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Radioinmunoensayo

El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del ingls Radioimmunoassay) es un tipo


de inmunoensayo o mtodo radioinmunomtrico que se basa en la formacin
especfica de los complejos Antgeno-Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran
especificidad unido a la sensibilidad de los mtodos radiolgicos. La tcnica ha sido
prcticamente reemplazada por el mtodo ELISA el cual mide la unin Ag-Ac
mediante colorimetras en lugar de radiometras. Casi todas las molculas pueden
ser antignicas y esto se usa para que los anticuerpos puedan unirse a esa
molcula y marcarla radiactivamente. Una buena manera de provocar que una
molcula sea antignica est basada en que unhapteno combinado con un
coadyugante da respuesta inmune. Un coadyuvante muy usado es la albmina de
suero bovino o BSA, por lo que al conjugar un hapteno con BSA e introducirlo en
otra especie aparecern anticuerpos contra el hapteno.
ndice
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1 Radioinmunoensayos
o

1.1 RIA Directo

1.2 RIA de Inhibicin

1.3 RIA de Sandwich (IRMA)

2 Unin no especfica

3 Referencias

Radioinmunoensayos[editar]
RIA Directo[editar]
El RIA se basa en la competencia existente entre el antgeno no marcado y una
cantidad conocida del antgeno marcado para formar los complejos AgAc o Ag*Ac.
Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en el que
manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se observar que a mayor cantidad
de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y por tanto
menos radiactividad), lo que permitir relacionar la radiactividad con la
concentracin de Ag.
1. Se obtienen anticuerpos especficos, para ello se inyectan en un animal
pequeas cantidades en varias dosis del antgeno muy purificado.
El animal generar anticuerpos que podrn ser recogidos del plasma
sanguneo.

2. Se marca el antgeno radiactivamente. El antgeno marcado debe seguir


siendo reconocible por el anticuerpo.
3. Se aaden Ac a una placa de titulacin y quedan unidos al soporte slido,
tras lo que se agrega el Ag* en cantidad conocida y el Ag de la muestra
problema.
4. Se elimina el antgeno no unido por decantacin y lavado, y se determina la
cantidad de marcaje unido.
5. Se interpola el valor obtenido en la recta de calibracin que debe haberse
realizado con anterioridad.
Tabla de calibrado
Antisuero

Ag*

Ag

Suero normal

Tubo 1

1mL

1mL

0mL

1mL

Tubo 2

1mL

1mL

0,1mL

0,9mL

Tubo 3

1mL

1mL

0,2mL

0,8mL

Tubo 4

1mL

1mL

0,3mL

0,7mL

Tubo 5

1mL

1mL

0,4mL

0,6mL

Tubo 6

1mL

1mL

0,5mL

0,5mL

Para la realizacin del calibrado se dispone de varios tubos en los que se aaden
una cantidad fija de Ac y de Ag* y una cantidad variable de Ag a la que se aade
suero normal para enrasar al mismo volumen. As obtendramos una tabla como la
adjunta.
En el tubo 1 Ac no se une a Ag. En el tubo 2 la mayora se une a Ag*, la
competencia se va desplazando poco a poco a Ag por lo que la radiactividad de la
muestra va disminuyendo (disminuyen los complejos Ac-Ag*). Se crea una recta R
vs. [Ag].

RIA de Inhibicin[editar]
Usado cuando no se puede marcar el antgeno.

1. Se inmoviliza una cantidad constante de antgeno en un soporte slido. Se


suele saturar con BSA, leche en polvo o casena para que no se una nada
ms al soporte.
2. Se aade una cantidad constante de Anticuerpo marcado y el antgeno fro a
medir (o de calibrado). En este paso se establece una competencia en la
que el Ac se une al Ag fijo al soporte o al problema.
3. Se eliminan el anticuerpo no inmovilizado y el antgeno soluble y se
determina la cantidad de anticuerpo marcado que se ha inmovilizado.
4. Se construye una curva de calibrado representando la cantidad de
anticuerpo marcado inmovilizado frente a la concentracin de antgeno
soluble aadida o bien se interpola la radiactividad medida en esta curva de
calibrado.

RIA de Sandwich (IRMA)[editar]


1. Se inmoviliza una concentracin fija del Ac1 (no marcado) en un soporte
slido. Tras lo que se satura el soporte.
2. Se aade la muestra problema (o de calibrado) de Ag.
3. Se aade Ac*2 (marcado) que se una a otro eptopo del Ag.
4. Eliminacin del Ac*2 no unido.
5. Se determina la cantidad de anticuerpo marcado unido.
6. A partir de una recta patrn se interpola el valor obtenido para saber la
concentracin de Ag presente o bien se realiza la recta de calibrado.

Unin no especfica[editar]
Normalmente se suelen obtener valores de radiactividad por encima del 0 cuando
[Ag]=0, esto se debe a la unin no especfica (NSB). Se suelen usar algunos
pocillos para calcular el NSB que existe (haciendo un blanco de calibrado). Para ello
se aade a un pocillo 1mL de suero+1mL de Ag*+XmL de Ag+(1-X)mL de suero y
al no aadir Ac se realiza el mismo proceso y al lavar se mide la unin no
especfica.