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Jose Julin Siachoque Jara

Tutor Inmunologa 2012-II


VI Semestre de Medicina

Parcial prctico 1. Generalidades


El recuento de leucocitos (WBC) es un dato de gran importancia en la medicina clnica. Una cifra
anmala puede ser indicativa de infeccin y se utiliza, por otra parte, para seguir el desarrollo de
algunas enfermedades tales como leucemias, linfomas y procesos alrgicos entre otras.
Valores normales de WBC
Neonato
Nio 1-3 aos
Nio 4-7 aos
Adulto

10-25 x 103/mL
8-15 x 103/mL
4.5-10 x 103/mL
4.5-10 x 103/mL

Leucograma normal
Poblacin celular
Neutrfilos (PMN)
Linfocitos (Linf)
Basfilos (Bas)
Eosinfilos (Eos)
Monocitos (Mon)

Porcentaje normal
50-70%
20-40%
0-2%
1-5%
2-8%

Formula blanca diferencial normal:


Edad
Neonato
15 das
1-3 meses
1-6 aos
7-12 aos
Adulto

PMN
40-80%
16-80%
20-40%
35-55%
50-70%
50-70%

Linf
24-40%
42-60%
50-75%
42-62%
20-50%
30-40%

Las cifras de poblaciones celulares pueden aumentar por:


Neutrfilos (PMN): Infecciones bacterianas
Linfocitos (L): Infecciones virales
Basfilos (Bas): Procesos alrgicos
Eosinfilos (Eos): Infecciones parasitarias
Monocitos (Mon): Aumentan por diversos procesos

Eos
2%
3%
2%
2%
2%
3%

Bas
2%
2%
2%
1%
1%
1%

Mon
6%
9%
5%
5%
5%
7%

Cmo producir un anticuerpo monoclonal?


Los animales (habitualmente ratones) se inmunizan con un antgeno. Una vez que los animales estn
produciendo una buena respuesta de anticuerpos, se extraen sus bazos y se prepara una suspensin celular
(tambin es posible utilizar clulas de ganglios linfticos). Estas clulas se fusionan con una lnea celular de
mieloma mediante la adicin de polietilenglicol (PEG), que favorece la fusin de las membranas. Slo una
pequea proporcin de clulas se fusionan con xito. Despus de la fusin, la mezcla clula se cultiva en un
medio que contiene HAT (hipoxantina, aminopterina y timidina). La aminopterina es una toxina potente que
bloquea una va metablica. Con clulas normales, se puede establecer un cortocircuito que soslaye esta va,
proporcionndoles los metabolitos intermediarios hipoxantina y timidina.
As, las clulas esplnicas pueden crecer en medio HAT; en cambio, las clulas del mieloma mueren en este
medio, debido a que padecen un defecto metablico que les impide utilizar la va de derivacin. Dicho
cultivo con medio HAT contiene clulas esplnicas normales, clulas mielomatosas y clulas fusionadas; las
clulas esplnicas mueren naturalmente en el cultivo al cabo de 1-2 semanas y las clulas mielomatosas
mueren por el HAT, pero las fusionadas sobreviven y crecen, ya que tienen la inmortalidad del mieloma y el
cortocircuito metablico de las clulas esplnicas.
Algunas clulas fusionadas tendrn tambin la capacidad productora de anticuerpos de las clulas
esplnicas. Los sobrenadantes de todos los pocillos con clulas de crecimiento son sometidos a prueba para
determinar si producen el anticuerpo deseado; si el resultado es positivo, los cultivos se clonan, es decir, se
siembran de modo que slo haya una clula en cada pocillo. Este es el comienzo de un clon de clulas
derivadas de un nico progenitor, que no muere y da lugar a la produccin de anticuerpos monoclonales.

PEG
Antgeno

Fusin

Cultivo en HAT
Clulas esplnicas
(resistentes a HAT)

Prueba para seleccionar cultivos productores


del anticuerpo deseado

Clon de cultivos productores de anticuerpos

Mieloma no secretor
(sensible a HAT)