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DETERMINACION DE HIERRO EN MUESTRA DE ESPINACA POR EL MÉTODO

ESPECTOFOTOMÉTRICO
I.
II.

OBJETIVOS
Determinación de hierro en muestra de espinaca por el método espectrofotométrico
FUNDAMENTO TEORICO

La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+, originando un complejo de color rojo característico
(ferroína) que absorbe notablemente en las regiones del espectro visible de alrededor de 505
nm. El Fe3+ no presenta absorción a esa longitud de onda y debe ser reducido a Fe 2+ mediante
un agente reductor apropiado, como la hidroxilamina, (en forma de clorato para incrementar su
solubilidad). (Boumans, 1997) La reducción cuantitativa de Fe 3+ a Fe2+ ocurre en pocos minutos
en un medio ácido (pH 3-4) de acuerdo a la siguiente ecuación: Después de la reducción del Fe
3+
a Fe 2+, se da la formación de un complejo con la adición de ortofenantrolina. En un medio
acido la ortofenantrolina se encuentra en su forma protonada como ion 1,10- fenantrolin
(FenH+). La reacción de complicación puede ser descrita por la siguiente ecuación: (La
estructura química del complejo se muestra en la figura 2) Fig. 2. Estructura química de la
ferroína. Consiste en 3 moléculas de OP (ortofenantrolina) alrededor de un átomo central de
Fe. Los átomos de carbono de la ferroína
III.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales
- 5 fiolas de 150ml
- 2 fiolas de 200ml
- Probeta
- Pipetas
- Vaguetas
Reactivos
- Un ramo de espinaca
- Ácido ascórbico
- Orto-fenantrolina
- Equipos
- Campana de extracción
- Espectrofotómetro visible
-

-

Bombilla de succión
Crisol
Embudos
Papel filtro
Vasos de precipitados de 50ml

-

Buffer
Agua destilada
Ácido clorhídrico

-

Balanza analítica
Mufla

. . Una vez fría. vemos que a los pocos minutos las muestras empiezan a humear. A esta solución la llamaremos “La muestra patrón”. B) PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN - Marcamos 6 fiolas y agregamos diferentes soluciones como se indica en la Tabla 1. Para cálculos diluimos esta solución a la concentración de 10 ppm. .fenantrolina forma un complejo coloreado con el hierro. Pesamos dos muestras de aproximadamente 2 gramos cada una. Se continuó con la incineración hasta que las muestras deje de humear. .Finalizada la incineración procedemos a filtrar en fiolas de 100 ml. con ayuda de una vagueta guiamos al líquido para evitar que el papel filtro se rompa. Aquí se calcinó la muestra hasta obtener cenizas (tiempo aproximado: 3 horas) y luego se dejó enfriar. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL A) PREPARACIÓN DE LA MUESTRA - Primera parte: Picamos finamente la espinaca. - Segunda parte: - Con una probeta medimos 5ml de HCl y con cuidado la añadimos a la muestra desecada. De la solución de concentración 10 ppm. para ello empleamos papel filtro Whatman. que son tóxicos.Volvemos a agregar HCl a la muestra. Procedemos a incinerar las 2 muestras haciendo uso de una campana extractora de gases. Pasamos las muestras picadas y pesadas a crisoles. esta vez 2ml. pasamos la muestra al desecador (Equipo que contiene una sustancia desecante que absorbe la humedad). hasta que deje de humear. Empleamos la campana extractora debido a que los gases que se emiten en la incineración son vapores de la descomposición del ataque con HCl. lo doblamos en media luna y luego en ¼.Quemamos la muestra acidificada en la cocina eléctrica ubicada en el interior de la campana extractora de gases hasta que deje de humear. Agregamos 1 ml. ya sea hierro del patrón o de la espinaca. 2 ml. con un poco de agua destilada lo adherimos a las paredes de un embudo de vidrio. En la mufla se puede llegar hasta una temperatura 600 °C. y repetimos la incineración para finalizar el ataque. Seguidamente agregamos en las fiolas solución buffer de pH=3 (Fe) y solución de ácido ascórbico. La cocina eléctrica se encuentra al interior de la campana.Finalmente obtenemos una muestra de hierro obtenido por medio de la espinaca. tinicial  5 : 52 pm t final  6 : 04 pm - Retiramos los crisoles con ayuda de pinzas y las pasamos a una mufla (Determinador de cenizas). Observamos que la orto . 3ml y 4 ml en diferentes fiolas. - Muestras .Tabla 1.Concluído el filtrado enrasamos las fiolas con agua destilada y con un marcador nombramos cada una. también utilizaremos una fiola a la cual denominaremos “Blanco” debido a que a esta fiola no se agregara la muestra patrón. Blanco I II III IV - muestra problema .IV. esto ioniza a los metales. . en una concentración de 2 ppm.

5% (ml) H2O - - - 2 2 2 2 4 2 - 2 2 - 6ml - 2 - 2 1 0 - - 1 3 2 2 - 2 0. ESQUEMA DEL EXPERIMENTO - DETERMINACIÓN DE HIERRO EN MUESTRA DE ESPINACA POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VISIBLE - Preparación de la curva de calibración Preparación de la muestra Primera Segunda - Picado - Primer quemado de la - Pesad Quemado de la muestra - Primer ataque con HCl Enfriamiento Desecado v Preparación del patrón 2ppm (sulfato ferroso amoniacal) Dilución del patrón a 10ppm Humeo de Preparamos 6 fiolas que - Calcinació Utilizamos la muestra de la espinaca obtenida Segundo quemado de la Segundo ataque con Filtrad de la HCl Solución de ortofenatrolina Soluciónbuffer de ácido Solución ascórbico . Seguidamente procedemos a hacer la lectura de muestra. 0. 0. 1 1 1 1 1 Agua hasta enrasar la fiola X 0.2 3 4 C) ANALISIS DE MUESTRA - Pasamos una parte las muestras a un vaso pequeño de precipitado cada una.- solución patrón 10ppm (ml) - solución buffer pH 3 (ml) - 0 2 - Concentración de hierro en mg - - 1 - Solución de ácido ascórbico al 10% (ml) solución de ortofenantrolina al 0. V.

- Muestra patrón - - DETERMINACIÓN DE HIERRO EN MUESTRA DE ESPINACA POR EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VISIBLE - Preparación de la muestra - Primera parte - - Calculamos la absorbancia mediante el espectrofotométrico UV.VISIBLE .

- - - Segunda parte .

- - - .

- - - .

- - - - Preparación de la curva de calibración .

- - - .

- - - .

- - - .

00 0.0.09 0.1118 - Concentración (mg/ml) - 0.0.05 0.0.17 0.- VI.I .99 0.1859 .02 0.01 0 0.0.11 0.07 0.04 .1230 .0.0.03 0.03 0.01 R² = 0.III .0.04 f(x) = 0.04 0.15 0.II .1519 .X .02 0.Por interpolación de los datos obtenidos obtendremos la concentración de la muestra problema 0.21 Absorbancia - .19 0.01 0.0274 .13 0. CÁLCULOS Y RESULTADOS - Fiola Blanco .03 Concentración. mg/mL 0.29x .02 0.IV Muestra Problema - - Absorbanc ia .05 0.01 0.0829 .

se calibre con un blanco.8762mgFe /100 g   31. Por lo general.01789. aunque un pH ácido (2.1118 la concentración de hierro en mg/ml es 0.4) .En la determinación de hierro. 01789mgFe 100 g  2. Vteórico  Vexp Vteórico  6.0150679 0.1ml  2 g de muestra     100ml  Cálculo del porcentaje de error: - Vteórico  2. 29% ANÁLISIS DE RESULTADOS . VIII. . lo mejor es realizar las mediciones a una longitud de onda que corresponda al máximo del espectro de absorción para lograr sensibilidad máxima.3. .- - a: b: R2: Interpolación - -0. su intensidad es independiente del pH entre 3 y 9.Entonces la cantidad de hierro contenido en la espinaca es 2. ml   100ml  0.El método se basa en la reacción del Fe (II) con o-fenantrolina para dar un complejo intensamente coloreado.1118 0.El mal manejo de un equipo puede conllevar a resultados poco precisos y exactos.88mgFe/100g. lo cual se debe a errores cometidos durante la práctica CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES: . este valor difiere del teórico con un porcentaje de error del 7%.En Cualquier determinación espectrofotométrica es de importancia especial la elección de la longitud de onda.9960591 X: Y: - - 0.0178885 - - Cálculo de mg de hierro en la muestra: mgFe /100 g   g de muestra    - mgFe /100 g  - mgFe 100 g  alícuota de la muestra.70mgFe / 100 g %e  VII. El Fe (III) se reduce a Fe (II) con hidroquinona y luego se forma el complejo con la o-fenantrolina : . La solución coloreada obedece a la ley de Beer.Se obtuvo que para una absorbancia de 0. y si es necesario que este proceso se haga más de dos veces debe realizarse para mayor confiabilidad. . el complejo rojo-naranja que se forma es un quelato de tres moléculas de fenantrolina por átomo de Fe (ferroína). por ello es necesario que antes de usarse.2947792 0.9 .

944) http://es. Skoog D. La adición de un exceso de hidroxilamina elimina los errores causados por exceso de reactivos oxidantes. zinc. La presencia de cantidades excesivas de materia orgánica puede hacer necesaria una digestión. (Skoog. el molibdato y la plata precipitan la fenantrolina. Química de alimentos. Análisis moderno de los alimentos. Mc Graw Hill. L. Principios de análisis instrumental. The Journal of Biological Chemistry. 1991. Zaragoza (España). Holler J. Equilibrio iónico y análisis químico.El procedimiento del método de la fenantrolina tiene cierta limitación en su aplicabilidad. Van Gaalen.(PDF) FENNEMA O. fosfatos.net/mouthblack09/determinacion-de-hierro-conortofenantrolina - BOUMANS. Differential Inhibition of the Yeast bc1 Complex by Phenanthrolines and Ferroin. 1997.(Skoog. Acribia. .A. BIBLIOGRAFÍA: Alfonso Clavijo Díaz. el cadmio.. y Berden.A. el mercurio..A. 2001. Fundamentos de química analítica. México. Grivell. nitrito.2001) . Skoog D. cromo.F.C. 2001) . - asegura un rápido desarrollo del color por esto es importante la adición de HCl y HNO3.La presencia de iones metálicos.Cualquiera de estos oxidantes fuertes. cobalto y cobre. cianuro.2001. H. ha de evitarse un almacenamiento prolongado o la exposición a la luz. West D.slideshare. Primera Edición. Acribia. 272.A. L. segunda edición. llevar el residuo a combustión seca suave.M. y volver a disolver en ácido. Química analítica. Nieman T. M.IX. HART F. A. quinta edición. séptima edición. es necesario utilizar exceso de fenantrolina. 2. Mc Graw Hill/ Interamericana . 19753-19760.. bismuto. Bogotá 2002 (Pag.M. aunque también se puede realizar una extracción. Para evitar la existencia de cantidades de materia orgánica o colorante. es mejor evaporar la muestra. España 1993. Universidad Nacional de Colombia.