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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA QUMICA E


INDUSTRIAS EXTRACTIVAS

INGENIERA QUMICA INDUSTRIAL


DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA INDUSTRIAL

TCNICAS DE SEPARACIN
(KARLA JENY LOZANO ROJAS)
PRCTICAS:

FUNCIONAMIENTO Y PARTES DEL CROMATOGRAFO DE GASES


FUNDAMENTO Y PARTES DEL HPLC

GRUPO: 2IV90
SECCIN A
EQUIPO 1
INTEGRANTES:
FLORES ROJAS FRANCISCO JAVIER.
GARCA BALDERAS JOS MANUEL.
HERNNDEZ GIOVANNI

FECHA DE ENTREGA: VIERNES 27/FEBRERO/2015.

CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)

INTRUDUCCION:

La cromatografa de lquidos es la tcnica analtica de separacin ms


aplicablemente utilizada. Las razones de su popularidad son su
sensibilidad, su facilidad de adaptacin a las determinaciones
cuantitativas exactas, su idoneidad para automatizarla, su capacidad
para separar especies no voltiles o termolbiles, pero sobre todo su
amplia aplicabilidad a sustancias que no son importantes en la industria,
muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general algunos
ejemplos de estos materiales son aminocidos, protenas, cidos
nucleicos , hidrocarburos, carbohidratos, frmacos terpenoides
plaguicidas, antibiticos, esteroides, especies organometalicas y una
variedad de sustancias inorgnicas.

La cromatografa de alta eficiencia se encuadra dentro de la


cromatografa de elucin. En esta, un lquido (fase mvil) circula en
intimo contacto con un slido u otro liquido inmiscible (fase
estacionaria); al introducir una mezcla de sustancias (analitos) en la
corriente de la fase mvil, cada analito avanzar a lo largo del sistema
con una velocidad diferente que depender de su afinidad por cada una
de las fases. Esto supone que despus de terminado el recorrido de la
muestra por la columna, cada una de las sustancias introducidas en el
sistema eluir en tiempo diferente, es decir estn separadas.

La cromatografa de lquidos es importante porque la mayora de los


compuestos no son suficientemente voltiles para que se pueda aplicar
la cromatografa de gases. La cromatografa de lquidos de alta eficiencia
(HPLC) utiliza una presin elevada para forzar al disolvente a que pase
por una columna que contiene partculas muy finas, consiguiendo as
separaciones de gran resolucin. El equipo de HPLC cuenta
principalmente con un sistema de suministro de disolvente, una vlvula
de inyeccin de muestra, una columna de alta presin, un detector y un
ordenador para controlar el equipo y visualizar los resultados.

LA BOMBA.
La misin de la bomba es suministrar el caudal constate y libre de pulsos
de la fase mvil a travs de la columna, sin que el flujo se influido por l
presin en cabeza de columna ya que sta puede variar por la
obstruccin en las lneas de conduccin, por el filtro, etc.
Un sistema de bombeo debe de cumplir las siguientes caractersticas:
Estar construido con materiales qumicamente inertes frente a la
fase mvil
Ser capaz de trabajar a presiones elevadas
Proporcionar un flujo libre de pulsaciones
Suministrar flujos adecuados para distintos tipos de columna
El caudal debe de ser constante a lo largo del tiempo
SISTEMA DE INYECCIN
El mtodo de inyeccin de la muestra es de suma importancia, pues un
mal sistema de inyeccin puede dar lugar a ensanchamientos de la
bomba cromatografa que deterioren la eficiencia del sistema
cromatogrfico.

Un inyector ideal de cumplir las siguientes caractersticas:


Introducir la muestra a la columna con una banda lo ms estrecha
posible
Ser de fcil manejo
Ser capaz de trabajar a presiones elevadas
INYCTORES DE VALVULA
Ese sistema de inyeccin consiste en una vlvula de seis vas, dos de las
cuales estn conectadas entre s por medio de una espira (loop). Esta
espira es un tubo de volumen conocido, cuya misin es la de contener la
muestra antes de efectuarse la inyeccin.
La introduccin de la muestra se lleva a cabo en dos etapas; la primera
se realiza a presin atmosfrica, y consiste en cargar la muestra en la
espira con ayuda de una jeringa; la segunda, mediante un giro de la
vlvula, se hace pasar el eluyente a travs de la espira hacia la columna.

LA COLUMNA

La columna es un elemento fundamental del cromatgrafo


de lquidos, puesto que es en ella donde se lleva a cabo la
separacin; por lo tanto resulta fundamental una correcta
eleccin de la columna adecuada para cada separacin, ya
que con una columna inadecuada o de mala calidad nunca
se tendrn unos buenos resultados an que se disponga
del mejor instrumental.
Las caractersticas de la columna que influyen sobre su
capacidad de separacin son:

Dimetro interno
Longitud
Conexiones (reducciones)
Relleno (fase estacionaria)
Tamao de partcula
DETECTORES
Un detector para la cromatografa es un dispositivo que permite
medir, a la salida de la columna, una propiedad fsica eluyente que
deber depender de la composicin de ste
. La deteccin en la cromatogrfia se realiza en continuo aunque
es posible la utilizacin de colectores de fracciones para la
identificacin y cuantificacin de pequeas fracciones de eluyente.
Caractersticas de
principalmente:

un

detector

para

la

cromatografa

son

1. Caractersticas que no afectan a la separacin


Respuesta
Ruido
Sensibilidad
2. Caractersticas que afectan a la eficiencia de la separacin
Volumen de la cubeta
Contante del tiempo

Clasificacin de detectores

1. Los que aportan informacin estructural sobre las


sustancias eluidas (permitan la obtencin de espectros de
las sustancias que salen de la columna)
IRTF
UV-VIS matriz de diodos
EM

2. Los que no aportan informacin estructural (son los ms


utilizados)

Detector
Detector
Detector
Detector
Detector

de ndice de refraccin
de UV-Visible
de fluorescencia
de conductividad elctrica
electroqumico