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HIDROLISIS DE LOS LÍPIDOS DE LA LECHE CON LIPASA Y SALES BILIARES

Objetivo general:

Verificar la actividad enzimática de la enterasa lipasa en la hidrolisis y
desnaturalización de los lípidos.

Objetivo Específicos.


Comprobar in vitro la importancia de las sales biliares (tauroclorato de
sodio) en la digestión de los lípidos.
Establecer la efectividad de la hidrolisis de las enterasas en presencia de
sales biliares haciendo usos de los cálculos químicos.
Observar la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación de
los ácidos grasos liberados utilizando como base al hidróxido de potasio.

mientras que los substratos naturales de las esterasas. y la naturaleza del ácido graso o del alcohol tiene efecto no en la especificidad sino en la velocidad de reacción. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las específicas para romper la unión éster en la posición alfa o alfa prima de los triglicéridos.Introducción En las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos ésteres hay diferencia entre las lipasas y las esterasas. Sin embargo las dos clases de enzimas son sumamente inespecíficas en cuanto a su acción. y las específicas para las uniones beta. Primero se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial y grasas. o sea triglicéridos de ácidos grasos. La hidrólisis completa de los triglicéridos procede entonces por pasos. por medio de enzimas lipolìticas elaboradas en el páncreas. La hidrólisis de los triglicéridos que consumen los animales superiores se lleva a cabo principalmente en el intestino delgado. son los esteres sencillos de ácidos de bajo peso molecular. luego lentamente se rompe las uniones beta. de cadena larga. .

las más modernas y con mejores prestaciones son los colorimétricos. Se le llama Pancreatina a un extracto de páncreas con fuerte actividad lipolitica. Se cree que esto se debe a que la enzima se absorbe a su substrato emulsificador.000 hasta 200. Lipasa: La lipasa (EC. El método titrimètrico para determinar la acción de la lipasa.3) (triacil glicerol acil hidrogenasa). Asimismo. y a la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. De los métodos antes mencionados. extraída de diferentes fuentes biológicas. que van desde 39. . mucosa intestinal y otros.1. Para que la enzima actúe. La lipasa es muy estable en suero. tejido adiposo. por lo que puede almacenarse varios días a temperatura ambiente. Debido a su pequeña masa. en los que se acoplan varias reacciones enzimáticas a la principal hasta conseguir la formación de un producto coloread. También llamada antiguamente esteapsina. filtra en el glomérulo renal. Estas esterasas hidrólisis substratos emulsificador. También existen varios tipos de inmunoanálisis para medir su concentración de masa. La lipasa es producida mayoritariamente por las células acinosas del páncreas y es vertida al duodeno con el jugo pancreático. No se han descrito formas moleculares de interés para el laboratorio clínico. Actúa sobre los enlaces éster de los carbonos 1 y 3. precisa de otra proteína denominada colipasa. todas ellas con actividad lipolìca. turbidimétricos y colorimétricos.1. pero es completamente reabsorbida en los túbulos. La concentración catalítica de lipasa puede medirse con métodos titrimétricos. La mayor parte de la lipasa presente en el plasma sanguíneo procede del páncreas aunque también contienen lipasa el hígado. La triacilglicerol lipasa cataliza la hidrólisis de los ésteres de glicerol con ácidos grasos de cadena larga. contiene siempre diversas fracciones proteicas de muy diversos pesos moleculares. lo que permite la posterior hidrólisis del tercer ácido graso por la lipasa.Marco teórico. con la función fisiológica de hidrolizar las grasas en el intestino delgado para facilitar su absorción. Por el contrario su concentración en la sangre es muy escasa. el sustrato debe estar emulsionado con sales biliares u otros emulgentes. Como muestra debe emplearse suero ya que existen dudas sobre el posible efecto interferente de los anticoagulantes. por lo que es indetectable en orina. consiste en estimar por titulación la cantidad de ácidos grasos liberados de los ésteres. y no ataca a substratos en verdadera solución.3.000. El 2monoacilglicérido resultante isomeriza lentamente a 3-monoacilglicérido.

1% en etanol Etanol 96% Tauroclorato de sodio al 1% Agua destilada. En un erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada Calentar 3 ml de extracto pancreático Adicionar 2 ml de tauroclorato de sodio y mezclar en el erlenmeyer . Reactivo:       Extracto pancreático 1% lipasa Hidróxido de potasio 0. 1 Pipeta volumétrica 10 ml 1 vaso precipitado de 250 ml 1 Pinzas de tubo de ensayos 1 Termómetro 1 Cubeta de aluminio Placa de calentamiento.05 M Fenolftaleína al 0.(gradilla) 6 Erlenmeyer de 100 ml 2 Pipetas de 5 y 10 ml 1 Probeta de 50 ml 1 Bureta de 25 ml 1 Pipeteador. Preparación del blanco. Diagrama de proceso. Ensayo 1: Extracto pancreático y Lipasa.Metodología: Materiales:              5 Tubos de ensayo . Baño de agua termostática.

05 % los erlenmeyer y agregar 10 agitando contantemente.05 % agitando contantemente. a cada erlenmeyer agregar 2 ml de tauroclorato y mezclar. Calentar a baño maria a 37°C Cada 20 minutos retirar uno a uno Titular con KOH al 0. En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Titular con KOH al 0. A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1%. A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y calentar a 37°C Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de Ensayo 2: Extracto pancreático – lipasa más tauroclorato de sodio. mezclar.ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína . En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y 2 ml de tauroclorato 1%.05 % agitando contantemente. Calentar a Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína Acción del extracto pancreático (lipasa) y el tauroclorato en la hidrolisis de los lípidos de la leche.Calentar durante 20 minutos a 37°C Agregar 3 gotas de fenolftaleína Titular con Hidróxido de Acción del extracto pancreático – lipasa sobre los lípidos de la leche. Preparación del Blanco En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Titular con KOH al 0.

00975 0. En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada A los 4 erlenmeyer agregar 2 ml de extracto de tauroclorato 1% Titular con KOH al 0.00038 0. Calentar a 37°C en baño maría.05M de KOH 0. Lípidos de la leche más extracto pancreático – lipasa. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0. retirar cada tubo en intervalos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína.05 % agitando contantemente.0075 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0. añadir a la leche el extracto acompañado de 2 ml de tauroclorato 1%.00049 0.00045 0.0000000 0.02435 0. Titular con KOH al 0.009 0.05M 9 34 24. Resultados: Tabla N°1. retirar cada tubo en intervalos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de fenolftaleína.35 9.0012500 0.00122 0.Ensayo 3: tauroclorato: Preparación del Blanco En 4 erlenmeyer agregar 10 ml de leche homogenizada en cada Calentar en ebullición 3 ml de extracto pancreático 1%.00170 0.05 % agitando contantemente.034 0.75 7.0000750 . Calentar a 37°C en baño maría.0000375 -0. Acción del tauroclorato de sodio en la hidrolisis de los lípidos.0007675 0.5 0.

05M 15.7 25.0005 0.01 0.0004800 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0.01 0.6 19.0005 0.05M de KOH 0.00112 0.0247 0.4 24.00078 0.00098 0.5 22.0252 Moles de ácido presentes Moles de ácido producidas por la hidrólisis 0.0156 0. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0.0224 0.01 0. Erlenmeye r Tiempo minutos Blanco 1 2 3 4 20´ 20´ 40´ 60 80 volumen base volumen base consumida(ml) consumida(lts) de KOH 0.0000000 0. Lípidos de la leche más tauroclorato.0195 0.Tabla N°2.00126 0.05M 10 10 10 10 10 0.0005 0.01 .0005 0.0005 0 0 0 0 0 Tabla N°3. Lípidos de la leche más extracto pancreático más tauroclorato.00124 0.01 0.2 0.0004550 0.0001950 0.0003400 0.05M de KOH 0.