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Resumen
La fibrosis heptica congnita ha estado descrita como una enfermedad letal con herencia recesiva autosmica monogenetica en
la raza del caballo Swiss Franches Montagnes. Realizamos un estudio societario ancho en el genoma con 5 casos y 12 controles
y se detect una asociacin en el cromosoma 20. El mapeo de homocigosis posterior define un intervalo crtico de 952 kb que
albergan 10 genes y un loci anotado incluyendo el rin poliqustico y la enfermedad 1 (autosmica recesiva) gnica heptica
(PKHD1). El PKHD1 representa un candidato funcional excelente como variantes en este gen fueron identificados en pacientes
humanos con herencia autosmica recesiva del rin poliqustico y la enfermedad heptica (ARPKD), as como varios mutantes
de ratn y rata. Mientras que las variantes del PKHD1 ms patgenas conducen a los defectos polienquistados en rin e hgado,
un subconjunto pequeo de los pacientes humanos ARPKD tienen slo sntomas ms vivos, parecido a nuestros caballos con
fibrosis heptica congnita. El gen PKHD1 es uno de los genes ms grandes del genoma con mltiples transcripciones
alternativas que an no han sido completamente caracterizados. Hemos secuenciado los genomas de un potro afectado y 46
caballos de control para establecer una lista exhaustiva de las variantes en el intervalo crtico. Se identificaron dos variantes sin
sentido en el gen PKHD1 que eran fuertemente, pero no perfectamente asociados con fibrosis heptica congnita. Especulamos
que la penetrancia reducida y / o potenciales interacciones epistticas con genes modificadores hipotticas pueden explicar la
asociacin imperfecta de las variantes PKHD1 detectados. As, nuestros datos indican que los caballos con fibrosis heptica
congnita representan un modelo animal de gran inters para el subtipo restringido en el hgado de ARPKD humana.
Cita: Drogemuller M, Jagannathan V, Welle MM, Graubner C, Straub R, et al. (2014) Fibrosis heptica congnita en el caballo Franches-Montagnes se asocia con el rin poliqustico y
la enfermedad heptica 1 (PKHD1) Gen. PLoS ONE 9 (10): e110125. doi: 10.1371 / journal.pone.0110125
Editor: William Barendse, CSIRO, Australia
Recibido 11 de junio 2014; Aceptado 15 de septiembre 2014; Publicado 08 de octubre 2014
Copyright: 2014 Drogemuller et al. Este es un artculo de acceso abierto distribuido bajo los trminos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado,
distribucin y reproduccin en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan.
Disponibilidad de datos: Los autores confirman que todos los datos que se basan las conclusiones son totalmente disponibles sin restricciones. Los archivos FASTQ primas para la RNASeq experimento hgado han sido archivados en EBI archivo de lectura corta y se puede acceder con el nmero de acceso PRJEB6068. La secuencia del genoma entero de la caballo
afectado ha sido depositado bajo el nmero de acceso PRJEB5942.
Financiacin: Este estudio fue financiado en parte por las contribuciones de la Oficina Federal Suiza para la Agricultura, el suizo Federal de Seguridad Alimentaria y la Oficina Veterinaria,
y la Asociacin de Cra suizo Franches-Montagnes. Sin financiacin externa adicional se recibi para este estudio. Los financiadores no tenan papel en el diseo del estudio, la recogida
y anlisis de datos, decisin a publicar, o la preparacin del manuscrito.
Conflicto de intereses: Despus de su retiro como director de la National Stud suizo en Avenches, Pierre-Andre' Poncet es Presidente de la Junta de Suiza y Observatorio de la Industria
Equina (Conseil et Suisse Observatoire de la Filie`re du Cheval (COFICHEV)). Esto no altera la adherencia de los autores a la revista PLoS One polticas sobre datos y materiales de uso
compartido.
* Email: tosso.leeb@vetsuisse.unibe.ch
Introduccin
La enfermedad poliqustica autosmica recesiva del rin (ARPKD) tiene
una incidencia de aproximadamente 1: 20.000 en los seres humanos [1].
Es causada por variantes en el rin poliqustico y la enfermedad 1
(autosmico recesivo) gen heptica (PKHD1). Ms de 500 variantes
potencialmente patgenos diferentes en el gen PKHD1 humana se han
descrito, y hay una considerable variacin en el fenotipo clnico y la edad
de inicio ([1,2], http://www.humgen.rwth-aachen.de/ index.php). Papacientes que llevan dos mutaciones PKHD1 truncar suelen morir en el
perodo perinatal, mientras que los pacientes con funcin PKHD1 residual
tpicamente tienen una enfermedad menos grave, que afecta
principalmente a los riones y el hgado.
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Resultados
Fibrosis Hpatica Congnita en Caballos FranchesMontagnes
Entre los aos 2008es y 2013, reclutamos un total de 7 potros de
Franches-Montagnes, 5 varones y 2 hembras, semanas 3 envejecidas para
12 meses, con signos clnicos de lesin ms viva severa (la Figura 1). Los
padres de todos los casos fueron clnicamente poco notorios. En 5 fuera de
estos 7 potros la calidad de tejido fino o las pruebas de sangre y el cido
desoxirribonucleico extrado fueron suficientes para los genotipos con
patatas fritas SNP. Los padres de estos 5 potros podran ser rastreados,
ambos en lo maternal y las lneas paternales sobre 3 para 7 generaciones,
para un solo antepasado comn y masculino (Elu) nacido en 1964 (la
Figura 2). Por lo tanto, llegamos a la conclusin de que una mutacin
hereditaria recesiva era lo ms probable, de acuerdo con nuestros estudios
anteriores [18]. Las pruebas incrustadas en parafina arregladas en
formalina del hgado del anterior estudio estaban disponibles y
exitosamente extrajimos cido desoxirribonucleico de 13 de estos potros
afectados.
Figura 1. Fibrosis heptica congnita en caballos Franches-Montagnes. (A) se vea, 2 meses de edad potro. El potro era pequeo para su
edad y se muestra una barriga. (B) de hgado de color ampliada y gris del potro afectada con quistes macroscpicamente visibles. (C)
Imgenes histolgicas de tejido heptico de un potro con fibrosis heptica congnita. Nota del porto-portal fibrosis en puente marcado y las
abundantes conductillos biliares dilatados rodeados de algunas clulas inflamatorias en el tejido fibrtico (H & E, 400x). (D) Imagen
histolgica de tejido heptico de un potro no afectado. Tenga en cuenta los pequeos conductos biliares en las reas del portal y la
ausencia de fibrosis (H & E 400x).doi: 10.1371 / journal.pone.0110125.g001
protenas
Figura 2. Pedigree de cinco caballos Franches-Montagnes con fibrosis heptica congnita. Los hombres estn representados por los
cuadrados, las hembras de los crculos. Los animales afectados se muestran con smbolos negros llenos, el ao de nacimiento se muestra
para todos los animales, y los nmeros de laboratorio FM se dan para animales de los que se dispona de ADN. El defecto gentico
causante fue probablemente transmite principalmente a la poblacin por el semental Elu naci en 1964. Todos los potros afectados son
endogmicos a este semental y le tanto como paterna y ancestro materno tener.
doi: 10.1371 / journal.pone.0110125.g002
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Figura 3. Asignacin de la fibrosis heptica congnita en el cromosoma 20, con 5 casos y 12 controles. (A) de Manhattan trama del estudio
de asociacin allica de todo el genoma (GWAS). (B) Detalle de la regin asociada. Un nico SNP en la posicin 49643575 super el
umbral de significacin de todo el genoma. (C) la cartografa Homocigtica. Las barras azules representan regiones homocigotos con
alelos compartidos en los 5 potros afectados. El comn idntica por segmento de descenso entre los 5 animales afectados delinea un
intervalo crtico desde Chr20: 49,164,218-50,115,936. doi: 10.1371 / journal.pone.0110125.g003
Tabla de variantes 1. No sinnimo en el intervalo crtico con respecto al conjunto de referencia EquCab 2 de un
caballo Franches-Montagnes afectado.
Position on chr.
20
Reference
allele
Variant allele
Gene
Variant (cDNA)
Variant (protein)
49,398,500
PKHD1
c.10796G.A
p.R3599H
49,398,692
PKHD1
c.10604T.G
p.L3535R
49,597,760
PKHD1
c.6845T.A
p.I2282N
49,630,834
PKHD1
c.6112C.T
p.H2038Y
49,630,951
PKHD1
c.5995A.G
p.K1999E
49,709,730
PKHD1
c.4462T.G
p.A1488S
49,709,928
PKHD1
c.4264G.A
p.D1422N
49,710,356
PKHD1
c.3836C.G
p.A1279G
49,710,359
PKHD1
c.3833G.A
p.R1278Q
49,710,363
PKHD1
c.3829T.C
p.S1277P
49,710,468
PKHD1
c.3724G.A
p.E1242K
49,740,355
PKHD1
c.1811G.A
p.R604Q
49,741,254
PKHD1
c.1670G.A
p.R557Q
49,766,468
PKHD1
c.317A.G
p.E106G
50,077,556
GC
EFHC1
50,077,559
GC
EFHC1
doi:10.1371/journal.pone.0110125.t001
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19
doi:10.1371/journal.pone.0110125.t002
1564
173
Affected Franches-Montagnes foals
$FranchesMontagnescontrols(5years)
1439
Total
This
was slaughtered
one
before
a horse
allyear
b This table summarizes a subset of horses
175
7 b
135
1304
217
250
1488
23
295
1
1a
30
142
1346
3
1a
35
259
CT
3
CC
Total
20
TT
AT
1
AA
19
intronic
g.49,552,834
C
T.
g.49,597,760A T.
c.6845T A.
PKHD1 variants.
2 strongly
associated
of
Table 2.
Genotypedistribution
TT
17
Discusin.
A pesar del mapeo exitoso del lugar geomtrico para fibrosis
heptica congnita en caballos de Franches-Montagnes para una
regin del contenido genmico un gene funcional plausible del
candidato no podramos identificar una variante de secuencia
perfectamente asociada.
Si el fenotipo en estos caballos es de hecho causado por un defecto
en el gen PKHD1, podra ser o bien una variante no sinnimo de
afectar directamente a la funcin de la protena o una variante
reguladora de la expresin de genes que afecta no codificante. Hemos
sistemticamente-ATED evala todas las variantes no sinnimas y
encontraron dos variantes fuertemente asociados, pero para estas dos
variantes encontramos raros caballos no afectados que tambin eran
homocigotos para estas variantes. Debido a la fuerte asociacin de la
variante c.6845T.A se utiliza actualmente en la seleccin asistida por
marcadores para las decisiones de cra. Aprox-madamente el 14% de
la poblacin actual Franches-Montagnes son heterocigotos para esta
variante y apareamientos entre animales heterocigotos estn
actualmente prohibidos. Tiene que ser advertido que no se conocen
todos los exones del gen PKHD1, pero evalu regiones por lo menos
todas transcritas que podramos identificar despus de un experimento
RNA-seq a partir de ARN de hgado.
Tambin tratamos de investigar sistemticamente todas las variantes
no codificantes en el intervalo crtico, que por supuesto es difcil
debido al tamao de la regin investigada y una imperfecta genoma
de referencia equina. Nuestros datos sostienen con mucha fuerza
contra una variante causal reguladora por dos razones: Por un lado, no
encontramos las variantes que eran ms fuertes asociados de las dos
variantes no sinnimas. Slo se encontr una variante intrnica con
fuerte asociacin, que tambin fue privado de la raza FranchesMontagnes. Sin embargo, esta variante era heterocigota en 2 de
nuestros casos, que eran homocigotos para tanto de las variantes no
sinnimas. Esto sugiere que esta variante intrnica se origin muy
recientemente por un evento de mutacin de la enfermedad haplotipo
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(DOCX)
Figura S2 Conservacin del residuo histidina en la posicin 2038 y el
residuo isoleucina en la posicin 2282 en la protena PKHD1.
(DOCX)
Agradecimientos
(TXT)
Tabla S1 Caballos utilizados para la secuenciacin del genoma.
(DOCX)
Tabla S2 genotipos de 64 variantes en el intervalo crtico, que eran
homocigotos variante en el genoma se-extingui de un potro afectado
Franches-Montagnes y, o bien de tipo salvaje homocigotos o
heterocigotos en las secuencias del genoma de 29-lun-tagnes
Franches no afectadas caballos y 18 caballos no afectado de otras
razas.
(XLSX)
(DOCX)
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