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PRACTICA No.

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LEY DE BEER-LAMBERT, CURVAS DE CALIBRACIN Y
MTODO ESTADSTICO DE REGRESION LINEAL
INTRODUCCIN
La gran mayora de mtodos instrumentales requieren una calibracin, proceso que
relaciona la seal analtica medida con la concentracin del analito. Los tres mtodos ms
frecuentemente utilizados son: la realizacin y el uso de una curva de calibrado, el mtodo
de la adicin estndar y el del patrn interno1. (1:16) Para realizar el mtodo de la curva de
calibrado se introducen en el instrumento varios patrones que contienen concentraciones
exactamente conocidas del analito y se registra la seal instrumental. Normalmente esta
seal se corrige por medio de la seal de un blanco en el que se establece el cero de
absorbancia, este blanco contiene todos los componentes de la matriz del anlisis (Ej.: agua
destilada, agua/etanol) a excepcin del analito que se desea medir. El blanco es preparado
en el instante en que se preparan las dems muestras a determinarse.
La absorcin de la luz por una solucin diluida, viene dada por la ley de Beer, que relaciona
la concentracin de la fase absorbente con la radiacin. La relacin entre la absorcin de la
luz y el camino recorrido por sta (o sea, el espesor de la cubeta, viene dado por las leyes
de Lambert. La fusin de estas leyes empricas nos da la absorbancia total por un cuerpo,
cuando interacciona con un haz monocromado.
Mediante un mtodo que obedezca la ley de Beer-Lambert se puede realizar un anlisis
cuantitativo de cualquier especie en solucin, conociendo por supuesto la longitud de onda
de mxima absorbancia del analito, esto por medio de la determinacin de la absorbancia
en funcin de soluciones de concentracin conocida a travs de la elaboracin de una curva
de calibracin que las relacione de manera proporcional y linealmente, para lo que se
requiere de un mtodo estadstico.
El mtodo estadstico clsico y que se adecua a las caractersticas para la realizacin de
dicha actividad es el de los mnimos cuadrados2 en los que se grafica la ordenada (la
variable independiente) con los datos de la respuesta del aparato y la abscisa (variable
dependiente) en donde se coloca la concentracin o el tanto por ciento del analito, lo ms
habitual (y deseable) es que la grfica se aproxime a una lnea recta, sin embargo puede
darse el caso de que los valores no coincidan en una recta debido a errores aleatorios del
proceso de medida y el mtodo de los mnimos cuadrados nos sirve para intentar ajustar la
mejor lnea recta que conecte los puntos. La ecuacin cannica de la recta se expresa
matemticamente como: (1:937-939) (2: 3-23)

y = mx + b
n, indica el nmero de datos y las sumatorias correspondientes. Esto
se simplifica con
el uso de calculadoras cientficas en cuyas opciones estadsticas se encuentra por lo regular
la opcin de clculo de regresin lineal, al igual que en programas de ordenador como Exel
y otras hojas electrnicas.
Objetivos

1. Elaborar una curva de calibracin para relacionar la seal analtica medida con la
concentracin del analito.
2. Conocer la importancia de la elaboracin de un blanco para la realizacin de un
anlisis espectrofotomtrico.
3. Aplicar mtodos estadsticos esenciales e inherentes a los mtodos instrumentales.

Procedimiento
Elaboracin de una Curva de Calibracin.
Solucin de trabajo
a) Prepara una disolucin de CoCl2 o Cr(NO3)2 0.158 g en 100 ml de agua
desmineralizada. Calcular la concentracin de esta disolucin.
b) De esta disolucin (solucin madre) tomar 4 alcuotas de 2.5, 5, 10 y 25 ml agregar
cada una de estas alcuotas en balones aforados de 50 ml y aforar con agua
destilada.
c) Calcular las concentraciones de los estndares ya que con estos se realizara la curva
de calibracin.
Determinacin del mximo de absorcin
a) Con la solucin de concertacin intermedio y el blanco, agua destilada, determine el
mximo de absorcin en un rango de +/-20nm de la mxima lectura de absorcin
determinada la semana pasada para este catin. Las lecturas se harn de 5 en 5 nm
en un rango de 450 a 550 nm.
b) Obtenga la grfica de absorbancia contra longitud de onda.
Calibracin del Espectrofotmetro
a) Encender el Spectronic 20 y esperar 15 minutos antes de realizar los pasos
siguientes.
b) Luego de los 15 minutos ajustar el 0%T con la perilla lateral del lado izquierdo.
(ajuste de corriente oscura: cierre del obturador mecnico para anular la corriente en
el detector)
c) Preparar e introducir en la cubeta del espectrofotmetro la solucin blanco.
d) Ajustar el 100% T por medio de la perilla lateral derecha.
e) Quitar el blanco de la cubeta y lavar con una pequea porcin del estndar ms
diluido.
f) Desechar el lavado e introducir una cantidad razonable de estndar en el aparato y
medir %T (luego transformar a A)
g) Sacar y lavar con agua destilada la cubeta y lavar con una pequea porcin del
estndar siguiente para realizar la medida de transmitancia.
h) Comprobacin de blanco (o sea 100% de agua destilada cada 2 mediciones, si la
escala est corrida ajustar con la perilla lateral derecha del aparato
i) Repetir el procedimiento para estndares faltantes.
Clculos y Resultados
a) Graficar respuesta del aparato (Absorbancia) en eje Y, contra concentracin del
colorante en ppm eje X.
b) Ingresar los valores a una calculadora de clculo de regresin lineal para determinar
la pendiente m y el intercepto en eje x: b segn la ecuacin cannica de la recta:

y = mx + b. Recuerde borrar las lecturas estadsticas de clculos pasados de la


memoria de su calculadora.
c) Calcular el r o coeficiente de regresin de la recta, esto indica que tan
conveniente de usar es el mtodo, el valor deber estar comprendido entre 0.990 a
0.999 si es 1 son unos genios para las curvas! El valor no puede ser mayor a 1.
Recordar que esto indica que la seal o respuesta del instrumento puede asociarse
de un 99 a 100% con la concentracin del analito.
El instructor proveer una solucin de concentracin desconocida que deben de medir para
calcular la concentracin en partes por milln de un colorante determinado.
Anlisis de Resultados.
a) La Ley de Beer-Lambert se demuestra con el experimento que se realiz?, Se
logr determinar la concentracin de la muestra desconocida por medio del
mtodo?,Segn el coeficiente de correlacin determinado para el anlisis cree que
es confiable el valor de concentracin de muestra desconocida, y si no se cree as
por qu razn existe cierto error? Por qu es importante la ley de Beer?
b) Los mtodos instrumentales incluyen procesos estadsticos, A la hora de medir el
valor de la absorbancia de los estndares y la muestra desconocida cree que es
suficiente llevar a cabo solo una vez la medicin? Podra medirse 2 o tres veces y
realizar un promedio de absorbancia para incrementar la reproducibilidad o
confiabilidad del mtodo?
Cuestionario.
1. Si en lugar del color asignado en el laboratorio se hubiese tenido que trabajar con
una Solucin de otro color como un color secundario como el violeta, sera
necesario hacer un barrido para determinar el mximo de absorbancia? Explique su
razonamiento.

2. Si la solucin stock fuese incolora, cree que se puede llevar a cabo una
determinacin en el Spectronic 200? Explique su razonamiento.

3. Si la solucin stock estuviera coloreada pero al mismo tiempo extremadamente


turbia como afectara esto el anlisis?

4. Qu es un cromforo y para que se utiliza en anlisis en los que se requiere que


una solucin incolora tenga color?

5. Si mi muestra presenta un Coeficiente de Person fuese 0.820 podra ser los


resultados fiables?

Bibliografa.
1. Skoog, D. A., Holler, F.J. & T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis
Instrumental. 5ta Edicin, Editorial McGraw-Hill, Mxico. 1028 pp.
2. American Public Health (APH) et. al. Mtodos Estndar para el Exmen de Aguas
y Aguas de Desecho, Incluyendo Sedimentos Bentables y Lodos. (1963) 11 Ed.
Trad. I.Q.Pedro Caballero. Editorial Interamericana S. A. Mxico, 609 pp.

DIAGRAMA DE FLUJO

ANOTACIONES