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Transcripcin

Consiste en la sntesis de ARN tomando como molde ADN y signica el


paso de la informacin contenida en el ADN hacia el ARN.

Se puede considerar el primer paso en la transferencia de


informacin de un gen a un producto de un gen.

Estructura del gen y el mensajero


procariota

Introduccin a la transcripcin
Mediante secuenciacin, los cienDcos pueden esEmar el nmero de
genes de las diferentes especies (E. coli=3200, S. cerevisiae= 6300, D.
melanogaster= 13600).
Humanos? ~20000 genes.
Corte y empalme alternaEvo permiten que estos genes codiquen
para ~ 100000 protenas
Genes en eucariotas estn compuestos de secuencias llamadas
exones (codicantes) y secuencias llamadas intrones (no
codicantes)
En eucariotas, usualmente una fraccin pequea (~2%) del genoma
codica para protena. En procariotas hay una alta densidad de genes
por genoma.

En las bacterias la transcripcin y la traduccin Eenen lugar en el


citoplasma bacteriano y al mismo Eempo, son simultneas. Sin
embargo, en eucariotas la transcripcin Eene lugar en el ncleo y la
traduccin en el citoplasma.
En eucariotas, antes de que los RNA estn listos para ser
transportado al citoplasma para la traduccin, debe ser procesado
extensivamente lo que incluye la eleminacin de intrones y la
adicin de un casquete en el extremo 5 y una cola de mlEples
adeninas en el extremo 3
Un RNA completamente procesado llamado RNAm es el
intermediario en la sntesis de protena
Ambos procariotas y eucariotas Eenen otros Epos de RNA (ncRNA)
que nunca son traducidos, pero que llevan a cabo roles importantes
en la clula

Las interacciones de DNA y RNA se llevan a cabo especialmente
debido a complementariedad de bases y la unin de varias
protenas a siEos especcos del DNA o RNA

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Dogma Central de la Biologa Molecular

La informacin genEca contenida en el ADN se manEene mediante su


capacidad de replicacin. La informacin contenida en el ADN se expresa
dando lugar a protenas, mediante los procesos de transcripcin, paso por el
que la informacin se transere a una molcula de ARN mensajero (ARN-m) y,
mediante el proceso de la traduccin el mensaje transportado por el ARN-m se
traduce a protena.
Modicaciones del "Dogma Central de la Biologa Molecular"

Propiedades del RNA


-Una cadena, no doble hlice. Apareamiento intramolecular.

-Azcar ribosa (OH en el carbono 2) en vez de desoxiribosa

-Esqueleto azcar-fosfato en posiciones 5-3 del azcar como
DNA

-Uracilo en vez de Timina, se empareja con Adenina.

-Catalizador biolgico -> Ribozima. Molculas de RNA que
funcionan como enzimas

En una ciencia como la GenEca no debera emplearse la palabra "dogma" ya que


como se puede ver en muy poco Eempo el fundamento central de la Biologa
Molecular propuesto por Crick tuvo que ser modicado.

Diferencias entre DNA y RNA

Las molculas de RNA pueden ser divididas en


dos categoras


1. RNA mensajero (mRNA): conMene la informacin para sntesis
de protenas
2. RNA funcional

-RNA de transferencia (tRNA): responsables de llevar el aminocido (aa)


correcto al RNAm durante la traduccin
-RNA ribosmico (rRNA): Componente principal de los ribosomas que es
donde se lleva a cabo el ensamblaje de aa por el RNAm y RNAt
-RNA nuclear pequeo (snRNA): Procesamiento de transcritos de RNA en
eucariotas
-MicroRNA (miRNA): regulacin de produccin de protenas en eucariotas
-RNA de interferencia pequeo (siRNA) y piRNA: protegen la integridad de
genomas de plantas y animales
-RNA no codicante largos (ncRNA): Su funcin esta bajo invesEgacin

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TRANSCRIPCIN
Propiedades que hacen posible la sntesis
del transcrito de RNA

Nomenclatura
de las cadenas
en relacin a la
transcripcin

1. COMPLEMENTARIEDAD ENTRE BASES


A-U, C-G, G-C, T-A

2. UNIN DE PROTENAS ESPECIFICAS AL DNA (RNA
Polimerasa y otras protenas que actan como factores
de transcripcin).

Orientacin y nomenclatura de las cadenas en


relacin a la transcripcin

Qu cadena de la doble hlice es la


codificadora?

(5) CGCTATAGCG (3) cadena codificadora del DNA


(3) GCGATATCGC (5) cadena molde del DNA

(5) CGCUAUAGCG (3) transcrito de RNA

Depende de cada gen, no es un


propiedad del cromosoma.
Orientacin de la transcripcin

cadena codificadora del DNA


cadena molde del DNA

transcrito de RNA

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RNA polimerasa
Enzima compleja, no requiere primer
(cebador), no funciona la correccin de
errores
Procariotas: slo un tipo. Con mltiples
subunidades.
E. Coli :
factor sigma iniciacin + CORE
(holoenzima)
Eucariotas: 3 tipos
I -> rRNA
II -> mRNA
III -> tRNA, snRNA, rRNA 5S

PROCARIOTAS

APOENZIMA = 4 subunidades

RNA polimerasa
2 subunidades = ensamblan el enzima y
promueven interacciones
= acEvidad catalEca
= se une al DNA
= ensamblaje y regulacin expresin
= Se une a las regiones promotoras y posicional
a la holoenzima en el siEo de inicio

Holoenzima RNA polimerasa

PROCARIOTAS
En procariotas una sola polimerasa (RNA Polimerasa) se
encarga de transcribir el DNA en las diferentes clases de
RNA
ESTRUCTURA (E. coli)

Se compone de 5 subunidades: 2 subunidades idnEcas,


, , , ms subunidad factor sigma ().
El cofactor Eene la propiedad de disociarse del resto de
subunidades durante el proceso dejando el ncleo central
de la enzima al descubierto. ayuda a desdoblar el DNA.
HOLOENZIMA = 5 subunidades (con cofactor )
ACTIVA
APOENZIMA = 4 subunidades ( el cofactor disociado)
INACTIVA
E. coli y otras bacterias Eenen varios factores que
reconocen diferentes promotores

Etapas de la transcripcin
Iniciacin:
Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb) y regin -35 pb
Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70
pb)
Elongacin:
5->3
Enrollamiento aguas arriba (5) y desenrollamiento
aguas abajo (3) del DNA
Terminacin:
Dependiente del factor Rho
Independiente de Rho

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Iniciacin de la transcripcin en
procariotas
La RNA polimerasa se une a un siEo especca llamado promotor localizado
cerca del siEo de inicio de la transcripcin. El promotor es una importante
regin regulatoria del gen
La sntesis de un transcrito de RNA comienza en su extremo 5 y conEna
en direccin 5 a 3. El promotor se encuentra en la regin regulatoria 5.
Por convencin 5 se escribe a la izquierda y 3 a la derecha.

Iniciacin
La ARN polimerasa se une al ADN y separa las hebras
de ADN en colaboracin con otros cofactores
permitiendo, de esta manera, el acceso de la ARN
polimerasa al molde de ADN de cadena simple

La primera base transcrita se encuentra siempre en la misma posicin. El


promotor se dice que est ro arriba (upstream) del siEo de iniciacin y a la
derecha del siEo de iniciacin se le reere como ro abajo (downstream)

Por convencin, la primera base en ser trnascrita se conoce como +1.
Posiciones ro arriba son desiganadas en negaEvo (-) y ro abajo en posiEvo
(+)

Regiones promotoras para siete genes de E. coli


Regiones -35 y -10 (Pribnow)

Etapas de la transcripcin
Iniciacin:
Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb aguas arriba) y regin -35 pb

Regiones consenso
La holoenzima RNA polimerasa se une a los promotores y desdobla la doble helice de
DNA lo que permite la sntesis de una cadena de RNA
Note que la parte del gen que codica para protena usualmente comienza con
ATG, pero el siEo de iniciacin, donde la transcripcin comienza est usualmente
bastante arriba de esta secuencia.

Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70


pb)

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Etapas de la transcripcin
Iniciacin:
Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb) y regin -35 pb
Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70
pb)

Elongacin
La RNA polimerasa tiene la
capacidad de desenrollar y
volver a enrollar el DNA,
mantener las cadenas
separadas de DNA y el
producto de RNA, cataliza
la unin de nuevos
nucletidos y puede
reiniciar la sntesis de RNA
en caso de que se detenga

Elongacin:
5->3
Enrollamiento aguas arriba (5) y desenrollamiento
aguas abajo (3) del DNA
Terminacin:
Dependiente del factor Rho
Independiente de Rho

Terminacin: mecanismo
intrnseco -> DNA
Palndrome,
estructura tallo-bucle

La subunidad posiciona la RNA polimerasa


procarita para iniciar la transcripcin

Regin 3 no traducida de ~ 40 bases (3UTR)

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Separacin del promotor


Una vez sintetizado el primer enlace fosfodister, se
debe deshacer el complejo del promotor para que
quede limpio para volver a funcionar de nuevo.
Durante esta fase hay una tendencia a desprenderse
el transcrito inicial de ARN y producir transcritos
truncados, dando lugar a una iniciacin abortada,
comn tanto en procariotas como eucariotas. Una
vez que la cadena transcrita alcanza una longitud de
unos 23 nucletidos, el complejo ya no se desliza y
da lugar a la siguiente fase, la elongacin

Elongacin: sntesis de RNA que es complementaria a


la hebra molde de DNA y ocurre en direccin 5 a 3.
En este esquema las 5 subunidades de la RNA
polimerasa se representan como una elipse. La regin
de transcripcin acEva se conoce como burbuja de
transcripcin.
En este diagrama se muestra uno de dos mecanismos
de terminacin principales de E. coli y otras
bacterias: la terminacin intrnseca,en la cual el RNA
sinteEzado adquiere una conformacin cabeza de
aller que hace que la RNA polimerasa se desprenda
del DNA y se pare la transcripcin.
Otro mecanismo de terminacin es el dependiente del
factor rho.

Terminacin
La ARN polimerasa se mueve a lo largo del molde
sintetizando RNA hasta que encuentra una secuencia
terminadora. En este punto se deja de aadir nucletidos a
la cadena naciente de ARN liberando el producto completo
que se disocia del ADN.
The transcripEon of an individual gene conEnues beyond
the protein-encoding segment of the gene, creaEng a 3
untranslated region (3 UTR) at the end of the transcript.

RNAs with rho-dependent terminaEon signals do not have the string of


U residues at their 3 end and usually do not have hairpin loops. Instead,
they have a sequence of about 40 to 60 nucleoEdes that is rich in C
residues and poor in G residues and includes an upstream segment
called the rut (rho u2liza2on) site.

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Transcripcin Eucariotas
RNA Polimerasa en Eucariotas

A diferencia de procariotas donde solo hay una RNA


polimerasa que cataliza la sntesis de todos los Mpos de
RNA, en eucariotas existen tres Mpos de RNA
polimerasa.
La I, la II y la III
RNA polimerasa I, 13 subunidades. Se localiza en el
ncleo y en el nucleolo. -> Sntesis de rARN 45S.
RNA polimerasa II, 12 subunidades. Se localiza en el
nucleoplasma. -> Sntesis de RNAm y microARN.
RNA polimerasa III, 17 subunidades. Se localiza en el
nucleoplasma. -> Sntesis rRNA 5S y tRNA.