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Complejo de iniciacin de la transcripcin

Fosforilacin de el CTD de la ARN pol II

FACTORES DE ELONGACIN
TFII S
Reduce el tiempo de pausa
Lectura de prueba
pTEFb
Fosforila a la ARNp
Fosforila a hSPT5
Recluta TAT- SF1
TAT- SF1
Empalme
hSPT5
Formacin del casquete

LA ARN POL EN LA ELONGACIN SE ASOCIA CON UN NUEVO


CONJUNTO DE FACTORES PROTEICOS QUE PARTICIPAN EN EL
PROCESAMIENTO DEL ARN (RECLUTAMIENTO
COTRANSCRIPCIONAL DE FACTORES DE PROCESAMIENTO)

Procesamiento?
Estructura y formacin del casquete
Poliadenilacin
Splicing

ROLES CELULARES DE LOS TRANSCRIPTOS POR


LA ARNpol III

Review TRENDS in Genetics Vol.23 No.12

Specific variants of general transcription factors regulate germ cell development in diverse
organisms

Richard N. Freinman

REGULACIN EN
EUCARIOTAS
Dra. Estela Castillo

Posibles niveles de regulacin de la expresin


gnica:

REGULACIN EN EUCARIOTAS
La regulacin de la expresin gnica es ms compleja
en eucariotas.
El ADN est empaquetado con protenas formando
la cromatina.
La transcripcin se produce en el ncleo y la traduccin
en el Citoplasma.

Los transcritos son procesados antes de ser


transportados al citoplasma.

La mayora de eucariotas son organismos pluricelulares


con expresin gnica diferencial en cada tipo celular.

El nmero de genes es mayor.

REGULACIN EN EUCARIOTAS:
TRANSCRIPCIN
Control de la transcripcin elementos CIS y TRANS

Control en CIS
Promotores secuencias de ADN de 200 pb a 5' del inicio de la
transcripcin.
*Promotor Mnimo regin comprendida entre la caja
TATA (-25-30) y el inicio de la transcripcin.
Determina una transcripcin basal
*Elementos proximales: Secuencias localizadas entre
la caja TATA y -200 pb (o ms lejos) y que determinan
una transcripcin eficiente y regulada del gen. Estructura
modular. La localizacin y organizacin de estos mdulos
es variable.
Elementos que actan con independencia de la distancia:
*Intensificadores (enhancers)
*Silenciadores

REGULACIN EN EUCARIOTAS: PROMOTORES

REGULACIN EN EUCARIOTAS: TRANSCRIPCIN


Intensificadores y silenciadores:
Pueden localizarse a 5 o 3 del gen, o incluso
dentro del mismo.
Puede invertirse su orientacin sin cambiar su
efecto.
Al moverlos a otra posicin del genoma afectan a
la expresin de los genes adyacentes.
Tienen una estructura modular, con diferentes
secuencias cortas de ADN.
Regulan la expresin gnica especfica tisular y
temporal.

REGULACIN EN EUCARIOTAS: TRANSCRIPCIN


Elementos que actan en TRANS: son protenas
reguladoras que se unen a secuencias de
reconocimiento especficas del ADN.
Factores de transcripcin basales o
generales: se
unen al promotor mnimo para
iniciar la transcripcin.
Factores de transcripcin: protenas que se
pueden
unir a secuencias del promotor,
activadores y
silenciadores afectando a la
transcripcin. Si incrementan la transcripcin se
denominan activadores, si la disminuyen represores.
Controlan el
nivel de expresin y la
especificidad tisular y temporal.

REGULACIN EN EUCARIOTAS: FACTORES DE


TRANSCRIPCIN

EL HOMEOBOX CODIFICA PARA UN HOMEODOMINIO

CLASE

MNOMERO
O DMERO

CARACTERSTICA
S

EJEMPLO

HELICE
VUELTA
HELICE

MONMERO

TRES HELICES:
H3 SE UNE AL ADN
H1 Y 2 SE UNEN A
OTRAS PROTENAS

PROTENAS
HOMOTICAS
DE
DROSOPHILA

DEDO DE Zn

MONMERO

UNE Zn EN UNA
REGIN PROTENA
RICA EN
HISTIDINAS O
CISTEINAS

RECEPTOR
ESTEROIDEO

CIERRE DE
LEUCINA

HOMODMERO
HETERODMER
O

DMEROS
FORMADOS A
TRAVS DE LA
INTERACCIN DE
REGIONES RICAS
EN LEUCINA

PROTOONCOGE
N C-FOS Y CJUN

HELICE
BUCLE
HELICE

DMERO

DOS HELICES
UNIDAS POR UN
BUCLE

PROTOONCOGE
N C-MYC

Proteinas de
unin a poly(C)
y su papel en
la activacin de
la
transcripcin.

REMODELACIN DE LA CROMATINA
Remodelacin de la cromatina: cambios en la
organizacin de la cromatina.
Para la transcripcin de un gen es necesario una
estructura de la cromatina abierta (la ARN polimerasa
y los activadores deben unirse al ADN)
Hipersensibilidad al ADNasa I: en los genes activos
se observan normalmente regiones hipersensibles a la
ADNasa I (sin nucleosomas o ADN unidos dbilmente
a estos).

REGULACIN EN EUCARIOTAS: EPIGENTICA


Epigentica: cambios heredables en la expresin
gnica que ocurren sin cambio en la secuencia de ADN
Epigentica como sistema para activar o inactivar
genes de forma selectiva.
Mecanismo de accin epigenticos:
Metilacin de las citosinas
Acetilacin, Fosforilacin y Metilacin de las
histonas

EPIGENTICA

REGULACIN POST-TRANSCRIPCIONAL
Procesamiento alternativo del ARNm: permite generar
diferentes productos a partir de un nico gen. Muy
frecuente (30-60% de los genes humanos)
Edicin del ARNm
Splicing Alternativo
Poliadenilacin Alternativa
Estabilidad del ARNm
MicroRNAs y siRNA
Regulacin traduccional y postraduccional

ALGUNOS EJEMPLOS DE REGULACIN:

HIF FACTOR DE TRANSCRIPCIN

EXPRESIN GNICA LUEGO DE HIPOXIA ES EL RESULTADO


DE UNA
COMBINACIN DE EFECTOS

EL OXGENO PUEDE ACTUAR SOBRE LA DINMICA DE LA


CROMATINA Y SU ESTRUCTURA

REGULACIN DE LOS GENES DE MUCINAS

REGULACIN DE LOS GENES DE MUCINAS

REGULACIN DE LOS GENES DE MUCINAS

REGULACIN: ACTIVACIN REPRESIN POR OTROS

METILACIN DEL ADN

MODIFICACIONES COVALENTES DE
HISTONAS

COMPLEJOS PROTEICOS

REGULACIN MEDIADA POR ARN

METILACIN DEL ADN


La metilacin impide la unin de los factores de
transcripcin
Favorece la unin de protenas que inhiben la
transcripcin
Afecta a la accesibilidad que a su vez depende de:
Posicin del nucleosoma
Desensablado parcial de histonas
Metilan las islas CpG
1% del ADN
60 a 90% de las islas estn metiladas
70% de las islas estn en secuencias gnicas

Principalmente en el extremo
5

ADN metilado recluta HDAc a travs de protenas


con dominios de unin a CpG metiladas.
MeCP2 disminuye la transcripcin reclutando
Deacetilasas de Histonas (HDAC)

INHIBICIN DE LA TRANSCRIPCIN POR METILACIN


DEL ADN

MODIFICACIONES DE HISTONAS
Las cadenas laterales de las histonas sufren
modificaciones.
Modificaciones postraduccionales:
Acetilacin
Fosforilacin
Metilacin (ms estable)
Otras, ubiquitinacin...
Hiptesis del cdigo de histonas: combinacin de las
modificaciones de histonas Epigenoma.

Enzima: ADN (citosina 5) Metil transferasa.


EC 2.1.37 DNMT
DNMT 1 enzima de mantenimiento de
metilacin
DNMT3A y 3B metilacin de novo

Dominio SET
SUR39H1: codifica una HMT (metilasa de
histonas) que metila H3 en posicin Lys9 a travs
de un dominio comn SET
EZH2 Metila H3 en Lys 27 (silencia)
MLL metila H3 en Lys 4 (activa al inhibir la
HDAC)

COMPLEJOS PROTEICOS
POLYCOMB TRITHORAX

A.

Ac frente a polycomb en Drosophila

B.

Grupo de ADN a travs de elemento PREs (Polycomb


Response Elements)

POLYCOMB (PCG) Y TRITHORAX (TRXG)


GRUPO DE PROTEINAS: REGULADORES EPIGENETICOS
Originalmente descubiertas en Drosophila como reguladores de
los genes hometicos, tambin regulan otros blancos
involucrados en la diferenciacion y proliferacin.
PcG silencian genes, trxG activa genes.
Conservadas a travs de la evolucin.
En humanos ellas mantienen a las celulas indiferenciadas, pero
tambien se requieren para la proliferacion y el mantenimiento
de varios tipos de stem cells. Tambien regulan la X-inactivation
en hembras asi como imprinting genomico.
Mutaciones en PcG y trxG inducen diferente cnceres.

PCG Y TRXG ESTN ASOCIADAS A MLTIPLES LUGARES


EN EL GENOMA
DAPI

Merg
e

PH

Tincin de los cromosomas politcnicos muestran alrededor


100 bandas para cada PcG.
de

PROTENAS PCG SE UNEN A ELEMENTOS DEL ADN


ESPECFICOS LLAMADOS PREs
Unin de protenas PcG en vivo (en cromosomas
politcnicos y por experimentos de entrecruzamiento
crosslinking )
Unin lidera el mantenimiento de la represin de PcG
en genes reporteros.
Represin es potenciada por la presencia de muchas
copias de PRE.

POLYCOMB

POLYCOMB

ACCIN DE LOS COMPLEJOS PcG Y trxG


SOBRE EL CROMOSOMA
Remodelaje del
nucleosoma
(complejo
BRM)

Ac

acetilacin y
metilacin de
histonas (complejas
TAC1 y ASH1)

PRE

ON

Mantenimiento
del estado activo
(cromatina
abierta)

OFF

PcG

MeK4H3

Targetgene

Desacetilacin y
metilacin de
histonas [complejo
ESC-E (Z)]

MeK27H3

Compactacin de la
cromatina.
Ubiquitinacin H2A
(complejo PCR1)

trxG

Mantenimiento del
estado reprimido
(cromatina
compacta)

UbH2A

QU EFECTOS PRODUCE POLYCOMB SOBRE LA


CROMATINA?
CONDENSACIN DE LA CROMATINA

El complejo puede condensar un arreglo de 12 nucleosomas in


vitro.
La condensacin requiere protenas PSC (no PH) e involucra
histonas pero no necesita la cola de las histonas.

Datos extrados de: Francis et al. (2004), Science

INHIBICIN DE LA TRANSCRIPCIN POR COMPLEJO


PC

TRITHORAX

TRANSCRIPTOS NO CODIFICANTES
TRANSCRIPTOS A PARTIR DE CUALQUIER CADENA:

Small RNAs (sRNAs),


MicroRNAs (miRNAs; 22 nt),
Small nucleolar RNAs (snoRNAs; 60300 nt),
Small interfering RNAs (siRNAs;2125 nt)
Piwi-associated RNAs (piRNAs;2631 nt).
Otros
Long RNAs
ncRNAs tambin incluyen otras variedades de largos
cuya funcin no se ha elucidado.

BioEssays 29:10771080, 2007

ARN NO CODIFICANTES

REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN POR


TRANSCRIPTOS NO CODIFICANTES LARGOS

ARN no codificantes ncRNA (largos)


Qu mecanismo regula su biosntesis?
Cul es su funcin biolgica?
Existe un relacin entre los ARN codificantes de protenas
y los ARN intrnicos?
Modelo
Lneas celulares de cncer de prstata
Andrgenos

Northernblotde
distintostejidoscon
transcriptointrnico
antisensemapeadoen
ellocusGAS6.

EFECTO DE ANDRGENOS EN LOS NIVELES DE ARN


INTNICOS Y SU TRANSCRIPTO CODIFICANTE
CORRESPONDIENTE
Transcripcin antisense de los intrones puede regular los
niveles de procesamiento transcripcional del ARNm sense
que codifica protenas
Al menos algunos de los transcriptos intrnicos pueden
afectar los niveles y/o el splicing de los transcriptos
codificantes para protenas de la cadena opuesta.
No est claro si funcionan como ARN largos o cortos.
Estos ncRNAs pueden ser regulados por seales fisiolgicas
como las hormonas

CMO CONTROLA EL ANDRGENO LA TRANSCRIPCIN


DEL ARN INTRNICO?
Por analsis bioinformticos. Se encuentran sitios ARE
putativos
upstream (al menos uno para 24 ARN)
SI EXISTE EL SITIO HAY UNIN?
S, si hay un incremento de la unin del receptor de
andrgenos
a un elemento de respuesta upstream de asMYO5A.
El motivo de asMYO5A ARE se localiza en el 5 de la regin
genmica
812 pb upstream de la regin donde mapea el transcripto
intrnico
antisense
MYO5A.

PATRONES DE
EXPRESIN DE
HOX Y
TRANSCRIPTO
S OS

EXPRESIN DE HOX Y NCT EN CLULAS


TRATADAS CON AR

Mecanismo de control de la expresin gnica a nivel de


la transcripcin por ARNnc

Las imgenes incluidas en esta


presentacin
son del dominio pblico
y no se pretendi
violentar ningn derecho copyright

Dra. Estela Castillo


Seccin Bioqumica Biologa Molecular
Facultad de Ciencias - UDELAR

Referencias
TRENDSinBiochemicalSciencesVol.32No.8
www.igh.cnrs.fr/equip/cavalli/link.PolycombTeaching.html
GenomeBiology2007,Volume8,Issue3,ArticleR43Nakayaetal.R43.3

Annu.Rev.Physiol.2008.70:40529
BioEssays29:10771080,
2007.
RNA(2007),13:223239.