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INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL
Escuela Nacional de Ciencias
Biolgicas
Departamento Microbiologa
Laboratorio de Fisiologa y Bioqumica Microbiana

6QV1

Autores:
Herrera Rodrguez juan Manuel
Garca Garca Citlalli Itzel
Lpez Bailn Luis Uriel
Equipo-3
20 - Septiembre - 2013

Prctica No. 2

Balance de fermentacin.

HIPTESIS.
Se conoce que 1 en el proceso de fermentacin, al realizar un balance de este, de manera
terica deberan obtenerse dos moles de CO 2 y dos moles de Etanol, por lo que si este
proceso se lleva a cabo de manera correcta, deben obtenerse valores cercanos a los tericos
y guardarse esa relacin de por cada mol de glucosa, dos moles de cada uno de los dos
productos.
OBJETIVO GENERALE.
Se llevara a cabo una fermentacin y el balance de esta en cuanto a los resultados
obtenidos.
OBJETIVOS PARTICULARES.

Realizar la determinacin de glucosa residual por medio del mtodo de DNS.


Realizar la determinacin de Etanol por el mtodo de Conway.
Realizar la determinacin de CO2 por su precipitacin a bicarbonato de bario.
Determinar el rendimiento de la fermentacin.

CLCULOS Y RESULTADOS.
Curva tipo de Etanol.
Tabla 1. Curva tipo de etanol por el mtodo de Conway.
g de
etanol
0

Absorbancia a 445
nm
1.264

500

1.126

1000
1500

0.876
0.682
1

2000

0.488

2500

0.331

Etanol formado durante la fermentacin.


Tabla 2. Lecturas de la determinacin de produccin de etanol durante la fermentacin, por
medio del mtodo de Conway.
Muestras
0.2 mL de muestra fermentada

Absorbancia a
445 nm
0.837

0.5 mL de muestra fermentada

0.329

1.0 mL de muestra control

1.204

Curva tipo de Glucosa.


Tabla 3. Curva tipo de glucosa por medio del mtodo de DNS.
g de
Glucosa
0
100
200
300
400
500

Absorbancia a
540 nm
0.144
0.338
0.536
0.735
0.958

Tabla 3.

Glucosa Residual.
Tabla 4. Lecturas de la determinacin de glucosa residual en la fermentacin, por el mtodo
de DNS.
Muestras
0.2 mL de sobrenadante diluido 1:
0.5 mL de sobrenadante diluido 1:
1.0 mL de sobrenadante testigo
diluido 1:

Absorbancia a
540 nm
0.011
0.197
0.009

Determinacin de CO2
Tabla 5. Determinacin de Bixido de Carbono durante la fermentacin por media la
precipitacin en Carbonato de Bario.

Peso en
gramos (g)
0.8283

Muestras
Papel Filtro
2

Papel Filtro + BaCO3


BaCO3 de
fermentacin
Papel Filtro Testigo
Papel Filtro + BaCO3
testigo

0.9752
0.1459
0.856

BaCO3 Testigo

0.916
0.06

Balance de Fermentacin.
Tabla 6. Valores del Balance de fermentacin.
Sustanc
ias

g/10
mL

Glucosa

158

Etanol

51.08

CO2

19.37

Moles x Mol Estado


%
Carbono
de Glucosa
de
P.O P.R
Carbono O/
mM
Recupera
Fermentad Oxidaci .
.
recupera R
do
a
n
do
0.8
6
77
1 mmol
1.1
0.3
59
1
1.26 mmol
2.52
-2 2 2.52
9
0.4
0.501
+
42
mmol
1.002
2
- 1 1.002

MANEJO DE DATOS
1.- Determinacin de CO2 en la fermentacin.
Se calculan los gramos de BaCO3 formados

gBaC O3 =( g de papel con BaC O3 ) ( g del papel )=0.97520.8283=0.1469 g de BaC O3


Para el control se hacen las mismas operaciones utilizando los datos correspondientes
Se determina el factor gravimtrico

F . G=

( PM C O2 ) ( 1 )
( PM sustancia buscada ) a
44
=
=
=0.223
197
( PM sustancia pesada ) b ( PM BaC O3 ) ( 1 )

Se calculan los mg de CO2 producidos

gC O2=( F . G. ) ( gBaC O3 )=( 0.223 )( 0.1469 ) =0.0328 g 32.8 mg


Para el control se hacen las mismas operaciones utilizando los datos correspondientes
Se hace la correccin de peso

( mgC O2 problema )( mgC O2 testigo )=32.813.4=19.4 mg

Se calculan los mM de CO2 producidos


3

44 mg 1mM
=
x=0.44 mM de C O2
19.5 mg
x
2.- Determinacin de etanol
Se calculan los g de etanol para el problema con alcuota de 0.5mL a partir de
la ecuacin de la recta

y=3.87 x 1 04 x +1.278 x=

|1.278|
0.3291.278
=
=2452 g 2.452 mg
4
3.87 x 1 0
3.87 x 1 04

Para el control y el problema con alcuota de 0.2mL se hacen las mismas operaciones
utilizando los datos correspondientes
Se hace la correccin de dilucin y alcuota

( 2.452 )

( 0.51 ) ( 10)=49.04 mg de etOH /10 mL

Para el control y el problema con alcuota de 0.2mL se hacen las mismas operaciones
utilizando los datos correspondientes

Se obtiene el promedio de los resultados de los problemas de 0.2 y 0.5 mL

56.95+ 49.04
=52.995 mg e tOH
2
Se hace la correccin con el control

mgEtOH problemamgEtOH Control=52.9951.91=51.085 mg etOH

Se calculan los mM de etanol obtenidos en la fermentacin

46 mg
1mM
=
x=1.11 mM
51.08 mg
x

3.- Determinacin de glucosa fermentada


Se calcula la glucosa inicial

M=

g
g=( M ) ( PM ) ( L )=( 2 )( 180 )( 1 )=360 g
( PM ) ( L )

1000 mL 360 g
=
x =0.18 g=180 mg
0.5 mL
x

Se calculan los g de glucosa para el problema con alcuota de 0.5mL a partir


de la ecuacin de la recta
4

y=2.025 x 1 0 x0.0653
x=

|+ 0.0653| 0.197+ 0.0653


=
=129 g=0.129 mg
2.025 x 103 2.025 x 1 03

Se hace la correccin de dilucin y alcuota

( 0.129 )

( 0.51 ) ( 10) ( 10)=25.8 mg/10 mL

Para el control y el problema con alcuota de 0.2mL se hacen las mismas operaciones
utilizando los datos correspondientes

Se realiza un promedio de los problemas con diferentes alcuotas

( 18.5+25.8 )
=22.15 mg/10 mL
2
Se corrige el valor del problema utilizando el valor del contro

mg de glucosa= problematestigo=22.150.36=21.79

Se calcula la glucosa fermentada

Glc fermentada=Glc inicialGlc residual=18021.79=158.21 mg

Se determinan los milimoles de glucosa fermentada

180 mg
1 mM
=
x=0.87 mM
158.21 mg
x

4. Balance de fermentacin
Se calculan los mM de productos por mM de glucosa fermentada

0.877 mM glucosa 1.1 mM etOH


=
x=1.26 mM etOH
1mM glucosa
xmM
Los mM de CO2 producidos por mM de glucosa fermentada se calcula de la misma forma
utilizando los datos respectivos
5

Se calcula el estado de oxidacin de los productos, tomndose H=-0.5 y O=+1 y


se multiplica por el numero de mM obtenidos por mM de glucosa fermentada

C H 3 CH 2 O H H (6 )(0.5 ) =3
= 2

O ( 1 ) ( 1 )=1

(2 )( 0.501 )=1.002
Se calcula el % de carbn recuperado y el ndice O/R

%C=

Carbonos de los productos 2 ( 1.27 ) +1 ( 0.5 )


=
=50.6
Carbonos del sustrato
6

O producto oxidado
1
=
=
=0.39
R producto reducido 2.54

GRFICAS.

Curva Tipo de Etanol


1.4
1.2

f(x) = - 0x + 1.28
R = 1

1
0.8
Absorbancia a 445nm 0.6
0.4
0.2
0
0

500

1000 1500 2000 2500 3000


g de Etanol

Grafica 1. Curva tipo de etanol por el mtodo de Conway

Curva Tipo de Gluosa


1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
Absorbancia a 540nm
0.4
0.3
0.2
0.1
0

f(x) = 0x - 0.03
R = 1

100

200

300

400

500

600

g de Glucosa

Grafica 2. Curva tipo de glucosa determinada por el mtodo del DNS

Discusin.

El presente experimento, tena como objetivo principal el realizar un ensayo de fermentacin


y a su vez hacer un anlisis de dicho proceso por medio de un balance de fermentacin. Por
ello comenzaremos con el anlisis de los resultados en base a los productos obtenidos
durante la fermentacin. Como se sabe 1, la fermentacin es un proceso anaerobio que lo
llevan a cabo diversos microorganismos, en donde se lleva a cabo una oxidacin parcial de
glucosa para la re-oxidacin del NADH a NAD +, obteniendo como productos CO2 y Etanol,
siendo el segundo de mayor importancia en la industria de bebidas alcohlicas y el primero
en la produccin de panes y quesos. Tericamente, se tiene que por cada mol de glucosa que
utiliza el microorganismo, Saccharomyces cerevisiae, deberan de producirse 2 moles de
etanol y dos de CO2, al hacer el balance de los datos, el etanol sobrepasa por poco a un 1 mol
y el CO2 no se aproxima a la unidad, al recordar cmo se obtuvieron estos datos, se tiene que
para la determinacin de Bixido de Carbono se hizo uso de un mtodo gravimtrico,
formando un precipitado, en donde uno de los factores que pudo haber modificado nuestros
datos fue; que al hacer los lavados del recipiente donde se realizo la reaccin de
precipitacin, no se llevaron de forma adecuada, o simplemente el recipiente tena una fuga,
provocando la salida del gas haciendo imposible una correcta cuantificacin y por
consecuencia se obtuvo un resultado en relacin a la glucosa y etanol muy bajo, por otro lado
el etanol siendo un compuesto voltil y tomando en cuenta que el procedimiento no se realiz
de manera rpida dicho compuesto pudo haber escapado, sin embargo, podemos mencionar
que los dos moles de cada producto, eran los esperados tericamente, pues en realidad la
levadura no puede trabajar al 100% y dar productos exactos en base al sustrato que
consume. Nosotros al tener ambos compuestos bajos, podemos agregar que 2, el pH ptimo
para que Saccharomyces cerevisiae se encuentre en un estado optimo, tiene que estar en un
medio acido con un pH que oscile entre los 4 y 5, por otro lado se hace necesario recordar; en
el vaso central para la determinacin de CO 2, se coloc NaOH, el cual pudo haberse
derramado sobre las levaduras generando un estadio de estrs afectando de manera negativa
su metabolismo. Por otro lado, haciendo referencia al balance de fermentacin y en especifico
el dato de carbono recuperado, (el cual nos da una idea de que tanto rendimiento hubo en el
proceso), se tiene un valor de 59%, dato que podramos considerarlo como bueno, debido a
que es la primera vez que este procedimiento se lleva a cabo y no hubo un control extremo
del proceso, otro dato en el balance esta el ndice de xido reduccin, en el cual se obtuvo un
valor lejano a 1, siendo de 0.34, dando un indicativo de una mayor cantidad de productos
oxidados que reducidos.

Conclusiones.

Saccharomyces cerevisiae tiene un mayor rendimiento a pH cidos.


Tericamente por un mol de glucosa consumida se producen dos de etanol y dos de
CO2, por lo que experimentalmente se debe mantener esta proporcin.
El balance de fermentacin nos da datos, como es el % de carbono recuperado que
indica el rendimiento de la fermentacin, as como el ndice de Oxido/Reduccin.
El mtodo de Conway para determinar etanol no es sencillo, por lo que hay vario
factores que afectan el resultado.
El mtodo de DNS es un mtodo muy sencillo para determinar azucares reductores, no
es especfico para glucosa.

Bibliografa.
8

[1] Jhon L. Ingraham, Catherine A. Ingraham. Introduccin a la microbiologa. Vol. 2. 1998,


Editorial Reverte. Pginas 735-738.
[2] Bernardo Sigifredo; M. Celeste Stroppiano Tutores: Ing. Romina A. Beltrn, Tca. Nadia Z.
Comba. Departamento de Qumica. Universidad Tecnolgica Nacional. Facultad Regional Villa
Mara, Av. Universidad 450. Villa Mara. Crdoba. Argentina 2 Grupo de Investigacin en
Simulacin para Ingeniera Qumica GISIQ F. R. Villa Mara de la UTN. Titulo Articulo: ANLISIS
COMPARATIVO DE LA INFLUENCIA DE FACTORES DE ESTRS EN LEVADURAS INDUSTRIALES Y
LEVADURAS DE PANIFICACIN. Pgina 2

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