Cromatografa de gases

La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se
produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos
de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito; su
nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido
(GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms
ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En
la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de
adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa
tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la
separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase
estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido
inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos
componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la
columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.
Aplicaciones

La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad

para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y
sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar
cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis
cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada
compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de
temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones cuantitativas,
integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados
adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito.

Montaje de tcnicas

El montaje de una tcnica analtica de CG es netamente emprica, el perfil de los

analitos que se quiera determinar, la eleccin de la fase mvil, los tiempos de
retencin (elucin) estarn dados exclusivamente por las condiciones particulares
de la columna (fase estacionaria) frente al equipo. Las rampas de temperatura a
seleccionar
bien
pueden
isotrmicas
o
escalonadas.
La eleccin del gs depender del tipo de detector, la eleccin de la columna (fase
estacionaria) depender de la polaridad de los compuestos a separar, el detector
depender
del
tipo
de
compuestos
a
detectar.
Usualmente una tcnica analtica de GC consumir muchas horas de un
cromatografista en ser desarrollada e instalada por el mtodo del ensayo y error
antes
de
ser
validada
como
real.

La eleccin de los estndares es fundamental en el desarrollo de la tcnica. La

estabilizacin de la lnea base de la fase mvil en la fase estacionaria ( posterior al
frente del solvente) a travs del tiempo es fundamental para establecer un
mtodo. Una lnea de base (solvente) poco estable o irregular que cambia de
intensidad frente al detector a medida que eluye debe ser afinada y estabilizada
antes
de
introducir
los
analitos.
El layout de los parmetros del rango de temperatura del horno, la adecuada
eleccin de la columna y su fase estacionaria (incluye, tipo, largo y dimetro), la
eleccin adecuada del tipo de detector, las temperaturas del detector e inyector,
los volmenes de analito, debern ser establecidas de modo tal que se obtenga la
mayor eficacia en separar los analitos, y con la mejor resolucin posible. La pureza
de la muestra depender de la preparacin previa de la misma.
La CG es una metodologa altamente efectiva y su perfomance permite una amplia
gama de posibiidades para la qumica analtica en compuestos orgnicos. Una
derivacin de esta tcnica es la Cromatografa HPLC que funciona en base a la
afinidad del analito por la fase mvil lquida en vez de gaseosa.
La sensibilidad de la tcnica GC puede incluso detectar microgramos del analito si
est bien montada. La cuantificacin se basa en clculos del rea bajo la curva que
es proporcional a la concentracin del analito. Comnmente se usa en estndar
interno de trabajo.
Las caractersticas descritas para cada vegetal deben ser cumplidas por la muestra de
materia prima como el primer paso para establecer su identidad y pureza.
Las caractersticas macroscpicas son todos los elementos morfolgicos de
laplanta para lo cual se necesita tener bien identificada la clasificacin botnica del
ejemplar.

Estas caractersticas comprenden la forma, el tamao, el color, la textura, los aspectos

de fractura y caractersticas de la superficie que son tiles para determinar la identidad
y la pureza de ladroga examinada cuando se recibe en la forma vegetal entera o con el
rgano especfico (raz, tallo, hoja, flor, fruto,semilla).
Cuando se trata de droga pulverizada es indispensable el anlisis microscpico.
Este anlisis ayuda a la identificacin de ladroga y es fundamental cuando se quiere
determinar adulterantes. Para garantizar la identificacin de la planta medicinal,
elanlisis microscpico debe ser complementado con el anlisis fisicoqumico del
material vegetal.
Mtodo: Se dispersa en un porta objeto cantidad suficiente de muestra y se observa a
travs de un microscopio de luz con aumentos de 4x, 10x y 40x.
La cromatografa en capa delgada es un mtodo simple y eficiente que sirve para
identificar y cuantificar metabolitos secundarios en las drogas vegetales, sus
extractos y tinturas e igualmente para que en una formulacin farmacutica sea
posible identificar la presencia de un metabolito secundario de inters farmacolgico.

Procedimientos de cromatografa
Existen dos procedimientos, uno sobre papel y otro sobre placa de silicagel.
Tanto al papel como a la placa de silica gel se les denomina fase estacionaria.

En ambos se deposita el material a ensayar con una micropipeta de laboratorioo

instrumental semejante (una jeringuilla de muestreo), sobre una lnea de referencia o
de partida. La placa de silica gel con la muestra depositada se coloca dentro de una
cmara con una mezcla de solventes orgnicos que son especficos para cada ensayo a
la cual se le denomina fase mvil.
Al cabo de cierto tiempo especificado se determina el corrimiento que ha tenido la
mezcla de solventes los cuales se desplazaron sobre la fase fija en el papel o placa
de silica gel y se determina la distancia desde el punto en donde se coloc la muestra
hasta el borde extremo del corrimiento de la fase mvil.
En la medida que la muestra se desplaza sobre la fase fija va dejando un rastro de
sustancias orgnicas que deben ser reveladas por medio de un reactivo qumico o
exponiendo la fase mvil bajo los rayos de la luz ultravioleta.
Se determina la distancia que se encuentra la mancha o manchas detectadas desde
su posicin al punto de partida de la muestra. La razn entre la distancia a que se
encuentra la mancha analizada y el total del corrimiento de la fase mvil se le llama
razn de fraccionamiento Rf.
Cuando los principios activos de una droga no son conocidos, la identificacin de
la droga puede ser realizada a travs de la determinacin de sustancias caractersticas
de la planta en cuestin, aunque no tengan actividad farmacolgica
(perfil cromatogrfico) contra un extracto preparado bajo las mismas condiciones de
la muestra, pero con un material vegetal de referencia.
Estas sustancias denominadas marcadores (o marcadores positivos), son seleccionadas
entre los diferentes compuestos caractersticos de la planta medicinal. El uso de ellas
debe limitarse solamente a la identificacin del material vegetal, de los extractos y de
las tinturas. Los marcadores pueden servir, igualmente, para identificar la presencia
de la droga en un fitofrmaco.
Cuando los marcadores no son las sustancias responsables de la accin farmacolgica
de la droga, no deben ser utilizados para las determinaciones cuantitativas.
La presencia de manchas o bandas coloreadas con el mismo valor de razn de
fraccionamiento (Rf) de las sustancias de referencia en el cromatograma de la
muestra, no es suficiente para identificar el material vegetal.
La existencia de otras manchas o bandas coloreadas debe ser anotada, as como su
posicin en relacin a la posicin de las sustancias de referencia utilizada. El uso de
sustancias de referencia que no son constituyentes de la planta es de utilidad para
determinar la ocurrencia de falsificaciones, estas sustancias reciben la denominacin
de marcadores negativos.

Debe especificarse las condiciones cromatogrficas de la fase estacionaria, la fase

mvil y el revelado.