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Control del Ciclo Celular y

Reparación del ADN

Depto. Biofísica
Facultad de Medicina
ESFUNO ESCUELAS, UTI BCyT 2015

Control del Ciclo Celular
• La transición de una fase del ciclo a la siguiente requiere que
se completen una serie de eventos:

bioquímicos

morfológicos y

genéticos

• Son genes que controlan la inducción y activación de
complejos ciclina-cdk.

• A través de la citometría de flujo se puede estudiar la respuesta a diversos agentes en poblaciones celulares normales y mutantes. .

Cuando mutan se transforman en oncogenes. orquestando la multiplicación anárquica de las células. que estimulan la proliferación celular. . • La transformación maligna de una célula acontece por acumulación de mutaciones en genes específicos agrupados en 2 familias:  Protooncogenes: dirigen la producción de proteínas como ciclinas y factores de crecimiento.• Las células tumorales descienden de un ancestro común por el inicio indebido de un programa de división celular.

Su mutante luego de irradiada no detiene su progresión en el ciclo (mutación. a través de la inhibición directa o indirecta de los complejos ciclina-cdk. • Gen p53 (control G1/S): desempeña un papel importante en apoptosis y control del ciclo celular. Cuando no están presentes o se encuentran inactivos por mutaciones. . amplificación génica y transformación maligna). • Los supresores tumorales frenan la progresión del ciclo en forma reversible o irreversible. Supresores tumorales: que en el organismo sano controlan la proliferación celular. las células dejan de crecer normalmente y adquieren propiedades proliferativas anormales.

donde un 50% de los pacientes muestran una mutación del genTP53. • Síndrome de Li-Fraumeni: los individuos con este síndrome tienen un mayor riesgo para desarrollar cánceres primarios múltiples.• Una vez activado p53:  o bien podrá inducir un paro en el cc para permitir la reparación  o inducirá apoptosis para eliminar el daño en la célula. .

dependiendo de factores:  genéticos  metabólicos  ambientales • Involucran sistemas enzimáticos y se encuentran presentes desde virus hasta mamíferos. incluso células tumorales. • Importancia de la reparación:  estabilidad del genoma  mutagénesis – biodiversidad  envejecimiento (acumulación de errores)  transformación maligna  muerte celular .• Las lesiones producidas en el ADN por distintos agentes pueden repararse con cierta probabilidad.

de base mal apareadas).  Reparación recombinacional. de base. Dentro de este se encuentra:  Reparación por foto-reactivación.  Reparación de bases alquiladas. . • Mecanismos complejos de reparación:  Reparación escisional (de nucleótido.  Reparación post-replicativa.Reparación del ADN • Mecanismos simples de reparación (reversión directa del daño).

Reparación por Foto-reactivación • Repara dímeros de bases producidos por UV. • Las enzimas asociadas son fotoliasas que reconocen la lesión. • Conservada en la escala biológica desde virus a mamíferos (no presente en humanos). . a través de la absorción de luz visible para romper los enlaces covalentes.

forma pares de bases complementarias con la timina.Reparación de Bases Alquiladas • La metilación de la guanina. • La reparación se lleva a cabo por una “enzima suicida”. . cuyo producto O6-metilguanina. en lugar de citosina.

roturas simples y de doble cadena. • Implica:  Reconocimiento y demarcación de la lesión  Separación del segmento marcado  Corte del segmento  Síntesis de nueva porción por polimerasas  Unión a la cadena por ligasas .Escisión de Nucleótido • Repara lesiones producidas por radiación UV.

. el trastorno conocido como Xeroderma pigmentosum se caracteriza por la incapacidad de reparar los dímeros de timina producto de la exposición a UV.  Alta incidencia de cáncer de piel. • Se caracteriza por:  Hipersensibilidad a radiaciones UV.• En humanos. • Mutación autosómica recesiva.

.• El Síndrome de Cockayne puede servir como elemento de conexión entre dos modelos actuales que explican el envejecimiento: deficiencia en la reparación (con baja probabilidad de error)  acumulación de lesiones por radicales libres (principalmente en genoma e interfases: membranas mitocondrial y nuclear).

. •Se reconoce la hebra recién sintetizada y se elimina la base mal apareada.Reparación de Bases Mal Apareadas •El reconocimiento de los desapareamientos se basa en la distorsión de la doble hélice.

catalizando el intercambio entre secuencias homólogas.Reparación Recombinacional • Involucrada en la reparación de roturas dobles de cadena (DSBs) en el ADN producidas por radiaciones ionizantes y radiomiméticos. • El modelo actual implica el reconocimiento de las DSBs por complejo enzimático ATP-dependiente. . • En las células eucariotas es necesaria la presencia de las proteínas Ku que permiten el intercambio con secuencias no homólogas (lo que llevaría a la mutación).

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Replicación Post-replicativa • Reconoce errores en la hebra de ADN recientemente sintetizada y sin metilar. . • En procariotas este tipo de reparación se llama respuesta SOS y se pone en marcha para resolver un daño tan grave que la muerte celular es la única alternativa.

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Métodos de Estudio de Reparación • Entre los más importantes a nivel poblacional:  Análisis de sobrevida y rendimiento mutagénico en función de la dosis  Distintos tipos de lesiones pueden detectarse con electroforesis de distintos tipos y cromatografía .

EPR: reparación con error. . Los signos (-) indican deficiencias de reparación (mutantes). EFR: reparación sin error.

• La comparación de cepas salvajes con mutantes sensibles a nivel de sobrevida y mutagénesis permite sacar conclusiones sobre:  los sistemas de reparación involucrados y su magnitud  así como de las relaciones entre vías de reparación .

 se hace migrar el ADN de células tratadas y no tratadas sobre una matriz en respuesta a un campo eléctrico  el número de DSBs dependerá de la relación entre los picos (tratados vs controles) asumiendo la distribución de Poisson). .• La técnica de electroforesis por campos pulsados transversales y alternados (TAFE) permite detectar dobles roturas de cadena en el ADN.

mutantes) wt +[BLM] = 0. . t = 0h.5 µg/ml Densitogramas de ADN y corrida correspondiente.5 µg/ml rad17/rad17 +[BLM] = 0.control (wt.5 µg/ml chk1/chk1 +[BLM] = 0.

5. ¿Cómo incide la mutación de p53 en la cinética celular luego de la exposición a radiaciones? 3.Preguntas 1. ¿Qué deficiencias presentan los pacientes portadores de Xeroderma pigmentosum? 4. ¿Cuáles es la función de los supresores tumorales? 2. Describa brevemente que sistemas de reparación del ADN conoce. ¿Qué métodos de estudio utilizaría para evaluar los mecanismos de reparación? .