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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTONIO

GUILLERMO URRELO
FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
INGENIERIA AMBIENTAL Y PREVENCION
DE RIESGOS
INTEGRANTES:

CHUGDEN ROMERO, NARDA MIRELA


HERRERA TERAN, ELMER
VASQUEZ CABALERO, SAUL

D0CENTE:
Ing. FERNANDO KAMILO JOAKIN
CURSO:
GESTION Y MONITOREO DE LA CALIDAD DE AGUA
TEMA:
CROMATOGRAFIA IONICA DE NITRITOS

CICLO:
VII
GRUPO:
A

CAJAMARCA, JUNIO DEL 2015

I.

INTRODUCCION
En las ltimas dcadas, la cromatografa inica se ha convertido en uno de los
mtodos ms importantes para el anlisis de trazas de aniones y cationes. Tcnica
absolutamente imprescindible en el anlisis de aguas y medio ambiente; tcnica
basada en la separacin de sustancias por su diferente migracin en una columna
de intercambio inico o en una lmina impregnada con un intercambiador inico.
En la cromatografa de alta resolucin, la separacin de los iones tiene lugar
gracias al proceso de cambio inico entre la fase mvil y los grupos de cambio
enlazado covalentes a la fase estacionaria.

II.

OBJETIVOS
II.1.
OBJETIVO GRNERAL
Estudiar nitritos a travs de cromatografa inica
II.2.

III.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Conocer lo referente al mtodo estudiado: cromatografa inica.
Explicar cmo se emplea, realiza y desarrolla la cromatografa
inica en nitritos.

MARCO TEORICO
III.1.

CROMATOGRAFIA IONICA
La cromatografa inica es un mtodo cualitativo y cuantitativo basado en la
separacin de los diferentes iones que contiene una determinada disolucin
hacindolos pasar a travs de una columna intercambiadora de iones y
midiendo la seal recibida en los diferentes tiempos de respuestas
caractersticos de cada ion.
En la siguiente tabla se da una relacin general de los diferentes mtodos
cromatogrficos basada en la naturaleza de la fase mvil:
Clasificacin
general
Cromatografa
lquida
(LC)

Fase estacionaria

Fase mvil

Slido

lquido

resina cambiadora
Lquido

lquido
lquido

Cromatografa
gaseosa(GC)
Cromatografa de
fluidos
supercrticos
(SFC)

Lquido
Slido
slido-especies
orgnicas

gas
gas
fluido
supercrtico

Mecanismo de
separacin
adsorcin
exclusin
intercambio
inico
reparto
adsorcin
adsorcin
reparto

Mtodo fsico de separacin basado en la diferencia de distribucin de los


componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una mvil y otra
estacionaria. Las molculas de soluto de la mezcla son retenidas por la fase
estacionaria y arrastradas por la fase mvil, de manera que si los componentes
de la mezcla presentan diferentes afinidades por alguna de las fases, sus
velocidades medias de avance a lo largo del sistema sern diferentes. La
afinidad viene determinada por fuerzas de tipo Van der Waals, puentes de
hidrgeno o transferencia de carga. Los componentes que sean fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se movern ms lentamente a lo largo de
dicha fase que aquellos que se unen dbilmente. Como consecuencia de esta
diferencia de movilidad los componentes de la mezcla se separan en bandas
discretas, que pueden analizarse cualitativa o cuantitativamente mediante el
uso de los detectores adecuados.

III.1.1. Cromatografa inica clsica.


Esta cromatografa inica difiere de la actual en que el eluyente y la
muestra se introducen en la columna, en el tipo de columna y en el
empaquetamiento de la misma. La separacin requera largo tiempo y
se sola hacer impregnando primero la columna con un disolvente
adecuado, adicionando la muestra en la parte superior y aadiendo
finalmente el e1uyente que descendera por la columna por el efecto de
la gravedad, resultando el proceso en ocasiones muy lento o
inexistente.
III.1.2. Cromatografa inica moderna
La cromatografa inica actual es ms rpida y eficaz, lo que la hace
ms atractiva desde el punto de vista analtico. La mejora ha tenido
lugar en cuatro factores:

Mejores componentes cromatogrficos.


Columnas y resinas de intercambio ms eficientes.

III.2.

Muestras ms pequeas
Deteccin automtica de los iones separados en la muestra.

PARAMETROS
CROMATOGRAFICO

FUNDAMENTALES

DEL

PROCESO

III.2.1. Tiempo muerto, volumen muerto:


Es el tiempo necesario para eluir una sustancia no retenida desde el inyector
pasando por la columna hasta el detector. En el caso de volumen se trata del
volumen necesario para transportar un compuesto no retenido desde el
inyector hasta el detector.

V =F
V= volumen muerto
F = flujo = velocidad del eluyente
T = tiempo muerto
III.2.2. Coeficiente de reparto
Es la relacin entre la concentracin del compuesto en la fase mvil y
en la fase estacionaria.

K=C s /C m

K = coeficiente de reparto
Cs= concentracin del compuesto en la fase estacionaria
Cm = concentracin del compuesto en la fase mvil
III.2.3. Tiempo de retencin, volumen de retencin
El tiempo que transcurre desde la inyeccin hasta la deteccin del
compuesto retenido es lo que se llama tiempo bruto de retencin. El
tiempo de retencin neto se emplea para ver si un compuesto eluye con
respecto a un compuesto no retenido.

T R=T R T a
TR - tiempo de retencin neto
TR = tiempo de retencin bruto
Multiplicando los tiempos de retencin por el flujo se obtienen los
volmenes de retencin
VR'= VR - Va

VR'= volumen de retencin neto


VR = volumen de retencin bruto
III.2.4. Factor de capacidad
El tiempo de retencin y el volumen de retencin se puede expresar
relativamente con respecto al tiempo muerto o volumen muerto. El
factor de capacidad mide el nmero de volmenes muertos que deben
pasar por la columna para eluir el compuesto. Este independiente de la
longitud y del flujo de factor es la columna; depende del proceso de
separacin. En un sistema donde la columna y el eluyente son fijos, el
factor de capacidad es una caracterstica del compuesto.
k'= T R T0/T0= tR/t0
k'= VR -V0/V0 = VR/V0

Tambin se define el factor capacidad como la masa del componente


en la fase estacionaria partido por la masa del mismo en la fase mvil,
estando relacionado con el coeficiente de reparto:
k' = k x V s/Vm

Vs=volumen de la fase estacionaria


Vm= volumen de la fase mvil
El factor Vs/Vm se indica frecuentemente como relacin de fases. Para
conseguir la separacin de dos compuestos es de gran importancia que
tengan distintos factores de capacidad y por tanto distintos coeficientes
de reparto.
III.3.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS CON OTROS METODOS


La determinacin de los aniones presentes en disolucin se realiza tradicionalmente
con tcnicas, y en ocasiones instrumentacin, independientes para cada uno de ellos
con el consiguiente gasto econmico y de tiempo.
Los aniones mayoritarios que suelen ser determinados y las tcnicas ms
comnmente utilizadas son:
a) Nitrato y Nitrito: Su determinacin es difcil por los procedimientos
relativamente complejos que se precisan y las interferencias que pueden
tener lugar. Segn la riqueza de la muestra y las posibles interferencias que
pueda presentar se utilizan distintas tcnicas:
Tcnica ultravioleta (UV) se mide la absorbancia a 220nm y es
adecuada para muestras poco contaminadas por materia orgnica
(Armstrong, 1963; Navone, 1964).
El electrodo selectivo de nitrato puede ser utilizado tanto en
muestras claras como en aquellas contaminadas (Somerfeld et al,
1971). Para concentraciones entre 0.1 y 1 mg de N-N0 3-/1 puede
utilizarse el mtodo de reduccin con cadmio (Connors, 1976). }

IV.

El mtodo del cido cromotrpico (West et al, 1966) y el del


salicilato sdico (Schneider, 1974) puede aplicarse en
concentraciones comprendidas entre 0.1 y 5.0 mg de N- N0 3-/1,
pero tienen el inconveniente de la interferencia del cloruro. Para
concentraciones ms altas, la muestra debe diluirse hasta los
intervalos anteriores o bien utilizar el mtodo de reduccin de
Devarda's para nitrgeno total oxidado (nitrito y nitrato), ya que
este mtodo tiene un ndice de deteccin ms alto (Evans et al,
1972).

DESCRIPCIN DEL METODO


IV.1. Alcance
Esta tcnica se utiliza para la determinacin de iones Fluoruro, Cloruro,
Nitrgeno de Nitrito, Nitrgeno de Nitrato, Sulfato, Sulfuro, Tiocianato,
Tiosulfato y Nitrgeno de Amonio en las muestras de aguas de procesos.
IV.2.

Principio
Una alcuota de muestra lquida filtrada, homognea y que no contiene
partculas mayores a 0.45 m es inyectada en una corriente con un flujo de
eluyente y es pasada a travs de un cromatgrafo inico. Los analitos de
inters, llmense aniones o cationes se separan segn sus afinidades
relativas a los lechos de empaquetamiento de cada columna de
intercambio. Los analitos separados se miden por conductividad o por un
sistema de deteccin UV/VIS segn sea el caso y se identifican sobre la
base del tiempo de retencin de cada uno de ellos, comparados con
estndares de concentraciones conocidas. Para los aniones se usa en
combinacin con un sistema supresor post columna, que disminuye la
conductividad del eluyente y transforma los aniones separados en sus
correspondientes cidos.

IV.3.

Reactivos:
Agua Ultra pura, Resistividad > 18,2 M.cm, pasada por filtro de 0.2
m
cido Sulfrico concentrado (H2SO4) G.R.
cido Ntrico (HNO3) ultrex
cido Piridin - 2,6 dicarboxilico (cido dipicolnico) P.A.
Bicarbonato de sodio (NaHCO3) P.A.
Carbonato de sodio (Na2CO3) P.A.
Hidrosulfuro de sodio (NaHS) G.T pureza 71%.
Hidrxido de sodio (NaOH) P.A. en granallas
Soluciones estndar es certificadas de Fluoruro, Cloruro, Nitrito,
Nitrato, Sulfato, Tiocianato, Sulfuro y Tiosulfato de 1000 ppm
respectivamente
Solucin estndar certificada de Nitrgeno de amonio de 100 ppm.
Eluyente concentrado para cationes: Es una solucin que contiene
cido ntrico ultrex 42.5 mM, y cido dipicolnico 17.5 mM: Pesar y
transferir 5.84 g de cido dipicolnico a una fiola de 2000 mL que

contiene aproximadamente 1000 mL de agua ultra pura, luego


adicionar 5.5 mL de cido ntrico ultrex lentamente por las paredes
de la fiola, disolver, aforar y homogenizar. El equipo diluir 25 veces
esta solucin.
NOTA: Si la botella de eluyente diluido est vaca se recomienda
preparar 1000 mL de eluyente diluido para agilizar su llenado
automtico.
Eluyente concentrado para aniones: Es una solucin que contiene
carbonato de sodio 64 mM y bicarbonato de sodio 20 mM: Pesar y
transferir 13.56 g de carbonato de sodio y 3.36 g de bicarbonato de
sodio a una fiola de 2000 mL que contiene aproximadamente 1000
mL de agua ultra pura, disolver, aforar y homogenizar. Este eluyente
actuar como medio para crecimiento de algas por esta razn el
eluyente no debe mantenerse por ms de un mes. El equipo diluir
20 veces esta solucin.
NOTA: Si la botella de eluyente diluido est vaca se recomienda
preparar 1000 mL de eluyente diluido para agilizar su llenado
automtico.
Solucin de regeneracin MSM (Metrohm Supressor Module):
Es una solucin de cido sulfrico 100 mM: En una fiola de 1000
mL que contiene 500 mL aproximadamente de agua ultra pura,
dispensar 5.0 mL de cido sulfrico concentrado lentamente por las
paredes de la fiola y enfriar con mucho cuidado, aforar con agua
ultra pura y homogenizar.
Estndar de 1000 ppm de sulfuro: Si no se cuenta con estndar de
sulfuro de 1000 ppm preparar a partir de NaHS para ello pesar y
transferir 4.00 g de hidrxido de sodio en granallas y 2.4648 g de
hidrosulfuro de sodio (NaHS, 70% de pureza) a una fiola de 1000
mL que contiene 500 mL aproximadamente de agua ultra pura,
disolver, aforar y homogenizar.

IV.4.

Materiales y equipos
Balanza analtica, con precisin de 0.1 mg.
Brocha y esptula.
Cromatgrafo Inico Metrohm 850 Professional IC.
Filtro de polipropileno DigiFILTER de 0.45 m.
Fiolas de 100, 1000 y 2000 mL.
Pipetas volumtricas de 0.5, 1, 2, 3, y 20 mL.
Pisceta.
Soporte mltiple de filtrado DigiFILTER Manifold de 12 posiciones.
Tapn de polipropileno con perforacin.
Tubo de Ensayo de polipropileno de 11 mL (16 x 108 mm) o
equivalente.
Tubo de polipropileno de 50 mL DigiTUBE

IV.5.

Elementos de proteccin personal:

IV.6.

Lentes de seguridad.
Guantes de nitrilo.
Mandil anticido.
Respirador.
Careta.

Conservacin de las muestras


El material del recipiente a utilizar para el almacenamiento de las muestras
deber ser de polietileno o vidrio, para la preservacin de las muestras
considerar el siguiente cuadro:
Analito

Preservacin

Floruro
Cloruros
Nitritos

Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C,
recipiente lleno
Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C
Enfriamiento a 4C

Nitrato
Sulfatos
Trosulfato
sulfuro
Nitrgeno de amonio
IV.7.

Tiempo mximo de
conservacin
28 das
28 das
48 horas
48 horas
28 das
28 das
28 das
28 das

Preparacin de estndares
En la determinacin de aniones y cationes por cromatografa inica se
deben preparar los siguientes estndares de calibracin:

IV.7.1. ESTNDAR PARA ANIONES: Tomar con pipeta volumtrica y


verter a una fiola de 100 mL las alcuotas de las soluciones
estndares certificadas que se indican a continuacin:
Anion
Cloruro
Floruro
Nitrito
Nitrato
Sulfato
Trosulfato
Tiocianato

Concentracin
ppm
10
10
5
30
200
10
5

AlcLuota m
1
1
0,5
3
20
1
0,5

Aforar con agua ultra pura y homogenizar.


IV.7.2. ESTNDAR PARA CATIONES (100 ppm de N-NH3):
Tomar con pipeta volumtrica una alcuota de 10 mL de la solucin
estndar certificada de nitrgeno de amonio (N-NH3) y verter a una
fiola de 100 mL, aforar con agua ultra pura y homogenizar
IV.7.3. ESTNDAR PARA SULFURO (20 ppm de Sulfuro):
Pesar y transferir 0.40 g de hidrxido de sodio en granallas a una fiola
de 100 mL, tomar con pipeta volumtrica una alcuota de 2 mL de la
solucin estndar de 1000 ppm de sulfuro y verterla en la fiola, aforar
con agua ultra pura y homogenizar. Descartar el remanente de las
soluciones estndar, nunca devolver al frasco original.
IV.8.

Descripcin

IV.8.1.

Preparacin de la muestra
Agitar el recipiente original de la muestra asegurndose que la muestra
sea homognea.

Dilucin: Para el anlisis de las muestras realizar una dilucin 25X


para ello tomar una alcuota de 2 mL con una pipeta volumtrica de
la muestra y transferir a una fiola de 50 mL aforar con agua
ultrapura y homogenizar. Considerar otro factor de dilucin si es
necesario. Dejar reposar la dilucin como mnimo dos horas. Todas
las diluciones de las muestras debern ser filtradas antes de ser
ingresadas al equipo.

Filtrado: Verter 25 mL de la dilucin de la muestra a un tubo de


polipropileno de 50 mL tapar el tubo conteniendo la muestra con un
filtro de polipropileno, enroscar en sentido horario hasta ajustar,
luego colocar otro tubo de polipropileno de 50 mL vaco en la rosca
opuesta al filtro de polipropileno y ajustar. Invertir los tubos de tal
forma que el tubo que contiene la muestra quede en la parte
superior. Colocar los tubos en las guas del soporte mltiple de
filtrado e introducir la cnula de la vlvula de vaco en el orificio de

succin del filtro de polipropileno. Conectar el soporte mltiple de


filtrado a un terminal o fuente de vaco, activar la fuente de vaco,
presionar la vlvula de paso del soporte mltiple de filtrado para
que el vaco se distribuya en cada uno de los terminales de vaco
con que est conectada a cada tubo y filtrar toda la muestra.

IV.8.2. Calibracin
Configurar y estabilizar el equipo cromatgrafo de acuerdo al
instructivo SMLA-IN-IC001 Equipo de Cromatografa Inica Metrohm
850 Professional IC.
Cargar en el autosampler los estndares de calibracin en la siguiente
secuencia: Un tubo con el estndar de aniones, otro tubo con el
estndar de cationes y por ultimo un tubo que contenga el estndar de
sulfuro, repetir esta secuencia cuatro veces, en total cargar doce tubos
para

calibrar,

el

equipo

realiza

la

dilucin

correspondiente

automticamente.
Nota: Las diluciones que realiza el equipo automticamente para la
calibracin son de 1X, 2X, 5X y 10X.

IV.8.3. Acondicionamiento y carga de muestras en el equipo:


Configurar y estabilizar el equipo cromatgrafo de acuerdo al
instructivo SMLA-IN-IC001 Equipo de Cromatografa Inica Metrohm
850 Professional IC.
El Cromatgrafo Inico est configurado de tal manera que una
muestra para ser analizada debe estar contenida en dos tubos de
ensayo en el siguiente orden, el primero para anlisis de aniones y el
segundo para anlisis de cationes.
Verter las muestras en los tubos de la siguiente forma: Tomar 10 mL de
la dilucin 25X o de la dilucin que se crea necesaria en un tubo de
ensayo de polipropileno de 11 mL y tapar con tapn de polipropileno

con perforacin.
IV.9.

Control de calidad
El coeficiente de correlacin de las curvas de calibracin de cada analito
debe ser mayor o igual 0.99 y tiene que ser de forma lineal, un blanco
reactivo (Agua ultrapura) se debe analizar al inicio y al final de la lectura de
los lotes de anlisis para asegurar que no ocurri un problema de
contaminacin durante el anlisis del batch. Si hay evidencia de
contaminacin cambiar el agua ultrapura que utiliza el instrumento.
Verificar el estado de calibracin del instrumento con el material de
referencia certificado multianalito considerar 10% de la concentracin
certificada. Si no se verifica la calibracin recalibrar el instrumento.
El Analista es el responsable de la correcta ejecucin de este
procedimiento.

IV.10. Clculos
IV.10.1.

La concentracin de los analitos Fluoruro, Cloruro, Sulfato,

Tiosulfato, Tiocianato y Nitrgeno de amonio se calcula con la


siguiente ecuacin:

C analito ( ppm )=

l v
vm

Dnde:
Canalito : Concentracin del analito (anin o catin) en ppm
L: Lectura del equipo en ppm
V: Volumen de aforo en mL
Vm: Alcuota de muestra en mL

Este clculo es hecho por el software del equipo Cromatgrafo


Inico Metrohm 850 Professional IC.

IV.10.2.

El Nitrito y Nitrato se expresan como Nitrgeno de nitrito y

Nitrgeno de nitrato
Respectivamente y se calculan con las siguientes ecuaciones:

C analito ( ppm )=

l v
F
vm

Dnde:
Canalito: Concentracin de Nitrgeno del analito en ppm
L: Lectura del equipo en ppm
V: Volumen de aforo en mL
Vm: Alcuota de muestra en mL
F: Factor estequiomtrico 0.3043 para nitrito y 0.2258 para nitrato
Reportar solo aquellas lecturas que estn dentro de la concentracin del
estndar de calibracin ms alto, las muestras cuyas lecturas excedan
esta condicin se les tiene que hacer otra dilucin y reanalizar.

V.

RECOMENDACIONES
Leer las hojas de seguridad (MSDS) de cada uno de los reactivos
involucrados en este mtodo.
Utilizar el EPP adecuado, poner en prctica el instructivo SMLA-IN-PG003
EPP y Vestimenta en Laboratorio.

No usar material de vidrio quebrado o con estado defectuoso, solo usar


material de vidrio en perfecto estado.
VI.

CONCLUSIONES

VII.

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS