DETERMINACION DE HIERRO EN MUESTRA DE ESPINACA POR EL MTODO

ESPECTOFOTOMTRICO
I.
II.

OBJETIVOS
Determinacin de hierro en muestra de espinaca por el mtodo espectrofotomtrico
FUNDAMENTO TEORICO

La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+, originando un complejo de color rojo caracterstico

(ferrona) que absorbe notablemente en las regiones del espectro visible de alrededor de 505
nm. El Fe3+ no presenta absorcin a esa longitud de onda y debe ser reducido a Fe 2+ mediante
un agente reductor apropiado, como la hidroxilamina, (en forma de clorato para incrementar su
solubilidad). (Boumans, 1997) La reduccin cuantitativa de Fe 3+ a Fe2+ ocurre en pocos minutos
en un medio cido (pH 3-4) de acuerdo a la siguiente ecuacin: Despus de la reduccin del Fe
3+
a Fe 2+, se da la formacin de un complejo con la adicin de ortofenantrolina. En un medio
acido la ortofenantrolina se encuentra en su forma protonada como ion 1,10- fenantrolin
(FenH+). La reaccin de complicacin puede ser descrita por la siguiente ecuacin: (La
estructura qumica del complejo se muestra en la figura 2) Fig. 2. Estructura qumica de la
ferrona. Consiste en 3 molculas de OP (ortofenantrolina) alrededor de un tomo central de
Fe. Los tomos de carbono de la ferrona
III.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales
- 5 fiolas de 150ml
- 2 fiolas de 200ml
- Probeta
- Pipetas
- Vaguetas
Reactivos
- Un ramo de espinaca
- cido ascrbico
- Orto-fenantrolina
- Equipos
- Campana de extraccin
- Espectrofotmetro visible
-

Bombilla de succin
Crisol
Embudos
Papel filtro
Vasos de precipitados de 50ml

Buffer
Agua destilada
cido clorhdrico

Balanza analtica
Mufla

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A) PREPARACIN DE LA MUESTRA
-

Primera parte:

Picamos finamente la espinaca.

Pesamos dos muestras de aproximadamente 2 gramos cada una.
Pasamos las muestras picadas y pesadas a crisoles.
Procedemos a incinerar las 2 muestras haciendo uso de una campana extractora de
gases. La cocina elctrica se encuentra al interior de la campana, vemos que a los
pocos minutos las muestras empiezan a humear. Se continu con la incineracin hasta
que las muestras deje de humear.

tinicial 5 : 52 pm
t final 6 : 04 pm
-

Retiramos los crisoles con ayuda de pinzas y las pasamos a una mufla (Determinador
de cenizas).
En la mufla se puede llegar hasta una temperatura 600 C. Aqu se calcin la muestra
hasta obtener cenizas (tiempo aproximado: 3 horas) y luego se dej enfriar.
Una vez fra, pasamos la muestra al desecador (Equipo que contiene una sustancia
desecante que absorbe la humedad).
-

Segunda parte:

Con una probeta medimos 5ml de HCl y con cuidado la aadimos a la muestra
desecada, esto ioniza a los metales.
- Quemamos la muestra acidificada en la cocina elctrica ubicada en el interior de la
campana extractora de gases hasta que deje de humear.
- Volvemos a agregar HCl a la muestra, esta vez 2ml, y repetimos la incineracin para
finalizar el ataque, hasta que deje de humear. Empleamos la campana extractora
debido a que los gases que se emiten en la incineracin son vapores de la
descomposicin del ataque con HCl, que son txicos.
- Finalizada la incineracin procedemos a filtrar en fiolas de 100 ml, para ello empleamos
papel filtro Whatman, lo doblamos en media luna y luego en , con un poco de agua
destilada lo adherimos a las paredes de un embudo de vidrio, con ayuda de una
vagueta guiamos al lquido para evitar que el papel filtro se rompa.
- Concludo el filtrado enrasamos las fiolas con agua destilada y con un marcador
nombramos cada una.
- Finalmente obtenemos una muestra de hierro obtenido por medio de la espinaca, en
una concentracin de 2 ppm.
B) PREPARACIN DE CURVA DE CALIBRACIN
-

Marcamos 6 fiolas y agregamos diferentes soluciones como se indica en la Tabla 1.

Para clculos diluimos esta solucin a la concentracin de 10 ppm. A esta solucin la
llamaremos La muestra patrn.
De la solucin de concentracin 10 ppm. Agregamos 1 ml. 2 ml, 3ml y 4 ml en
diferentes fiolas, tambin utilizaremos una fiola a la cual denominaremos Blanco
debido a que a esta fiola no se agregara la muestra patrn.
Seguidamente agregamos en las fiolas solucin buffer de pH=3 (Fe) y solucin de
cido ascrbico.
Observamos que la orto - fenantrolina forma un complejo coloreado con el hierro, ya
sea hierro del patrn o de la espinaca.

Muestras

- Tabla 1.
Blanco
I
II

III

IV

muestra
problema

solucin patrn 10ppm (ml)

-

solucin buffer pH 3 (ml)

0
2

Concentracin de hierro en mg
-

Solucin de cido ascrbico al

10% (ml)
solucin de ortofenantrolina al
0,5% (ml)
H2O

4
2
-

6ml
-

0,
1

1
1
1
1
Agua hasta enrasar la fiola
X
0,
0,
0,2
3
4

C) ANALISIS DE MUESTRA
-

Pasamos una parte las muestras a un vaso pequeo de precipitado cada una.
Seguidamente procedemos a hacer la lectura de muestra.

V.

ESQUEMA DEL EXPERIMENTO

-

DETERMINACIN DE HIERRO EN MUESTRA DE

ESPINACA POR EL MTODO
ESPECTROFOTOMTRICO UV-VISIBLE

Preparacin de la curva
de calibracin

Preparacin
de la
muestra
Primera

Segunda

Picado
-

Primer
quemado de la

Pesad
Quemado
de
la muestra
-

Primer ataque
con HCl

Enfriamiento
Desecado
v

Preparacin del patrn 2ppm

(sulfato ferroso amoniacal)

Dilucin del patrn a 10ppm

Humeo de
Preparamos 6 fiolas que

Calcinaci

Utilizamos la muestra de la
espinaca obtenida

Segundo
quemado de la
Segundo
ataque
con
Filtrad de
la HCl

Solucin de ortofenatrolina

Solucinbuffer
de cido
Solucin
ascrbico

Muestra patrn

DETERMINACIN DE HIERRO EN MUESTRA DE ESPINACA

POR EL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO UV-VISIBLE

Preparacin de la muestra

Primera parte

Calculamos la absorbancia mediante el

espectrofotomtrico UV- VISIBLE

Segunda parte

Preparacin de la curva de calibracin

VI.

CLCULOS Y RESULTADOS
-

Fiola

Blanco
- I
- II
- III
- IV
Muestra Problema

Absorbanc
ia
- 0,0274
- 0,0829
- 0,1230
- 0,1519
- 0,1859
- 0,1118

Concentracin (mg/ml)
-

0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
- X

- Por interpolacin de los datos obtenidos obtendremos la concentracin de la

muestra problema
0.05
0.04
0.04

f(x) = 0.29x - 0.01

R = 0.99

0.03
0.03

Concentracin, mg/mL 0.02

0.02
0.01
0.01
0
0.05 0.07 0.09 0.11 0.13 0.15 0.17 0.19 0.21

Absorbancia

a:
b:
R2:

Interpolacin
-

-0.0150679
0.2947792
0.9960591

X:
Y:

0.1118
0.0178885
-

Clculo de mg de hierro en la muestra:

mgFe /100 g

g de muestra

mgFe /100 g
-

mgFe 100 g
alcuota de la muestra, ml

100ml

0, 01789mgFe 100 g
2,8762mgFe /100 g
31,1ml
2 g de muestra

100ml

Clculo del porcentaje de error:

-

Vterico 2,70mgFe / 100 g

%e

VII.

VIII.

Vterico Vexp
Vterico

6, 29%

ANLISIS DE RESULTADOS
- El mtodo se basa en la reaccin del Fe (II) con o-fenantrolina para dar
un complejo intensamente coloreado. El Fe (III) se reduce a Fe (II) con
hidroquinona y luego se forma el complejo con la o-fenantrolina :
- Se obtuvo que para una absorbancia de 0,1118 la concentracin de
hierro en mg/ml es 0,01789.
- Entonces la cantidad de hierro contenido en la espinaca es
2,88mgFe/100g, este valor difiere del terico con un porcentaje de error
del 7%, lo cual se debe a errores cometidos durante la prctica
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
- En Cualquier determinacin espectrofotomtrica es de importancia
especial la eleccin de la longitud de onda. Por lo general, lo mejor es
realizar las mediciones a una longitud de onda que corresponda al
mximo del espectro de absorcin para lograr sensibilidad mxima.
- El mal manejo de un equipo puede conllevar a resultados poco precisos
y exactos, por ello es necesario que antes de usarse, se calibre con un
blanco, y si es necesario que este proceso se haga ms de dos veces
debe realizarse para mayor confiabilidad.
- En la determinacin de hierro, el complejo rojo-naranja que se forma es
un quelato de tres molculas de fenantrolina por tomo de Fe (ferrona).
La solucin coloreada obedece a la ley de Beer, su intensidad es
independiente del pH entre 3 y 9, aunque un pH cido (2,9 - 3,4)

IX.
-

asegura un rpido desarrollo del color por esto es importante la adicin

de HCl y HNO3. (Skoog,2001)
- Cualquiera de estos oxidantes fuertes, cianuro, nitrito, fosfatos, cromo,
zinc, cobalto y cobre, bismuto, el cadmio, el mercurio, el molibdato y la
plata precipitan la fenantrolina. La adicin de un exceso de
hidroxilamina elimina los errores causados por exceso de reactivos
oxidantes.(Skoog, 2001)
- La presencia de iones metlicos, es necesario utilizar exceso de
fenantrolina, aunque tambin se puede realizar una extraccin. Para
evitar la existencia de cantidades de materia orgnica o colorante, es
mejor evaporar la muestra, llevar el residuo a combustin seca suave, y
volver a disolver en cido. La presencia de cantidades excesivas de
materia orgnica puede hacer necesaria una digestin.
- El procedimiento del mtodo de la fenantrolina tiene cierta limitacin en
su aplicabilidad, ha de evitarse un almacenamiento prolongado o la
exposicin a la luz.
BIBLIOGRAFA:
Alfonso Clavijo Daz; Fundamentos de qumica analtica. Equilibrio inico y
anlisis qumico; Primera Edicin, Universidad Nacional de Colombia, Bogot
2002 (Pag.944)
http://es.slideshare.net/mouthblack09/determinacion-de-hierro-conortofenantrolina

BOUMANS, H., Van Gaalen, M.C.M., Grivell, L.A. y Berden, A. 1997.

Differential Inhibition of the Yeast bc1 Complex by Phenanthrolines and Ferroin.
The Journal of Biological Chemistry. 272, 2, 19753-19760.(PDF)
FENNEMA O.; Qumica de alimentos; Acribia, segunda edicin; Espaa 1993.
HART F. L; Anlisis moderno de los alimentos; Acribia. Zaragoza (Espaa),
1991.
Skoog D.A, West D.M. 2001. Qumica analtica, sptima edicin, Mc Graw Hill.
Mxico.
Skoog D.A, Holler J.F, Nieman T.A.2001. Principios de anlisis instrumental,
quinta edicin, Mc Graw Hill/ Interamericana