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INDICE
1. PRESENTACION...PAG 2
2. INTRODUCCIONPAG 3
3. OBJETIVOPAG 4
4. MARCO TEORICO.PAG 5
5. SECUENCIA DE LA PRACTICAPAG 6
6. MATERIALES.PAG 7

7. CONTENIDO...PAG 8 29
8. ESTADISTICA.PAG 30
9. CONCLUSIONPAG 31
10. LOGROS.PAG 32
11. RECOMENDACIONES..PAG 33
12. BIBLIOGRAFIAPAG 34

PRESENTACIN
En esta oportunidad presentare el siguiente informe que rene fundamentos
tericos acerca de inmunologa los cuales nos ayudan a realizar diferentes

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interpretaciones de las distintas pruebas y tcnicas realizadas en este rea las


cuales las hicimos con las personas responsables del rea

INTRODUCCIN

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Los seres superiores estn defendiendo constantemente su integridad biolgica


frente a agresiones, esencialmente externas. De no ser as, moriran como
consecuencia de tumores e infecciones de bacterias, virus, hongos, etc. Para que
estos fenmenos de defensa se lleven a cabo, los organismos disponen de un
conjunto de elementos especiales, conocido como sistema inmune. La capacidad
de defensa se adquiere antes de nacer y se madura y consolida en los primeros
aos de la vida fuera del seno materno.
La inmunologa es la ciencia que estudia los procesos moleculares y celulares
implicados en la defensa de la integridad biolgica del organismo a travs de la
identificacin de las sustancias propias y deteccin de las sustancias extraas y su
destruccin. En cada organismo, los mecanismos de defensa son muy diversos y
heterogneos, aunque siempre existe una actuacin integrada de todos ellos. Los
mecanismos de defensa pueden ser de tipo inespecfico y especfico. Los
mecanismos inespecficos estn constituidos por las barreras naturales, tales como
la piel, mucosas y otros que estn protegiendo constantemente al individo de
contagios externos. Otros elementos naturales de actuacin son la lisozima de la
saliva, lgrimas y secreciones nasales que tienen capacidad de romper la unin de
azcares en las paredes bacterianas, lo que puede inducir su lisis. Tambin entre
estos mecanismos inespecficos se encuentra la respuesta inmune inespecfica que
estn constituida fundamentalmente por los componentes de la respuesta inmune
especfica.

OBJETIVO

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Conocer la inmunologa desde el punto de vista mdico clnico, para


determinar enfermedades del sistema inmunolgico y realizar el respectivo
diagnstico.
Reconocer el sistema inmunitario, para entender el origen de ciertas
patologas.
Conocer los conceptos de antgeno, eptope y hapteno. - Concepto de
anticuerpos como molculas bifuncionales (de reconocimiento y efectoras). Receptores especficos en linfocitos B y T.
Conocer la estructura del sistema inmune, su funcin de vigilancia en el
organismo humano.
Reconocer las Barreras mecnicas y bioqumicas de defensa, Inflamacin y
respuesta de fase aguda. Mecanismos celulares (macrfagos, neutrfilos,
mastocitos y eosinfilos).

MARCO TERICO

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INMUNOLOGA:

La palabra inmunologa deriva del latn immuzlis, que significa "sin carga",
entendindose por carga un impuesto, ley o enfermedad. Se dice que aquellos
individuos que no sucumben ante la enfermedad cuando se infectan, se hallan
inmunes, y este estado de resistencia especfica a una enfermedad se denomina
Inmunidad.
La Inmunologa es la rama de las ciencias biolgicas que se ocupa del estudio de
las respuestas de defensa a estmulos exgenos o endgenos y a sus desviaciones
patolgicas. Otra definicin es que la Inmunologa es la ciencia que estudia todos
los aspectos del sistema inmunitario normal y patolgico, aunque la delimitacin
anatmica y funcional del sistema inmunitario es algo an impreciso. Inmunologa es
una disciplina que trata del estudio, diagnstico y tratamiento de pacientes con
enfermedades causadas por alteraciones de los mecanismos inmunolgicos y de las
situaciones en las que las manipulaciones inmunolgicas forman una parte
importante del tratamiento y/o de la prevencin.
En Inmunologa se incluyen las enfermedades en las que los mecanismos
inmunitarios no actan adecuadamente, bien sea por razones genticas o
adquiridas (inmunodeficiencias, incluyendo el SIDA) o debido a la transformacin
neoplsica de clulas del sistema inmunitario (tumores linfoides) o donde la
actuacin de anticuerpos especficos y/o linfocitos sensibilizados, bien sea
directamente o a travs de varios sistemas efectores asociados, produce como
resultado lesiones tisulares en el hospedador (hipersensibilidad inmediata y
autoinmunidad). Tambin se ocupa la Inmunologa de las situaciones en las que las
lesiones pueden ser el resultado de la accin del sistema inmunitario en la defensa
contra microorganismos (infeccin e inmunidad) o durante el rechazo de aloinjertos
(transplantes y transfusiones). Por ltimo, tambin la inmunologa clnica incluye el
uso de la inmunoterapia.
El trabajo en esta especialidad hospitalaria incluye una tecnologa propia y requiere
de manera ineludible su prctica en laboratorios adecuadamente dotados, as como
tambin la asistencia a los enfermos mediante consultas con los mdicos que los
tengan a su cargo.

SECUENCIA DE LA PRCTICA
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Limpieza de las mesas antes y despus de los procedimientos.

Toma de muestra de 7 a 10 a.m.

Codificacin de las muestras de inmunologa y procesamiento.

Reporte de resultados.

Registro a los libros.

Lavado de material usado.

Tiempo de Practica:
Inicio: 1 abril del 2014
Final: 15 de mayo del 2014

MATERIALES

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Placas (PCR,FR,ASO,Aglutinaciones)
Equipos de lector Elisa
Reactivos (PSA,TSH,T4,T3,FT4,PSALibre,BhCG,Hidatidosis)
Agua destilada
Gradillas
Estufa de incubacin
Refrigeradora
Centrifuga
Pipetas automticas de 25-50-500 ul
Vasos de precipitacin
Reloj
Cinta adhesiva
Papel toalla

CONTENIDO

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1. PROTENA C REACTIVA (PCR-LATEX)


2. FACTOR REMATOIDEO (FR-LATEX)
3. ANTI-ESTREPTOLISINA (ASLO-LATEX)
4. KIT ANTGENOS FEBRILES
5. TIROXINA (T3)
6. TIROXINA LIBRE (T4 LIBRE)
7. TIROXINA TOTAL (T4)
8. TIROTROPINA (TSH)
9. ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO TOTAL (PSA TOTAL)
10. ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO (PSA LIBRE)
11. HIDATIDOSIS ELISA IgG
12. HORMONA GONADOTROPINA CORINICA CUANTITATIVO (hCG)
13. FRACCIN BETA CUALITATIVA (beta acu-color)

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1. PROTENA C REACTIVA (PCR-

LATEX)

Fundamento:
El

PCR-ltex

test es una prueba


rpida de aglutinacin

en
porta basada en la tcnica de Singer, para la deteccin directa y la semi
cuantificacin de la protena C reactiva en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de ltex recubierto con
anticuerpos PCR, frente a los sueros problema.
La presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel del PCR por
enzima del lmite superior del intervalo de referencia de las muestras ensayadas.
Tcnica:
Llevar los reactivos y el suero a temperatura ambiente.
Agitar el reactivo de ltex antes de usarlo.
a. Prueba Cualitativa:

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Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora.
En los crculos adicionales depositar una gota de control positivo y una
gota de control negativo.
Aadir a cada circulo una gota de reactivo de PCR ltex.
Efectuar la mezcla con ayuda de un palito desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Observar de inmediato con ayuda de una luz adecuada, la aparicin de
cualquier signo de aglutinacin.

Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente

aglutinacin

dbil

intensa,

fcilmente

visible

Significado Clnico:
La protena se reactiva es una protena de fase aguda presente normalmente en el
suero, que aumenta significativamente en una gran diversidad de lesiones tisulares,
infecciones bacterianas y vricas, inflamaciones as como en las neoplasias
malignas. La PCR contribuye a la defensa inmunolgica inespecfica de varias
formas entre ellas, mediante la activacin del complemento y la aceleracin de la
fagocitosis

2. FACTOR REMATOIDEO (FR-LATEX)

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Fundamento:
El PR-ltex test es una prueba rpida de aglutinacin basada en una modificacin
de las tcnicas de Singer. Para la deteccin directa y la semi cuantificacin en porta
de los factores reumatoideos (FR) presentes en el suero.
La determinacin se efecta ensayando en una suspensin de partculas de ltex
recubiertas con gama globulina humana frente a los sueros problema. La presencia
o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en
las muestras ensayadas.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora.
En los crculos adicionales depositar una gota de control positivo y una
gota de control negativo.
Aadir a cada circulo una gota de reactivo de FR ltex.
Efectuar la mezcla con ayuda de un palito desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Observar de inmediato con ayuda de una luz adecuada, la aparicin de
cualquier signo de aglutinacin.
Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente

aglutinacin

dbil

intensa,

fcilmente

visible

Significado Clnico:
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos mayormente de la clase
IGM dirigidos contra determinantes de la porcin Fc de la inmunoglobulina IgG del
paciente. Aunque presentes en diversas enfermedades se han elevado
principalmente en pacientes con artritis reumatoidea.

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3. ANTI-ESTREPTOLISINA (ASLO-LATEX)
Fundamento:
El ASLO-ltex test es una prueba rpidamente de aglutinacin en porta para la
deteccin directa y la semi cuantificacin de niveles clnicamente significativos de
anticuerpos anti-estreptolisina o ASLO en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de ltex
recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o ausencia
de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de ASLO en las
muestras ensayadas a niveles significativos.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Depositar una gota (50 ul) de suero problema en uno de los crculos de la
tarjeta visualizadora en un crculo adicionales depositar una gota de control
positivo y una gota de control negativo.
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Aadir a cada circulo una gota de antgeno de ASLO ltex.


Efectuar la mezcla con ayuda de un palito desechable, extendindola de
forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo.
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos.
Observar de inmediato con ayuda de una luz adecuada, la aparicin de
cualquier signo de aglutinacin.

Lectura:
Reaccin negativa: suspensin uniforme sin cambio visible alguno tal como se
presenta en el control negativo.
Reaccin
positiva:
macroscpicamente

aglutinacin

dbil

intensa,

fcilmente

visible

Significado Clnico:
Como respuesta a la infeccin por estreptococos hemolticos de los grupos A, C y G
productores de estreptolisina o (ASLO) que pueden ser determinados en el
laboratorio. La investigacin inmunolgica de estos anticuerpos especficos contra
los productos metablicos de los estreptococos proporciona una informacin valiosa
para el diagnstico de infecciones provocadas por estreptococos (fiebre reumtica,
glomrulo nefritis)

ESTRPTOCOCUS BETA HEMOLITICO


4. KIT ANTGENOS FEBRILES
Fundamento:
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El suero del paciente se pone en contacto con los antgenos especficos, en este
caso se utiliza suspensiones de salmonellas o brucellas muertas.
Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producirn una
aglutinacin macroscpicamente.
Tcnica:
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
a. Prueba cualitativa
Colocar en una placa una gota de suero y agregarle una gota de suspensin
de antgeno (tfico O, H, paratfico A, B, Brucellas).
Mezclar y agitar la placa en forma circular durante 5 minutos.
Observar la presencia o ausencia de aglutinacin utilizando la luz indirecta
sobre el fondo oscuro.
Lectura:
Positivo (aglutinacin)
Negativo (homogeneidad)
Significado Clnico:
La salmonellas se consideran patgenos entricos obligados y su aislamiento en un
individuo implica la enfermedad o estado de portador.
La enfermedad puede presentar en tres formas distintas:
Gastroenteritis, septicemia o fiebre tifoidea.
En la brucelosis el periodo de incubacin puede extenderse en algunos das desde
algunos das hasta varios meses (generalmente 3 semanas).

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5. TIROXINA (T3)
Fundamento:
Inmuno ensayo competitivo de quimioluminiscencia (Tipo 5) Los reactivos
esenciales requeridos para un inmuno ensayo enzimtico de fase slida incluyen
anticuerpos inmovilizados, conjugado enzima antgeno y el antgeno nativo.
Despus de la mezcla del anticuerpo inmovilizado, el conjugado enzima antgeno y
el suero que contiene el antgeno nativo, se obtiene una reaccin de competencia
entre el antgeno nativo y el conjugado enzima antgeno para un nmero limitado de
sitios de unin insolubilizados.
Tcnica:

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Antes de seguir adelante con el ensayo, los reactivos, los sueros de referencias y
controles debern estar a temperatura ambiente (20-27C).

Formatee los pozos del micro placa para cada suero de referencia, control y
muestra de pacientes que deba ensayarse en duplicado. Colocar las tiras no
utilizadas de micro pozos nuevamente en la bolsa de aluminio, sellar y
almacenarlo de 2 8C.
Pipetee 0.050 ml (50ul) del suero de referencia apropiado, control o muestras
dentro del pocillo asignado.
Adicione 0.100ml (100ul) de Trazador de trabajo, solucin de conjugado
Enzima T3 a todos los pozos. (Ver seccin de preparacin de reactivos)
Agite suavemente la micro placa durante 20 30 segundos mezclar y cubrir.
Incube durante 45 minutos a temperatura ambiente.
Elimine el contenido del micro placa mediante decantacin o aspiracin. Si
se decanta, golpee la placa y squela con papel absorbente.
Adicione 350ul de buffer de lavado (ver Seccin Preparacin de Reactivos),
decante (golpear y secar) o aspire. Repetir 4 veces ms (4) para obtener un
total de 5 lavados. Se puede utilizar un lavador automtico o manual de
placas. Seguir las instrucciones del fabricante para asegurar el uso
apropiado. Si se utiliza un frasco de lavado, llene cada pozo oprimiendo el
recipiente (evitar la formacin de burbujas de aire) dispensar las solucin de
lavado. Decante la solucin de lavado y repita 4 veces ms.
Adicionar 50ul de sustrato A y adicionar 50ul de sustrato B.
Incubar por 15 minutos a temperatura ambiente.
Aadir solucin de stop 50ul a todos.
Esperar 30 minutos para la lectura en 620 a 630nm.

Valores de Referencia:
VR: 0.76 3.43 ug/dl
Significado Clnico:
Los niveles por encima de lo normal pueden indicar:

Niveles altos de una protena que transporta T3 en la sangre (puede ocurrir


con el embarazo, el uso de pldoras anticonceptivas o estrgenos, enfermedad
heptica, o como parte de una afeccin hereditaria)
Hipertiroidismo (por ejemplo, enfermedad de Graves)
Tirotoxicosis por T3 (poco comn)
Cncer tiroideo (poco comn)

Los niveles por debajo de lo normal pueden deberse a:

Enfermedad prolongada

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Hipotiroidismo (por ejemplo, enfermedad de Hashimoto)


Inanicin

Otras afecciones por las cuales se puede realizar el examen:

Tiroiditis indolora (silenciosa)


Parlisis peridica tirotxica
Bocio nodular txico

6. TIROXINA LIBRE (T4 LIBRE)


Fundamento:
Los reactivos esenciales requeridos por una fase solida de enzima e inmuno ensayo
incluye el anticuerpo inmovilizado, enzima-antgeno conjugado y antgeno nativo.
Mezclando el anticuerpo inmovilizado, conjugacin de enzima-antgeno y suero que
contienen el antgeno nativo, una reaccin de la competicin resulta entre el
antgeno nativo y la conjugacin del enzima-antgeno para un limitado nmero de
insolubles sitios obligatorios.
Tcnica:

Dispersar 50 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima T4 libre, mezclar el micro placa de 20-30
segundos y cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar.
Leer en absorbancia a 450 nm.

Valores de Referencia:
VR: 0.55 3.25 ng/dl
Significado Clnico:
Los niveles de T4 superiores a lo normal junto con niveles bajos de hormona
estimulante de la tiroides pueden deberse a afecciones que involucran una
hiperactividad de la tiroides, como:

Enfermedad de Hashimoto temprana


Enfermedad de Graves
Tumores de clulas germinativas

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Niveles altos de una protena que transporta T4 en la sangre (puede ocurrir


con el embarazo, el uso de pldoras anticonceptivas o estrgenos, enfermedad
heptica, o como parte de una afeccin hereditaria)
Hipertiroidismo inducido por yodo
Tiroiditis subaguda o crnica
Bocio multi nodular txico
Enfermedad trofoblstica

Los niveles de T4 inferiores a lo normal pueden indicar:

Hipotiroidismo (incluyendo enfermedad de Hashimoto y algunos otros


trastornos que involucran hipoactividad de la tiroides)
Enfermedad
Desnutricin o ayuno
Uso de ciertos medicamentos

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7. TIROXINA TOTAL (T4)


Fundamento:
Los reactivos esenciales requeridos por una fase solida de enzima e inmuno ensayo
incluye el anticuerpo inmovilizado, enzima-antgeno conjugado y antgeno nativo.
Mezclando el anticuerpo inmovilizado, conjugacin de enzima-antgeno y suero que
contienen el antgeno nativo, una reaccin de la competicin resulta entre el

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antgeno nativo y la conjugacin del enzima-antgeno para un limitado nmero de


insolubles sitios obligatorios.
Tcnica:

Dispersar 50 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima T4, mezclar el micro placa de 20-30 segundos y
cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar.
Leer en absorbancia a 450 nm.

Valores de Referencia:
VR: 5.76 16.8 ug/dl
Significado Clnico:
Los niveles de T4 superiores a lo normal junto con niveles bajos de hormona
estimulante de la tiroides pueden deberse a afecciones que involucran una
hiperactividad de la tiroides, como:

Enfermedad de Hashimoto temprana


Enfermedad de Graves
Tumores de clulas germinativas
Niveles altos de una protena que transporta T4 en la sangre (puede ocurrir
con el embarazo, el uso de pldoras anticonceptivas o estrgenos, enfermedad
heptica, o como parte de una afeccin hereditaria)
Hipertiroidismo inducido por yodo
Tiroiditis subaguda o crnica
Bocio multi nodular txico
Enfermedad trofoblstica

Los niveles de T4 inferiores a lo normal pueden indicar:

Hipotiroidismo (incluyendo enfermedad de Hashimoto y algunos otros


trastornos que involucran hipoactividad de la tiroides)
Enfermedad

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Desnutricin o ayuno
8. TIROTROPINA (TSH)

Fundamento:
Los reactivos esenciales sugeridos por un anlisis inmunoenzimometrico incluyen
alta afinidad y especificidad de anticuerpos, con diferentes y con reconocimiento
distinto del epitome, en exceso, y antgeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilizacin toma lugar durante el anlisis en la
superficie del micro pozo a travs de la interaccin de streptavidin cubierto en el
pozo y el exgeno agregado biotinilado monoclonal al anticuerpo de anti-TSH.
Mezclando el anticuerpo monoclonal inmovilizado, conjugacin del enzima-antgeno
etiquetado y un suero que contiene el antgeno nativo y los anticuerpos sin
competencia o steric hidrance, para formar un sndwich complejo soluble.
Tcnica:

Dispersar 50 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima TSH, mezclar el micro placa de 20-30 segundos y
cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar.
Leer en absorbancia a 450 nm.

Valores de Referencia:
VR: 0.39 6.16 u lU/ml
Significado Clnico:
Los niveles por encima de lo normal pueden indicar:

Hipotiroidismo congnito (cretinismo)

Exposicin a ratones (trabajadores de laboratorios o veterinarios)

Hipotiroidismo primario

Resistencia a la hormona tiroidea

Hipotiroidismo dependiente de TSH


Los niveles por debajo de lo normal pueden deberse a:

Hipertiroidismo

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Deficiencia de TSH
Uso de algunos medicamentos, incluyendo agonistas de la dopamina,
glucocorticoides, anlogos de somatostatina y bexarote.

9. ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO TOTAL (PSA TOTAL)


Fundamento:
Los reactivos esenciales sugeridos por un anlisis inmunoenzimometrico incluyen
alta afinidad y especificidad de anticuerpos, con diferentes y con reconocimiento
distinto del epitome, en exceso, y antgeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilizacin toma lugar durante el anlisis en la
superficie del micro pozo a travs de la interaccin de streptavidin cubierto en el
pozo y el exgeno agregado biotinilado monoclonal al anticuerpo de PSA.
Mezclando el anticuerpo monoclonal inmovilizado, conjugacin del enzimaetiquetado y un suero que contiene el antgeno nativo, resultados de la reaccin
entre el antgeno nativo y los anticuerpos, sin competicin u obstculo esterico, de
formar un complejo soluble de sndwich se ilustra con una ecuacin.
Tcnica:

Dispersar 25 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima PSA, mezclar el micro placa de 20-30 segundos y
cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar.
Leer en absorbancia a 450 nm.
Valores de Referencia:
EDAD
40-49
50-59
60-69
70-79

RANGO NORMAL DE PSA


0-2.5 ng/dl
0-3.5 ng/dl
0-4.5 ng/dl
0-6.5 ng/dl

Significado Clnico:

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La prueba para el PSA es una herramienta importante para detectar el cncer de


prstata, pero no es infalible. Otras afecciones pueden causar una elevacin en el
PSA, como:

Una prstata ms grande.

Infeccin de la prstata (prostatitis).

Infeccin urinaria.

Exmenes recientes en la vejiga (cistoscopa) o prstata (biopsia).

Sonda vesical recientemente puesta en la vejiga para drenar orina.

10. ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO LIBRE (PSA LIBRE)


Fundamento:
Es un aprueba de inmuno ensayo en fase slida. Un anticuerpo monoclonal antiPSA-libre cubierto en la superficie del micro pozo de un anticuerpo etiquetado de
conejo anti-PSA-libre con peroxidasa de rbano es usado en su trazado.
Las molculas de PSA-libre presente en una solucin estndar o suero
ensandwichados entre los 2 anticuerpos. Siguiendo la formacin de la cobertura
del complejo antgeno-anticuerpo, la no unin del anticuerpo-enzima son removidos
con el lavado. La actividad de la peroxidasa de rbano unida a los pozos en el
ensayo por una reaccin colorimtrica. La intensidad de color formado es
proporcional a la concentracin PSA-libre en la muestra.
Tcnica:

Dispersar 25 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima PSA, mezclar el micro placa de 20-30 segundos y
cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar

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Valores Normales:
Leer en
absorbancia a 450
nm. Aos

PSA libre(ng/ml)

PSA complejo

40-49

0,5

1,0

0,7

0,7

1,5

60-69

1,0

2,0

70-79

1,2

3,0

PSA libre + PSA a -1-antiquimotripsina = PSA total


PSA libre/PSA total, > 0,15
PSA complejo/PSA total, < 0,70
PSA libre/PSA complejo, > 0,25
No tiene relacin con la edad del paciente (o sea, el lmite
superior normal para todas las razones es constante para los
hombres de todas las edades).
Significado Clnico:
Los pacientes con cncer de prstata tienen menor porcentaje de PSA libre,
mientras que los que sufren una hiperplasia de prstata tienen una mayor
proporcin
de
PSA libre.
Es
importante
tener
en
cuenta
que
la eyaculacin incrementa momentneamente el nivel tanto de PSA libre como total,
retornando a valores basales dentro de 24 horas.

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11. HIDATIDOSIS ELISA IgG


Fundamento:
El material unido de forma no especifica ser eliminado por medio del lavado.
Durante la incubacion con el conjugado, losanticuerpos anti-IgG humana marcados
con peroxidasa, se uniran al complejo formado. Finalmente en la etapa de
incubacion con el sustrato cromogenico, la peroxidasa unida al complejo producira
unacoloracion, que permitira detectar las muestras reactivas al E. granulosus. La
reaccion enzimatica ser detenida por la adicion de cido sulfrico, midiendose
enseguida la intensidad de color con un lector colorimtrico para placas de ELISA.
Tcnica:

Ajustar la estufa a 37 +-1C


Sacar todos los reactivos una hora antes a temperatura ambiente sin abrir
las placas
Agitar todos los componentes
Preparar solucin wash para 10 lavados de 5 veces cada lavado de 300 ul
para cada pocillo
POCILLOS

SOL. WASH

H2O

VOL. FINAL

0.75 ml

14.25 ml

15 ml

0.9 ml

17.1 ml

18 ml

10

1.5 ml

28.5 ml

30 ml

Sacar el nmero de pocillos necesarios para el procedimiento

CT +

Aadir 100ul de diluyente de muestra a todos los pocillos


Aadir 5 ul control +, 5ul control -, 5u suero cut off, 5ul de
muestra en sus representativos pocillos
S. Cut Off 1
Homogenizar en un agitador de placas durante 2 minutos
Incubar durante 45 minutos a 37 +-1C
(cubrir
con
S. Cut Off 2
lamina adhesiva)
Aspirar el contenido y lavar 5 veces con 300ul de solucin
Mix 1
wash para cada pocillo
Aadir 100ul de conjugado IgG a todos los pocillos
Incubar durante 39 minutos a 37 +-1C (cubrir con lamina adhesiva)
Aspirar el contenido y lavar 5 veces con 300ul de solucin wash para cada
pocillo
Aadir 100ul de solucin de sustrato a todos los pocillos
CT -

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Incubar en oscuridad 20 minutos a temperatura ambiente


Aadir 50ul de solucin de parada a todos los pocillos
Leer a 450/620 nm una hora antes de cavar el ensayo

Valores Normales:
CONTROL
Control positivo
Control negativo
Control cut off

D.O.
>0.9
<0.5
>0.55 y <1.5

ndice de Ac = (D.O. de la muestra/ media de D.O. de los sueros cut off) * 10


INDICE
INTERPRETACION
<9
Negativo
9-11
Dudoso
>11
Positivo

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12. HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA CUANTITATIVO (hCG)

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Fundamento:
Los reactivos esenciales sugeridos por un anlisis inmunoenzimometrico incluyen
alta afinidad y especificidad de anticuerpos, con diferentes y con reconocimiento
distinto del epitome, en exceso, y antgeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilizacin toma lugar durante el anlisis en la
superficie del micro pozo a travs de la interaccin de streptavidin cubierto en el
pozo y el exgeno agregado biotinilado monoclonal al anticuerpo de anti-hCG.
Mezclando el anticuerpo monoclonal inmovilizado, conjugacin del enzimaetiquetado y un suero que contiene el antgeno nativo, resultados de la reaccin
entre el antgeno nativo y los anticuerpos, sin competicin u obstculo esterico, de
formar un complejo soluble de sndwich se ilustra con una ecuacin.
Tcnica:

Dispersar 25 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 100 ul de enzima hCG, mezclar el micro placa de 20-30 segundos
y cubrir.
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 60 minutos.
Decantar y lavar con buffer de lavado por 3 veces.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
Adicionar 50 ul de solucin stop, mezclar.
Leer en absorbancia a 450 nm con filtro diferencial de 630.

Valores Normales:
1 semana
2 semana
3 semana
4 semana
2 & 3 mes
2 trimestre
3 trimestre

10-30 mlU/mL
30-100 mlU/mL
100-1000 mlU/mL
1000-10000 mlU/mL
30000-100000 mlU/mL
10000-30000 mlU/mL
5000-15000 mlU/mL

13. FRACCION BETA CUALITATIVO (beta acu-color)

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Fundamento:
Inmuno ensayo cromatogrfico con partculas de oro coloidal, esta prueba es
cualitativa y detecta rpidamente la hormona gonodotropina corionica humana
presente en suero y orina.
Tcnica:

Dispersar 50 ul de suero de referencia, controles en los pozos.


Dispersar 50 ul de conjugado
Incubar a temperatura ambiente (18-30C) por 3 minutos.
lavado por 5 veces con agua destilada.
Eliminar el exceso de agua sobre el papel absorbente.
Dispersar sustrato A 50 ul y sustrato B 50 ul.
Incubar a temperatura ambiente por 5 minutos.
Resultado positivo azul negativo incoloro o transparente.

Significado Clnico:
En embarazos normales, la HCG puede detectarse en suero y orina desde 7 das
despus de la concepcin duplicando su concentracin cada 1.3 a 2 das. Para el
momento en que falta el primer periodo menstrual, la concentracin de HCG es
aproximadamente 100 mUI/ml observndose niveles pico de 200000 mUI/ml o ms
para el final del primer trimestre del embarazo.

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Nmero de Exmenes Inmunolgicos Realizados en el Hospital


Regional Durante el del 1 de abril al 15 de mayo del 2014

250

200

150

100

50

del 1ero de abril hasta el 15 de mayo

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CONCLUSIN

El procesamiento de las pruebas inmunolgicas como PCR, ASO, FR, T3, T4,
etc. Se realizan para el diagnstico de las diferentes patologas o el
tratamiento del paciente.
La funcin principal del rea de inmunologa es brindar apoyo al mdico de
diversas enfermedades.

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LOGROS

Interpretacin clnica de las pruebas.


Determinacin de pruebas hormonales.
Procesamiento de la hidatidosis.
Manejo de equipo de hormonas.

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RECOMENDACIONES

Evitar trabajar con muestras hemolizadas.


Tener en cuenta que el FR puede salir positivo en enfermedades crnicas
como en una endocarditis bacteriana, TBC y en enfermedades virales como
rubiola, VIH, etc.
Antes de procesar sacar los reactivos una hora antes de la refrigeradora.
Verificar la fecha de vencimiento de los reactivos.

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BIBLIOGRAFA

http://es.scribd.com/doc/70598035/LABORATORIODE-INMUNOLOGIA
http://www.uco.es/grupos/inmunologiamolecular/inmunologia/tema01/etexto01.htm
http://www.slideshare.net/jujosansan/inmunologa12922529
http://www.monobind.com/immunoassays-fertilityprenatal-prl-accubind-elisa
http://www.wiener-lab.com

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