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Los avances en biohidrgeno

fermentativa
Produccin: El camino a seguir?
Un esfuerzo significativo est en marcha para desarrollar biocombustibles
como sustitutos de los combustibles fsiles no renovables. Entre las diversas
opciones, el hidrgeno es una energa atractiva para el futuro debido a su
potencialmente mayor eficiencia de la conversin de potencia utilizable,
baja generacin de contaminantes y alta densidad de energa. Hay una
variedad de tecnologas para la produccin biolgica de hidrgeno; aqu, nos
concentramos en la produccin de hidrgeno por fermentacin y resaltar
algunos enfoques recientemente aplicados, tales como superficie de
respuesta metodologa, diferentes configuraciones de reactor y organismos
que se han utilizado para maximizar la produccin de hidrgeno tasas y
rendimientos. Sin embargo, no son significativas restantes barreras a la
aplicacin prctica, como la baja los rendimientos y las tasas de produccin,
y discutimos varios mtodos, entre ellos dos procesos de la etapa de
ingeniera y metablica, que estn dirigidas a la superacin de estas
barreras.

Introduccin
Los retos conjuntos del cambio climtico antropognico y la disminucin de
las reservas de combustibles fsiles estn impulsando la investigacin
intensa en fuentes de energa alternativas. Una va atractiva es utilizar un
proceso biolgico para producir biocombustible. Entre las diversas opciones
de biocombustibles, gas biohidrgeno es un atractivo portador de futuro de
la energa debido a su eficiencia potencialmente mayor de la conversin de
energa utilizable, baja en generacin inexistente de los contaminantes y de
alta densidad de energa. Los procesos de produccin biolgicos de
hidrgeno se pueden clasificar en tres principales categoras: biopirolisis de
agua utilizando algas y cianobacterias; fotodescomposicin de compuestos
orgnicos por las bacterias fotosintticas (fotofermentacion); y fermentativa
la produccin de hidrgeno a partir de desechos orgnicos o cultivos
energticos (Recuadro 1) [1]. Rendimientos Sin embargo, las bajas tasas de
produccin han sido los principales obstculos a la prctica de aplicacin de
tecnologas de biohidrgeno. La investigacin intensiva sobre biohidrgeno
est en marcha, y en los ltimos aos varios enfoques nuevos han sido
propuesto y estudiado para superar estos inconvenientes.
Aqu nos concentramos principalmente en la produccin de hidrgeno por
fermentacin, para los que ha habido una explosin virtual de los artculos
de investigacin ltimamente (pero no de hidrgeno, todava no!), y muchos
comentarios recientes sobre aspectos especficos estn disponibles [2-7]. Se

discuten nuevas tcnicas y mejoras existentes, que se han utilizado en los


intentos de aumentar las tasas de produccin de hidrgeno y de los
rendimientos. Algunas de las tcnicas discutidas han permitido grandes
aumentos en hidrgeno las tasas de produccin, y este avance ha trado la
produccin fermentativa de hidrgeno hasta el punto donde la tarifa de
produccin con sustratos reales (residuos) bajo realista condiciones estn
acercando los niveles prcticos. Por supuesto, es demasiado pronto para
poder definir exactamente lo que podra ser un nivel prctico para la
produccin de biohidrgeno, pero un spero criterio puede obtenerse
mediante el examen de un proceso detallado de anlisis de la produccin de
etanol por productor lignocelulsicos
[8], donde el diseo se centra
alrededor de una planta capaz de producir 50 a 100 kJ / l / h de etanol; el
cual como equivalente de hidrgeno sera de 5 a 10 l / l / h.
El gran obstculo que queda es la incompleta conversin y por consiguiente
bajo rendimiento. Tcnicas tradicionales, tales como la manipulacin y
optimizacin de parmetros de bioprocesos o de los organismos utilizados,
han fracasado para lograr ms de ~25% de conversin de sustrato a H2. De
hecho, esto es una consecuencia directa de la termodinmica de los
procesos metablicos conocidos, un hecho sealado tericamente Hace ms
de treinta aos [9] y ahora demostrado ampliamente en la prctica (por
ejemplo, ver [10]). Adems de H2, microbios fermentadores de hidrgeno
hacen otros productos a satisfacer sus necesidades metablicas y de mayor
crecimiento; estos incluyen acetato, que permite la sntesis de ATP, y una
variedad de productos reducidos (por ejemplo, etanol, butanol y cido
butrico) que permite la reoxidacin del NADH, que es necesarias para la
gluclisis continua (vase las figuras 1 y 2). Tipos y proporciones relativas
de los productos depende del organismo, las condiciones ambientales (pH y
la parcial presin de hidrgeno) y el estado de oxidacin del sustrato est
degradando. Por lo tanto, se cree que las fermentaciones se limitan a
producir ya sea como mximo 2 H2 / glucosa (tipo de bacterias de la
fermentacin entrica de cido mixto) o 4 H2 / glucosa (de tipo clostridios
fermentacin) [2]. Por lo tanto, los rendimientos son bajos, y dos tercios de
la de carbono y protones en el sustrato se excretan como otros productos y
desperdiciado. Varios enfoques, incluyendo la ingeniera metablica y
diversos procesos de dos etapas, se estn investigando activamente en un
intento de resolver este problema, y stos se discuten a continuacin.

Las tcnicas para la mejora de biohidrgeno


En primer lugar, se examinan algunas de las tcnicas tradicionales que se
han aplicado para la produccin de biohidrgeno y discutir a Hasta qu
punto tienen, o pueden, contribuir a aumentar la produccin de
biohidrgeno. Las tcnicas para la mejora de biohidrgeno tienden a buscar
a travs de las configuraciones de biorreactores especializados (ver Tabla 1).
Esto ha llevado a los sistemas con ms robusto, rendimiento que son

estables durante largos perodos de tiempo (meses) y resistente a las


fluctuaciones a corto plazo en parmetros de funcionamiento. Adems,
volumtrica optimizado las tasas de produccin se podan obtener.
Fermentaciones de biohidrgeno, como la mayora de otros tipos de
fermentacin, se pueden llevar a cabo tanto en modo discontinuo o
continuo. El modo por lotes de fermentaciones han demostrado ser ms
adecuado para estudios de optimizacin iniciales [4,11], pero cualquier
proceso industrial tienen que ser realizados en un proceso continuo o al
menos semi-continua (alimentado o secuenciacin batch). Muchos estudios
han empleado reactores continuos de tanque agitado (CSTR, ver Glosario),
ya sea con cepas purificadas o mezclas microbianas [4,5,11]. CSTR, los
sistemas de reactores continuos ms comnmente utilizados, la simple
construccin, facilita la operacin y la eficacia homognea de mezcla. Sin
embargo, en estos reactores, el tiempo de retencin hidrulico (HRT, ver
Glosario) controla la tasa de crecimiento microbiano y por lo tanto HRT
debe ser mayor que la mxima tasa de crecimiento del organismo (s),
porque ms rpido la tasas de dilucin, estas causan lavado. Un segundo
conceptual categora de reactores de flujo continuo, caracterizado por los
medios de la retencin fsica de la biomasa microbiana, supera este
problema y ofrece varias ventajas para un bioproceso prctico, porque el
lavado es causado por la alta tasa de dilucin. y la concentracin de la
biomasa
microbiana
se
vuelven
independiente
de
HRT,
altas
concentraciones de clulas pueden ser logrado, fomentando las altas tasas
de produccin volumtrica, y de alto rendimiento, lo que permite el uso (y
tratamiento) de los residuos con relativamente pequeos reactores de
volumen.
De hecho, muchos estudios recientes [3,5,11-22] han demostrado que las
altas tasas de produccin volumtrica de lata de hidrgeno se lograron en
estos reactores, y se dan algunos ejemplos en la Tabla 1. Retencin fsica de
la biomasa microbiana se ha logrado por varios medios diferentes,
incluyendo el uso de flculos o grnulos que se forman de manera natural
mediante bio pelculas microbianas o a base de membranas remanentes. De
hecho, hay muchas variaciones que hay casi tantos tipos de reactores
diferentes, con asociado acrnimos (UASB, FBBAC, AFBR, ASBR, CIGSB,
FBR), como hay laboratorios que llevan a cabo la investigacin en esta rea
(Tabla 1). Desafortunadamente, esto tambin crea una situacin en que es
muy difcil determinar si las diferencias en los diversos estudios se deben a
diferentes reactores o a las diferencias en los parmetros de
funcionamiento. Futuros estudios podran ayudar a resolver esta
ambigedad por comparar directamente diferentes configuraciones de
reactor o, por lo menos, al operar bajo condiciones novedosa con unas
configuraciones utilizadas en estudios previos. Un estudio que
especficamente compararon dos tipos de reactores diferentes mostr que
grnulos dieron un rendimiento superior sobre una bio pelcula, con
aproximadamente tres veces mayor tasa de produccin de hidrgeno [21].
En general, el mayor avance de estos tipos de reactores ms de un CSTR es
su gran aumento volumtrico en la tasa de produccin, que en algunos

casos puede ser de hasta una asombrosa> 50 veces ms grande (vase la


Tabla 1). Adems, estos tipos de reactores presentan un entorno favorable
para el desarrollo y el mantenimiento de los consorcios microbianos mixto,
que tienen ventajas que se describen a continuacin.
Un potencial problema con estos tipos de reactores es la prdida de
hidrgeno a travs de la formacin de metano. Debido a que las clulas que
controlan el crecimiento ya no directamente por la TRH en los sistemas
utilizando biomasa microbiana retenida, metangenos de crecimiento lento
puede florecer incluso a altas tasas de rendimiento lquido. Ella Cabe
sealar que los rendimientos obtenidos con hidrgeno estos sistemas no son
mayores que los conseguidos con CSTR, y de hecho no hay ninguna razn
para pensar que la tipo de reactor podra influir en el rendimiento.

El uso de consorcios microbianos mixtos


La mayora de los reactores descritos anteriormente dependen de la
formacin de flculos o grnulos, que son macroscpicos agregados de
clulas microbianas. La capacidad para formar estas partculas es un rasgo
raro en un cultivo puro, pero puede ser fcilmente seleccionado por un
cultivo mixto cuando se usa como un nculo.
Tambin hay un nmero de otras posibles ventajas del uso de consorcios
microbianos en lugar de puro culturas. Fermentaciones de hidrgeno
industriales, tendrn que ser llevados a cabo en condiciones no estriles
usando materias primas complejas disponibles slo con pretratamiento
mnimo. Consorcios microbianos abordan estas cuestiones, ya que han sido
seleccionados para el crecimiento y el dominio bajo condiciones no estriles.
Como una comunidad compleja que son tambin probables que contenga un
conjunto necesario de actividades hidrolticas, y son potencialmente ms
robustos a cambios en condiciones ambientales [23].
Un gran nmero de estudios recientes han examinado hidrgeno produccin
utilizando consorcios microbianos, y algunos ejemplos relevantes se dan en
la Tabla 1 (que otros pueden ser encontrados en otra parte [24]). El uso de
consorcios microbianos tienden a demostrar ser tiles en sistemas de
reactores que producen altas tasas volumtricas de produccin de
hidrgeno, como se discute anteriormente. Sin embargo, tambin hay varios
problemas asociados con su uso. Como comunidades complejas, su
composicin puede variar con el tiempo, con los cambios en los parmetros
del proceso y de reactor a reactor, como se demostr por molecular

(16sRNA) estudios [25-28]. Una posible forma de superar este cuestin


podra ser la construccin de consorcios "de diseo" [29] con el objetivo de
crear una comunidad de diversos miembros, cada uno aportando una
capacidad metablica nico y esencial. El rango metablico total sera
mayor que cualquier miembro individual, mientras que al mismo tiempo
interdependencia mutua asegurara el mantenimiento estable de los
miembros individuales. Sin embargo, poco se sabe acerca de la complejas
interacciones que se producen en los consorcios naturales o cmo
comunidades microbianas sintticos estables se podran construir [30]. Por
lo tanto, mucho trabajo adicional podra ser requerido antes de producir
hidrgeno sinttico, podra convertirse en una realidad. Parece que la
organizacin espacial dentro de un consorcio podra ser importante [31].

La mejora de la produccin de biohidrgeno por


ingeniera metablica de las vas existentes
Ingeniera metablica ha recibido aumentar la atencin en los intentos de
produccin de biohidrgeno, en los rendimientos de hidrgeno particulares
[32-40]. Las mejoras en la produccin de hidrgeno por las vas existentes
se pueden solicitar mediante el aumento del flujo a travs de un nocauts de
genes por vas o aumento de la expresin homloga de enzimas
participantes en las rutas de generacin de hidrgeno. La mayora de los
estudios que emplean estas estrategias han utilizado el caballo de batalla
de laboratorio para la ingeniera metablica.
Escherchia coli (Tabla 2, Figura 1). La razn de a ver utilizando E. coli ha
sido: (i) su genoma puede ser fcilmente manipulado; (ii) su metabolismo es
el mejor entendido de todas las bacterias; y (iii) que se degrada fcilmente
con variedades de azcares. En el lado negativo es el hecho de que
restringe en el metabolismo los rendimientos de hidrgeno a 2 H2 / glucosa
[2].
Sin embargo, el uso de E. coli ha servido como prueba principal de la
ingeniera metablica, esta se puede utilizar para lograr los rendimientos
mximos de hidrgeno predicho por la teora (vase Tabla 2 y la Figura 1
para los genes que se han dirigido).
La inactivacin de las vas que drenan las piscinas de piruvato, la fuente de
electrones (a travs de formiato) para la reduccin de protones, se espera
que aumente la produccin de hidrgeno, y se encontraron aumentos
modestos en los rendimientos de H2 cuando LDHA (Lactato deshidrogenasa)
[33-36] o frd (fumarato de reductasa) [35,36] fueron inactivados. En E. coli,
que est formado a partir de piruvato, se degrada a H2 y CO2 por el FHL

(formiato liasa-hidrgeno), y manipulaciones que condujeron a un aumento


en la expresin de enzimas, tales como FdhH (formiato deshidrogenasa H) y
Hyd3 (hidrogenasa 3), que tambin participan en esta va de aumento de
los rendimientos de H2 [33-36]. Por otra parte, la cantidad total de
hidrgeno producido se puede aumentar mediante la inactivacin de la
hidrogenasas Hyd1 y Hyd2, que son potencialmente capaces para oxidar.
Estos efectos son aditivos, y mutados, las cepas de E. coli que albergan
mltiples mutaciones permiten el rendimiento de H2 demostrando que
estaban cerca de la terica mximo de 2 H2 / glucosa para las vas
metablicas que existir en este organismo [2]. Aunque menos estudiado
hasta ahora, estas estrategias similares de ingeniera metablica podran
aplicarse a otros organismos. Sin embargo, no parece posible superar los
lmites actuales metablicos (2 a 4 H2 / glucosa) de este enfoque.

Otros intentos
Los nuevos modelos y nuevas optimizaciones se han llevado a cabo en los
intentos de mejorar la produccin de biohidrgeno. Las tarifas y los
rendimientos de la produccin de hidrgeno, como para muchos otros
bioprocesos, son una funcin de varias variables, incluyendo el pH,
temperatura, concentracin de sustrato y la disponibilidad de nutrientes,
entre otros. Aunque muchos estudios han informado que los efectos varan
los parmetros individuales uno a uno, el modelado y el anlisis podran ser
usados para determinar los valores ptimos de los parmetros importantes
pertinentes. Una variedad de modelados se han desarrollado como mtodos
que son ampliamente aplicables a la gama de diversos campos, incluyendo
la ingeniera, biologa, ciencias ambientales, la elaboracin de alimentos y la
transformacin industrial, as como su aplicacin en la produccin de
biohidrgeno es objeto de una revisin muy reciente [41]. Aunque las vas
metablicas y los flujos son relativamente bien entendido de un cultivo puro
de fermentacin de un definido sustrato, este tipo de anlisis, sin embargo,
puede tener algunos valores para el modelado de las fermentaciones de
sustratos complejos por consorcios microbianos que implican mltiples tipos
metablicos con las interacciones desconocidas.
Un tipo de tratamiento, es el anlisis de componentes principales [42], se
utiliz recientemente para evaluar los efectos del pH, la TRH y mezcla en la
produccin de hidrgeno [43]. Dos tipos principales de enfoques de
modelado ampliamente usados que son pertinentes a la produccin de
BioH2 son las redes neuronales artificiales (RNA, ver Glosario) y el diseo de
experimentos (DOE, ver Glosario). RNAs se utilizaron con xito para modelar
los resultados de la produccin de hidrgeno y la demanda qumica de
oxgeno (DQO, ver Glosario) la eliminacin con un lodo anaerbico de flujo

ascendente en un reactor de manta (UASB, ver Glosario) [44] y un ampliado


reactor lecho granular de lodo (EGSB). DOE utiliza modelados estadsticos
para analizar la relacin entre un conjunto de factores experimentales
independientes y proponer un diseo apropiado para su verificacin
experimental [46]. Un enfoque comn y poderoso del DOE es otorgado por
el diseo factorial (FD), combinado con la respuesta metodolgica de
superficie (RSM, ver Glosario) [47].
FD investiga las respuestas de mltiples factores que dependen de cada
otro y permite la identificacin de los ms importantes parmetros que
controlan el proceso y el grado de la interaccin entre ellos. El enfoque FD
puede ser acoplado a los sistemas experimentales de RSM, que utiliza una
respuesta de funcin para ajustar los datos experimentales obtenidos en
diseos teorticos.
Varios estudios recientes que investigan la produccin de hidrgeno por
medio de fermentacin oscura, han aplicado FD y RSM con el objetivo de
optimizar la produccin de hidrgeno (Tabla 3). Su resultados demuestran
que este tipo de anlisis puede de hecho ser utilizado para optimizar varios
aspectos de un biohidrgeno del proceso, incluidas las estrategias de
tratamiento previo, las condiciones para la germinacin de esporas, las
formulaciones de micronutrientes, la composicin del sustrato, de carbono /
nitrgeno (C / N) y carbono / fosfato (C / P). La ms til aplicacin ha sido
determinar el funcionamiento ptimo de condiciones con respecto a la
terapia de reemplazo hormonal, pH y la concentracin de sustrato, es decir,
la tasa de carga orgnica (OLR, ver Glosario). A pesar de todo se requieren
condiciones similares para fermentaciones mesfilos, hay diferencias
suficientes en algunos de los parmetros para justificar la necesidad de
optimizacin de un sistema particular. Adems, estos mtodos podran ser
tiles en el establecimiento de parmetros de proceso para nuevos
consorcios o sustratos complejos (flujos de residuos). Por ltimo, cabe
sealar que Aunque estos mtodos pueden optimizar rpidamente un
particular, la fermentacin, que no puede mejorar an ms el rendimiento
sobre lo que se podra obtener por mtodos ms clsicos de optimizacin,
como se puede ver por los resultados reportados en Tabla 3.
Micelas inversas tambin se han propuesto como unos posibles medios para
aumentar la produccin de hidrgeno. Micelas inversas, esencialmente
nano-estructuras de auto-montaje en el que un tensioactivo anfiflico se usa
para atrapar a una hidrfila como catalizador biolgico, se han utilizado
principalmente para investigar su capacidad para aumentar la estabilidad
de la enzima, mejorar la enzima cintica y promover la particin de
sustratos o productos entre la fase orgnica y acuosa [62,63]. La
encapsulacin de las clulas enteras en micelas inversas ha sido mucho
ms beneficiosa, y las medidas por clulas son mucho menos evidentes.
Varios estudios de produccin de hidrgeno que se interrogue por diferentes
compaeros de culturas en micelas inversas en los estudios de lotes a
pequea escala. Sin embargo, las razones de los rendimientos ms altos

observados no estn claras. Gran parte del trabajo, incluyendo una escala
muy sustancial arriba, sigue siendo antes de este sistema podra ser
explotado como un sistema de produccin de biohidrgeno prctico que
podra funcionar continuamente sobre una base a largo plazo. En cualquier
caso, es difcil ver cmo el uso de micelas inversas podra avanzar y mejorar
los rendimientos o superar las mejoras volumtricas y las tasas de
produccin ya alcanzados por configuraciones de reactor con biomasa
microbiana retenida (vase ms arriba).

Avanzar hacia la conversin del sustrato completo


Sin embargo, incluso con las mejoras indicadas anteriormente, el
rendimiento del hidrogeno estn restringidas por las rutas metablicas
existentes a cualquiera de 2 H2 / glucosa (Entero bacteracae) o, a lo sumo,
4 H2 / glucosa (clostridios) en presiones parciales dehidrgeno muy bajos.
Las tcnicas ya discutidas no tienen, y no puede, aumentar el rendimiento
ms all de estos lmites. Estos rendimientos son, sin embargo,
prcticamente inaceptable por varias razones. Por un lado, no son
competitivos con la produccin de otros biocombustibles, como el
biometano o bioetanol, a partir de los mismos materiales de partida, debido
a que la eficiencia de conversin de sustrato a estos biocombustibles es
80% o mayor. Por otra parte, las conversiones de sustrato incompleta
durante fermentaciones de hidrgeno (dos tercios del sustrato es utilizado
para fabricar otros productos; vase el recuadro 1 y las Figuras 1 y 2) dan
lugar a la produccin de una gran cantidad de otros productos (es decir,
contra reembolso), que posteriormente deben ser eliminados. Por lo tanto,
el desarrollo de proceso de fermentacin para biohidrgeno requieren o bien
la introduccin vas adicionales que permitiran una conversin
estequiometrica (~ 12 H2 / glucosa) dentro de la clula microbiana o el
desarrollo de un sistema de dos etapas que hara permitir la recuperacin
de energa casi completas con la introduccin de un segundo proceso de
generacin de energa, preferiblemente hidrgeno, a partir de los productos
secundarios de la fermentacin que se producen en la primera etapa de
fermentacin oscura como productores de hidrgeno.

Vas de ingeniera metablica de nuevo hidrgenoproductores


Un enfoque para superar la barrera metablica es construir una va
alternativa de productos hidrgenos, las cuales se encuentran en otros
organismos; para ejemplo, el constructo de E. coli poda expresar altamente
activo FeFe hidrogenasa (HydA), una enzima que es normalmente
responsable de la evolucin de hidrgeno en la fermentacin es la Clostridia
(Figura 2). Sin embargo, para la insercin adicional se requeriran genes

porque E. coli no posee los genes Hyde, hydF y hydG, que son necesarios
para la maduracin de FeFe hidrogenasa, ni ninguna va obvia para reducir
esta hidrogenasa, que funciona con ferredoxina reducida. Como mnimo, dos
genes ms Probablemente se requiera para impulsar la evolucin del
hidrgeno significativa FDXA (tipo clostridial ferredoxina) y porA (piruvato
ferredoxina oxidorreductasa / flavodoxina). Recientemente, una Se utiliz el
enfoque artificial para construir un ferredoxina dependiente de NAD (P) H-H2
va E. coli. Dos plsmidos compatibles se utilizaron para introducir seis
genes (hydF, -E, -G y -A, FDXA y yumC, que codifica una NAD (P) H:
ferredoxina oxidorreductasa) bajo el control de promotores inducibles por
IPTG T7. La produccin de hidrgeno, que era sensible a la variacin en el
hidrgeno se observ presiones parciales como se esperaba. Sin embargo,
los niveles de hidrgeno producido eran bastante bajo e insignificante en
comparacin con lo que se observara con una E. coli de tipo salvaje. Sin
embargo, la cepa husped, BL21 (DE3), es incapaz de metabolismo de
hidrgeno, proporcionando una prueba de principio para la introduccin de
una nueva va productora de hidrgeno. Estrategias adicionales, incluyendo
el aumento de la actividad de hidrogenasa FeFe y modificando el
metabolismo para generar mayores niveles de nucletidos reducidos, podra
traer nuevas mejoras. Esta rea necesita claramente nuevos esfuerzos de
investigacin si presentan lmites metablicos van a ser superado, lo que
constituira un avance fundamental. Algunas sugerencias, basadas en el
modelado computacional, de la forma de lograr este objetivo recientemente
se han presentado y as incluir el aumento en gran medida a travs de la
oxidacin de la glucosa por va del fosfato de pentosa con la conversin de
la generada NADPH a NADH por transhidrogenasa. Adems, se ha sugerido
que la respiracin limitada podra ser utilizado para diseminar
completamente el sustrato derivado piruvato, la produccin de energa para
conducir electrones inverso y producir ms de 4 H2 / glucosa) [1,2], pero
esto nunca ha sido demostrado experimentalmente.

Sistemas de dos etapas hbridos


El principio bsico de un proceso es de dos etapas y es como sigue: (i) en la
primera etapa, la fermentacin del sustrato a hidrgeno y cidos orgnicos
tiene lugar en un proceso que ha sido optimizado el uso de una o varias de
las tecnologas avanzadas descritas anteriormente; (ii) a continuacin, en la
segunda etapa, energa gaseosa adicional, ya sea metano o (ms
preferiblemente) de hidrgeno, se extrae a partir del efluente de la primera
etapa del reactor. Tres sistemas de dos etapas diferentes que son

tericamente capaces de extraccin de energa completa tienen propuesto y


estn bajo investigacin activa en pequeo experimentos a escala de
laboratorio (Figura 2). Un enfoque es utilizar un reactor diferente para la
segunda etapa que es operado bajo diferentes condiciones, como por
ejemplo un pH ms alto y HRT ms largo, que el primer reactor, lo que
favorece la metanognesis. A pesar de la desventaja de generar dos
corrientes de gas diferentes, hidrgeno y metano, en trminos prcticos,
esto podra ser til porque la mezcla de hidrogeno metano son combustibles
ms limpios para los motores de combustin interna que el metano solo que
producen menos NOx. A pesar de que en el largo plazo el objetivo debera
ser producir slo una corriente de hidrgeno, este sistema hbrido de dos
etapas, produciendo ambos hidrgeno y metano, es casi listo para ser
puesto en prctica y que ya ha sido ampliado a la etapa de planta piloto. Tal
sistema de dos etapas puede ofrecer varias ventajas sobre una sencilla
fermentacin tradicional de metano, incluyendo una solubilizacin efectiva
de los sustratos tales como los residuos slidos orgnicos y el aumento de la
tolerancia a alta OLR. Varios estudios recientes han informado de la
operacin exitosa de este tipo de sistemas de dos etapas utilizando
desechos reales, incluyendo una fermentacin a escala piloto de la planta
de residuos de cocina que fue capaz de generar relativamente altas tasas
de produccin de hidrgeno (5.4 m3 / m3 / da) y metano (6,1 m3 / m3 /
da), mientras que al mismo tiempo lograr la eliminacin de 80% de DQO. La
eficiencia de este proceso es demostrado por el hecho de que los
rendimientos de metano eran dobles ms alto que un proceso de una sola
etapa comparable.
Otro proceso posible para aumentar la extraccin general de energa es el
uso de fotofermentacion en la segunda etapa, con el objetivo de recuperar
hidrgeno adicional a partir de los productos de una generacin de
hidrgeno por fermentacin oscura. En esta reaccin, no fotosinttica de
azufre prpura las bacterias captan la energa luminosa y la utilizan para
cuantitativamente convertir los cidos orgnicos en hidrgeno. Una gran
cantidad de la investigacin se ha realizado en este mbito y ha sido
revisado recientemente. Las principales conclusiones fueron que un gran
nmero de estos organismos son capaces de degradar una variedad de
cidos orgnicos a hidrgeno, a veces alcanzar altos rendimientos con
sustratos puros. En efecto, en principio, fotofermentacion son capaces de
convertir completamente compuestos orgnicos en hidrgeno, incluso
contra relativamente altas presiones parciales de hidrgeno, porque la
evolucin de hidrgeno es impulsado por la nitrogenasa ATP-dependiente y
el ATP requerida se forma a travs de la captura fotosinttica de energa de
la luz. De hecho, en la prctica, casi conversin estequiometrica de algunos
cidos orgnicos al hidrgeno puede ser obtenido. Algunos estudios
recientes, en el que la segunda etapa fue en realidad alimenta, el efluente
de un reactor de produccin de hidrgeno, tales sistema han demostrado la
viabilidad de una de dos etapas, aunque los rendimientos fueron muy por
debajo de la estequiometria. Sin embargo, la eficiencia de conversin de luz
bajos acoplados con bajas tasas volumtricas de produccin de traducir a un

requisito para reas de superficie imposiblemente grandes. Aunque ms


investigacin muy bien podra ayudar a aumentar el rendimiento, los
obstculos tcnicos a la aplicacin prctica de tales procesos son graves,
dada la relativamente baja fotosinttica eficiencias de estos organismos de
moderado a alto de luz intensidades y el requisito de fotobiorreactores de
alto costo que son transparentes y en el hidrgeno impermeable. Otro
enfoque emplea electro hidrognesis microbiana clulas (MEC), en el que la
electricidad se aplica a una celda microbiana de combustible proporciona la
energa necesaria para convertir cidos orgnicos, que son productos
secundarios tpicos de una fermentacin de hidrgeno, al hidrgeno [77-82].
Esta zona ha sido completamente cubierta en una excelente revisin
reciente, por lo que slo se da un resumen de los principales puntos de aqu.
Esta tecnologa representa una elegante aplicacin de principios de la
termodinmica a la manipulacin de metabolismo microbiano para su uso
en la produccin biotecnolgica de combustibles. MECs son de hecho
bastante verstil; no slo es posible seleccionar las bacterias apropiadas
durante la operacin sino tambin otros sustratos, tales como aguas
residuales, pueden ser utilizados. Por lo tanto, debido a la versatilidad de la
comunidad microbiana en la cmara andica, MECs no se limitan a la
utilizacin de productos de fermentacin como sustrato, pero tambin
puede, al menos en principio, completamente descomponer la glucosa o con
un contenido de glucosa- sustratos, tales como celulosa, a hidrgeno.
Aqu, la comunidad mixta lleva a cabo la fermentacin oscura in situ, y los
productos de la fermentacin resultantes se utilizan por los miembros de la
comunidad electrgenos. El electrognico bioelectroquimica las bacterias en
las clulas su sustrato utilizando el electrodo (nodo) como terminal de
aceptor de electrones. Voltaje suplementario (> 200 mV) es aadido a la
que ya generado a partir del sustrato (acetato de ~300 mV) para conducir
la evolucin de hidrgeno en el ctodo. Por lo tanto, en principio, una
segunda etapa despus de un MEC fermentativa de hidrgeno inicial podra
convertir completamente un sustrato de hidrgeno, el logro de 12 H2 /
glucosa con slo una pequea inversin de la electricidad. En los seis aos
transcurridos desde MEC fueron descritos por primera vez, varias
innovaciones han sido desarrolladas y en consecuencia, su rendimiento ha
sido mejorado dramticamente. Actualmente se informan tasas
volumtricas (~6 m3H2 / m3 de reactor / da) son mucho mayores que
aquellos que se obtuvieron originalmente. Sin embargo, estas tasas son
todava casi dos rdenes de magnitud ms bajos que los obtenidos con
fermentaciones oscuras y, por otra parte, slo han sido observado en los
altos voltajes aplicados (~ 800 mV). Queda por ver si es o no lo
suficientemente alta las tasas volumtricas que se puede lograr con
entradas elctricas nominales. Por lo tanto, retos sustanciales a la aplicacin
prctica de esta prometedora tecnologa permanecen, incluida la sustitucin
platino caro para el ctodo, el aumento de densidades de corriente y la
reduccin de la entrada elctrica requerido.

Outlook y direcciones futuras


Muchos dicen que "el hidrgeno es el combustible del futuro"; algunos add
'y siempre ser!' De hecho, a pesar de una gran cantidad de investigacin
en el pasado y en la actualidad, los principales obstculos siguen siendo que
hay que superar antes de un proceso prctico puede ser factible
demostrado para cualquier enfoque de produccin biolgica de hidrogeno.
Aqu nos hemos centrado en el progreso reciente en la produccin de
hidrgeno por fermentacin oscuro. Como se muestra aqu, se han
producido mejoras sustanciales en los ltimos tanto el rendimiento como
tasas volumtricas de produccin de fermentaciones de hidrgeno. Sin
embargo, para ser prctico, los rendimientos deben considerablemente
extenderse ms all de la presente limitacin metablica de 4 H2 / glucosa.
Por lo tanto, la principal cuestin pendiente es Puede crearse un proceso
biolgico prctico para extraer casi todos el H2 desde el sustrato (12 H2 /
glucosa)? Intentando frente a este desafo debe ser el foco de futuro de la
investigacin biohidrgeno. Termodinmica y las limitaciones metablicas
sugieren que sera imposible encontrar un organismo capaz de la conversin
completa de los sustratos a base de azcar a hidrgeno por fermentacin y
que la intervencin humana que se necesita para resolver este problema.
Existen varias posibilidades, que incluye adems la ingeniera metablica o
varias etapas de sistemas, como se discute aqu. Sin embargo, no son
excepcionales preguntas que deben ser contestadas para cada uno de estos
diferentes enfoques si quieren tener xito. Por ejemplo, con respecto a la
ingeniera metablica, pueda ser introducida nuevas vas que son capaces
de la casi completa extraccin de protones desde el sustrato y su reduccin
a H2. Aunque ya demostrable en una escala piloto, la fermentacin de
hidrgeno unido y la digestin de metano (que es uno de los sistemas de
dos etapas discutidas aqu) hacen no producir una corriente de hidrgeno
puro y por lo tanto es menos deseable. Para que los otros sistemas de dos
etapas discutidas aqu para seguir adelante, los principales impedimentos
deben ser superados. Para un sistema hbrido usando fotofermentacion, las
preguntas clave son: (i) pueden crear bacterias fotosinttico ms eficiente?;
y (ii) pueden los cientficos de materiales desarrollar suficiente hidrogeno
impermeable a bajo costo transparente en fotobiorreactores? Para un
sistema hbrido usando MEC, se plantea una cuestin pendiente diferente:
puede MEC desarrollarse que tienen densidades de corriente suficientes,
requieren voltajes ms bajos y utilizan ctodos de bajo costo, Resolucin de
la excepcional problema del aumento de los rendimientos de hidrgeno
podra conducir al desarrollo de sistemas capaces de la completa conversin
de los flujos de residuos y cultivos energticos a hidrgeno, un potencial
combustible sostenible del futuro.

Tabla 1. Disponible reactores de fermentacin oscuros

Microorganismos Sustrato Tipo de tasa de H2 reactor (l H2 / l / h) Refs


Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) melaza reactor continuo
de tanque agitado (CSTR) 0.20 [12]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) La glucosa anaerbica
reactor discontinuo secuencial (ASBR) 0,23 [13]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) La sacarosa biorreactor
de lecho fijo con carbn activado (FBBAC) 1.2 [14]
Lodos activados y digeridos glucosa lodo anaerbico reactor de lecho
fluidizado (AFBR) 2.4 [15]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) La sacarosa Upflow
reactor de manto de lodo anaerbico (UASB) 0,27 [16]
Lodo anaerbico sacarosa Polymethymethacrylate (PMMA) inmovilizado
clulas 1.8 [17]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) inducida por Carrier
sacarosa lecho de lodo granular (CIGSB) 9.3 [18]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) La sacarosa reactor de
lecho fluidizado (FBR) 1.4 [19]
Lodos (planta de tratamiento de aguas residuales) La glucosa anaerbica
reactor de lecho fluidizado (AFBR) 7.6 biopelcula; 6,6 grnulos [20]
(Planta de tratamiento de aguas residuales) de lodos sacarosa biorreactor
anaerbico continuamente agitado (CSABR) 15,0 [19]
Biorreactor de membrana de glucosa suelo con tratamiento trmico (MBR)
0,38 [21]
Examinar las tendencias de la Biotecnologa Vol.27 No.5
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