IB EVALUACIN INTERNA - BIOLOGA

St. Matthews College North

T.P. N 5: Fotosntesis S2
Alumno:
Profesor: Marina Vega

Fecha de realizacin:
Fecha de entrega:

Unidad 3

NIVELES DE LOGRO:
2= COMPLETAMENTE, 1= PARCIALMENTE,
0= NO ALCANZADO

NIVEL
OTORGADO
2
1
0

COMENTARIOS
T
OT
A
L

DISEO
Definicin del problema y seleccin de variables
Control de variables
Desarrollo de un mtodo de obtencin de datos

OBTENCIN Y PROCESAMIENTO DE DATOS

Registro de datos brutos
Procesamiento de datos brutos
Presentacin de los datos procesados

CONCLUSIN Y EVALUACIN
Formulacin de conclusiones
Evaluacin de los procedimientos
Mejora de la investigacin

TCNICAS DE MANIPULACIN
Cumplimiento de las instrucciones
Aplicacin de las tcnicas
Seguridad en el trabajo
APTITUDES PERSONALES
Motivacin propia y perseverancia
Trabajo en equipo
Reflexin personal
CONFIRMO QUE ESTE INFORME LO HE REALIZADO EN

COMENTARIOS GENERALES:

FORMA PERSONAL

FIRMA DEL ALUMNO:

FECHA:
FIRMA DEL PROFESOR:

Prctica N 5
Fotosntesis
Criterio: OPD, CE
OBJETIVO
Calcular y compara tasas de fotosntesis utilizando un colormetro

INTRODUCCIN
El proceso de fotosntesis involucra el uso de la energa lumnica para convertir dixido de carbono y
agua en azcares, oxgeno, y otros compuestos orgnicos. Este proceso se resume frecuentemente en
la siguiente ecuacin:

Luz

6 H2O + 6 CO2

C6H12O6 + 6 O2

(1)

Ocurre en dos etapas. La primera, llamada etapa lumnica o dependiente de la luz, requiere energa
lumnica. Los productos de esta etapa son utilizados luego para producir glucosa desde dixido de
carbono y agua. Ya que las reacciones de la segunda etapa no requieren el uso directo de la luz, se la
llama la etapa independiente de la luz o ciclo de Calvin.
En la etapa lumnica los fotosistemas absorben fotones de la luz lo que produce que la excitacin de las
molculas de clorofila ya que algunos de sus electrones pasan a un estado de mayor energa. Esta
energa es pasada en forma aleatoria de pigmento a pigmento en proceso llamado cadena de
transferencia de energa de electrones. Gran parte de la energa impulsa la formacin de ATP mientras
que otra parte se utiliza para obtener electrones de la molcula de agua, esta reaccin se conoce como
fotlisis y sus productos son: oxgeno, electrones y H+. La coenzima NADP+ acepta electrones, por
lo tanto toma estos productos y se transforma en NADPH.
En 1937 Robert Hill demostr que cloroplastos aislados producen oxgeno en ausencia de CO 2. Este
descubrimiento fue uno de los primeros indicios de que la fuente de electrones en las reacciones de la
fase clara de la fotosntesis era el agua. En su sistema in vitro, Hill us un aceptor artificial de electrones,
un compuesto de color azul llamado DCPIP (2,6 diclorofenol indofenol). La ecuacin general de la
reaccin de Hill se puede sintetizar como:
Luz
H2O + A
AH2 + O2
Cloroplastos
Donde A es el aceptor artificial de electrones en su forma oxidada (DCPIP) y AH 2 es su forma reducida.
Formalmente la reaccin de Hill se describe como la foto reduccin de un aceptor artificial de
electrones por los hidrgenos del agua, con liberacin de oxgeno.
En cloroplastos aislados un mtodo conveniente para evidenciar la reaccin de Hill es usar como aceptor
artificial de electrones un reactivo que cambie de color una vez reducido, como el 2,6 diclorofenol
indofenol, que en su forma oxidada es azul y en su forma reducida es incoloro.
Dado que el DCPIP reemplazar al NADP + en la etapa lumnica, se predice que la solucin experimental
(con luz, cloroplastos y DCPIP) se tornar casi incolora por efecto de la fotosntesis. Los cambios de
coloracin de una solucin pueden cuantificarse midiendo cunta luz absorbe dicha solucin.

Un colormetro es un equipo que posee la capacidad de emitir luz (I0 o intensidad inicial) a determinadas
(longitudes de onda), de recibir cualquier remanente de luz que no haya sido absorbido por una
muestra (It o intensidad transmitida), y de calcular el cociente entre ambos (It/I0), conocido como
Transmitancia (T). Se define absorbancia (A) a una determinada, como el logaritmo de la inversa de la
transmitancia. Cuanto ms luz se transmite a travs de una solucin, menos se absorbe, y viceversa.
Esto permite cuantificar la aparicin o desaparicin de un determinado producto coloreado (en este
caso la forma oxidada del DCPIP) cuando previamente se hace una curva de calibracin contra
concentraciones conocidas, o comparar tasas de aparicin/desaparicin del mismo cuando se analizan
pendientes.
En el presente trabajo prctico se expondr una solucin de cloroplastos + DCPIP frente a una
fuente de luz artificial de diferentes colores, a continuacin se tomarn lecturas de las
absorbancias (en funcin del tiempo) utilizando un colormetro.
Materiales:
-Colormetro y LaBQuest.
-Cubas colorimtricas
-Papel Aluminio
-Lmpara
-Cronmetro
-Vaso de Precipitados de 600 o 500ml
-Tubos de ensayo pequeos
-Pipeta de 5 o 10ml
-Propipeta
-Pipeta Pasteur
-DCPIP 3.2 mM
-Solucin de Buffer pH = 7.
-Solucin de cloroplastos extrados de pasto fresco
-Mechero
-pinza
-Agua Destilada.
Preparacin previa y calibracin:
1. El material a utilizar ser entregado por los docentes (cloroplastos hervidos y sin hervir)
2. Rotular las pipetas Pasteur con: H (hervido) y S: (sin hervir)
3. Colocar el material en hielo y en oscuridad. No mezclar las pipetas.
4. Marcar una de las cubas con: B (blanco), S (sin hervir), H (hervido) O (oscuridad envuelta en papel
aluminio).
5. Preparar una batera de cubas de acuerdo con lo expuesto en la Tabla 1 (buffer, agua destilada,
DCPIP sin cloroplastos).
B
S
Buffer pH = 7
1 ml
1 ml
Agua Destilada
2 ml
1 ml
DCPIP
--------------------1 ml
Sol.Clorop.S/Hervir
6 gotas
6 gotas
Sol.Clorop. Hervid.
----------------------------------------Tabla 1: Tutorial para el llenado de las cubas.

O
1 ml
1 ml
1 ml
6 gotas
---------------------

H
1 ml
1 ml
1 ml
--------------------6 gotas

6. Calibrar el colormetro (ver Calibracin del colormetro)

Calibracin del colormetro:
1. Cambiar la longitud de onda a 635nm.
2. Mantener apretado el botn CAL hasta que el LED rojo sobre el tablero titile.

3. Blanco: Agregar a la cuba B (tabla 1) la suspensin de cloroplastos. Esto deja al colormetro calibrado
con un blanco (o cero en la medicin de absorbancia) igual a una solucin de cloroplastos sin hervir ms
buffer.
Desarrollo experimental:
1. Colocar un vaso de precipitados de 500 ml lleno de agua entre la fuente lumnica y las cubas (Fig. 1).
2. Colocar 6 gotas de cloroplastos en la cuba S (tabla 1). Tapar e invertir.
3. Colocarla en el colormetro y registrar la absorbancia. Este dato corresponde a tiempo T = 0 (cero).
4. Quitar la cuba del colormetro y colocarla frente a la luz de acuerdo a lo observado en la figura 1.
Disparar el cronmetro en este momento.
5. Repetir lo mismo para las cubas O y H. Disparar un cronmetro cada vez.
6. Registrar mediciones cada 5 (cinco) minutos (t = 1; 2; n)
7. Repetir el desarrollo experimental pero colocando un filtro de celofn verde sobre el vaso de
precipitados y sin contaminacin lumnica externa (as se cambia la longitud de onda a la que se
exponen los cloroplastos).
8. Calcular la tasa de fotosntesis para cada set de datos (luz natural sin filtro, luz con filtro verde).

Figura 1: Vista zenital de la disposicin de las cubas y la fuente lumnica.

1. Redacte una pregunta de investigacin, una hiptesis y determine las variables del trabajo prctico.
2. Analice y procese los datos obtenidos en la prctica y redacte el informe habitual.