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COLORACIONES ESPECIALES

I.

INTRODUCCIN
En la mayora de las ocasiones, para la observacin de los microorganismos, estos
son teidos, ya que de esta forma son ms fciles de visualizar y se pueden poner de
manifiesto caractersticas diferenciales.

II.

III.

OBJETIVOS

Ensayo de la tcnica de coloracin para las endosporas.

Verificar las estructuras microbianas como son las endosporas mediante el


mtodo de coloracin de Wirtz Conklin.

MARCO TERICO
Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen
en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando
las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes,
temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora
por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula
vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la
espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar
perdura durante aos. Algunas de las bacterias productoras de endosporas son
patgenas para el hombre, por lo que su estudio y observacin son de enorme inters.
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:

Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.


Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con


agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo
colorante.1

1 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

ENDOSPORAS
Las endosporas (esporas) son formas de resistencia (a la temperatura, agentes
qumicos y fsicos, desecacin, etc.) que presentan algunas bacterias Gram-positivas
(Bacillus,
Clostridium). La produccin de una endospora por una bacteria es un proceso lento
que requiere un tiempo considerable (horas). Se inicia como respuesta a condiciones
ambientales adversas y culmina con la muerte de la clula madre de la endospora y la
liberacin de esta.
En las esporas el material citoplsmico se ha desecado al mximo y han acumulado
ciertas molculas (cido dipicolnico) que les dotan de una gran termorresistencia. La
pared celular de las esporas es de un tipo de peptidoglicano modificado.
La forma y posicin de la endospora en la clula productora proporciona informacin
sobre qu especie es. Por consiguiente, tiene valor taxonmico.
En general, puede decirse que las esporas son de forma esfrica y suelen aparecer
libres, aunque en ocasiones se pueden observar en el interior de las bacterias a las
que deforman de una manera caracterstica, lo que sirve para su identificacin
(Clostridium).

IV.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
-

Lmina portaobjeto
Mechero
Asa de siembra
Encendedor
Papel lente
Microscopio

Reactivos

V.

Cultivo de Bacillus

Verde de malaquita

Safranina o Fucsina bsica

Aceite de inmersin

PROCEDIMIENTO
Coloracin de endosporas: Mtodo de Wirtz Conklin

Esterilizar el asa de siembra, flamear los bordes del asa de siembra y la parte
que va a entrar en contacto con la muestra hasta que quede rojo vivo.
Flamear los bordes del tubo de ensayo que contiene el cultivo de Bacillus.
Destapar el tubo de ensayo con precaucin, sin que se contamine el resto de la
muestra; extraer un poco de la muestra y extenderla en la lmina portaobjeto.
Fijar la muestra en calor y cubrir con Verde de Malaquita. Esperar que caliente
hasta la aparicin de vapores por un intervalo de tiempo de cinco minutos.
Lavar con agua corriente (agua de cao).
Agrega Safranina o Fucsina bsica por un periodo de tiempo de 1 minuto.
Lavar con agua corriente (agua de cao).
Secar a temperatura ambiente y observar con el lente de inmersin.

VI.

RESULTADOS
Despus de realizar la tincin y con la ayuda del microscopio
se pueden observar las esporas del Bacillus subtillis con una
coloracin verdosa.

VII.

CONCLUSIONES
Se llega a la conclusin que las endosporas se encuentran dentro del microorganismo
son clulas especializadas, no reproductivas

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