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Velocidad de conduccin en nervio citico aislado de sapo

Fundamentos tericos:
Los axones de las neuronas conducen los potenciales de accin a una velocidad
que depende, entre otras cosas, de su dimetro: a mayor dimetro, mayor
velocidad de conduccin y viceversa. Asimismo, la presencia de mielina aumenta
an ms la velocidad de conduccin. Para medirla, basta con estimular en un
punto del axn y medir cunto tarda el potencial en ser recogido por un electrodo
colocado a una distancia conocida. Dividiendo la distancia por el tiempo se obtiene
la velocidad, la cual va a ser nica y caracterstica del tipo de axn estudiado; y se
van a cumplir las propiedades de umbral y ley del todo o nada.
Un nervio como el citico de sapo est formado por los axones de numerosas
neuronas, tanto motoras como sensitivas. Los axones son de distinto dimetro, lo
cual implica diferente velocidad de conduccin. Si se realiza el experimento
descripto antes, los potenciales de cada axn estimulado se transmitirn a
diferente velocidad, de forma que en el sitio donde est ubicado el electrodo
receptor no se va a obtener un nico potencial sino un abanico de potenciales
que llegan en tiempos distintos. Asimismo, la propiedad de umbral va a estar
presente en forma menos ntida porque va a existir en realidad una mezcla de
umbrales. La ley del todo o nada en apariencia no se va a cumplir, porque el
potencial recogido vara en funcin de la intensidad del estmulo aplicado. Sin
embargo, la ley s se cumple a nivel de cada axn aislado, pero en el nervio entero
se van reclutando ms axones a medida que crece el estmulo, dando la falsa
impresin de un potencial que va en aumento. De todos modos, si se realiza el
experimento se va a obtener una velocidad promedio representativa de toda la
variedad de axones que forman el nervio.
Tcnica:
Se desmedula un sapo y se lo coloca con la parte ventral hacia abajo. Se saca la
piel de los miembros inferiores y se diseca el citico de un lado en la mayor
extensin posible, es decir desde sus races de origen medular hasta la
articulacin de la rodilla, y procurando liberarlo del tejido conectivo circundante.
Una vez extrado se lo conserva sumergido en solucin de Ringer batracio hasta el
momento de usarlo.
Para estimular el nervio y recoger los potenciales se usa una cmara de nervio,
esquematizada en la Fig. 1. La misma es de forma rectangular, y est cruzada
transversalmente por varios electrodos de plata, sobre los cuales se coloca el
nervio de forma que haga contacto con todos ellos. En el fondo de la cmara se
coloca una delgada capa de Ringer para mantener hmedo el ambiente, y se
cierra con una tapa. Los dos electrodos ubicados en el extremo izquierdo (A y B
del esquema) se conectan al estimulador elctrico, y por all se envan los
estmulos de intensidad, frecuencia y duracin conocidos.

Los electrodos colocados a la derecha (C a G del esquema) se destinan a recoger


el potencial que ha viajado por el nervio, con excepcin del primer electrodo, el C,
que se conecta a tierra (en la cmara que se usa en el TP hay un electrodo ms
de recoleccin, o sea un total de 6, de C a H). Adems, nuestra cmara tiene una
llave selectora que permite conectar al amplificador ya sea los electrodos D y E o
los electrodos G y H. Entre estos dos pares de electrodos hay una distancia de 1,5
cm.
Figura 1:

Se ata un hilo en cada punta del nervio y se lo extiende sobre todos los electrodos.
Cada hilo se pasa por un orificio del extremo de la cmara y se sujeta por fuera de
ella con cinta adhesiva, de manera que el nervio quede levemente tenso y
sostenido a una cierta distancia por encima de la capa lquida, sin tocarla. El

nervio constituye entonces el nico vnculo fsico entre los 7 electrodos. Se tapa la
cmara y se puede comenzar la experiencia.

C AMARA DE NERVIO

Estimulo
2 cm

Registro

3.5 cm

Se coloca la frecuencia en 10 pulsos/segundo y la duracin del pulso de 0,1 mseg,


y se va aumentando la intensidad del estmulo hasta que aparece un potencial en
el trazado conectado a los electrodos ms prximos al sitio de estmulo,
procurando alinear el pico del potencial con una marca de tiempo. Luego se
mueve la llave de manera que se registren los electrodos ms lejanos al sitio de
estmulo, y se mide la distancia que hay entre los picos de ambos potenciales. Esa
distancia se transforma en tiempo conociendo la velocidad de barrido del
osciloscopio, y por ltimo se divide 0.015 m (distancia entre sitios de registro) por
el tiempo en segundos, y obtenemos la velocidad de conduccin en metros por
segundo.

Ejemplo de pregunta de parcial:


Cules de las siguientes expresiones caracterizan correctamente la conduccin
activa (mediante potenciales de accin) en una neurona?
A) La conduccin activa es efectiva solamente a cortas distancias, como en el
cuerpo de la neurona.
B) La constante de espacio () es la distancia en la cual el potencial de accin
inicial decae a 1/e del valor original.
C) El umbral depende principalmente de las propiedades de los canales de Na.
D) La conduccin activa es ms veloz en los axones de dimetro pequeo.
E) La conduccin activa sigue la ley del todo o nada.
F) Los potenciales de accin se propagan ms velozmente en los axones
amielnicos.
G) En los nodos de Ranvier la capa de mielina es ms gruesa que en el resto
del axn.
H) La conduccin activa es ms veloz en los axones de mayor dimetro.
I) La conduccin activa nunca es operativa en condiciones fisiolgicas.
J) Los potenciales de accin se propagan ms velozmente en los axones
mielnicos.

Potencial de Accin

En la clula nerviosa en reposo, como vimos en la entrada Potencial de


membrana, el flujo constante hacia dentro de sodio, se ve equilibrado con el
flujo constante de potasio hacia fuera de la clula, de forma que el potencial de
membrana es tambin constante.
Esta situacin, sin embargo, se ve alterada cuando la membrana se depolariza
ms all del umbral para generar un potencial de accin. Una vez que el
potencial de membrana alcanza este umbral, muchos canales de sodio, sensibles
a voltaje (estos canales son diferentes a los que se encontraban abiertos durante
el reposo, ya que aquellos no requieren de estmulo para su activacin) se abren,
permitiendo el paso de sodio al interior de la clula. Este flujo supera al de
salida de potasio, por lo tanto, la membrana celular se despolariza an ms. A su
vez, este aumento en la despolarizacin, permite que se abran an ms canales
de sodio, lo que acelera la despolarizacin. Como la entrada de iones sodio,
supera por lejos la salida de iones potasio, el potencial de membrana se ve
prcticamente slo afectado por el sodio, arrastrando el potencial de membrana
al potencial de equilibrio del sodio, el que es aproximadamente +55 mV. Sin
embargo, es necesario tener presente, que el potencial de membrana nunca va a

alcanzar complemente este valor, ya que el flujo de potasio hacia fuera de la


clula contina y tambin se produce un leve incremento de la entrada de
cloruro, lo que hace que el potencial de membrana sea un poco menor que el
potencial de equilibrio de sodio.
El potencial de membrana seguira teniendo este valor positivo, cercano al
potencial de equilibrio del sodio, si no fuera por dos situaciones:

Los canales de sodio sensibles a voltaje, sufren inactivacin.

La apertura de canales de potasio sensibles a voltaje determinan que


aumente gradualmente el flujo de salida de K+. El aumento de la
permeabilidad de potasio es ms lento que la del sodio, debido al ndice
ms lento de apertura de los canales de potasio sensibles a voltaje.

De este modo, el aumento retardado del flujo de potasio hacia el exterior


celular, sumado a la inactivacin de los canales de sodio sensibles a voltaje y por
ende la disminucin en la conduccin de sodio al interior celular, provocan la
repolarizacin paulatina de la clula, o sea, la recuperacin de su potencial de
reposo (potencial de equilibrio de la membrana celular en ausencia de estmulo).
En este vdeo se muestra un resumen de lo explicado anteriormente, es bastante
didctico.
Cmo podemos determinar cules son los iones involucrados en el potencial
de accin?
La primera respuesta a esta pregunta, surgi de Alan Hodgkin y Bernard Katz,
quienes hallaron que la amplitud del potencial de accin disminuye cuando se
reducen las concentraciones de sodio externas, lo que indica que el flujo de
sodio hacia el interior celular es el responsable de la fase de elevacin del
potencial de accin. Sus datos tambin revelaron la participacin del potasio en
la fase de cada del potencial de accin. De este modo, Hodgkin y Katz
propusieron que la despolarizacin de la clula causara un breve incremento de
la permeabilidad de la membrana celular para el sodio, durante el cual superara
a la dominante en la membrana celular en reposo para los iones de potasio.
Los experimentos que demostraran lo descrito anteriormente fueron realizados
por medio del sistema de voltage clamp o pinzamiento de voltaje. La funcin
bsica del este mtodo es interrumpir la interaccin entre el potencial de
membrana y la apertura y cierre de canales de membrana sensibles a voltaje. El
mantenimiento del voltaje lo realiza inyectando corriente en la clula, la que es
igual y opuesta a la que fluye a travs de los canales de iones sensibles a voltaje.
Un experimento tpico de voltage clamp, comienza con el mantenimiento del
potencial de membrana en su potencial de reposo. Si se enva un potencial de
despolarizacin de 10 mV se observar una descarga muy breve de salida
correspondiente a la corriente capacitiva. Esta corriente va seguida de otra,
tambin de salida, ms pequea y que persiste durante todo el pulso
despolarizante (ver figura 1). Al final del pulso se puede ver una pequea
corriente de entrada. Esta corriente corresponde a la capacitiva nuevamente.
Luego de esto, la corriente de la membrana regresa a cero.

Figura1: Una pequea despolarizacin va acompaada de corrientes capacitivas


y de fuga.
La corriente inica que se ve luego de la capacitiva, es la llamada corriente de
fuga o corriente de leak. sta, se produce gracias a los canales de reposo, que
siempre estn abiertos (an en ausencia de estmulo) y que adems son los
responsables del potencial de reposo de la membrana celular.
Si se enva una pulsacin de despolarizacin mayor, entonces el registro de la
corriente se complica un poco. Por una parte, la amplitud de la corriente
capacitiva y la de fuga, aumentan. Adems como puedes observar de la figura 2,
luego de la corriente capacitiva de salida y al comienzo de la de fuga, se produce
una corriente de entrada, la que se mantiene durante unos pocos milisegundos
para dar lugar a una gran corriente de salida. Esta corriente de salida se
mantendr durante todo lo que dure el pulso.

Figura 2, una despolarizacin mayor induce corrientes capacitivas y de fuga ms


grandes, ms una corriente de entrada y otra de salida.
Una explicacin para este resultado es que la despolarizacin de membrana
produce la apertura de dos canales por separado, uno que promover el flujo de
iones hacia dentro de la clula y otro que promover la salida de iones de la
clula.
Para poder determinar de qu iones se trataba y por ende, qu canales son lo
que se abren, Hodgkin y Huxley comenzaron por reemplazar el sodio extracelular
por un catin ms grande y no permeable, como la colina. Con esto, fueron
capaces de eliminar la corriente de entrada y pudieron determinar que sta
efectivamente era producida por el ion sodio. Posteriormente utilizaron
bloqueadores, como tetrodotoxina (TTX). Esta molcula es un veneno
procedente de un tipo de pez globo, el cual bloquea selectivamente los canales
de sodio dependientes de voltaje con una potencia muy elevada en el orden de
nanomoles.

Otro bloqueador sumanente importante en biofsica es el tetraetilamonio (TEA).


Esta molcula es un bloqueador selectivo de los canales de potasio sensibles a
voltaje, de modo que al aplicar TEA al axn, se puede ver una prdida de la
corriente de salida correspondiente al potasio (figura 3).

Figura 3: Si se despolariza la clula en presencia de tetrodotoxina (TTX) que


bloquea las corrientes de sodio y luego en presencia de tetraetilamonio (TEA) que
bloquea la corriente de potasio, podemos ver que se pierde la corriente de entrada
y
de
salida
respectivamente.

Los canales de sodio y de potasio sensibles a voltaje, presentan algunas


similitudes como que a medida que aumenta la despolarizacin, ambos
aumentan su probabilidad de apertura y su velocidad de apertura. Sin embargo,
tambin presentan diferencias adems de su selectividad, ya que difieren en
cuanto a su velocidad de apertura y a su respuesta frente a una despolarizacin
prolongada. Siempre, frente a cualquier despolarizacin, los canales de sodio se
van a abrir ms rpido que los canales de potasio sensibles a voltaje. Adems,
frente a una despolarizacin prolongada, los canales de sodio dejan de conducir
debido a que sufren inactivacin. Al contrario, los canales de potasio no se
inactivan, sino que permanecen abiertos todo el tiempo que la membrana est
despolariza

http://www.academia.edu/8186959/Biolog%C3%ADa_TP1
http://acercandolabiofisica.blogspot.mx/2009/10/potencial-de-accion.html
http://glosarios.servidor-alicante.com/fundamentos-biologicos-conducta/pronasa
http://glosarios.servidor-alicante.com/fundamentos-biologicosconducta/tetraetilamonio-tea
https://books.google.com.mx/books?
id=jgVxyb2JlOgC&pg=PA274&lpg=PA274&dq=pronasa+potencial+de+accion&sou
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