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UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA QUMICA
CARTAGENADE INDIAS, D. T. y C.
2013
Directora
Adriana Patricia Herrera Barros, Ph.D.
UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA QUMICA
CARTAGENA DE INDIAS, D. T. y C.
2013
Nota de aceptacin:
______________________________
______________________________
______________________________
______________________________
______________________________
______________________________
Firma del Director del Programa
______________________________
Firma del Evaluador
______________________________
Firma del Evaluador
AGRADECIMIENTOS
Le agradecemos a Dios por darnos fuerza para superar todos los obstculos, que
se nos presentaron en la realizacin de ste trabajo.
CONTENIDO
pg.
RESUMEN ....................................................................................................................... 6
ABSTRACT ...................................................................................................................... 7
INTRODUCCIN ............................................................................................................ 8
1.
OBJETIVOS ........................................................................................................ 11
2.1. ANTECEDENTES.................................................................................................. 12
2.2. ESTADO DEL ARTE ............................................................................................. 13
2.3. MARCO TERICO ................................................................................................ 17
2.3.1. Nanotecnologa................................................................................................... 17
2.3.1.1. Nanopartculas de plata .................................................................................. 18
2.3.1.2. Mtodos de sntesis de Nanopartculas ........................................................ 18
2.3.2. Mtodos de modificacin de Nanomateriales .................................................. 20
2.3.3. Qumica verde..................................................................................................... 21
2.3.3.1. Solventes naturales......................................................................................... 21
2.3.3.2. Extracto de Cilantro......................................................................................... 22
2.3.4. Pulpa de papel .................................................................................................... 23
2.3.5. Microorganismos patgenos ............................................................................. 24
2.3.5.1. Escherichia coli................................................................................................ 24
3.
METODOLOGA ................................................................................................. 27
4.1.
4.2.
4.3.
4.4.
5.
CONCLUSIONES ............................................................................................... 53
6.
RECOMENDACIONES ...................................................................................... 54
LISTA DE TABLAS
pg.
Tabla 8. Anlisis de varianza de dos factores con varias muestras por grupo.................. 51
LISTA DE FIGURAS
pg.
a) 100 m
y b) 10m ........................................................................................................................ 44
LISTA DE ANEXOS
pg.
RESUMEN
En esta
ABSTRACT
The physical-chemical
properties
determined
of
the
synthesized
nanoparticles
were
by
using
INTRODUCCIN
poseen
propiedades
distintas
sus
caractersticas
volumtricas,
la
contaminacin
medioambiental,
los
microorganismos
medicamentos
otros
compuestos
con
nanopartculas,
polimricas
antimicrobianas
para
[4,10,11],
empaquetado
de
alimentos
con
sintetizando
nanopartculas
de
propiedades
plata
con
10
1. OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL
Sintetizar nanopartculas de plata utilizando la metodologa de qumica verde y
modificarlas con pulpa de papel para estudiar la actividad antimicrobiana contra la
Escherichia coli.
1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
11
2. MARCO DE REFERENCIA
2.1. ANTECEDENTES
Feng et l., reportaron estudios de la inhibicin de iones de plata contra dos cepas
de bacterias, Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Para esto, las cepas de
ambas bacterias se inocularon en el medio Luria Bertoni (LB) y se incubaron a
37C en agitador rotatorio (200 rpm) durante 16 h. En ste estudio se concluy
que los iones de plata penetran por la pared celular en donde se da la reaccin de
ADN con las protenas de tiol, ocasionando que no se diera el proceso de
replicacin y /o la muerte celular [8].
Tambin, Kazachenko et l., investigaron la sntesis y la actividad antimicrobiana
de los complejos de plata con los aminocidos histidina y triptfano. Al mezclarlos
con el nitrato de plata se form un precipitado blanco, posteriormente ste se
centrifug, sec y utiliz para la evaluacin de la actividad antimicrobiana.
Adems, usaron el mtodo de doble dilucin en serie, mostrando una gran
actividad antimicrobiana frente a bacterias Gram-negativas [13].En estudios
adicionales, Spacciapoli et l., en el 2001, demostraron el uso de nitrato de plata
para el tratamiento de patgenos periodontales, encontrando que el nitrato de
plata es ms eficaz que los antibiticos, para el tratamiento de la cavidad oral de
las infecciones periodontales [14].
Matsumura et l., estudiaron la actividad de la zeolita de plata frente a E. coli y se
compar su actividad antibacteriana con nitrato de plata, utilizando para su estudio
la E. coli cepa OW6, cepa CSH7 y UM1. Estas clulas bacterianas se recogieron
por centrifugacin y se re-suspendieron en zeolita de plata o nitrato de plata con
una densidad entre 10 a 100 mg/l, observndose una buena actividad
antimicrobiana frente a las cepas [15].
12
mayor actividad
se
conoce
como
nanotecnologa
nanociencia.
Actualmente,
los
13
En
el
uso de
14
15
posible
la
sntesis
mediante
polimerizacin
en
miniemulsin
de
16
17
Estudios
18
Ec (1.)
19
a razn de 2 C/min y
ejemplo
nanopartculas
de
nanomateriales modificados es la
de
magnetita
con
poli
(etilenglicol)
funcionalizacin
de
(PEG-COOH)
20
21
22
23
pues
24
25
Los pacientes afectados por estos grmenes son habitualmente nios menores de
dos aos, y dado que la dosis infectante estimada para esta edad es reducida
(aunque no conocida con precisin) se transmite habitualmente por va fecal-oral,
a travs de manos contaminadas, alimentos, etc., a partir de enfermos, infectados
inaparentes o convalecientes que pueden excretar grmenes por hasta 2
semanas. Estas bacterias son sin embargo capaces de afectar, con menos
frecuencia, a nios mayores o adultos, y de provocar brotes de gastroenteritis con
diarrea lquida no inflamatoria, por consumo en comn de alimentos con altos
inculos de microorganismos (108 a 1010) [57].
26
3. METODOLOGA
27
durante la
reaccin.
Como
variables dependientes se
28
ETAPA 1 (Sntesis)
VARIABLE
DEFINICIN
INDICADOR
Independiente
Concentracin
mM
Tamao
nm
nm
Dependiente
Interviniente
Longitud de
Onda
Tiempo de
reaccin
Temperatura
Volumen
Extracto
Concentracin
Etapa 2 (efecto
antimicrobiano)
Independiente
Dependiente
Tiempo de
contacto
Tamao Halo
Inhibicin
Concentracin
E. Coli
min
C
mL
h
mm
mL/g
mm
29
NIVELES
SIMBOLOGA
(signos algebraicos)
24 h
48 h
0.01
0.05
Cantidad de nanopartculas de
plata dispersadas en la pulpa de
papel.
ETIQUETAS
(1)
ab
30
Modelo/Marca
STM/VWR
pH-metro
Thomson
Centrifuga
PLC-012E
Horno
MicroProc
Ultraturrax
Incubadora
EscoCelCulture
Esterilizadora
SA 300H
UV-Vis
Spectro UV 2650
FTIR
Varian 800
ZetaSizer
Nano series / NanoZs90. Malvern
Estereoscopio
ST5
Fuente: Elaborada en la presente investigacin
DLS
31
Uso
Preparacin de extracto de cilantro y
sntesis de nanopartculas.
Suspensin de nanopartculas en
agua destilada a pH10.
Lavado de nanopartculas.
Secado
de
nanopartculas
y
preparacin de discos de papel
modificados con nanopartculas.
Preparacin de suspensiones de
nanopartculas y discos de papel
modificados con nanopartculas.
Crecimiento y mantenimiento del
cultivo de bacterias.
Esterilizacin de los instrumentos
usados para cultivar la bacteria.
Verificar
la
sntesis
de
las
nanopartculas de plata a travs de la
longitud de onda caracterstica de
estos nanomateriales.
Detectar las especies qumicas
presentes en el extracto.
Determinar el tamao
nanopartculas de plata.
de
las
3.6. PROCEDIMIENTO
3.6.1. Sntesis de nanopartculas de plata empleando la metodologa de
qumica verde
32
destilada.
b) Sntesis de nanopartculas de plata
La sntesis de nanopartculas de plata se realiz a partir de la reduccin de una sal
precursora, nitrato de plata (AgNO3), utilizando como agente reductor un extracto
de hojas de cilantro, evitando utilizar solventes que originen
productos
procedi
inicialmente
temperatura
ambiente
Esta
durante
33
34
35
36
4. ANLISIS DE RESULTADOS
4.1.
37
4.2.
resultados
obtenidos
del
FTIR
mostraron
los
grupos
funcionales
correspondientes a los principales componentes del cilantro, tales como los cidos
38
Grupo Funcional
CH3-CH2
2850-2960
-CH=CH-
3020-3100
>C=O
1640-1680
COOH
CH-CH2
2850-2960
-CH2OH
3400-3650, 1050-1150
OHC=COH
1670-1780
-O-
2500-3100
cido ascrbico
2850-2960
Fuente: Propia de los autores de esta investigacin
39
Figura 3. FTIR del extracto de cilantro preparado como agente reductor de la sal
de nitrato de plata en la sntesis de las nanopartculas.
4500
3500
2500
1500
500
40
Absorbancia
350
400
450
500
41
0,43
0,38
0,33
0,28
0,23
0,18
0,13
300
350
400
450
500
AgNP-10
AgNP-100
Ec. (2)
0.5
( 2 )
Ec. (3)
42
(nm)
Dh (nm)
AgNP-1
415
75 30
AgNP-10
430
66 18
AgNP-100
428
80 28
43
a)
b)
10 m
100 m
Fuente: Propia de los autores de esta investigacin
4.3.
intentar
destruir
las
estructuras
cristalinas
(usualmente
por
a)
b)
4.4.
45
con los discos modificados de nanopartculas de plata con pulpa de papel como se
indic en la seccin 3.6.4. Para ste anlisis, se colocaron en las cajas petri cinco
(5) discos de pulpa de papel modificados con las diferentes concentraciones de
nanopartculas de plata, con previa siembra de la bacteria E. coli y realizando dos
replicas para las concentraciones utilizadas. Tambin, se usaron como blancos de
referencia discos de pulpa de papel sin modificar con nanopartculas, con el
propsito de comparar el efecto antimicrobiano de las nanopartculas. Todas las
cajas petri, inoculadas y con sus respectivos discos, se colocaron en la incubadora
a 37C para la posterior verificacin de los halos de inhibicin sobre el crecimiento
de la bacteria E. Coli, en un tiempo de 24 y 48 horas.
Despus, se retiraron las cajas de la incubadora verificando el crecimiento de la E.
coli y se identificaron las zonas sin crecimiento bacteriano. Las zonas de inhibicin
se midieron usando una regla desde la parte posterior de la caja usando luz
reflejada, sosteniendo la caja sobre una superficie de color negro que no refleje la
luz, como se describe en el procedimiento de Bauer- Kirby para difusin por disco
(ANEXO A). La Figura 8, muestra fotos caractersticas tomadas para el
crecimiento de la bacteria E. Coli luego de 24 h de contacto con los discos
modificados con la pulpa de papel a concentraciones de 0.01 mg-AgNP/mg-pp
(Figura 8a), 0.05 mg-AgNP/mg-pp (Figura 8b) y blanco de discos no modificados
(Figura 8c). A partir de estas imgenes se observ que los halos de inhibicin
cambian muy poco su tamao despus de 24 horas de contacto, con valores en el
rango de 1.0 y 1.5 milmetros. La Tabla 7, muestra un resumen de estas
mediciones.
46
clulas. Al observar las Figuras 8(c) y 9(c) que representan los blancos de
referencias ledos a tiempos de contacto de 24 y 48 h, respectivamente, se
observ que los discos de pulpa de papel sin modificacin de nanopartculas de
plata y expuestos a la bacteria E. coli no ofrecieron ninguna barrera que impidiera
el crecimiento de la bacteria a su alrededor, evidencindose as el poder
antimicrobial exhibido por las nanopartculas de plata.
Luego de 48 h de contacto, se llevaron las muestras a un Estereoscopio, para
determinar con mayor precisin el tamao del halo de inhibicin. La Figura 10,
muestra las fotos tomadas con ste microscopio y la comparacin con el blanco de
referencia.
47
48
49
a
)
c
)
b
)
Factor
Promedio (mm)
Desviacin
Correlacin
M1
M2
2.0
1.6
1.2
1.60
0.326
1.3
1.0
1.1
1.13
0.125
1.5
1.3
1.0
1.26
0.205
1.0
1.0
0.9
0.96
0.048
50
Estndar
Tabla 8. Anlisis de varianza de dos factores con varias muestras por grupo
Datos Mustrales
Factor b1
Factor b1
Factor b1
Factor b2
Factor b2
Factor b2
Factor a 1
1.0
1.0
0.9
1.5
1.3
1.0
RESUMEN
Factor a 2
1.3
1.0
1.1
2.0
1.6
1.2
factor a 1
factor a 2
Total
b1
Cuenta
Suma
Promedio
Varianza
2.9
0.96
0.0033
3.4
1.13
0.023
6.3
1.05
0.019
3
3.8
0.96
0.063
3
4.8
1.6
0.16
6
8.6
1.43
0.122
6
6.7
1.11
0.053
6
8.2
1.36
0.138
b2
Cuenta
Suma
Promedio
Varianza
Total
Cuenta
Suma
Promedio
Varianza
51
Suma de
cuadrados
Renglones
0.440
Promedio
de los
cuadrados
0.440
7.053
0.0289
Valor
crtico para
F
5.317
Columnas
0.187
0.187
0.1215
5.317
Interaccin
0.020
0.020
0.333
0.579
5.317
0.5
0.0625
1.149
11
Dentro del
grupo
Total
Grados de
libertad
Probabi
lidad
RESULTADO
Efecto de
interaccin
0.333
0.579
No
significativo
Efecto rengln
7.053
0.028
significativo
Efecto columna
3.0
0.121
No
significativo
Potencia de
contraste
DESCRIPCIN
0.05
Del anlisis de varianza ANOVA llevado a cabo se concluy que las diferentes
concentraciones parecen tener efecto significativo en los dimetros medios de los
halos de inhibicin y por el contrario, no existe un cambio significativo de tamao
despus de tiempos de contacto de 24 y 48 horas.
52
5. CONCLUSIONES
Utilizando como recurso natural el extracto de la planta de cilantro, se desarroll la
sntesis de nanopartculas de plata aplicando un mtodo amigable para el medio
ambiente, comparado con los mtodos qumicos, que originan subproductos no
deseados. Por tal motivo, este mtodo resulta econmico y menos perjudicial para
el medio ambiente, y con resultados acertados para la sntesis de nanopartculas.
La sntesis de las nanopartculas de plata, se comprob con las tcnicas de
caracterizacin (UV-vis, FTIR, DLS). Estas pruebas demostraron la existencia de
las nanopartculas en las sntesis obtenidas con picos apreciables en un rango de
400 a 450 nm, estimados por estudios anteriores. La espectroscopia por Infrarrojo
por Transformada de Fourier (FTIR) mostr la viabilidad que tiene el extracto de
cilantro como agente reductor para sintetizar nanopartculas de plata debido a los
componentes que se encuentran en esta planta. Observndose un tamao
hidrodinmico promedio de 8020 nm para las nanopartculas sintetizadas. Por lo
tanto que la variacin de la concentracin del precursor AgNO3 no tuvo un efecto
significativo en las propiedades fsico/qumicas de las nanopartculas sintetizadas.
Tambin, se logr la dispersin de las nanopartculas de plata en la pulpa de papel
debido a la capacidad de enlace de la pulpa con otras fibras adyacentes cuando
se encuentra en presencia de grupos hidroxilos, demostrando la posibilidad de
obtener un material de empaque activo modificado con nanopartculas de plata,
que exhiban propiedades antibacterianas y antifngicas.
La medicin de la actividad antimicrobial de las nanopartculas de plata
modificadas con pulpa de papel se evidenci con los halos de inhibicin que
present la bacteria Escherichia coli, por lo tanto inhibi el crecimiento de este
microorganismo
comprobando
que
la
concentracin
tamao
de
las
53
6. RECOMENDACIONES
Realizar las sntesis de las nanopartculas de plata con el tallo del cilantro,
comparar los resultados con la sntesis obtenida en esta investigacin, con
el fin de utilizar toda la planta de cilantro.
54
REFERENCIAS
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