Manual Microbiología (Recuperado)

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO EN MICROBIOLOGA
INSTITUTO DE EDUCACIN
SUPERIOR TECNOLGICO
RO SANTA
PBLICO
SEMESTRE ACADMICO: III.

DOCENTE: Luis Alberto Aznarn Caballero.
ESPECIALIDAD: Laboratorio Clnico.
ALUMNO: Quiones Acua Cesar
TEMA: manual de practicas de microbiologia
SANTA PER
2014
VISIN:
MISIN:
Ser modelo de imnovacin

tecnolgica y acadmica.
Formamos Profesionales Tcnicos competentes,

generadores de nuevos conocimientose
involucrados en mejor la calidad de vida.
DEDICATORIA
Este manual est dedicado a mis

padres y a mi nico hermano ya que
me brindaron la oportunidad de seguir
continuando con mis estudios superior
por eso dicho
PRESENTACIN:
Este manual ha sido elaborado en forma simple, didctica y eminentemente
prctica para que su contenido sea fcil de entender.
En este manual nos referimos a las tcnicas bsicas empleadas en el rea de
hematologa partiendo de la toma de muestra hasta la realizacin de las
pruebas respectivas.
Esperamos que este manual constituya una herramienta de consulta y gua
para el personal de laboratorio en general.
Nos referimos a los medios de cultivos :
Agar sangre -.se usa para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos
patgenos.
Muller hinton.-recomendado universalmente para la realizacin de la prueba de
sensibilidad a los antimicrobianos.
Mac conkey.-especfico para bacterias gram negativas y cepas que fermentan
lactosa.
AGRADECIMIENTO:
Agradezco adis por la energa que me

brinda cada da para seguir esforzndome en
mi carrera profesional, como tambin
agradezco al profesor lus aznaran
caballero por todas las enseanzas que nos
brinda en cada clase.
PRCTICA N 01: AGAR MULLER HINTON

1. OBJETIVOS:
4

Esta prctica nuestro principal objetivo es realizar la preparacin del medio de
cultivo Agar Muller Hinton.
Tambin conocer los insumos y materiales para la preparacin del medio de cultivo.
2. INTRODUCCIN:
El agar Muller Hinton es un medio para realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana

mediante el mtodo de difusin en disco.
La composicin del medio Muller Hinton permite el crecimiento de las bacterias no
exigentes (entero bacterias, bacilos Gram-negativos no fermentadores,
staphylococos y entero cocos) encontrados en patologa humana, mientras que garantiza
mnimas interferencias entre los componentes del medio y el resultado de la prueba de
susceptibilidad antimicrobiana.
La concentracin de iones divalentes en el
ajustada para asegurar una determinacin ms
sensibilidad de Pseudomonas frente a los
a las tetracilinas.
medio est
exacta de la
aminoglicsidos y
La baja concentracin de timina - timidina

sulfonamidas) restringe el crecimiento alrededor
permitiendo una medida ms exacta de las
(inhibidores de
de los discos,
zonas de inhibicin
3. MATERIALES:
Bagueta.
Probeta.
Agar Muller Hinton.
Placas Petri.
Botellas de vidrio.
Papel.
REACTIVOS:
Agua destilada.
EQUIPOS:
Balanza.
Estufa.
Cocina.
Autoclave.
4. PROCEDIMIENTOS:
1. Preparacin: 38 gr. De Agar

agua destilada.
2. Pesamos en la balanza 38 gr. De
5
Muller Hinton 1.000 ml. De

Agar Muller Hinton.

3. Mezclamos el Agar Muller Hinton con el agua destilada y disolvemos con ayuda de
la bagueta.
4. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y dejamos hervir
durante 1 minuto.
5. Vaciamos la solucin en las botellas de vidrio esterilizadas, y las colocamos en la
autoclave a 120C por 20 para esterilizar el Agar.
6. Dejamos enfriar y transcurrido unos minutos vaciamos el Agar Muller Hinton en las
placas Petri estriles.
7. Guardamos en la estufa por 24 h. colocamos las placas Petri bocabajo para k la
solucin no transpire y obtener un mej or calidad de la muestra.
5. CONCLUSIONES:
La realizacin de los pasos para la preparacin del medio de cultivo fue sencilla.
Pude reconocer los materiales para la preparacin
6. ANEXOS:
AGAR SANGRE
1. OBJETIVOS:
Realizar la prctica siguiendo todos los pasos de forma adecuada para evitar
inconvenientes.
Preparar el Agar Sangre como medio de cultivo.
Saber el uso adecuado de los materiales.
2. INTRODUCCIN:
Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la investigacin de los diversos tipos
de hemlisis (, o gamma). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Para la
preparacin del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro
sdico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de
soja. La adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que estn
en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores del crecimiento
bacteriano presentes en el suero.
7

Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los
eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles. La
sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%,
pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo,
humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o contienen determinados factores de
enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados
grmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de
adicionarla al medio base.
Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar
chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos
y meningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de los
medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de crecimiento no
contenidas en la sangre.
3. MATERIALES:
Bagueta.
Medio base (Agar Muller Hinton).
Balanza.
Placas Petri.
Botellas de vidrio esterilizadas.
Jeringa.
Ligadura.
Algodn.
Alcohol.
REACTIVOS:
Agua destilada.
EQUIPOS:
Balanza.
Estufa.
Cocina.
Autoclave.
MATERIAL BIOLGICO:
Sangre.
4. PROCEDIMIENTOS:
1. Utilizamos como medio base Agar Muller Hinton.
2. Obtenemos la muestra biolgica y la mezclamos con el medio base (Agar Muller
Hinton).
8

3. Luego vaciamos en las placas Petri estriles y dejamos enfriar por unos minutos.
4. Llevamos a la estufa por 24 h. y las colocamos bocabajo para evitar la transpiracin
del medio y obtener una mejor calidad de la muestra.
5. CONCLUSIONES:
La preparacin de este medio resulto ms fcil ya que tenamos el medio base

(Agar Mueller Hinton), para poder preparar el agar sangre.
El agar sangre se utiliza para el cultivo de bacterias y tambin para poder
reconocer los tipos de hemolisis.
6. ANEXOS:
PRCTICA N02:
UROCULTIVO
FUNDAMENTO:
9

El urocultivo se basa en la identificacin del nmero y de los tipos de bacterias
presentes en la orina.
Es necesario que el mtodo (recogida) sea el adecuado siguiendo unos protocolos de
higiene evitando s posibles contaminaciones de la muestra.
OBJETIVOS:
o Realizar el urocultivo para determinarlos diferentes tipos de microorganismos en la
muestra de orina.
o Realizar las diferentes pruebas para el diagnos tico y tratamiento de l posible
enfermedad o infeccin urinaria.
MATERIALES:
Agar muller hinton.

Agar mac conkey.
Asa bacteriolgica.
Mechero.
Placas petri.
MUESTRA BIOLGICA:
Orina asptica.
EQUIPOS:
Estufa.
PROCEDIMIENTO:
1. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo con ayuda del mechero, luego enfriamos.
2. Tomamos usa asada de orina.
3. Con el asa colocamos 4 gotas de orina y sembramos en estras en las placas petri con
agar muller hinton.
4. En la placa con agar Mac Conkey solo sembramos la orina en la cuarta parte de la
placa, para luego identificar si se degrado la lactosa.
5. Colocamos en la estufa por 24 hrs. a 37 C temperatura ptima para crecimiento
microbiano.
10
CONCLUSIONES:
La practica resulto fcil ya que pude realizar el procedimiento de manera sencilla.
Se realizo el sembrado con la muestra de orina patolgica en el agar Muller Hinton
para la identificacin de las bacterias.
ANEXOS:
RECUENTO DE COLONIAS
INTRODUCCIN:
El recuento de colonias se realiza para saber la cantidad de colonias que hay en la
muestra, ya que puede estar produciendo infeccin.
Estudios cuantitativos, indican que los recuentos de unidades formadoras de colonias
por mililitro(UFC/ml) a partir de las muestras de orina, son mayores cuando las
bacterias estan produciendo ITU (Infeccin del Tracto Urinario) cuando se trata de
colonizantes o contaminantes de la zona periuretral arrastrados por la orina.
MATERIALES:
Placa petri con cultivo de orina .
Marcador.
Regla.
11
PROCEDIMIENTO:
Recuento de colonias:
1. Sacamos los urocultivos de la estufa, y con ayuda de una regla dividimos la placa
petri en cuatro partes iguales.
2. Contamos el numero de colonias, solo de la cuarta parte de la placa petri .
3. Luego obtenido el nmero de colonias, mltiplicamos por 4 y luego por 1000.
4. El resultdo de dicha operacin si es mayor a 100,000 UFC/ml se trataria de una
ITU (infeccin del tracto urinario).
Germen aislado:
1. Identificamos si las bacterias viraron el indicador rojo de fenol en el Agar Mac
Conkey.
2. si encontramos en el cultivo de orina colonias rojas o rosadas diriamos que son
bacterias degradadoras de lactosa (LACTOSA POSITIVO), y si encontramos colonias
incoloras, se tratara de bacterias no degradadoras de lactosa (LACTOSA POSITIVO).
CONCLUSIONES:
En la mayora de urocultivos se encontro una mayor cantidad de 100.000
unidades formadoras de colonias, entonces se tratara de una infeccin.
ANEXOS:
RECUENTO
AISLADO.
12
DE BACTERIAS.
GERMEN
ANTIBIOGRAMA
INTRODUCCIN:
El antibiograma es una prueba de rutina en clnica para determinar el tratamiento ms
efectivo frente a una infeccin bacteriana.
Esta prueba consiste en hacer crecer la bacteria de manera homognea sobre un medio de
cultivo slido en una placa de Petri y depositar unos discos impregnados con distintos
antibiticos. Se incuba la placa. Las bacterias crecern all donde no haya difundido un
antibitico que no inhiba su crecimiento; por tanto, alrededor de los discos de antibitico se
formar un halo de medio en el que no han crecido las bacterias. El dimetro del halo
depende de la capacidad del antibitico de inhibir el crecimiento bacteriano y de la difusin
del mismo en el medio de cultivo.
El antibitico difunde en el medio desde el disco en todas direcciones; por lo que, cuanto
ms cerca del disco, mayor concentracin de antibitico y cuanto ms alejado, la
concentracin ser menor. La bacteria crecer en la placa, excepto en los lugares donde sea
crtica la concentracin un antibitico al que es sensible.
Por tanto, alrededor de los discos de antibitico, se puede observar un halo en el que no hay
crecimiento bacteriano, siendo este mayor cuanto ms efectivo sea el antibitico.
Segn el tipo de bacteria que se siembre, Gram + o Gram -, los antibiticos a los que se
enfrenta el cultivo en el antibiograma son unos u otros.
MATERIALES:
13
Tubos.
Gradilla.
Mechero.
Algodn.
Hisopos.
Pinza.
Placas petri con agar Muller
Hinton.
Regla.
REACTIVOS:
Agua destilada.
EQUIPOS:
Autoclave.
Estufa.
PROCEDIMIENTO:
1. Con la pipeta medimos 2ml. De
H2O destilda y
agregamos a los tubos.
2. Luego colocamos a cada tubo un tapn de algodn.
3. Se lleva a esterilizar al autoclave a 125 C por 20 minutos.
4. Prendemos el mechero, flameamos la pinza y luego sacamos un hisopo del frasco con
la pinza.
5. Con el hisopo sacamos una colonia de la placa.
6. Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el
hisopo con la colonia.
7. Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de agua.
8. Sembramos con el hisopo en la placa de agar muller hinton con el mtodo de difusina
, teniendo en cuenta que no quede ningn espacio dentro de la placa.
9. Esperamos 5minutos para colocar los discos de sensibilidad.
10.
Transcurridos los 5 minutos colocamos los discos (en este caso 4 discos de
sensibilidad) y despues colocamos la placa invertida dentro de la estufa por 24 Hrs. a
37 C.
11.
Transcurrido el tiempo, procederemos a la lectura.
CUADRO DE SUSCEPTIBILIDAD:
14
GENTAMICINA
CIPROFLOXACI
NO
ACIDO
NALIDIXICO
NOROXIN
RESISTENTE
(R)
12
14
LIGERAMENTE
SENSIBLE(Ls)
15-16
SENSIBLE (S)
12
13-16
17
14
15-16
17
13
17
LECTURA DEL ANTIBIOGRAMA:

PROCEDIMIENTO DE LA LECTURA:
1. Sacamos las placas de la estufa para realizar la lectura.
2. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin.
3. Comparamos las medidas con el cuadro de susceptibilidad y de acuerdo a los
valores emitimos un resultado.
GENTAMICINA
CIPROFLOXACI
NO
AC.
NALIDIXICO
NOROXIN
Ls
11
17
-
INTERPRETACIN:
Con respecto al antibiograma, resulto sensible (17ml), la gentamicina y los demas

resultados salieron resistentes por lo tanto el paciente recibira un tratatimiento a base de
gentamicina ya que es el unico resultado que salio sensible.
15
ANEXOS:
16
PRCTICA N 03: CULTIVO DE SECRECIN FARINGEA
I.
INTRODUCCIN:
Es una prueba de laboratorio que se hace para identificar microorganismos que
pueden causar una infeccin en la garganta. Casi siempre se utiliza para diagnosticar
faringitis estreptoccica.
El exudado farngeo es la toma de muestra que se realiza en el fondo de la garganta
(en las amgdalas, generalmente), mediante el uso de un hisopo estril. Sirve como
herramienta de diagnstico de padecimientos de origen bacteriano.
El hisopo se introduce y se dan vueltas sobre la muestra a fin de que todo ste quede
impregnado. Se prosigue a sembrar en medios de cultivo, tomando como los ms
nutritivos agar sangre y agar chocolate, se pueden usar tambin el Agar Mac
Conkey, entre otros. Despus se procede a incubar a 37C y observar resultados en
48 horas.
II.
MATERIALES:
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Hisopos estriles.
Baja lenguas.
Frasco de vidrio (co2).
Vela.
Algodn.
Mechero.
Asa bacteriolgica.
Caldo de BHI.
Placas Petri con agar sangre.
EQUIPOS:
o Estufa.
MUESTRA BIOLGICA:
o Secrecin farngea.
III.
PROCEDIMIENTO:
17
1. Recoleccin de la muestra:
Le pedimos al paciente que abra la boca, colocamos el baja lenguas, e introducimos
el hisopo y sacamos la muestra de secrecin farngea.
2. Luego introducimos el hisopo en el tubo con caldo de BHI, frotamos en las
paredes del tubo para que la muestra se quede dentro del tubo.
3. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, enfriamos. Flameamos el tubo con
caldo de BHI.
4. Introducimos el asa bacteriolgica y tomamos una asada de caldo de BHI, luego
sembramos en estras en la placa Petri con agar sangre.
5. Colocamos las placa Petri con agar sangre en forma invertida dentro del frasco
de vidrio, con el algodn embebido en agua e introducimos la vela y la
prendemos (as creamos un ambiente de co2), tapamos el frasco.
6. Incubamos el frasco dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.
AISLAR COLONIAS:
1. Prendemos el mechero, calentamos la punta bacteriolgica al rojo vivo y

enfriamos.
2. Aislamos la colonia que se desea estudiar.
3. Sembramos en forma de estras dentro de la placa con agar sangre.
4. Colocamos las placa Petri con agar sangre en forma invertida dentro del frasco
de vidrio, con el algodn embebido en agua e introducimos la vela y la
prendemos (as creamos un ambiente de co2), tapamos el frasco.
IV.
CONCLUSIONES:
o El examen de secrecin farngea se utiliza para identificar a los microorganismos
que pueden causar una posible infeccin.
V.
ANEXOS:
18
ANTIBIOGRAMA
I.
INTRODUCCIN:
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la

susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos.
Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para
estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables
de las infecciones.
19

Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al
menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de
utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o
semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia moderna
de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos
microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilizacin de
antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que
padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un aumento en los niveles de
resistencia antibitica.
II.
MATERIALES:
o Tubos de vidrio con agua destilada
o
o
o
o
o
o
o
estril.
Algodn.
Placas Petri con agar Mller Hinton.
Hisopos estriles.
Mechero.
Pinza.
Discos de sensibilidad.
Pipeta.
EQUIPOS:
o Estufa.
III.
PROCEDIMIENTO:
12.
Con la pipeta medimos 2ml. De H2O2 y agregamos a los tubos.
13.
Luego colocamos a cada tubo un tapn de algodn.
14.
Se lleva a esterilizar al autoclave a 125 C por 20 minutos.
15.
Prendemos el mechero, flameamos la pinza y luego sacamos un hisopo del
frasco con la pinza.
16.
Con el hisopo sacamos una colonia de la placa.
17.
Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el
18.
Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de gua.
19.
Sembramos con el hisopo en la placa de agar muller hinton de manera pareja ,
teniendo en cuenta que no quede ningn espacio en blanco dentro de la placa.
20.
Esperamos 5 para colocar los discos de sensibilidad.
21.
Transcurridos los 5 colocamos los discos (en este caso 4 discos de sensibilidad)
y despues colocamos la placa dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.
20

22.
Despues realizamos la lectura.
PENICILINA
AMPICILINA
CEFALEXINA
AMOXICILINA/
AC.
CLAVULANICO.
RESISTENTE
(R)
13
13
13
13
LIGERAMENTE
SENSIBLE(Ls)
14-16
14-16
14-16
14-16
SENSIBLE (S)
17
17
17
17

5. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin del
antibiograma en el cultivo de secrecin faringea.
PENICILINA
AMPICILINA
CEFALEXINA
AMOXICILINA/
AC.
CLAVULANICO.
21
RESISTENTE
(R)
-
LIGERAMENTE
SENSIBLE(Ls)
-
SENSIBLE (S)
22
20

INTERPRETACIN:
con respecto al antibiograma podemos decir que la paciente deyanira morales recibira
tratamiento a dichos medicamentos (ampicilina y amoxicilina), ya que los demas
medicamentos salieron resistentes.
IV.
CONCLUSIONES:
Esta prueba microbiolgica se realiza para ver la susceptibilidad de la bacteria a

distintos tipos de antibiticos, y tambin para iniciar un tratamiento al paciente que
presenta una infeccin en la garganta.
V.
22
ANEXOS:
PRCTICA N 04:GLUCOSURIA
I.
INTRODUCCIN:
Se llama glucosuria a la presencia de glucosa en la orina a niveles elevados. La glucosa se
reabsorbe en su totalidad a nivel de las nefronas, las unidades funcionales del rin donde
se produce la depuracin de la sangre. La glucosuria renal es la consecuencia de un defecto
hereditario de reabsorcin de glucosa en el tbulo renal, y viene definida por los siguientes
criterios: glucosuria constante, glucemia normal, utilizacin normal de hidratos de carbono y
ausencia de otras anomalas tubulares.
FUNDAMENTO:
La glucosa es una sustancia reductora y por lo tanto al agregarle el reactivo

de Benedict oxida al sulfato cprico a oxido cprico.
II.
MATERIALES:
gotero
rejilla
vaso de precipitacin
pipeta.
Tubos de vidrio
EQUIPOS:
Cocina.
MUESTRA BIOLGICO:
Orina.
23
REACTIVOS:
Reactivo de Benedict.
III.
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de vidrio agregamos con ayuda de la pipeta medimos 1.25 ml del
reactivo de Benedict y 2 gotas de orina.
2. Mezclamos completamente.
3. Colocamos el tubo de vidrio dentro del vaso de precipitacin y lo llevamos a la
cocina.
4. Hervimos durante 2 minutos.
5. Dejamos enfriar a temperatura ambiente.
6. Examinamos la muestra y observamos si hay viraje de color.
LECTURA:
COLOR
Azul
Verde
Verde con
amarillo
Desde amarillo
hasta verde
oscuro
Castao
Rojo
RESULTADO
CONCENTRAC
IN Mmol/L
Negativo
Huellas
+
0
14
28
++
56
+++
++++
83
III o ms
RESULTADO
CONCENTRCIN
REPORTE:
COLOR
24

DE Mmol/L
CASTAO
+++
83
IV. CONCLUSIONES:
En el primer tubo no hubo un viraje de color ya que no se encontr glucosa en la
muestra de orina.
En el segundo tubo viro de color ya que hubo presencia de glucosa en la orina.

V. ANEXOS:
25
PRCTICA N 04:PROTEINURIA
I.
INTRODUCCIN:
26

La proteinuria es la presencia de protenas en la orina en cantidad superior a 300 mg en
la orina de 24 horas, esta puede ser transitoria, permanente, ortosttica, monoclonal o de
sobrecarga. La proteinuria en pequeas cantidades (30 a 300) suele estar casi siempre a
expensas de la albumina denominndose micro albuminuria, dato que adquiere un
especial inters en la patologa diabtica.
II.
MATERIALES:
o Tubos de vidrio.
o Gotero.
o Gradilla.
MUESTRA BIOLGICA:
o Orina.
EQUIPOS:
o Centrfuga.
REACTIVOS:
o cido sulfosaliclico al 3 %.
III.
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo agregamos la orina patolgica y colocamos a centrifugar a 3500 RPM
durante 5 minutos.
2. Luego en un tubo de vidrio agregamos 1 gota del sobrenadante + 3 gotas del cido
sulfosaliclico al 3%.
3. Y procedemos con la lectura.
LECTURA:
TRAZAS
1+
2 ++
3 +++
27
LIGERAMENTE TURBIO
POCO TURBIO
TURBIO
FRAGMENTADO
REPORTE:
TURBIDEZ
3 +++
IV. CONCLUSIONES:
En el primer tubo no presento cambio de aspecto ya que la orina no contiene
protenas.
El segundo tubo cambio de aspecto, ya que present turbidez 3 +++ y por lo
tanto la orina tiene protenas esto debido a un problema de riones que se
localiza en la unidad funcional del rin que es la nefrona.
II
V. ANEXOS:
28
PRCTICA N 05:EXAMEN DE SECRECIN

VAGINAL
I. INTRODUCCIN:
Las pruebas diagnsticas de Vaginosis Bacteriana se dividen en dos categoras a
saber; criterio clnico (de Amsel) y criterio basado en laboratorio (de Nugent). En
ambos casos se requiere de la toma muestra de secrecin vaginal con un hisopo
estril.
La VB categorizada por los criterios de Amsel incluye cuatro caractersticas, de las
cuales al menos tres parmetros deben estar presentes para poder hacer el
diagnstico:
29

1) Descarga transvaginal lechosa de color grisceo o amarillento.
2) PH vaginal de ms de 4.5.
3) Prueba de aminas positiva (cuando se le agrega una solucin alcalina - KOH al 10%
a la secrecin vaginal, esta emite un olor ftido similar al que produce el pescado).
4) Presencia de grupos de clulas de descamacin, llamadas clulas clave.
II. MATERIALES:
Tubo de vidrio.
Lmina portaobjeto.
Laminilla cubreobjetos.
Gotero.
Hisopos.
Gradilla.
REACTIVOS:
Cloruro de sodio.
KOH al 10 %.
MUESTRA BIOLGICA:
Secrecin vaginal.
III. PROCEDIMIENTO:
TOMA DE MUESTRA:
1. Con la paciente en posicin ginecolgica, procedemos a tomar la muestra de secrecin
vaginal con ayuda del hisopo estril.
2. Una vez tomada la muestra con el hisopo, lo colocamos dentro del tubo de vidrio con
cloruro de sodio para evitar que la muestra se deseque.
3. Luego transportamos la muestra de secrecin vaginal de inmediato al laboratorio para su
respectivo anlisis.
TEST DE AMINAS:
1. En un extremo de la lmina portaobjeto agregamos una gota de la muestra de secrecin
vaginal con cloruro de sodio.
2. En el otro extremo de la lmina agregamos una gota de la muestra + 1 gota de KOH al
10 %.
30

3. Y procedemos a identificar si hubo cambio de olor pescado (POSITIVO) en la muestra
con KOH al 10 %.
4. Luego llevamos al microscopio: primero enfocamos con el objetivo de 10x y para hacer
la lectura con el objetivo de 40x.
REPORTE:
TEST DE AMINAS: positivo.
LECTURA MICROSCOPICA:
TRICHOMO
NAS
0
LACTOBACILLUS
GARDNERELLA
MOBILUNCUS
LEVADURAS
0
CELULAS
CLAVE
20 %
xC
36
46
2-5
PUNTAJE TOTAL
AMINAS
(+)
PUNTAJE
3
2
2
7
IV. CONCLUSIONES:
En el test de aminas el examen de secrecin dio positivo, ya que al agregarle KOH al 10%
hubo liberacin de enzimas: putrecina y cadaverina.
Para el diagnstico de Vaginosis Bacteriana se utilizan dos criterios clnicos de Amsel y de
Nugent.
31
V. ANEXOS:
32
CULTIVO
DE SECRECIN
VAGINAL
I.
INTRODUCCIN:
La secrecin vaginal es un trmino dado a los lquidos biolgicos contenidos en

o fuera de la vagina.
S bien algunos tipos de secreciones son normales y reflejan las diferentes
etapas del ciclo de una mujer, algunas pueden ser un resultado de infecciones,
como las enfermedades de transmisin sexual.
La vagina tiene su propio ecosistema con un balance de la flora bacteriana
presente, cuando el ecosistema se altera puede aparecer la vaginitis por
diferentes causas como uso de antibiticos, hormonas, preparaciones orales o
tpicas de contraceptivos, duchas vaginales, medicamentos vaginales,
enfermedades de transmisin sexual, cambios de pareja y situaciones de estrs.
Los cambios en el pH y la disminucin de los lactobacilos productores de
perxido de hidrogeno provocan la proliferacin de microorganismos que
normalmente estn reprimidos como G. Vaginalis, Mycoplasma Hominis Y
Mobiluncus Spp.
Estos microorganismos como productores de su metabolismo, liberan aminas
que son responsables del mal olor en la descarga vaginal, incremento del pH y
causa exfoliacin de clulas epiteliales.
II.
MATERIALES:
o
o
o
o
o
o
33
Hisopos estriles.
Mechero.
Asa bacteriolgica.
Caldo de BHI.
Placas Petri con agar sangre.
Tubos de vidrio.
EQUIPOS:
o Estufa.
III.
PROCEDIMIENTO:
1. Una vez tomada la muestra a la paciente con el hisopo, lo colocamos en el

tubo de vidrio con solucin salina.
2. Luego introducimos el hisopo en el tubo con caldo de BHI, frotamos en las
paredes del tubo para que la muestra se quede dentro del tubo.
3. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, enfriamos. Flameamos el tubo
con caldo de BHI.
4. Introducimos el asa bacteriolgica y tomamos una asada de caldo de BHI,
luego sembramos en estras en la placa Petri con Agar Sangre y Agar Mac
Conkey.
5. Colocamos la placa de agar sangre dentro de un frasco de vidrio con una vela
encendida y con un algodn embebido en agua.
IV.
CONCLUSIONES:
V.
34
Realizamos el cultivo de secrecin vaginal para el reconocimiento de

bacterias que pueden estar causando una infeccin.
ANEXOS:
ANTIBIOGRAMA
INTRODUCCIN:
I.
El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la

susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos.
Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para
35

estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables
de las infecciones.
Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al
menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de
utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o
semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural).
La historia moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias
presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La
utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las
personas que padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un aumento en
los niveles de resistencia antibitica.
II.
o
o
o
o
o
o
o
o
MATERIALES:
Tubos de vidrio con agua destilada estril.

Algodn.
Placas Petri con agar Mller Hinton.
Hisopos estriles.
Mechero.
Pinza.
Discos de sensibilidad.
Pipeta.
EQUIPOS:
o Estufa.
MUESTRA BIOLGICA:
III.
Secrecin vaginal.
PROCEDIMIENTO:
1. Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el

2. Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de gua.
3. Sembramos con el hisopo con el metodo de difusin en la placa de agar muller
hinton, teniendo en cuenta que no quede ningn espacio en blanco dentro de la
placa.
4. Esperamos 5 minutos para colocar los discos de sensibilidad.
5. Transcurridos los 5 minutos colocamos los discos (en este caso 4 discos de
sensibilidad) y despues colocamos la placa dentro de la estufa a 37 C por 24
horas.
6. Despues realizamos la lectura.
36

AMOXICILINA/
AC.
CLAVULANICO
AMIKIN
GENTAMICINA
CIPROFLOXACI
NO
RESISTENTE
(R)
13
LIGERAMENTE
SENSIBLE(Ls)
14-16
SENSIBLE (S)
13
13
13
14-16
14-16
14-16
17
17
17
17

8. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin del
antibiograma en el cultivo de secrecin faringea.
GENTAMICINA
CIPROFLOXACI
NO
AC.
37
Ls
24
27
10

NALIDIXICO
NOROXIN
23
INTERPRETACIN:
Con respecto al antibiograma podemos decir que la pacienta leslie diaz ramos recibira
tratamiento a dichos medicamentos (GENTAMICINA,AMIKINY CIPROFLOXACINA).
IV.
CONCLUSIONES:
Realizamos el antibiograma del cultivo de secrecin vaginal para ver la

resistencia microbiana.
Con el antibiograma podemos darle a la paciente su respectivo
tratamiento.
V.
38
ANEXOS:
39
AGAR TSI
INTRODUCCION:
El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de
los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:
1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no cido sulfhdrico.
4. Produzcan o no gas.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para
el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El
tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de
hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de
color negro.
MATERIALES:
Tubos
Mechero
Asa bacteriolgica
Gradilla
Placas Petri ( AGAR MLLER HINTON Y AGAR MAC CONKEY)
Equipos:
Estufa
MUESTRA BIOLGICA
Orina patolgica
40
PROCEDIMIENTO:
Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, y dejamos enfriar por unos segundos.
Tomamos una asada de orina y sembramos en forma de estras en (M.C) (.M.H)
Luego colocamos en la estufa las placas con agares (M.C) (M.H) a 37| c por 24 horas.
CONCLUSIONES:
Este agar nos permite el anlisis del control microbiano por lo cual vamos a ver los
cambios de oxidacin que se presenta.
ANEXOS:
CULTIVO TSI:
41
INTRODUCCION:
Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a

amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa,
el medio permanecer de color rojo.
Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie
volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar
de color rojo.
Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar
un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente
ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero
este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de
gas.
MATERIALES:
Tubos
Punta Bacteriolgica
Mechero
Placas Sembradas
Gradillas
Refrigeradora
Autoclave
Estufa
EQUIPOS:
REACTIVOS:
CITRATO SIMMUNS
PROCEDIMIENTO:
Pipeteamos los citratos y vertimos en los tubos y lo taponeamos.

Luego lo dejamos secar los citratos en una medida d 45.
Luego lo ponemos los citratos a la refrigeradora.
Luego aislamos una colonia de la placa AGAR MAC CONKEY.
42
Sembramos con la punta bacteriolgica en el tubo del TSI.

Y ya por ultimo lo llevamos los tubos de TSI a la estufa a 37C por 24 horas.
Conclusiones:
Realizamos este procedimiento con el fin de ver si ha virado los 3
azucares, lactosa glucosa sacarosa.
ANEXOS:
43
Lectura:
44

A/A
Por qu ha virado los tres azucares
Lactosa, sacarosa y glucosa
Citrato (-)
Porque no degrado el azul
De bromo timol de vade que
Azul Prusia.
CATALASA y COAGULOSA
Materiales:
Hisopo
Algodn
Tubo de ensayo
Placas Petri ( agar sangre )
45
Asa bacteriolgica
Muestra biolgica:
Acn
Asepsia
Procedimiento:
Reventamos el acn y extraemos la asepsia con un hisopo.

Lo vertimos en tubo de ensayo con caldo de BHI.
Lo ponemos en la estufa a 37 c por 24 horas.
Al da siguiente sembramos en la placa Petri de agar sangre
Colocamos ala estufa a 37 C por 24 horas.
Anexos:
PRUEBA DE CATALASA Y COAGULOSA

1 CATALASA
INTRODUCCIN:
La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que
cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. Esta enzima
utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.
46

Adems la catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido de
hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que
se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno
o MATERIALES:
Tubos de EDTA
Tubo de ensayo
Agua destilada
Lamina
Punta bacteriolgica
o EQUIPO:
Centrifuga
o MATERIAL BIOLOGICO:
Acn (Asepsia)
PROCEDIMIENTO:
Agregamos una gota de agua destilada a la lmina.

Aislamos una colonia de la placa sembrada de agar sangre.
Mesclamos la colonia con la gota de agua destilada de la lmina.
Si hay presencia de burbujas es por que presenta liberacin de oxgeno. (+)
LECTURA:
Anexos:
47
COAGULASA
INTRODUCCIN:
La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos que permite la
conversin del fibringeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre
diferentes tipos de Staphylococcus.
La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama
estafilotrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibringeno en fibrina. Esto
hace que se coagule la sangre. La coagulasa est estrechamente relacionada con la
superficie de la bacteria S. aureus y puede revestir su superficie con fibrina al entrar en
contacto con la sangre. Se cree que esta cubierta de fibrina del Staphylococcus es capaz de
resistir la fagocitosis haciendo esta bacteria tenga un factor de virulencia mayor. La
coagulasa Bound es parte de una familia ms grande de MSCRAMM.
48
MATERIALES:
Tubos de EDTA
Tubo de ensayo
Agua destilada
Punta bacteriolgica
EQUIPO:
Centrifuga
MATERIAL BIOLOGICO:
Sangre
Plasma
PROCEDIMIENTO:
Agregamos 2 gotas de agua destilada; mas 2 gotas de plasma.

Luego aislamos la colonia problema e introducimos al tubo.
Luego lo llevamos a la estufa a 37C por 24 horas.
Lectura:
Coagulasa (-) epidermidis.
Anexos:
49
Bibliografa:
http://es.wikipedia.org/wiki/Coagulasa
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa
https://www.google.com.pe/search?
q=cultivo+tsi&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ei=QTXIU_iMKoOsQSP0IGwCw&ved=0CD0QsAQ&biw=1366&bih=601#facrc=_&imgdii=_
http://www.britanialab.com/productos/332_hoja_tecnica_es.pdf
https://www.google.com.pe/?gws_rd=cr&ei=dkavUqGsL47SkQe2y4GoBg#q=epidermides
50
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