CT 4 (2012) 223-238

Cultivos Celulares. Clulas madre

y la regeneracin sea
lvaro Gonzlez Garcinuo1
Universidad de Salamanca
alvaro_gonzalez@usal.es

SUMARIO
La Investigacin Biomdica se ha desarrollado a gran velocidad en los ltimos aos.
Los avances en el campo de las clulas madre y la ingeniera tisular son una realidad del
siglo XXI con un amplio potencial por delante, para el tratamiento de numerosas enfermedades. En el presente artculo se realiza una revisin a las tcnicas usadas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el hueso mediante el empleo de clulas madre o
mejoras en el implante de nuevos tejidos a los enfermos gracias a la produccin de tejidos
exvivo por ingeniera tisular. Los estudios aqu descritos se encuentran en su mayora en
las primeras fases de investigacin, y algunos de ellos han resultado productivos cuando
se han ensayado en animales de experimentacin o en humanos. La potencialidad de estos
cultivos celulares ha sido demostrada y vislumbra un futuro esperanzador por sus mltiples
aplicaciones en muchas patologas.
Palabras clave: Ingeniera tisular, clulas madre, enfermedades seas, leucemia
SUMMARY
Biomedical research has been developed really quickly in recent years. Advances
in stem cells and tissue engineering are a reality in 21th century with a great potential in
the future for treatment of numerous diseases. In this article has been made a review of
techniques used to treat bone with stem cells or improvements in tissue implants through
tissue production exvivo. Most of the studies described are in the first step of investigation,

lvaro Gonzlez Garcinuo es estudiante de 2 de Grado en Biotecnologa.

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and some of them had good results when have been testing at experimental animals or at
humans. The potentiality of these cells crops has been probed and reveals a hopeful future
because of their multiple applications in a lot of diseases.
Key words: tissue engineering, stem cells, bone diseases, leukemia

1. Las clulas madre. Introduccin. Clasificacin

Definimos clula madre o stem cell como una clula progenitora, autorrenovable, capaz de regenerar uno o ms tipos celulares diferenciados. Tradicionalmente se han dividido las clulas madre en dos grandes grupos:
Clulas madre embrionarias: son las que derivan de la masa celular del
embrin cuando este se encuentra en el estado de blastocito (durante las dos
primeras semanas desde la fecundacin). Estas clulas son pluripotenciales,
es decir, son capaces de generar todos los tipos celulares.
Clulas madre adultas: son fruto de sucesivas divisiones de las anteriores.
Son las rgano-especficas, es decir, son multipotenciales, capaces de originar clulas de un rgano concreto del embrin, y solo de ese tipo. Son muy
usadas en terapia celular.
El uso de las clulas madre para tratar diversas enfermedades es una realidad
en muchos casos y en otro una fuente continua de investigacin. A continuacin
enumeramos una serie de aspectos donde ya hay conocimiento de los beneficios
que tiene el uso de clulas madre, son: tumores cerebrales, enfermedades retinianas, cncer de ovarios, cncer de testculos, estudios de hematologa (leucemias),
carcinoma renal, esclerosis mltiple, artritis reumatoide, defectos en el hueso y en
el cartlago2
Nuestro estudio se centrar en estas ltimas enfermedades, las patologas del
hueso y del cartlago y los tratamientos existentes y retos del futuro en las mismas.

2. Tcnicas usadas para mantener clulas madre. Cultivos

La blstula se forma hacia la primera semana del desarrollo embrionario, de
cuya MCI (masa celular interna) se obtienen clulas. Se desarrolla por el mtodo
de Evans y Kaufman, que mantienen las clulas gracias a distintos factores inhibitorios. Una va usada a menudo es la congelacin de las mismas (criopreservacin)

2 Cf., S. Grisola, M. D. Miana, E. Bendala-Tufanisco, Mesenchymal stem cells: biology

and potential clinical uses, Ministerio de Sanidad y Consumo, Madrid 2003.

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en nitrgeno lquido a -196C. Otro mecanismo es usar ciertas sustancias qumicas

llamadas factores de transcripcin que consiguen bloquear procesos de diferenciacin. Son ejemplos de estos factores: OCT3-4, NANOG y SOX2. Tratan de suprimir a Cdx2 que es la responsable de la diferenciacin del endodermo primitivo.
La supresin de los programas de diferenciacin es un factor clave para mantener la pluripotencialidad.
La gran dificultad del cultivo de las clulas comienza cuando queremos inducir su diferenciacin hacia uno u otro cultivo. Este proceso es laborioso, no se
consigue bien y tampoco est perfectamente definido. Para la diferenciacin de las
clulas embrionarias el gran problema es la deteccin de las condiciones ptimas
para cada cultivo, y aparte de definirlas bien, ser capaces de controlarlas durante
todo el proceso. Ya que la proliferacin celular (densidad) cambia los factores y su
influencia de forma poco controlable adems de generar uniones clula-clula y
uniones clula-matriz que dificultan el crecimiento individual.
Los medios que hasta ahora han funcionado son varios, con suero lquido, y
suplementado con factores diversos, albmina, trasnferrina, insulina Todos los
cultivos deben realizarse en monocapa.
Todas las lneas celulares descubiertas y bien aisladas pasan a formar parte
en Europa de un banco llamado Registro Europeo de Lneas de Clulas Madre
embrionarias. Este registro busca reunir toda la informacin de todas las lneas, y
sus formas de cultivo. Adems permite la interaccin entre los laboratorios europeos para el flujo de informacin y de lneas celulares.
El futuro de las tcnicas de clulas madre se presenta esperanzador. Se acaban de probar la implantacin de clulas madre en el tejido nervioso que permite
la regeneracin de las neuronas muertas (hecho clave para potenciar el desarrollo
cerebral). Tambin se trabaja mucho en el desarrollo de nuevas clulas cardiacas,
hasta ahora, evasivas, que solucionara muchas enfermedades de este tipo. Con un
buen desarrollo de las clulas madre se podran evitar procesos de trasplante de
tejidos o de rganos que siempre resultan incmodos para el paciente y supone
evitar fenmenos de rechazo.

3. El tejido seo. Conceptos clave de su estructura. Tipos

de hueso
El tejido seo o hueso se compone de clulas y matriz. La matriz son fibras
y sustancia fundamental con mucha sal de calcio (dando dureza y resistencia al
hueso). El hueso es adems el lugar de asiento de la mdula sea (rgano hematopoytico de los vertebrados). Entre las clulas distinguimos:

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Clulas osteoprogenitoras: clulas de origen mesenquimtico que darn

lugar a osteoblastos. En el hueso adulto conservan la capacidad de dividirse
(en respuesta a estmulos como una fractura sea).
Osteoblastos: son derivadas de las anteriores y son las encargadas de realizar la sntesis de toda la matriz (fibras y sustancia fundamental). Forman
la capa ms interna de la estructura sea (periostio). Son cbicos o prismticos y sus mitocondrias guardan grnulos de polifostato de calcio para la
calcificacin de la matriz.
Osteocitos: Son los osteoblastos embebidos por su propia secrecin, es
decir, incorporados en la matriz sea calcificada. Son fusiformes con prolongaciones muy finas a lo largo de la matriz que les permiten interaccionar
los unos con los otros. Estos ya no sintetizan matriz pero la conservan.
Osteoclastos: clulas grandes y multinucleadas, adosadas a las zonas de
reabsorcin del hueso en las lagunas de Howship. De su compleja estructura
citolgica, nos quedamos con las mltiples prolongaciones citoplasmticas
llamndose borde fruncido que contactan con el hueso. Los osteoclastos
destruyen la matriz sea por secrecin de colagenasas y cidos que acidifican el medio e inducen la ostelisis enzimtica. Se originan directamente
de los monocitos.
La matriz son fibras (mayoritariamente colgeno con 100 nm de espesor y
estriacin peridica cada 64 nm pero estn mineralizadas, dando propiedades distintas a las del conjuntivo) y tambin sustancia fundamental (con glucoprotenas,
proteoglucanos y sales minerales).
El hueso se puede clasificar en plano, corto o largo (si atendemos a la forma),
en esponjoso y compacto (si atendemos a la estructura) o en inmaduro y definitivo
(si nos fijamos en el desarrollo).
La unidad bsica del hueso es la osteona, con el Sistema de Havers que es
tpica de los huesos compactos (en la zona central). Est formado por un canal de
Havers alrededor del cual se agrupan de 5 a 20 clulas seas (osteocitos u osteoblastos). Los canales de Havers se comunican entre s por los conductos de Volkman.

4. Osificacin. Proceso fisiolgico estndar

La osificacin u osteognesis es el proceso de crear nuevo hueso, podemos
hablar de dos tipos o modelos: desde conjuntivo o mesnquima (intramembranosa)
o desde el cartlago (endocondral).

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La intramembranosa engloba a huesos planos y tambin es el mecanismo

seguido en caso de fracturas. El tejido mesenquimal de los alrededores se diferencia por unos factores a osteoblastos, que comienzan a sintetizar la matriz, haciendo
la sustitucin y convirtindose en osteocitos.
La endocondral es tpica de huesos largos y cortos, y se parte de cartlago
hialino como molde. Se estructura en 5 zonas diferenciadas: zona cartlago normal,
zona cartlago seriado (condrocitos alineados), zona cartlago hipertrofiado (condrocitos grandes intactos), zona cartlago calcificado (condrocitos grandes degenerados), zona cartlago osteoide.
Los osteoblastos se incluyen en las cavidades o huecos dejados por los condrocitos degenerados y desde all cambian la matriz por una nueva (aprovechan el
espacio dejado).

5. Ingeniera de tejidos seos

Los lesiones o defectos en el tejido seo se han tratado tradicionalmente
usando implantes de injertos autlogos, alognicos o xenognicos; en otros casos,
implantando biomateriales que sustituan al tejido daado. Podemos definir a las
terapias convencionales que se han venido usando hasta nuestros das:
Autoinjertos: la ms usada. Consiste en la implantacin de injertos autlogos, que conllevan la toma de un fragmento de hueso del paciente y su
posterior trasplante a otra zona del mismo.
Aloinjertos: toma y procesamiento del hueso de un cadver y su posterior
transplante al paciente. Este tipo de injerto es acelular y presenta resultados
menos positivos que los autoinjertos, ya que su tasa de incorporacin es
menor, debido a la ausencia de clulas osteoprogenitoras.
Xenoinjertos: encarnan una pequea proporcin de las terapias para reemplazo seo y utiliza fragmentos de hueso obtenidos de animales de distintas
especies.
Materiales: existen implantes de materiales que no tienen su origen en seres
vivos, como metales, plsticos o cermicos.
Sin embargo, existe una clara desventaja en la utilizacin de estos medios
dado que podemos encontrarnos con escasez de donantes, dificultades para la
extraccin, problemas de rechazo de trasplantes o con la incapacidad de los
materiales para remodelarse y ejercer funciones fisiolgicas3. Por lo tanto, en los
3 Cf., C. Estrada, A. C. Paz, L. E. Lpez, Ingeniera de tejido seo: consideraciones bsicas, Revista EIA, 5 (2006) 93-100.

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ltimos aos se ha implantado una serie de tcnicas que buscan solucionar los problemas que antes hemos comentado. El conjunto de estas tcnicas forman lo que
se denomina ingeniera de tejidos seos. Las tcnicas se basan en su mayora en el
cultivo celular y las variantes que este puede presentar: cultivo celular en matrices
tridimensionales, en medios de cultivo suplementados con factores de crecimiento.
En la regeneracin sea que utiliza la ingeniera de tejidos confluyen tres
elementos fundamentales: matrices tridimensionales, molculas de sealizacin
y diferentes tipos celulares. Todos estos elementos deben encontrarse bajo unas
condiciones fsico-qumicas adecuadas que permitan la regeneracin del tejido u
rgano que queremos reemplazar.
Por lo tanto, para la ingeniera de tejidos seos el mtodo ms usado consiste
en el cultivo de clulas en matrices tridimensionales biodegradables altamente
porosas, que hayan sido tratadas con factores de crecimiento (molculas de sealizacin). A continuacin estas matrices debern ser implantadas sobre el defecto
seo, esperando que induzcan o dirijan el crecimiento del nuevo tejido. Las clulas
adheridas a la matriz debern proliferar y diferenciarse en un tejido normal, mientras que la matriz metabolizar o degradar.
A continuacin nos centraremos especficamente en cada uno de los elementos anteriormente mencionados.
5.1. Matrices tridimensionales
Son dispositivos que proporcionan a las clulas el apoyo necesario para su
proliferacin y para el mantenimiento de sus funciones diferenciadas. Adems van
a aportar las seales biolgicas requeridas para la conservacin de la expresin
gnica especfica. Estas seales sern fundamentales para la arquitectura del tejido.
Las clulas interactan con estos dispositivos de manera activa en el proceso de
regeneracin del tejido, lo cual induce la liberacin de factores de diferenciacin
y crecimiento, mientras que sintetizan su propia matriz extracelular (MEC), que
proporciona un ambiente y arquitectura especficos del tejido, y sirve como reservorio de agua, nutrientes, citocinas y factores de crecimiento, entre otros. Cuando
se cultivan las clulas seas en matrices se forman las denominadas adhesiones en
3D. Estas estructuras difieren un poco en composicin, forma, distribucin y actividad con respecto a las adhesiones focales observadas en las clulas que crecen
sobre el sustrato tpico de los experimentos de cultivo de clulas. Al usar este tipo
de matrices ms naturales las clulas parecen desplegar una mayor adhesin,
movilidad, velocidad de proliferacin celular y morfologas ms similares a las del
tejido del que buscamos un reemplazo. Esto nos lleva a una conclusin determinante: la forma de la matriz cumple alguna funcin en el control de la forma y la

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actividad del resto de clulas del tejido seo. Las matrices tridimensionales para la
ingeniera del tejido seo deben cumplir una serie de propiedades:
Biocompatibilidad: no deber causar respuesta inmune ni ser txica para el
tejido una vez que se haya trasplantado al mismo.
Porosidad: deber tener poros que sern necesarios para la correcta difusin
de gases y nutrientes entre las clulas cultivadas. En el tejido seo la comunicacin celular est aumentada con respecto a otros tejidos por lo que el
factor porosidad es uno de los ms importantes de cara al cultivo celular en
matrices 3D.
Biodegradable: deber ser absorbida por el tejido que la rodea sin que sea
necesaria su eliminacin por medios quirrgicos.
Osteoinductividad: las clulas madres son agrupadas en los sitios de regeneracin y estimuladas para diferenciarse hacia la lnea osteognica.
Propiedades mecnicas: debemos tener en cuenta que las zonas de reemplazo estarn sometidas a tensiones y fuerzas mecnicas.
Osteconduccin: la matriz deber tener unas propiedades topogrficas
que permitan que las clulas osteognicas migren hacia la superficie de la
matriz tridimensional a travs de un cogulo de fibrina, que se establece
despus de haber implantado el material.
Este tipo de matrices 3D se puede sintetizar siguiendo distintos mtodos como
son gas foaming, solvent casting, rapid prototyping y H2O2 foaming los cuales permiten el procesamiento de distintos tipos de materiales.
Las matrices tridimensionales y su uso en la regeneracin sea es un campo
que aun no est plenamente desarrollado pero que, sin embargo, es especialmente
prometedor. Es por eso por lo que se pretende mejorar el estudio y el conocimiento
sobre el diseo de estas matrices. Cuanto ms se parezcan las propiedades de la
matriz a las del hueso, las alternativas sintticas tendrn un porcentaje mayor de
xito al ser trasplantadas al tejido a reemplazar.
5.2. Clulas
Las clulas ms usadas para la regeneracin sea son las clulas madres
mesenquimales (MSC). Estas clulas cumplen una serie de requisitos que las
hacen ideales para su cultivo. Bsicamente estas caractersticas son: fcil obtencin, conservacin y expansin; mantenimiento de su funcin y multipotencialidad
necesaria para diferenciarse o transdiferenciarse a una variedad de clulas especializadas.

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Las MSC se obtienen desde el tejido adiposo o desde mdula sea. Para la
osteognesis la clula seguira un proceso de diferenciacin que comenzara con su
transformacin en un osteoblasto transitorio y que pasara por estadios intermedios
como el osteoblasto, osteocito y finalmente hueso.
En general la fuente ms usada para obtener clulas madres es aquella que
utiliza a las clulas madres de individuos adultos que han mostrado la capacidad de
formar algunos tipos de tejidos. Las clulas madres embrionarias dado la controversia que presentan an no son muy utilizadas.
5.3. Factores de crecimiento
La morfognesis del hueso precisa de una serie de molculas de sealizacin,
que son los conocidos factores de crecimiento. Los factores de crecimiento que
estn ms relacionados con la osteognesis son:
a) Las protenas morfognicas seas (BMP).
b) El factor insulinoide de crecimiento (IGF).
c) El factor transformante del crecimiento de tipo beta.
d) El factor de crecimiento derivado de plaquetas.
e) El factor de crecimiento de fibroblastos.
Por lo tanto, estos factores son los que se aadirn a los medios de cultivos de
clulas osteoprogenitoras (MSC) para la regeneracin sea.
5.4. Modelo animales de regeneracin sea
Los modelos animales que se usan en la ingeniera de tejido son tan diversos
como los materiales o los factores de crecimiento que se usan para el cultivo celular. En general y como para otro tipo de experimentos, los estudios en animales se
inician en modelos como el ratn o la rata, para pasar despus a conejos, cerdos y
ovejas.

6. Patologas del tejido seo y su tratamiento con clulas madre

6.1. Osteoporosis
En primer lugar, vamos a ver la base de la enfermedad y luego explicaremos
las formas de tratamiento.

Cultivos Celulares. Clulas madre y la regeneracin sea 231

La osteoporosis es una enfermedad en la que se va perdiendo poco a poco la

masa sea y as el hueso queda ms poroso, frgil y delgado. De esta forma es ms
susceptible a romperse por golpe. Suele ser un proceso natural, que comienza entre
los 30-35 aos de vida en los seres humanos. La enfermedad se considera cuando
esta prdida se produce de forma acelerada. Es muy comn en las mujeres tras la
menopausia. Hablamos de osteopenia como paso anterior a la osteoporosis, que se
llama as cuando el proceso es contundente y acelerado.
Tradicionalmente se ha tratado la osteoporosis con medicamentos administrados al paciente que incrementaran los niveles de las hormonas que se relacionan
con metabolismo del calcio y los fosfatos (calcitonina, PTH y vitamina D). Aparte
de administrar estas hormonas, muy usado tambin es, para las mujeres tras la
menopausia, la administracin de estrgenos que contrarrestan las prdidas de los
mismos en esa fase de la vida.
Pero actualmente, el mundo de los cultivos celulares y la terapia regenerativa
se ha fijado en esta patologa y ha desarrollado nuevas tcnicas que exponemos a
continuacin:
a) Cpsulas de tejido seo
Desarrollado por investigadores de la Universidad de Estrasburgo (Francia)4.
Se basan en el contacto de las clulas madre con dos factores clave: BMP y TGF1
que inducen su diferenciacin a hueso/cartlago.
Por esto han fabricado unas microcpsulas, que son un reservorio de estos
factores, los cuales, slo los liberan si las clulas de alrededor lo requieren. En el
hueso daado se inyectan conjuntamente las clulas madre indiferenciadas y los
factores, as crecen en velocidades controladas.
Las microcpsulas estn formadas por poli-L-lysina y por poli-L-glutamico.
Han demostrado efectos positivos en los ensayos con ratones.
Respecto al cultivo de las clulas, se incuban en presencia de gel de alginato,
al 1% en agua MiliQ. Se implantan tres embriones por mililitro de la mezcla antes
descrita.
b) Regulacin de la expresin-mecanismos
Se sabe que las clulas madre mesenquimales generan tejido seo y regeneran
pero se desconoce exactamente el mecanismo desde que son incluidas a la circulacin sistmica hasta que realizan su efecto en el tutano del hueso. A continuacin

4 Benkirane-Jesel, Active multilayered capsules for in vivo bone formation, Estrasburgo,

Francia 2010.

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se explica el estudio de J. A. Gasser del Instituto de Investigacin Biomdica de

Basilea (Suiza)5.
Se marcaron radiactivamente las uniones especficas de los MSC (clulas
madre mesenquimales) con timidina y las clulas fueron marcadas con el gen de
la protena verde-fluorescente (GFP). Se prob en varios tipos del desarrollo de la
osteoporosis en mujeres post-menopusicas. Tras esperar los tiempos oportunos se
observ que una gran parte de las clulas administradas eran retenidas por el pulmn y otras grandes fracciones se quedaban en duodeno, bazo o timo.
Se observaron unas 900 clulas en la tibia y se vio efecto sobre hueso. Se
observ que la inyectada de forma intravenosa produca menos efecto en la conservacin-proliferacin del hueso que la PTH incluso. Sin embargo, si se administra
muy prxima a la tibia por inyeccin s se observan los efectos de regeneracin
sea que se esperan de las clulas MSC.
Las conclusiones de este experimento muestran que la administracin exclusiva de MSC no induce el hueso y que debe ser combinado con factores como los
de antes (BMP) o deben ser activadas por un estmulo fuerte como una fractura
en cuyo caso podran ser activas.
c) Potenciacin del desarrollo de MSC con interfern (INF) gamma.
El INF es producido por nuestro propio cuerpo, y segn estudios de la McGill
University puede ser clave para tratamiento de osteoporosis. Los experimentos invitro revelaron que al poner MSC en presencia de genes que codifican el INF se
produca una nueva sntesis de osteoblastos. Las propias clulas volvan a producir
INF por lo que incrementaba su concentracin y potenciaba la accin (feed-back
positivo). Al extrapolarse a animales se encuentra el problema de la inhibicin del
efecto de INF porque se inactiva su receptor. Por tanto, para definir la ruta exacta
del interfern se requiere de ms investigacin, aunque seguro est que es una
llave importante. Hasta ahora se ha usado interfern en tratamientos de cncer.
6.2. Peridontitis agresiva
La periodontitis agresiva es una enfermedad que puede llevar a la prdida
del diente, de su funcin y afectar a la esttica del paciente. Esta patologa suele
afectar a personas con buena salud, menores de 30 aos. La prdida vertical del
hueso alveolar en torno a los primeros molares e incisivos es una de sus principales
caractersticas clnicas.
5 J.A. Gasser, Stem Cells in the Treatment of Osteoporosis, Instituto de investigacin Biomdica en Basilea, Suiza 2003.

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Tradicionalmente, para los casos ms graves de esta enfermedad en los que el

hueso se ve muy afectado se proceda a la ostectoma (tcnica quirrgica de remocin de parte del hueso con cambio en la forma del maxilar). Sin embargo, con el
desarrollo de prcticas como el cultivo celular estn empezando a aparecer nuevas
soluciones menos agresivas. Entre estas soluciones destaca fundamentalmente el
cultivo de osteoblastos sobre titanio.
Interaccin entre osteoblastos y superficies de titanio6: la principal aplicacin
de este mtodo es la obtencin de implantes. Este proceso consiste en cultivar
clulas osteoblsticas sobre sustratos de titanio que presenten las superficies tpicamente usadas en los implantes delantales. Se ha demostrado en diversos estudios
que la osteointegracin mejora por el incremento de la rugosidad de la superficie
dado que tiende a imitar as a la superficie real del diente. En un principio se cultivan las clulas osteoblsticas durante 24 horas (perodo clave para la adhesin
celular) y a continuacin, durante 1, 2, 5 y 7 das en los cuales dichas clulas
llevarn a cabo su programa de proliferacin. Normalmente, el titanio se recubre
de fosfato clcico, colgeno y materiales polimricos que asociados a factores de
crecimiento seo como la BMP-2 se consideran recubrimientos osteoinductivos.
6.3. Artrosis
La artrosis es una enfermedad producida por el desgaste del cartlago, tejido
amortiguador que protege los extremos de los huesos y que favorece el movimiento
de la articulacin. Es la enfermedad reumtica ms frecuente, especialmente en
personas de edad avanzadas. Suele aparecer con una frecuencia mucho mayor en
mujeres que en hombres. Cabe destacar que la artrosis es un tipo de artritis ya que
esta ltima engloba a las distintas enfermedades relacionadas con el desgaste de
las articulaciones.
En la actualidad los tratamientos para la artrosis son en general paliativos, que
ayudan a controlar el dolor. Podemos encontrar tratamiento farmacolgico y no
farmacolgico. El uso de analgsicos, antiinflamatorios o corticosteroides son solo
algunos ejemplos del primer tipo de tratamiento. Mientras que ejercicios, reduccin de peso o aplicaciones de fro y calor sobre las articulaciones perteneceran al
grupo de tratamientos no farmacolgicos.
Sin embargo, con el desarrollo de la terapia celular se estn llevando a cabo
experimentos que buscan la obtencin de tratamientos esperanzadores que iran

6 A. Prez Borrego, L. Domnguez, P. Hernndez, Utilizacin de clulas madres en el tratamiento de defectos seos periodentales, Facultad de Ciencias Mdicas Enrique Cabrera La Habana, Cuba 2009.

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ms all de los meramente paliativos y que supondran la regeneracin de las zonas

desgatadas por la edad u otras causas. Uno de estos tratamientos es el siguiente.
Tcnicas de implantacin de condrocitos autlogos7: el cultivo de condrocitos permite generar clulas que sean capaces de sintetizar colgeno de tipo I. El
cultivo de condrocitos permite reparar el cartlago daado in vitro. La tcnica
consiste en obtener una muestra de condrocitos de la persona (cuanto ms joven
mejor), el cultivo en monocapa de los condrocitos y la implantacin posterior en
la zona o zonas lesionadas. Actualmente, aunque el cartlago que se consigue es
estticamente idntico al original, lo cierto es que la funcionalidad no es la misma,
ofreciendo una menor resistencia y una mayor capacidad de deshiscencia. En un
intento de mejorar la tcnica, solucionando este problema se suelen aadir formatos de matriz no degradables que en nuestro caso son los cidos polilctico (PLA)
o poligliclico (PGA). Los condrocitos deben cultivarse en el seno de este biomaterial y una vez que se ha rellenado uniformemente se procede a la implantacin.
Sin embargo a da de hoy esta tcnica solo se realiza a nivel experimental y
sobre animales modelos, por lo que an ser necesario ms experimentacin y
estudio hasta su final y esperada aplicacin en humanos.

7. Regeneracin de la mdula sea

Aunque estrictamente no vamos a hablar en este punto de regeneracin sea,
en cuanto al hueso, s vamos a hablar de la forma de combatir enfermedades que
afectan a una estructura localizada en el interior del hueso, la mdula sea. La
enfermedad ms comn de este tejido es la leucemia.
La leucemia es el cncer de la sangre. Es especialmente desarrollado en
la infancia y se caracteriza por un incremento descontrolado de glbulos blancos
inmaduros. Estas clulas se expanden de forma rpida ya que van en el torrente
sanguneo y pueden alcanzar otros tejidos fcilmente induciendo cambios no
deseables. Distinguimos varios tipos de leucemia, aguda o crnica con variedades
dentro de cada una. Hasta el momento, se ha tratado la leucemia mediante tcnicas
de quimioterapia o radioterapia, pero ahora parece inducirse una nueva forma de
regeneracin especialmente en la leucemia de los nios.

7 J. I. Lee, M. Sato, H. W. Kim, J. Mochida, Transplantation of scaffold-free spheroids

composed of synovium-derived cells and chondrocytes for the treatment of cartilage defects of the
knee, Eur Cell Mater 22 (2011) 275-90; discussion 290.

Cultivos Celulares. Clulas madre y la regeneracin sea 235

Se ha comprobado que tiene efectos positivos el inocular una infusin con tutano de hueso o con clulas del cordn umbilical que son capaces de diferenciarse
de forma correcta a todos los modelos de clulas sanguneas8.
El cordn umbilical es preferible frente al hueso porque facilita los trasplantes, ya que son clulas del propio individuo y es menos probable que al trasplantarse, genere fenmenos de rechazo o inmunogenicidad en el cuerpo receptor.
Los resultados son bastantes favorables; en un estudio realizado en los EEUU se
comprob que un tercio de los pacientes tratados con cordn umbilical dejaban de
padecer la enfermedad en 2 aos. Este tipo de tratamiento con clulas del cordn
es casi exclusivo para los nios, mientras que para los adultos, se recomienda usar
el tutano del hueso.
Debido a la potencia que puede alcanzar esta tcnica, vamos a ver brevemente
el aislamiento de las clulas del cordn umbilical.
La extraccin de la sangre del cordn umbilical se hace durante el parto, se
trata de una operacin simple con escasos riesgos para feto y madre. La extraccin
de sangre del cordn ha de realizarse cuando ya ha sido cortado del bebe pero
todava unido a la placenta. La sangre se guarda en unos contenedores especiales y
se lleva a las instalaciones donde ser congelada. Generalmente se tarda 1 o 2 das
desde la extraccin hasta el almacenamiento en el laboratorio. La temperatura de la
sangre ese tiempo se debe conservar de 4 a 10C.9
Aparte de estas dos tcnicas, hay una intermedia, que se basa extraer clulas
madre de la sangre (hematopoyticas), por mtodos variados de enriquecimiento
ya que all se encuentran en cantidades muy pequeas (comparados con el tutano
del hueso) pero aseguran un tratamiento efectivo y no invasivo.

8. CONCLUSIONES
A lo largo de este trabajo hemos realizado una aproximacin muy resumida a
las distintas tcnicas de regeneracin sea que conllevan cultivo de clulas madres.
A pesar de lo conciso del trabajo, hemos podido observar la cantidad de aplicaciones que este mtodo presenta; y lo que es ms importante, el amplio nmero de
posibilidades futuras que exhibe este interesante campo de investigacin.

8 J. Prez de Oteyza, Clulas madre de cordnumbilical y Medicina Regenerativa, Hospital

universitario Ramn y Cajal, Madrid 2008.
9 J. McConnaughey, Treating Leukemia With Stem Cells, Revista CBS News Healthwatch, 2009.

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Sin duda, las investigaciones venideras en la regeneracin sea se debern

centrar en varios puntos fundamentales. La profundizacin en el conocimiento de
los fenmenos de diferenciacin de las clulas madres, el progreso en su manipulacin ex vivo para su posible uso teraputico o la bsqueda de nuevas fuentes de
MSC de acceso ms fcil son algunos de las lneas que deben estudiarse. Adems,
la mejora del conocimiento sobre la vascularizacin o de los factores implicados
en la angiognesis supondra un acercamiento hacia la creacin de piezas seas ex
vivo. La conjuncin de estas vas futuras de investigacin, podra traer como resultado la consecucin de avances cientficos inimaginables hasta ahora.

9. Bibliografa
A. Prez Borrego, L. Domnguez, P. Hernndez, Utilizacin de clulas madres en el tratamiento de defectos seos periodentales, Facultad de Ciencias Mdicas Enrique
Cabrera La Habana, Cuba 2009.
Benkirane-Jesel, Active multilayered capsules for in vivo bone formation, Estrasburgo,
Francia 2010.
C. Estrada, A. C. Paz, L. E. Lpez, Ingeniera de tejido seo: consideraciones bsicas,
Revista EIA, 5 (2006) 93-100.
M. A. Cuadrado, Induccin y regeneracin sea bajo la influencia de la protena morfogentica sea (BMP), Universidad Complutense de Madrid 1991.
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