Prueba cruzada mayor

Se llevar a cabo una vez que tengamos seleccionada una bolsa compatible con el
grupo sanguneo del receptor para determinar si son compatibles el resto de los antgenos
de la sangre donada con los anticuerpos del receptor.
La prueba cruzada mayor es un test indirecto de la antiglobulina y puede realizarse del
siguiente modo:
1. Se toma una muestra de la sangre donada que queramos analizar y se prepara una
suspensin de hemates al 2-5%, que se lavan para eliminar las protenas plasmticas y
el anticoagulante.
2. En un tubo de hemlisis aadimos 2 gotas de la suspensin de los hemates del
donante y 2 del suero del receptor. Antes de pasar a la siguiente fase se puede centrifugar
la mezcla y leer.
3. Mezclar bien e incubar a 37 C durante 30-60 minutos; si existen anticuerpos que
reaccionen contra algunos de los antgenos presentes en los hemates del donante stos
se fijarn, quedando sensibilizados. Podemos acortar esta fase aadiendo a la mezcla 2
gotas de albmina al 22-30%. Y, como en la fase anterior, podemos centrifugar la mezcla
y leer.
4. Lavar la mezcla con solucin salina 3 o 4 veces. Como siempre que se lavan los
hemates, al final del ltimo centrifugado se decanta todo lo posible el sobrenadante para
obtener un botn seco de hemates. De este modo slo quedan en el tubo los anlisis los
hemates, recubiertos o no por los anticuerpos, y se eliminan los anticuerpos que an
permanezcan libres.
5. Aadir dos gotas del reactivo (antiglobulina humana). Si los lavados anteriores no
fueron efectivos y han quedado IgG libres la antiglobulina humana puede consumirse
unindose a ellas, y no a las IgG unidas a los hemates, dando un resultado negativo
falso.
6. Mezclar bien para suspender los hemates y centrifugar a 3.400 rpm durante 20-30
segundos o 1.000 rpm durante 1 minuto.
7. Golpear suavemente el fondo del tubo para desalojar el sedimento celular y agitarlo
suavemente para resuspender los hemates. Examinar microscpicamente la presencia o
ausencia de aglutinacin.
La lectura permite dos posibilidades:
Reaccin negativa: la suspensin de hemates es homognea, ya que stos no
han sido aglutinados por la antiglobulina humana. Lo interpretamos como que el
suero del receptor no presenta anticuerpos contra los antgenos del donante y las
muestras son compatibles.
Reaccin positiva: la antiglobulina humana ha aglutinado los hemates del
donante. Lo interpretamos como que el suero del receptor presenta anticuerpos
contra determinados antgenos eritrocitarios del donante y las muestras son
incompatibles. No podemos transfundir esta sangre donada a este receptor.

La prueba cruzada abreviada puede hacerse de este modo:

1. Se prepara una suspensin de hemates del donante al 2- 5%, lavados.
2. En un tubo se aaden 2 gotas del suero del receptor y dos de la suspensin de
hemates y se mezclan bien.
3. Se centrifuga la mezcla y observamos si hay o no aglutinacin o hemlisis.