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Reaccin secundaria: Se caracteriza por la aparicin de un fenmeno

visible como la aglutinacin, la precipitacin, etc.

Precipitacin: Cuando un anticuerpo es puesto en contacto con una


solucin de la macromolecula que lo origin, se forman complejos antgenoanticuerpo que se insolubilizan luego en su mayor parte dando una reaccin
de precipitacin, la que puede ser total o zonal.
Cualitativa: la precipitacin cualitativa se produce en dos etapas: 1desarrollo rpido de la formacin de los complejos Ac-Ag primarios y 2agregacin de los complejos originando micelas que precipitan. La
temperatura acelera la segunda etapa.
Con haptenos monovalentes o antgenos que poseen un solo determinante
antignico por molcula la precipitacin no se produce.
Cuantitativa: la precipitacin puede utilizarse con fines cuantitativos para
medirse la concentracin de anticuerpos presentes en suero. Es necesario
que el antgeno sea lo ms puro posible para evitar que otros antgenos no
especficos precipiten.
En medio de geles: las macro-molculas pueden difundir libremente a travs
de geles. Empleando soportes adecuados es posible hacer que migren
antgenos y anticuerpos de modo que al encontrarse reaccionen:

Difusin simple monodimensional: consiste en colocar en un tubo de


ensayo pequeo Agar fundido (al 1% en NaCl 0,15M) mezclado con
un volumen igual al del antisuero a analizar. Producida la
solidificacin se aade la solucin de antgeno. Los precipitados
aparecen con la forma de bandas cuando la concentracin del
antgeno que ha difundido es ptima.
Si en el suero haba ms de un anticuerpo y en la solucin aadida
ms de un antgeno que se corresponden se formarn tantas bandas
de precipitacin como sistemas haya interaccionando (siempre y
cuando los reactivos no estn a concentraciones menores a las
necesarias). La velocidad de migracin depende del coeficiente de
difusin del antgeno y de su concentracin.
Doble difusin bidimensional: emplea portaobjetos cubiertos con agar
al 1,5% en solucin salina como base de la reaccin. Consiste en
enfrentar en pequeas perforaciones efectuadas en Agar, y a
distancias convenientes, las soluciones de antgenos y anticuerpos. Al
difundir ambos y ponerse en contacto producirn una banda de
precipitacin cuando estn en la relacin ptima. Si la concentracin
de antgeno y anticuerpos colocados en los reservorios es la que
corresponde a la zona de equivalencia la banda de precipitacin se
formar equidistantemente de ambos.
Si la banda de precipitacin es recta indica que los pesos moleculares
son similares. Si la banda es cncava con respecto al reservorio de

antgeno, seala que el peso molecular de ste es superior al del


anticuerpo, y lo opuesto si es convexo.
La distancia a la que una sustancia difunde est directamente
relacionada con su concentracin e inversamente proporcionada a su
peso molecular.
Este mtodo resulta muy interesante porque permite identificar las
bandas de precipitacin mediante el empleo simultaneo de antgenos
y anticuerpos conocidos. De acuerdo a este hecho se describen tres
tipos de reacciones: 1- Reacciones de identidad: los dos sistemas
reactivos se funden en una nica banda de precipitacin; 2Reacciones de no identidad: Los sistemas no son iguales, cada uno
reacciona independientemente originando bandas de precipitacin
que se cruzan; y 3- Reacciones de identidad parcial: las bandas de
precipitacin en ambos sistemas se unen y funden parcialmente en
una banda, apareciendo una prolongacin o espoln en la
correspondiente al antgeno que se emple para la obtencin del
antisuero. Esto indica que en este antgeno hay componentes
antignicos no compartidos con el restante.
La difusin doble en placa es un excelente mtodo cualitativo para el
estudio de la homogeneidad de antgenos y anticuerpos purificados.
Tambin es til en la bsqueda de impurezas.
Difusin simple en placa: Desde el punto de vista cualitativo es poco
til, ya que el anterior provee ms informacin. Consiste en preparar
una placa con Agar al 3% en solucin salina, al que previa funcin se
le aade un volumen igual al del suero que contiene los anticuerpos.
Producida la solidificacin, se practican orificios en la misma y en
cada uno de ellos se coloca el antgeno a analizar. Si el sistema es
equivalente un crculo rodear el orificio.
Este mtodo permite detectar en muestras cantidades mnimas. El
dimetro del halo formado est en relacin directa con su
concentracin.
Si se efecta esta operacin con diferentes concentraciones
conocidas del antgeno especfico para el antisuero mezclado en el
agar, se puede graficar una curva de concentraciones antignicas
mediante la cual se puede calcular la concentracin de una muestra
desconocida segn su halo de precipitacin.
Inmunoelectroforesis: para su realizacin se requiere una fuente de
poder capaz de proveer el voltaje y miliamperaje necesarios, Agar
purificado, cubas de material plstico, soluciones reguladoras,
inmunosueros, reactivos, colorantes. La innmuno-precipitacin tiene
lugar en las 24 horas siguientes. Pueden emplearse otros soportes
diferentes como las tiras de acetato de celulosa gelatinizado.

Aglutinacin:

cuando un anticuerpo es puesto en contacto con su


antgeno especifico, si este se encuentra al estado particulado, las
partculas se agruman y aglutinan. Un mismo anticuerpo puede dar
aglutinacin con una suspensin bacteriana o precipitacin con un lisado de

la misma.
La aglutinacin se lleva a cabo en medio slido (0,15 M).
Mtodos cualitativos: son muy utilizados con el objetivo de identificar
bacterias, grupos sanguneos, etc. Estas reacciones se efectan en
portaobjetos mezclando suspensiones de las bacterias o hemates a
identificar con antisueros diferentes. La formacin de grumos indicara la
especificidad del sistema reaccionante.

Valoracin de antisueros: los mtodos son semicuantitativos y


consisten en determinar cul es la mxima dilucin del suero capaz
de aglutinar al antgeno especfico. Las diluciones generalmente se
hacen en razn de dos y el ttulo se expresa por la inversa de la
mxima dilucin aglutinante. Los valores obtenidos son groseros y
pueden aproximarse efectuando diluciones intermedias.
La variacin del ttulo puede ser muy til para seguir la evolucin de
una infeccin bacteriana o de una isosensibilizacin por antgenos
hemticos.
El dosaje de los anticuerpos por aglutinacin puede hacerse mediante
reacciones de lectura LENTA o RPIDA. En el primer caso se emplean
suspensiones diluidas de antgeno, las que se mezclan con volmenes
iguales de las diferentes diluciones del suero a valorar, empleando
como diluente cloruro de sodio 0,15M. los tubos son incubados en
baos de agua a 37C durante 2 horas y dejados luego en el
refrigerador hasta el da siguiente para completar la reaccin. El titulo
se determina buscando cul es el ltimo tubo de la serie que presenta
aglutinacin.
La aglutinacin rpida es muy utilizada en serologa diagnostica
(Brucellosis, Salmonella). En este caso la reaccin se efecta en
placas, el antgeno a emplear es 20 veces ms concentrado que el
usado en la aglutinacin lenta y la lectura de los resultados se hace a
los 3-5 minutos. Los fundamentos y determinacin del ttulo son
similares a los indicados anteriormente.
PROZONA: Es el comportamiento particular que se observa en
algunos sueros y est caracterizado por ausencia de aglutinacin en
los primeros tubos de la serie, en los que la concentracin de
anticuerpos es mxima, con aglutinacin positiva a diluciones
mayores.
Valoracin de anticuerpos incompletos o bloqueantes: Adems de no
aglutina, al ser puestos en presencia de las correspondientes
partculas antignicas las bloquean e impiden su aglutinacin por el
anticuerpo especifico bivalente.
La valoracin puede hacerse por bloqueo, conglutinacin o mtodo de
Coombs.
Aglutinacin cuantitativa: puede servir para determinar los
miligramos de anticuerpo especfico para un antgeno particulado
existente en un suero inmune. Se determina el nitrgeno del
aglutinado formado por el antgeno y su correspondiente anticuerpo,

al que se le resta el nitrgeno correspondiente a un volumen igual del


antgeno puesto en contacto con suero normal de la misma especie
animal que contena los anticuerpos.
Aglutinacin pasiva: cantidades de anticuerpos contra un antgenos
soluble no pueden detectarse por precipitacin si su concentracin no
excede los 20mg/ml. Teniendo en cuenta que la aglutinacin es ms
sensible que la precipitacin, se transforma la segunda en una
tcnica de aglutinacin (hemaglutinacin y aglutinacin pasiva
propiamente dicha).
Es un mtodo semicuantitativo que permite determinar
concentraciones relativas de anticuerpos sobre la base de la mxima
dilucin aglutinante. Es diez veces ms sensible que la aglutinacin y
mucho ms que la precipitacin. Es en parte debido al tamao de las
partculas.
Se coloca en tubos de 0,5 ml de las diluciones del suero a valorar y
0,05 ml del antgeno fijado al soporte, los que se agitan para mezclar.
Se dejan en temperatura ambiente por 18-24 horas y se observan los
tubos sin centrifugar por la parte inferior para determinar la
aglutinacin.
Es utilizada en serologa diagnstica para la deteccin de hormonas y
antgenos solubles (fluidos corporales).