente qumico (pH). En
la siguiente ecuacin, R es la constante de los gases, T es la temperatura absoluta y F es el cambio de
energa libre cuando 1 mol de electrones pasa a travs de un potencial elctrico de 1 volt.
p = Em - (2.3 RT/F) pH = Em -0.06 pH
= 0.14 - 0.06(-1.4) = 0.224 V.
Esta fuerza protn motriz total de 0.224 V corresponde a una energa libre de 5.2 kcal/mol de protones.
(b2) El ATP es sintetizado cuando un gradiente de pH se impone sobre la mitocondria o
cloroplasto en ausencia de un transporte de electrones.
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(b3) La bacteriorodopsina, una protena de membrana prpura de halobacterias, bombea protones

cuando se ilumina. Las vesculas sintticas que contienen esta protena bacteriana y una ATPasa purificada
de mitocondria cardiaca de res sintetizan ATP cuando se iluminan. En este experimento, la
bacteriorodopsina reemplaza la cadena respiratoria, lo cual demuestra que la cadena respiratoria y la
sintetasa de ATP son sistemas bioqumicos independientes unidos solo por la fuerza protn-motriz.
(b4) Los complejos de transporte de e- I, II y IV bombean protones desde la matriz. Su regreso a la
matriz impulsa la sntesis de ATP por la ATP sintetasa.
(b5) Un compartimiento cerrado es esencial para la fosforilacin oxidativa. La sntesis de ATP
acoplado a la transferencia de electrones no ocurre en preparaciones solubles o en fragmentos de
membrana que carecen de estos compartimientos exteriores e interiores bien definidos.
(b6). Las sustancias que acarrean protones a travs de mic disipan el gradiente de protones y por lo
tanto desacoplan la oxidacin y la fosforilacin.
(c) Con qu experimentos puede demostrarse que la oxidacin y la fosforilacin son procesos
acoplados?
Puede usar mitocondrias aisladas y los siguientes reactivos: ADP, Pi, succinato, CN-, venturicidina,
oligomicina y dinitrofenol. Las mitocondrias aisladas se suspenden en un medio con amortiguador y un
electrodo de O2 se usa para medir el consumo de este gas.
A diferentes intervalos, las muestran se remueven y se ensaya para medir la presencia de ATP. La
adicin de ADP y Pi solos resultan en poco o ningn incremento en el consumo de O2 o la sntesis de ATP.
Cuando se adiciona el succinato, la respiracin y la sntesis del ATP inician. La adicin de CN-, inhibe
ambos procesos. Por otro lado, la adicin de oligomicina o venturicidina (inhibidores de la sintetasa de ATP)
mitocondrias con succinato, ADP y Pi que estn respirando y sintetizando ATP, bloquea la respiracin y la
fosforilacin.
La adicin subsecuente de DNP (el cual introduce protones a la matriz) restaura la respiracin, pero no la
fosforilacin, la cual permanece inhibida. De esta manera el 2,4 dinitrofenol acta como desacoplante de
estos dos proceso.

(d) Qu es un ionforo? D un ejemplo. Carbonil cianuro fenilhidrazona y (ver respuesta anterior).

8. (a) Cmo ingresa el ADP y el fosfato a la matriz mitocondrial y como sale el ATP de sta? Cmo afecta
el atractilsido este proceso?.
La mic es generalmente impermeable a especies cargadas, pero dos sistemas especficos en la mic
transportan ADP y Pi a la matriz y ATP al citosol. La translocasa de nucletidos de adenina, la cual
atraviesa la mic, une ADP3- en la superficie exterior (citoslica) de la mic. y lo transporta al interior en
intercambio con ATP4- que es transportado hacia afuera.
Debido a que este antiporter mueve 4 cargas negativas hacia afuera por cada tres cargas negativas
que se mueven hacia el interior, su actividad es favorecida por el gradiente electroqumico transmembrana,
el cual le da a la matriz una carga neta negativa.
Este antiporter es inhibido especficamente por atractilsido, un glicsido txico formado por un
cardo especfico y que desde hace siglos se ha sabido que el ganado que pasta y que como esta planta se
envenena. El segundo sistema de transporte de membrana esencial para la fosforilacin oxidativa, es la
translocasa de fosfato, que promueve el simporte de un H2PO4- y un H+ hacia la matriz. Este transporte
tambin es favorecido por el gradiente de protones transmembrana.
(b) Cmo ingresa a la mitocondria NADH que se produce en el citosol?
Describa la va de glicerol fosfato deshidrogenasa y la va de malato aspartato. La primera va se
describi en la pregunta 2c y provee solo de energa para sintetizar 2 ATP por par de electrones.

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Las mitocondrias de las plantas superiores tienen una NADH deshidrogenasas orientada
externamente que es capaz de transferir electrones directamente del NADH citoslico a la cadena
respiratoria. La va malato-aspartato ocurre en dos fases de tres reacciones cada una.
Fase A (transporte de e- a la matriz).
A1. El NADH es reoxidado por el OA citoslico y con la enzima citoslica malato deshidrogenasa.
A2. El acarreador malato--cetoglutarato transporta a la matriz el malato formado en la reaccin
anterior, en intercambio con -cetoglutarato.
A3 En la matriz, el malato es reoxidado a OA por la enzima mitocondrial malato deshidrogenasa, y
as reduciendo el NAD+ a NADH.
Fase B (regeneracin del OA citoslico).
B4. Una trasaminasa convierte el OA mitocondrial en Asp con la concomitante conversin de Glu a cetoglutarato.
B5. Asp es transportado de la matriz al citosol por el acarreador Asp-Glu en intercambio con Glu
citoslico.
B6. El Asp citoslico es convertido a OA por una transaminasa con la conversin de -cetoglutarato a
Glu.
Por lo tanto, los electrones del NADH citoslico son transferidos al NADH mitocondrial que es sujeto
de la reoxidacin por la cadena de transporte de e-. Este sistema produce 3 ATP por cada NADH citoslico,
uno mas que el del sistema de glicerol 3 fosfato. Este sistema es activo en mitocondrias de hgado, rin,
y corazn, mientras que el de glicerol-3-fosfato es activo en msculo y cerebro.
(c) Cuntas molculas de ATP se sintetizan cuando se oxida completamente una molcula de glucosa?
36 o 38 dependiendo del acarreador que se use para oxidar el NADH extramitocondrial.
9. Problemas 1,3 y 4, Cap. 17.

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