Citoesqueleto I

(22/Abril)

DEF: Es una red compleja de distintos filamentos proteicos que se extienden a travs del
citoplasma de la clula eucarionte.
En algunas bacterias se han descrito distintas protenas que podran ser un esbozo de una
especie de citoesqueleto. Estas protenas son muy parecidas a las protenas del citoesqueleto
eucarionte. Nos quedamos con que el citoesqueleto es propio de clulas eucariontes.
Funciones: Organizacin de los componentes celulares, da la estructura interna de la clula,
reparte los organelos en diferentes lados y da las posiciones de estos. Variedad de formas de
los distintos tipos celulares, se encarga de la mantencin de las distintas formas. Movimientos
celulares coordinados tienen que ver con la migracin de las clulas por ejemplo en el
desarrollo embrionario. O la migracin de clulas frente a impulsos quimiotcticos (cuando son
llamadas a un sector de nuestro organismo). O cambios de forma en fagocitosis o diapedesis.
El citoesqueleto se denomina Dinmico porque parte de sus componentes (filamentos de actina
y microtbulos) son dinmicos, es decir, cambian de forma, estn constantemente en un
proceso de polimerizacin o depolimerizacin.
Los componentes del citoesqueleto
Son 3 tipos de filamentos que forman la red del citoesqueleto.
Microtbulos: Son los filamentos ms gruesos, alcanzan un mayor dimetro. C/u de ellos
tiene una protena especfica que hace la estructura del filamento, y c/u de ellos tambin tiene
una distribucin especfica dentro de la clula. La protena que los conforma es la Tubulina la
cual polimeriza y forma unos cilindros y esos cilindros son los de mayor dimetro del
citoesqueleto.
Filamentos intermedios: Tienen un dimetro intermedio. Se caracterizan por ser muy
resistentes porque se unen a una especializacin de membrana: los desmosomas. Todos estos se
renen en un punto de contacto entre dos clulas adyacente, este punto es una estructura
proteica a nivel de membrana (desmosomas) donde se insertan estos filamentos. A travs de
estos otorgan la resistencia. Los conforma la protena fibrosa.
Filamentos de actina: o microfilamentos porque son el componente de menor dimetro del
citoesqueleto. Se encuentran generalmente asociados al cortex celular en la periferia de la
clula anclados a algunos puntos de este; y formando parte de la estructura de algunas
microvellosidades, siendo responsables de que esas clulas mantengan esa forma. La protena
que los conforma es la Actina.

FILAMENTOS INTERMEDIOS
Estn insertos en un punto de membrana el desmosoma. Y adems son el nico componente
del citoesqueleto que se encuentra en el ncleo de una clula eucarionte, formando una
estructura que tiene como funcin el soporte de la envoltura nuclear denominada Lmina
nuclear. Asociado a la cara interna de la envoltura nuclear, est dentro del ncleo.
Funcin: Otorgar resistencia al estrs mecnico. Son particularmente importantes en clulas
que suelen estar sometidas a este tipo de estrs como: neuronas donde el axn largo debe estar
sostenido por algo para mantenerlo intacto. Clulas musculares que estn en un proceso
constante de contraccin y relajacin. Tambin a nivel de la piel que est constantemente
sometida a estrs mecnico.
Caractersticas: Constituidos por protenas fibrosas que son distintas para distintos tejidos.
Hay protenas fibrosas especficas para cada tipo de tejido. Son rgidos y resistentes. Tienen un
dimetro de 10 nm.
Estas protenas fibrosas van a polimerizar para formar el filamento intermedio. Tiene una
estructura bsica de un dominio central helicoidal con un alfa hlice, y tiene dos dominios
globulares en sus extremos (en el extremo amino y carboxi) (A). Esta estructura fibrosa larga le
permite que cuando polimeriza y forma un dmero se sobre enrolle. Todo el dominio helicoidal
de una protena se sobre enrolla con el dominio helicoidal de otra protena y forma el dmero
(B). Luego estos dmeros se sobre enrollan con otros dmeros y forman tetrmeros (C). Y estos
tetrmeros se unen fuertemente en sus dominios globulares, a travs de una complementacin
entre los extremos amino y carboxi entre tetrmeros (D). Esto se vuelve a sobre enrollar hasta
que finalmente se obtiene como estructura bsica de un filamento intermedio un verdadero
cordn sobre enrollado (E). Y esa estructura nos explica porqu los filamentos intermedios son
resistentes y rgidos. Este cordn mientras ms sobre enrollado es ms rgido.

Clasificacin de los filamentos intermedios

Segn su ubicacin dentro de la clula hay filamentos intermedios citoplasmticos o nucleares.
Filamentos intermedios nucleares: Estn estructurados como todos los filamentos
intermedios, y su protena fibrosa que es la que polimeriza y se sobre enrolla se llama protena
de la lmina nuclear. Est presente en todas las clulas nucleadas formando el soporte. (Estos
filamentos son una analoga con el cortex celular y la membrana plasmtica)
Filamentos intermedios citoplasmticos: Estn conformados por distintas protenas fibrosas
que polimerizan de la misma forma, pero se llaman distinto por diferencias en su estructura
primaria, por diferencias estructurales mnimas. El nombre de esta protena fibrosa
citoplasmtica depende del tejido en el que se encuentra.
Proteina fibrosa que constituye filamentos
intermedios citoplasmticos.
Keratina
Vimentina y protenas relacionadas a la
vimentina o vimentina Light.
Proteina del neurofilamento

Lugar donde se encuentra

Clulas epiteliales.
Tejido conectivo, clulas musculares, y
clulas de la neurogla.
neuronas

Estas diferencias en las protenas fibrosas que constituyen los filamentos intermedios
citoplasmticos de los distintos tipos celulares, sirven y se ha aplicado en biopsia o estudio de
un tumor. Cuando hay clulas malignas, mantienen caractersticas bsicas estructurales de la
clula que se transform en maligna. Los tumores se pueden reconocer de que tejido vienen al
hacer una tincin especfica contra la protena de los filamentos intermedios. La clula tumoral
que por proceso de metstasis se puede encontrar en cualquier parte de nuestro organismo, pero
que viene de un tumor original, para saber de donde viene ese tumor original se utiliza desde
hace mucho tiempo la identificacin de la protena del filamento intermedio. Se hace con
anticuerpos marcados con oro coloidal para microscopia electrnica o anticuerpos marcados
para microscopia de fluorescencia, para determinar el origen de la clula tumoral. Se utilizan
anticuerpos anti keratina, anti vimentina y otros (ya que las keratinas son una familia de varias
protenas igual que las vimentina)
Los filamentos intermedios en la lmina nuclear
En el dibujo son los azules asociados a la cara interna de la envoltura nuclear. Estn asociados
a la cara interna de la membrana interna del ncleo. Lo caf es cromatina y lo azul es la lmina
nuclear. Los filamentos intermedios forman una red bidimensional como un tejido.

Desensamblaje y ensamblaje durante la divisin celular

Tienen una participacin fundamental en el ensamblaje y desensamblaje del ncleo cuando la
clula se est dividiendo. Durante una fase de la mitosis el ncleo se desensambla, la envoltura
nuclear desaparece para permitir que los cromosomas duplicados se puedan separar. Los
filamentos intermedios que forman la lmina nuclear de ese ncleo, son los que dirigen este
desensamble gracias a una fosforilacin. Hay una seal que se gatilla durante el proceso de la
mitosis que activa a una kinasa que va a fosforilar a las protenas de la lmina nuclear. Estas
protenas fosforiladas cambian su estructura y pierden afinidad por las otras protenas de la
lmina nuclear, por lo tanto, la lmina nuclear se desarma. Y como la envoltura nuclear est
ntimamente asociada a la lmina, eso lleva a que la envoltura nuclear tambin se desensamble
y desaparezca en una fase especfica de la mitosis. Como la lmina es el soporte de la envoltura
nuclear, al desarmarse la primera, lo hace tambin la segunda.
En una fase especfica de la mitosis desaparece la envoltura nuclear, se separan los
cromosomas. Pero al final de la mitosis se deben reorganizar dos ncleos nuevos alrededor de
cada uno de los conjuntos de cromosomas que se separaron. Lo que gatilla que se reorganice la
envoltura nuclear es la defosforilacin de las protenas de la lmina. Una fosfatasa saca los
grupos fosfatos de las protenas de la lmina y se reorganiza la envoltura nuclear
Si no se fosforilan las protenas la envoltura no se desarma y la mitosis falla. Lo mismo si no se
defosforila.

Los filamentos intermedios otorgan a los tejidos la resistencia a la tensin

mecnica.
Esto se puede ver e imaginar en los epitelios. Las clulas epiteliales se encuentran unidas a
travs de desmosomas que le dan resistencia al epitelio por ejemplo a nuestra piel q podemos
tirarla y pellizcarla y se mantiene unida. Esto falla por ejemplo en la patologa de epidermolisis
bullosa simple.
Las epidermolisis bullosa son un conjunto de enfermedades y existen 3: la simple, la puntural o
de unin y la distrfica. Son 3 niveles de la enfermedad. Desde simple hasta ms grave.
Los niitos con piel de cristal por ejemplo en chile est la epidermolisis bullosa distrfica, la
ms grave.

Lo que ocurre en este tipo de enfermedades es que hay una alteracin de los filamentos
intermedios que puede ir de distintos niveles hasta que no existan los filamentos intermedios.
Hay una mutacin a nivel del gen de la protena, y la protena se ensambla mal, no se
ensambla, o no se expresa y no est. Sin los filamentos intermedios el epitelio es mucho ms
sensible al estrs mecnico. Y los niitos que tienen est enfermedad todo roce les produce
ampollas a nivel de la piel.
La epidermolisis bullosa simple como es a nivel del epitelio, es a nivel de las primeras clulas,
se producen ampollas de fcil recuperacin. Esto tambin sucede a nivel de los epitelios
internos. A medida que esto suceda ms hacia adentro, por ejemplo la puntural es a nivel de los
hemidesmosomas (las clulas no se desgarran solo entre s, sino que se desgarran de la matriz
extracelular), las cicatrices son ms profundas. En la distrfica es an ms profundo el
problema y se producen llagas y heridas que cicatrizan mal y van produciendo una distrofia del
tejido.
MICROTBULOS
Caractersticas: estn conformados por una protena dimrica que es la tubulina. La tubulina
va a polimerizar y a formar estos cilindros huecos de tubulina. Son los filamentos de mayor
dimetro del citoesqueleto, 25nm. Como son mas anchos son rgidos, pero a diferencia de los
filamentos intermedios son dinmicos, es decir, estn polimerizando y depolimerizando
constantemente.
La distribucin clsica de los microtbulos en una clula en interfase. Nacen todos desde un
centro comn que se denomina centro organizador de microtbulos y se reparten a lo largo de
todo el citoplasma de la clula.
Funciones: Participan en el transporte intracelular, ya que hay protenas que se asocian a los
microtubulos para realizar el transporte de vesculas, de organelos. Participan en la
organizacin celular, es decir, mantienen distribuidos y organizados los organelos al interior
de la clula.
En la imagen hay una tincin especfica para
microtbulos, con anticuerpos anti-tubulina
unidos a un fluorocromo. Y se muestra el
centro organizador de microtbulos, desde
donde nacen estos filamentos y se reparten
en el citoplasma.

Distintas orientaciones de microtbulos

Se pueden encontrar distintas orientaciones de los microtbulos porque estos son dinmicos y
pueden cambiar su organizacin en distintas etapas de una clula. Por ejemplo en la interfase
estn de una forma (A), pero cuando la clula entra en divisin esos microtbulos se
reorganizan y forman el uso mittico. Siempre naciendo desde un centro organizador, el cual
en este caso se duplica (B). En otras clulas como las clulas ciliadas existen microtbulos que
forman parte de la estructura de esos cilios y son la base del movimiento ciliar (C). Y en el
caso de las clulas nerviosas, los microtbulos se organizan hacia el axn para permitir el
transporte de algunos organelos, y especficamente de vesculas con neurotransmisores hacia la

terminal neuronal. Tambin hay microtbulos hacia el soma y las dendritas, pero
principalmente a lo largo del axn. A nivel de las neuronas se producen excepciones a todas las
reglas de los microtbulos, y una de esas es que hay microtbulos que nacen desde el axn y
no estn conectados al centro organizador (D).

Todos los microtbulos que forman parte de un cilio nacen del centro organizador o
cuerpo basal. Y hay un cuerpo basal por cada cilio.
Tambin a lo largo de los flagelos hay microtbulos, y son responsable del movimiento
de estos.
En clulas vegetales los microtbulos se asocian hacia la periferia de la clula.
Centro organizador de microtbulos

Esta constituido por otro tipo de tubulina que es la gamma tubulina. Y que sirve de centro de
nucleasin para la formacin de microtbulos. Un centro de nucleasin es una estructura
proteica en este caso gamma tubulina, que une y que llama a las tubulinas que vana empezar a
polimerizar. Estas tubulinas se van hacia el centro de nucleasin y parten polimerizando.
Los centros organizadores tienen entonces hacia la periferia la gamma tubulina o anillos de
gamma tubulina que actan como centros de nucleasin. Y por dentro de la estructura estn los
centrolos.
Los centrolos tambin estn conformados por microtbulos. Pero la funcin de estos no se
conoce bien. Porque los centrolos existen a nivel de los centrosomas o centros organizadores
de las clulas animales, pero no de las clulas vegetales. Los centros organizadores de
microtbulos en las clulas vegetales no poseen centrolos, pero las clulas s son capaces de
organizar microtbulos al igual que la clula animal y son capaces de formar el uso mittico
para la divisin. Por esto no se ha entendido la funcin de los centrolos, porque las clulas
vegetales carecen de ellos pero funcionan igual.

El

centro
organizador
est
compuesto por tubulina gamma
(anillos) y otros componentes
proteicos, protenas accesorias
la gamma tubulina.

Estructura de los microtbulos

Los microtbulos se forman por polimerizacin de una protena dimrica que es la tubulina. La
tubulina como protena tiene dos subunidades globulares que se unen. Una es la alfa tubulina, y
la otra la beta tubulina. Pero cuando se dice tubulina se refiere al dmero, no es necesario
especificar un dmero de tubulina. (Tubulina = dmero de alfa y Berta tubulina).
La tubulina polimeriza en los centros de nucleasin y forma cilindros. Al hacer un corte
transversal del cilindro nos encontramos con una organizacin de 13 protofilamentos formando
la periferia del cilindro. Esto es a nivel del citoplasma de una clula (A). En los cilios y
flagelos hay otra unidad de microtbulos ms compleja que son dobletes (B). Y los centrolos
que tambin estn conformados por microtbulos se organizan en tripletes (C).
El microtbulo tiene una polaridad, es decir, un extremo es diferente al otro. Se denomina
extremo negativo al extremo que se asocia a la gamma tubulina en el centro de nucleasin. Es
el extremo que presenta menor actividad de polimerizacin y depolimerizacin. El extremo
ms es donde hay mayor actividad de polimerizacin y depolimerizacin. Por lo tanto cuando
un microtubulo crece o se acorta lo hace a travs del extremo ms. El extremo menos est
estabilizado por la unin a la gamma-tubulina y al centro organizador de microtbulos. Al estar
estabilizado ese extremo tiene menos actividad.
(Esta clasificacin de ms y menos no tiene nada que ver con cargas)

La hidrlisis de GTP regula el crecimiento de los

microtbulos
Los microtbulos son dinmicos y su polimerizacin y depolimerizacin est regulada por
GTP. La tubulina es una protena de unin a GTP. Y cuando este la tubulina est unida a GTP
(unido a su subunidad alfa), presenta una gran afinidad por otras tubulinas y polimeriza. Pero
como toda protena de unin a GTP luego de un determinado tiempo el GTP se hidroliza y pasa
a ser GDP. Y cuando la tubulina est unida a GDP la interaccin entre tubulinas es ms dbil.
(En la figura la pelota verde claro es la subunidad beta de la tubulina, y la pelota verde oscuro
es la subunidad alfa tubulina. Se nota que la parte alfa se une a GTP que es lo rojito)
Mientras exista disponibilidad de GTP, va a haber ms tubulina unida a GTP y el microtbulo
va a polimerizar y a crecer. Este microtbulo se mantiene en crecimiento mientras la velocidad

de unin de llegada de tubulina unida a GTP, sea mayor que la velocidad de hidrlisis de GTP
unido a las tubulinas.
En otras palabras, mientras la tubulina est unida a GTP hay una alta afinidad por otras
tubulinas, se van uniendo. Pero la tubulina que est unida a GTP; luego hidroliza y pasa a GDP
y hay menor interaccin entre tubulinas. El microtbulo se mantiene en estado de crecimiento
mientras la concentracin de tubulina unida a GTP sea suficiente para que la velocidad con la
que se estn uniendo en el extremo ms, no sea alcanzada por la velocidad de hidrlisis del
GTP. Ya que las primeras tubulinas que se unieron hidrolizan y pasan a estar unidas a GDP.
Mientras exista un casquete o un Cap de tubulinas unidas a GTP el extremo ms se mantiene
estabilizado, activo y sigue polimerizando y creciendo
Todo esto para cuando no hay tanta tubulina unida a GTP disponible, estas paran de unirse, y la
velocidad de hidrlisis de GTP le gana a la velocidad con que se unen las tubulinas unidas a
GTP. As se desaparece el casquete de tubulinas unidas a GTP. Como ya no tengo este Cap, las
tubulinas comienzan a desarmarse. El microtbulo va en el proceso inverso, se va
depolimerizando y se acorta.
Los

microtbulos se caracterizan por esto por armarse y desarmarse, como por ejemplo en la
divisin celular, y esta caracterstica es esencial para su funcin.
Si inhibo el dinamismo, tcnica que se usa para sincronizar cultivos celulares, puedo inhibir la
entrada de la clula en divisin. Porque como no se puede desorganizar la organizacin de
microtbulos en interfase, no se puede entrar a mitosis porque no se puede organizar el uso
mittico. Y dejo la clula frenada en el paso a mitosis. As puedo frenar todas las clulas del
cultivo, y hacerlas entrar en mitosis todas juntas. (*)
Si se corta un fragmento de microtbulo, y no se le agrega GTP, se va a agotar el Cap del
extremo ms, y a pesar de que est cortado el extremo menos, y no est unido al centro
organizador, igual se produce una mayor actividad en el extremo ms que en el extremo menos.
Esto confirma que el extremo menos es de menor actividad incluso cuando se cort el
microtbulo. Por la disposicin de las tubulinas en el microfilamento con una polaridad, de un
extremo distinto del otro, hay un extremo ms activo que se desarma ms rpidamente que el
otro.
Dinamismo de los microtbulos

Hay toxinas como la colchicina y el taxol que estn en algunos hongos, que inhiben el
dinamismo de los microtbulos. Ya sea porque estabilizan o porque inhiben el crecimiento.
Impiden que crezca o que se desarme.
(*) Por lo tanto una clula que estaba en el ciclo celular he iba a entrar a dividirse, queda
frenada y no logra entrar a la divisin porque no puede desarmar sus microtbulos para
armarlos y formar el uso mittico. Entonces la clula queda ah, frenada antes de la mitosis.
Este efecto es reversible, por eso se usa para sincronizar cultivos. Se pone la toxina, y todas las
clulas van a llegar en su ciclo celular a un punto antes de entrar a la divisin. Se espera que
todas las clulas lleguen a ese punto y luego se saca la toxina y todas las clulas van a
reorganizar sus microtbulos y vana partir en el mismo punto del ciclo celular, se vana dividir
todas al mismo tiempo. Logrando as la sincronizacin.

Crecimiento y acortamiento in vivo de microtbulos

Es un estudio que se hace con tubulina marcada con fluorescencia, donde se ve como van
creciendo distintos microtbulos. Estn marcados los extremos de 3 microtbulos, A, B y C. Y
se ve como en un lapso de tiempo van cambiando la disposicin. El microtbulo A se acort, El
B creci, y el C qued igual, se acort un poco. Se ve el dinamismo, que estn constantemente
polimerizando y depolimerizando.

Fibroblastos en cultivo +
tubulina fluorescente

Efecto de la temperatura y la concentracin de tubulina sobre el

ensamblaje/desensamblaje de los microtbulos.

Hay dos factores que manejan el dinamismo de

los microtbulos, son la concentracin de
tubulina disponible, hay una concentracin
mnima de tubulina que se denomina
concentracin
crtica,
que
gatilla
la
polimerizacin de microtbulos. En el grfico se
mide la cantidad de tubulina v/s la cantidad de
microtbulos. En un principio hay solo tubulina, y
a medida que esta va aumentando, llega a una
concentracin crtica, y recin ah se gatilla el
crecimiento de un microtbulo. La concentracin
critica entonces, es la concentracin mnima de
tubulina que se necesita para que comience la
polimerizacin de un microtbulo.

Concentracin crtica
de dmeros de tubulina

El otro factor que regula el dinamismo de los

microtbulos es la temperatura. En el grfico se
ve que la masa de microtbulos, osea la cantidad
de microtbulos que se tienen varia segn la
temperatura. Cuando se enfra la clula del
experimento in Vitro, bajando la temperatura a
4C, rpidamente baja la masa de microtbulos.
Es decir, el microtbulo depolimeriza a bajas
temperaturas. Se mantiene esa masa y si se vuelve
a aumentar la temperatura a 37C, se vuelve a
recuperar la cantidad de microtbulos inicial.
Por tanto: a bajas temperaturas se favorece la
depolimerizacin y a temperatura normal de un
organismo se ve facilitada la polimerizacin.
Polarizacin de una clula por estabilizacin selectiva de los microtbulos.
Algunos ases de microtbulos se estabilizan, y se puede inhibir de forma fisiolgica normal el
dinamismo de los microtbulos. Lo que se produce en una clula polarizada es la estabilizacin
selectiva de microtbulos. Para esto existen protenas estabilizadoras, protenas Cap que hacen
un caping que se unen al extremo ms del microtbulo. Unidas estabilizan el extremo ms,
inhiben el dinamismo del microtbulo y lo mantiene estabilizado (sin polimerizacin ni
depolimerizacin). As los microtbulos quedan estabilizados por ambos extremos. Por el
extremo menos por su interaccin con el centro organizador de microtbulos, y en el extremo
ms por una protena caping.
Microtbulos
estabilizados
en sus dos extremos

Una clula polarizada es una clula que tiene dentro de sus dominios de membrana un dominio
o un sector que tiene una funcin especfica. El mejor ejemplo de esto es una clula secretora,
ya que estas normalmente llevan los grnulos del compuesto que van a secretar hacia un
dominio de membrana. Y esto sucede por ejemplo en las clulas plasmticas.
Las clulas plasmticas son las productoras de anticuerpos. Y vienen de
un proceso de diferenciacin del linfocito B. Hay un antgeno que activa
el linfocito B, y este responde produciendo anticuerpos a travs de un
proceso de diferenciacin hacia clula plasmtica. Pero este proceso de
diferenciacin involucra una reorganizacin del citoplasma que est
ntimamente relacionado con su funcin secretora y con la organizacin
de su citoesqueleto. Entonces hay un cambio de una clula redondita que
es el linfocito B, a una clula alargada que es la clula plasmtica. Ese
cambio en la forma tiene que ver con la reorganizacin del citoesqueleto
y con la estabilizacin de microtbulos, para que estos que estn implicados en el transporte de
organelos como vesculas (que transportan anticuerpos que van a ser liberados hacia un sector
de la membrana), tengan como un camino pavimentado listo para que las vesculas vallan
rpidamente al sector de la membrana donde se van a unir y vana ser liberados al medio.
Entonces las clulas polarizadas estabilizan un haz de microtbulos para tenerlo listo como
camino donde la clula lo necesite para hacer un transporte.
Microtbulos polarizados y en el transporte.
Este sistema de transporte es utilizado por ejemplo por los virus. Que utilizan la capacidad de
transporte que tienen las clulas. Como el virus herpes que puede viajar a lo largo de las
terminales nerviosas, lo hace unindose a estos microtbulos. Y utiliza los ases de
microtbulos que la clula nerviosa tiene organizado para el transporte de neurotransmisores, y
se va movilizando dentro de la clula a travs de esos ases