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Replicacin del ADN

El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN


duplicarse (es decir, sintetizar una copia idntica). De esta manera de una
molcula de ADN nica, se obtienen dos o ms "replicas" de la primera. Esta
duplicacin del material gentico se produce de acuerdo con un mecanismo
que se denomina Replicacin semiconservadora, lo que indica que las dos
cadenas complementarias del ADN original, al separarse, sirven de molde cada
una para la sntesis de una nueva cadena complementaria de la cadena molde,
de forma que cada nueva doble hlice contiene una de las cadenas del ADN
original. Gracias a la complementacin entre las bases que forman la
secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad
de reproducirse idnticamente, lo que permite que la informacin gentica se
transmita de una clula madre a las clulas hijas y es la base de la herencia del
material gentico.

La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes
de hidrgeno entre las bases complementarias puntos determinados: los
orgenes de replicacin. Las protenas iniciadoras reconocen secuencias de
nucletidos especficas en esos puntos y facilitan la fijacin de otras protenas
que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN formndose una
horquilla de replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen en
el mecanismo molecular de la replicacin, formando el llamado complejo de
replicacin o replisoma. Estas protenas y enzimas son homlogas en
eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.

Replicacin semiconservadora:
En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas originales,
y por eso se dice que la replicacin del ADN es semiconservadora. Hasta que
finalmente se pudo demostrar que la replicacin es semiconservadora, se
consideraron tres posibles modelos para el mecanismo de la replicacin:

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas


hijas se conserva una de las cadenas originales.

Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la


original.

Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de


la cadena antigua y fragmentos de la nueva

Tres posibles modelos de replicacin. a) Conservadora, b) Dispersora, c)


Semiconservadora (mecanismo real).
Los procariontes (especialmente Escherichia Coli) son excelentes para las
investigaciones

de

mecanismos

genticos

debido

sus

mnimos

requerimientos de crecimiento, los tiempos cortos de generacin y la


composicin gentica relativamente sencilla. Por el contrario, los eucariotas
multicelulares poseen varias propiedades que obstaculizan las investigaciones
genticas. La ms impresionante son los largos tiempo de generacin (con

frecuencia meses o aos) y las extraordinarias dificultades para identificar los


productos gnicos (p. ej., las enzimas o los componentes estructurales). Una
tctica comn en la investigacin gentica es inducir mutaciones, y
posteriormente observar los cambios de un producto gnico especfico o su
ausencia. Desafortunadamente, debido a su considerable complejidad, en los
organismos superiores este mtodo a identificado muy pocos productos
gnicos. Las tcnicas del DNA recombinante se estn empleando para burlar
este obstculo.
El proceso de la replicacin semiconservadora se demostr por primera vez
con un experimento elegante que describieron en 1958 Matthew Meselson y
Franklin Stahl.

El experimento permiti demostrar que el mecanismo real se ajusta a la


hiptesis de replicacin semiconservadora. Para ello se hicieron crecer clulas
de Escherichia coli en presencia de nitrgeno-15, un istopo del nitrgeno
ms pesado de lo habitual. En consecuencia, el istopo se incorpor a las
cadenas de ADN que se iban sintetizando, hacindolas ms pesadas.
Una vez conseguido el primer objetivo, las clulas fueron transferidas a un
medio que contena nitrgeno-14, es decir, un medio ms ligero, donde
continuaron su crecimiento (divisin celular, que requiere la replicacin del
ADN). Se purific el ADN y se analiz mediante una centrifugacin en gradiente

de cloruro de cesio, en donde hay ms densidad en el fondo del tubo que en la


parte media del mismo.
En la primera generacin se obtuvo una nica banda de ADN con densidad
intermedia. En la segunda generacin se obtuvieron dos bandas, una con
densidad ligera y otra con densidad intermedia o hbrida. En la tercera
generacin se obtuvieron dos bandas, una ligera (con una abundancia del 75
%) y otra intermedia (con el 25 % restante).
La banda intermedia o hbrida representa una molcula de ADN que contiene
una cadena pesada (original) y otra ligera (recin sintetizada). Las cadenas
ligeras representan una molcula de ADN en la que las dos cadenas han sido
sintetizadas (no existan aun cuando las clulas se pusieron en presencia de
nitrgeno-15).