UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE TECNOLOGIA E GEOCINCIAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA
BACHARELADO EM QUMICA INDUSTRIAL
BIOQUMICA APLICADA

Metabolismo

ESTUDANTES: Jailson Silva

Joyce Evanns
Mayra Weddija
Welenilton Jnior
PROFESSORA: Jenyffer Medeiros Campos
TURMA: I0 e I1

Recife, dezembro de 2013

1. Introduo

O termo metabolismo celular usado em referncia ao conjunto de

todas as reaes qumicas que ocorrem nas clulas. O metabolismo dos
microrganismos influenciado por uma srie de variveis que podem interferir
na sua sobrevivncia e/ou rendimento dos processos metablicos. Entre estas
variveis, destacam-se as ambientais, fsicas, qumicas e biolgicas.
A temperatura, varivel ambiental mais significativa para o processo,
sem dvidas o fator mais importante na interferncia do crescimento, e
sobrevivncia dos microrganismos. Tanto temperaturas muito frias ou muito
quentes so capazes de reduzir o crescimento dos micrbios, mas a
temperatura mnima e a mxima so variadas para cada espcie de
microrganismo. Quando a temperatura aumenta, reaes qumicas e
enzimticas na clula procedem mais rapidamente e o microrganismo tem um
crescimento mais rpido. Entretanto, acima de determinada temperatura, as
protenas podem ser irreversivelmente desnaturadas e as funes celulares
caem acentuadamente ao zero.
O pH outro fator importante, como bem sabemos, ele varia de acordo
com a composio do meio, influenciando o comportamento dos
microrganismos, que em sua marioria tem pH timo em torno da neutralidade.
Contudo muitos processos fermentativos se desenvolvem melhor em pH cido,
geralmente em torno de 5,0.
As fontes de carbono, desencadeiam os processos de regulao metablica.
Os meios de cultivo industriais apresentam composies complexas, e um
exemplo tpico o meio utilizado na produo de cerveja, que tem como fonte
de nitrognio uma mistura de aminocidos, uma pequena quantidade de
amnia livre e como fonte de carbono uma mistura de carboidratos.
Os sais representam substncias reguladoras do metabolismo celular,
tm participao nos mecanismos de osmose, estimulando em funo de suas
concentraes, a entrada/sada de gua na clula. A concentrao dos sais na
clula determina o grau de densidade do material intracelular em relao ao
meio extracelular. Em funo dessa diferena ou igualdade de concentrao
que a clula vai se mostrar hipotnica, isotnica ou hipertnica em relao ao
seu ambiente externo, justificando as correntes osmticas ou de difuso
atravs da sua membrana plasmtica sendo, por essa razo, altamente
importantes para a manuteno do equilbrio hidrossalino, da presso osmtica
e da homeostase na clula.
O objetivo desse experimento foi demonstrar de maneira emprica como
essas quatro variveis so de fato significativas nos processos metablicos das
clulas, influenciando o crescimento da levedura Saccharomyces cerevisiae em
diferentes condies ambientais.

2. Materiais e Mtodos

2.1 Materias
Extrato de levedura;
Uria;
Soluo de KH PO ;
MgSO .7H O;
gua destilada;
Glicerina;
Etanol;
Microrganismo: Saccharomyces cervisiae;
Amido;
Celulose;
Sacarose;
Glicose;
Ernlenmeyers;
Algodo hidrofbico;
Recipientes plsticos;
Esptulas;
Basto de vidro;
Tubos de ensaio;
Estante para tubos de ensaio;
Pipeta graduada de 5 mL com pera;
Bico de bnsen;
Balana analtica;
Encubadora.
2

2.2 Procedimento Experimental

2.2.1 Preparao do Meio

Efeito da temperatura;
O meio foi preparado utilizando-se ureia, glicose, extrato de levedura,
KH PO , MgSO .7H O e gua destilada. Posteriormente a soluo foi separada
em trs partes e cada uma foi armazenada uma temperatura diferente, 4C,
30C, e 60C.
2

Efeito do pH;
O meio preparado foi exatamente igual ao do item efeito da
temperatura. Aps o preparo, a soluo foi dividida em trs partes e cada uma
teve o pH ajustado para uma faixa diferente, 2, 7 e 10.

Efeito da fonte carbono;

O meio foi preparado contendo uria, extrato de levedura, KH PO ,
MgSO .7H O e gua destilada. Este foi separado em trs partes e a cada uma
foi adicionada uma fonte de carbono diferente: glicose, sacarose e celulose.
Para as fontes de carbono, amido, etanol e glicerina, foram utilizadas na
preparao do meio, em uma proveta de 500 mL:
de 0,6 g de extrato de levedura;
0,3 g de uria;
0,15 g de MgSO4.7H2O;
270 mL de gua destilada.
2

Aps o preparo da soluo, esta foi separada em trs erlenmeyers, 90

mL em cada, nos quais foram adicionadas as fontes de carbono: 1 g de amido
no primeiro, 20 g de glicerina no segundo e etanol no terceiro. Posteriormente
foi adicionado ao meio 10 mL de uma soluo de KH PO . Os erlenmeyers
foram tampados com algodo hidrofbio. Em seguida, os erlenmeyes contendo
as solues foram armazenados numa incubadora 30C por uma semana.
2

Efeito da concentrao de sais.

Para a preparao do meio foram utilizados glicose, extrato de levedura,
ureia, KH PO , MgSO .7H O e gua destilada. Em seguida a soluo foi dividida
em 5 partes, no foi adicionado NaCl na primeira, adicionou-se 1% de NaCl
segunda, 5% de NaCl terceira, 8% de NaCl quarta e 10% de NaCl quinta
parte.
2

2.2.2 Inoculao
Aps uma semana do preparo do meio, foi realizada a inoculao. Esta
foi conduzida de maneira assptica com a utilizao da chama do bico de
bnsen. Foram separadas 17 tubos de ensaio contendo os meios preparados
anteriormente, cada um com uma condio ambiental:
3 tubos para analisar a influncia de diferentes temperaturas;
3 para diferente pHs;
6 para diferentes fontes de carbono;
5 para diferentes concentraes de sais.
cada tubo foi adicionada, utilizando uma pipeta estril e sobre a
chama do bico de bnsen, 1 mL da suspenso de levedura contendo o
microrganismo Saccharomyces cervisiae. Em seguida os tubos foram
armazenados numa incubadora por alguns dias 30C.
2.2.3 Determinao de biomassa
Aps alguns dias de encubao os tubos foram analisados para
determinar as mudanas ocorridas no meio. Os resultados foram anotados.

3. Resultados e Discusses
3.1 Efeito da Temperatura
Aps uma semana de crescimento da levedura no meio, foram
avaliados os efeitos das temperaturas de 4, 30 e 60 C. A figura 1 mostra os
produtos obtidos. O crescimento foi avaliado pela formao de um corpo de
fundo nos tubos de ensaio, que indica (as leveduras em si, ou o produto da
fermentao delas?). Foi notado esse corpo de fundo no tubo de ensaio
submetido a 30C, o que est de acordo com a literatura, que estima uma faixa
de 25-30C de temperatura tima para o crescimento, sendo que at 40C a
levedura consegue crescer (com menor rendimento).

Figura 1. Efeito da temperatura no crescimento da levedura Saccharomyces

cerevisiae

3.2 Efeito do pH

De acordo com a literatura o pH timo para o crescimento da levedura

5.0~5.3, atende as expectativas do experimento. O corpo de fundo s foi notado
no tudo de ensaio com pH 7,0, sendo os outros dois condies muito extremas
para o desenvolvimento significativo do fungo.

Figura 2. Efeito do pH do meio reacional no crescimento da levedura

Saccharomyces cerevisiae.

3.3 Efeito da fonte de carbono

Clulas
haplides
de
Saccharomyces
cerevisiae
crescem
principalmente em meio com cujos susbtratos so mais fermentveis como
glicose e frutose, mas podem ser utilizadas outras fontes de carbono
(aucares alternativos) sacarose, maltose, orgalactose, galactose e rafinose,
ou compostos no fermentveis como glicerol, lactato, etanol e oracetate.
Como esperado, no foi notado crescimento nos meios com celulose e
amido. O meios com etanol e glicerol tambm no foram favorveis ao
crescimento da levedura, o que pode ser atribudo a baixa concentrao deles

em soluo. O crescimento ocorreu apenas nos meios com glicose e sacarose,

que so fontes de carbono mais eficientes nesse processo.

Figura 3. Efeito da fonte de carbono no crescimento da levedura Saccharomyces

cerevisiae

3.4 Efeito da concentrao de sais

De acordo com pesquisas, a levedura Saccharomyces cerevisiae tem
baixa tolerncia a concentrao de NaCl no meio reacional, o chamado efeito
do estresse salino, que explica o porqu da levedura no ter crescido
significativamente nas concentraes de 5, 8 e 10% de sal. A figura 5 mostra o
resultado de um estudo feito com diferentes concentraes de NaCl e os
resultados relativos ao crescimento da levedura [*].

Figura 4. Efeito da concentrao de NaCl no crescimento da levedura

Saccharomyces cerevisiae.

Figura 5. Efeito hiperosmtico de estresse do sal na viabilidade celular de

leveduras [*]

Concluso
A sobrevivncia e desenvolvimento dos microrganismos depende de um
ordenado conjunto de reaes que ocorrem no interior das clulas para
produzir energia. Para que essas reaes aconteam e o metabolismo
funcione, necessrio que haja um ambiente favorvel. A atividade do
microrganismo estudado, Saccharomyces cerevisiae, nas condies impostas
experimentalmente demonstram isso.
Baseando-se nos resultados encontrados, podemos afirmar com prioridade
que na indstria, esses fatores merecem uma ateno especial, pois so
totalmente responsveis pelo sucesso do processo, alm de que, quando
manipulados de maneira correta, otimizam os resultados e consequentemente
podem aumentar os lucros obtidos.
Vale ressaltar que, no meio onde foi analisada a presena do amido
como fonte carbono, no houve desenvolvimento do microrganismo. A turbidez
no tubo foi devido dissoluo do amido no meio.

Referncias
[*] Efeito hiperosmtico de estresse do sal na viabilidade celular de leveduras.
Stelios Logothetis, Graeme Walker, Elias T. Nerantzis. Proc. Nat. Sci., Matica
Srpska Novi Sad, iIssue 113, pages 271284, 2007.
MARZZOCO, A., TORRES, B. B.; Bioqumica Bsica. 2 ed. Rio de Janeiro:
Editora Guanabara, 1999, p. 73-124.

Questionrio
1. Voc espera que a levedura cresa em anaerobiose, aerobiose ou
facultativa?
O crescimento da levedura est restrito a presena de oxignio,
portanto, s ocorre em meio aerbio, mas aps o esgotamento do oxignio, a
levedura tem respirao facultativa e pode ento produzir etanol e gs
carbnico em ambiente anaerbio. Quando esse fungo se encontra em um
ambiente onde h muita oferta de oxignio, ele far a respirao aerbia e no
produzir lcool, mas, sim, gua e gs carbnico (responsvel por formar as
bolhas que inflam e tornam a massa mais macia).
2. Quais as funes dos nutrientes de um meio de cultura?
Os nutrientes fornecem a energia qumica e o esqueleto carbnico da
estrutura celular das leveduras (compostas principalmente de carbono,
oxignio e hidrognio). Diversos outros componentes podem ser encontrados
em um meio especifico para um determinado organismo visando satisfazer as
condies ideais para determinado teste. Alguns destes componentes visam
nutrir e incentivar apenas os microorganismos que sero objetos de estudo e
por tanto devem conter fatores de crescimento especficos como vitaminas,
aminocidos e etc.
H outros elementos requeridos no meio em concentraes menores
que tambm fazem parte da composio da levedura como nions inorgnicos.
Podemos tambm ter num meio de constituintes que inibem o crescimento de
determinados microorganismos ou at mesmo a ausncia de algum
componente essencial para um determinado grupo, sendo estes considerados
meios seletivos.
3. Escolha um meio para autotrficos e outro para heterotrficos.
Explique-os.
Os meios de cultura devem conter os nutrientes em quantidades e
propores corretas para a manuteno e multiplicao dos microrganismos. A
maior parte dos microrganismos utiliza substncias de baixo peso molecular
que so, frequentemente, derivadas da degradao enzimtica de nutrientes
complexos. Por isso, os nutrientes indispensveis ao organismo em causa
devem estar sob forma assimilvel.
A gua um componente importante e sempre presente em altas
quantidades. Todas as clulas requerem gua no meio para que os nutrientes
de baixo peso molecular possam atravessar a membrana celular, logo, a gua
est presente em todos os meios de cultura.
Meio para autotrficos: usam carbono inorgnico na forma de dixido
de carbono como nica ou principal fonte de carbono. Estes microrganismos

podem ser cultivados num meio de cultura s com compostos inorgnicos, pois
no necessitam de compostos orgnicos e podem ser inibidos por eles. A fonte
de energia para autotrficos a a energia radiante,utilizam a fontossntese.
Meio para heterotrficos: usam compostos orgnicos como principal
fonte de carbono. Estes microrganismos no podem ser cultivados num meio
s com compostos inorgnicos, pois eles necessitam de nutrientes orgnicos,
principalmente glicose. Dependem da oxidao de compostos qumicos como
fonte de energia. Alguns microrganismos usam molculas orgnicas (como a
glicose), enquanto outros usam compostos inorgnicos (como o H2S e o
NaNO2).
4. Qual a funo especfica dos sais no crescimento celular?
Como falado anteriormente na introduo deste trabalho, os sais tem
um papel fundamental de regulao da presso osmtica do corpo celular,
favorecendo o equilbrio inico da membrana plasmtica da clula e
controlando a entrada e sada de gua atravs dela e atuando na homeostase
da clula, permitindo o crescimento dos fungos.
5. Descreva etapa por etapa a via metablica envolvida.

Reao 1
Na primeira reao, a glicose que entra nos tecidos fosforilada no
grupo hidroxila em C6, com o gasto energtico de uma molcula de ATP,
dando origem a glicose-6-fosfato e ADP.1 Essa reao, catalisada pela enzima
hexoquinase, irreversvel sob condies fisiolgicas devido a seu G
altamente negativo.
Reao 2
Na segunda reao, catalisada pela enzima glicosefosfato-isomerase ,
a glicose-6-fosfato, uma aldose, convertida num processo de isomerizao

reversvel em frutose-6-fosfato, uma cetose, assim, permitindo um stio de

entrada para a frutose da dieta na gliclise.
Reao 3
A clula investe e outra molcula de ATP faz a fosforilao da frutose6-fosfato e a convert em frutose-1,6-bisfosfato. Esta tambm uma reao
irreversvel e de controle desta via metablica, catalisada pela enzima
fosfofrutoquinase, que a enzima marca-passo da gliclise
Reao 4
Na reao 4, a frutose-1,6-bisfosfato clivada em duas trioses:
gliceraldedo-3-fosfato e dihidroxiacetona fosfato. Esta reao catalisada pela
enzima aldolase.
Reao 5
O gliceraldedo-3-fosfato e a dihidroxiacetona fosfato so ismeros
facilmente interconvertveis pela enzima triosefosfato isomerase. Ocorre ento
a converso da dihidroxicetona P em gliceraldedo 3P, a nica triose que pode
continuar sendo oxidada.
De um modo geral,as reaes de 1-5
so as reaes
preparatrias,onde ocorre a fosforilao da glicose e sua conservao em
gliceraldedo-3-fosfato.
Reao 6
Nesta reao cada gliceraldedo-3-fosfato oxidado (desidrogenado)
pelo NAD+ (e o NAD+ passa a NADH) e fosforilado por um fosfato inorgnico,
dando origem a 1,3-Bifosfoglicerato. Esta reao catalisada pela enzima
Triose fosfato desidrogenase.
Reao 7
Na reao 7, catalisada pela enzima 1,3 BiP glicerato cinase, a 1,3
BPG transfere um grupo fosfato para uma molcula de ADP dando origem a
uma molcula de ATP e a 3-fosfoglicerato. Esta a primeira etapa da gliclise
que sintetiza ATP diretamente na via.
Reao 8
Na reao 8, a enzima fosfogliceromutase reposiciona a posio do
grupo fosfato 3- Fosfoglicerato, dando origem a 2-fosfoglicerato , preparando o
substrato para a prxima reao.
Reao 9
A reao 9 uma reao de desidratao catalisada pela enzima
enolase. O 2-fosfoglicerato desidratado formando uma molcula de gua e
fosfoenolpiruvato (PEP), um composto altamente energtico. Foi devido a esta

configurao energtica que o grupo fosfato foi transferido da posio 3 para 2

na reao anterior.
Reao 10
A reao 10, ltima desta via metablica, catalisada pela enzima
piruvato cinase, h transferncia do grupo fosfato do fosfoenolpiruvato para
uma molcula de ADP, formando-se ento uma molcula de ATP e piruvato.
Tendo em conta que por cada molcula de gliceraldedo-3-fosfato produz-se
duas molculas de ATP, na gliclise so produzidos ao todo 4 ATPs e gastos 2.
O saldo energtico de 2 molculas de ATP e 2 NADH por molcula de
glicose.
De um modo geral ,as reaes de 6-10 so as reaes de
conservao de energia , onde o gliceraldedo-3-fosfato convertido em
piruvato e a formao aclopada de ATP e NADH +H+
6. Quais os caminhos para o piruvato em aerobiose e anaerobiose?
(dados em sala)
O piruvato, produto final da gliclise, pode seguir diferentes vias
metablicas dependendo do organismo considerado e das condies
metablicas encontradas.
Em aerobiose,no caso em condies aerbicas, ser descarboxilidado
a acetil-CoA e utilizado no ciclo de Krebs. Em anaerobiose, em condies
anaerbicas, poder ser utilizado na fermentao alcolica ou ltica.
7. D 05 exemplos de uso industrial da via glicoltica.
Na indstria farmacutica na produo do antibitico, a penicilina, que
derivado de um mofo que cresce em uma mistura fermentativa de substncias ;
Na indstria alimentcia na produo de conservas e azedamento de leite por
fermentao ltica, chucrutes e linguias fermentadas ; Na produo de
bebidas alcolicas e fabricao de pes por fermentao alcolica; Na
produo de vinagre pela fermentao actica.

8. Descreva a lanadeira de eltrons em todas as suas etapas e onde

ocorre na clula.

A lanadeira de eltrons a cadeia respiratria, que uma etapa da

respirao celular, que ocorre nas cristas mitocondriais onde se encontram
transportadores proteicos com diferentes graus de afinidade para os eltrons.
As molculas de NADH e de FADH2, anteriormente formadas (Gliclise e Ciclo
de Krebs), transferem os eltrons que transportam para as protenas
(Citocromos) da cadeia transportadora de eltrons. Ao longo da cadeia
respiratria ocorre libertao gradual de energia, medida que os eltrons
passam de um transportador para outro. Esta energia libertada vai ser utilizada
na sntese de molculas de ATP, a partir de ADP+Pi, dissipando-se alguma
sobre a forma de calor. Cada molcula de NADH permite a sntese de trs
molculas de ATP, enquanto que a molcula de FADH2 apenas permite a
sntese de duas molculas de ATP. No final da cadeia transportadora, os
eltrons so transferidos para um aceitador final - oxignio, que capta dois
prtons H+, formando-se uma molcula de gua. responsvel pela maior
parte de ATP da clula.