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Ionizacin por desorcin asistida por lser (MALDI)

MALDI es una tcnica de ionizacin especialmente til para compuestos de alto peso
molecular. El uso de esta tcnica est ampliamente generalizado en bioqumica para el
anlisis de protenas, pptidos, glicoprotenas, oligosacridos y oligonucletidos.
MALDI se basa en el bombardeo de molculas con un lser para producir la ionizacin.
Esta tcnica requiere que la muestra sea previamente mezclada con una matriz
altamente absorbente. La matriz absorbe la energa del lser y la transforma en energa
de excitacin para la muestra, lo cual lleva al chisporroteo del analito y la matriz.
El mecanismo de ionizacin MALDI no est totalmente clarificado en el mbito terico. No
obstante, se cree que el proceso se desarrolla como se indica en la figura y siguiendo las
siguientes etapas:
1) Mezcla de la muestra con una matriz slida. Las molculas de analito se
distribuyen en una matriz slida, de manera que todas las molculas estn totalmente
aisladas unas de otras. Es necesario que la mezcla de matriz y muestra sea homognea.
2) Excitacin de la matriz. Parte de la energa del lser incidente es absorbida por la
matriz, lo que se traduce en un rpido calentamiento y evaporacin de la misma. La
materia evaporada forma unos agregados que constan de una molcula de analito
rodeada de molculas de matriz.
3) Ionizacin del analito. Las molculas de analito evaporadas reaccionan con las de
matriz captando cationes (generalmente protones) y dando lugar a iones [A+X] +, donde A
es el analito y X es H, Li, Na, K, etc. Los iones negativos se forman por reacciones que
implican la desprotonacin del analito y protonacin de la matriz, con formacin de los
iones [A-II]-, o bien la interaccin del analito con electrones de la matriz excitados por el
lser. Esta ltima modalidad de excitacin da lugar a la formacin de radicales [A] - de
analito.

Muestra
en matriz

Pulso del
lser
Analizad
or de
masas
Detector

Espectro de
masas MALDI

Vaco de
gran
intensidad
30.000 V

FIGURA. Esquema de funcionamiento de la ionizacin por desorcin asistida por lser


(MALDI).
La ionizacin de pptidos y protenas generalmente produce iones positivos, mientras
que oligonucletidos y oligosacridos tienden a generar iones negativos.
Una desventaja de este sistema es el corto tiempo de vida media de los iones formados.
Eso hace que los sistemas de ionizacin MALDI solo sean compatibles con analizadores de
tiempo de vuelo (TOF).

La energa del lser debe regularse apropiadamente para evitar que la muestra se descomponga debido a la ruptura de los enlaces qumicos menos energticos de las
molculas de analito. En caso de no conocerse la energa apropiada para la muestra a
analizar, se suele empezar aplicando una potencia de aproximadamente 10 6 W/cm2. La
Tabla muestra algunas de las matrices ms comnmente utilizadas, junta a sus
aplicaciones y a la longitud de onda de la luz lser.

TABLA. Matrices ms utilizadas en MALDI


Matriz

Longitud de
onda del
lser (nm)

Analito

2 amino 4 metil 5
nitropiridina

Protenas, Oligonucletidos

355

2 amino 5 nitropiridina

Oligonucletidos

355

6 azo 2 tiotiamina

Protenas

cido 2,5 dihidrobenzoico

Protenas,
oligonucletidos

cido cafeico

Protenas, Oligonucletidos

337

cido ferlico

Protenas, Oligonucletidos

337, 335, 488

cido 2 (4 hidroxifenilazo)

Protenas,
industriales

cido 3 hidroxipicolnico

Oligonucletidos, glicoprotenas

cido nicotnico

Protenas,
oligonucletidos

3 nitrobencil alcohol

Protenas

cido sinapnico

Protenas, polmeros industriales

cido a ciano 4 hidroxi


cinmico

Protenas, oligosacridos

266, 337
oligosacridos,

Ganglisidos,

polmeros

glicoprotenas,

337, 355

266, 377
266, 308, 355
266
266
377, 355
337