Universidad Autnoma Del Estado De Mxico

Facultad De Qumica
Qumica Legal
QFB

Practica N8 Pruebas Cristalogrficas Para Determinar La Naturaleza Sangunea De

Una Mancha
Objetivo
Confirmar la naturaleza sangunea de una mancha mediante un mtodo microcristralogrfico.
Marco Terico
En cualquier caso, y aunque no hubiera ninguna dificultad en reconocer una mancha como
sangre simplemente por observacin, siempre es necesaria una verificacin de su naturaleza
sangunea en el momento de la reconstruccin de una caso o de ser presentadas como pruebas
de un procedimiento legal.
A grandes rasgos, son cuatro las cuestiones que se plantean en el laboratorio a la hora de
identificar manchas, una de ellas es: La mancha que estudiamos es de sangre?, lo cual implica
la realizacin de una serie de procedimientos que reciben el nombre de conjunto diagnostico
genrico. Existen dos tipos de pruebas a aplicar:
Pruebas de orientacin. Son muy sensibles pero poco especficas, porque adems
de la sangre, hay otras muchas sustancias que son capaces de dar un resultado
positivo al ser sometidas a las mismas, por lo que solo se puede valorar un
resultado negativo.
Pruebas se certeza. Son muy especficas y de menor sensibilidad. Se basan en
comprobar la presencia en la muestra de alguno de los componentes de la sangre.
Estas pruebas no permiten determinar si la sangre analizada es o no humana.
Dentro de las pruebas de certeza se encuentran mtodos cristalogrficos o microqumicos. En
estas pruebas, se somete a la mancha a la accin de distintos reactivos, para obtener derivados
de la hemoglobina. Estos derivados forman cristales de colores y formas caractersticos que
pueden ser identificados por medio de observacin al microscopio y permiten asegurar la
naturaleza sangunea de la muestra que se estn analizando. Las dos tcnicas ms utilizadas son
las de Teichmann para obtener cristales de clorhidrato de hematina y el mtodo basado en la
obtencin de cristales de hemocromgeno es utilizado en el reactivo de Takayama.
Cristales De Teichmann O De Hematina
Las protenas se separan inmediatamente de la hemoglobina y del grupo prosttico cuando se
trata con cido actico, con el cual, se crea un medio acido en donde el grupo Hem se oxida ms
rpidamente que en un medio alcalino; si hay algn halgeno inorgnico como el cloro, se
formaran cristales insolubles de cloruro de ferriprotoporfirina o hemtica. En caso positivo se
observaran unos cristales romboidales de color caf oscuro.
Prueba De Takayama O Hemocromgeno
La ferroprotoporfirina y la ferriprotoporfirina se combinan con compuestos nitrogenados que
incluyen a otras protenas, hidrxido de amonio, piridina y nicotina llamados hemocromgenos
mediante la hemoglobina creando cristales tanto en medio acido como alcalino, por capilaridad,
se observan cristales romboidales de color rosa al microscopio.

Procedimiento
Teichmann y Takayama
Macerar en solucin
salina hasta conseguir
una solucin coloreada
al mximo.

Depositar unas gotas

de la solucin sobre el
extremo de un
portaobjetos y hacer
un extendido.

Cubrir el extendido
con un cubreobjetos y
adicionar por
capilaridad gotas del
reactivo segn la
prueba a realizar.

La preparacin se
calienta a la llama
hasta que se inicie la
ebullicin, teniendo
cuidado de no
sobrecalentar para
evitar quemar la
muestra.

Si la muestra no
procede de la elucion
de una muestra, si no
que esde una muestra
directa, basta realizar
una sola vez la adicion
del reactivo.

En caso de que no
aparezcan los cristales
se aade otra gota de
reactivo, repitiendo el
procedimiento. si
despues de 4 o 5
ebulliciones no
aparecen los cristales,
se puede dar la prueba
como negativa.

La preparacin se deja
enfrar y se observa al
microscpio buscando
los cristales.

Disposicin de Residuos
Colocar las laminillas, cubreobjetos y el residuo de muestra en solucin de hipoclorito de sodio
por 15 minutos.
Observaciones

Takayama, muestra directa

40X

Teichmann, muestra directa

40X

Takayama, muestra indirecta

40X

Resultados
En las muestras para Teichmann y Takayama en muestra fresca resultan positivas a cada prueba
identificando de forma inmediata los cristales en Takayama, y con un poco de dificultad se
encontraron los de Teichmann.
En las muestras diluidas fue difcil encontrarlos slo en el de Takayama fueron ms perceptibles,
pero estaba muy concentrada la dilucin, por lo que al diluirlo ms, ya no pudieron encontrarse.
La apariencia de los cristales en las reacciones de Takayama eran de color rosado transparente,
algunos en forma de aguja o formas semiromboidales, uno encima de otro.
En el caso de los cristales de Teichmann tenan definidamente una forma romboidal y era de un
color caf.
Conclusiones

Las pruebas que se realizan con las tcnicas de Takayama y Teichmann son relativamente
sencillas y rpidas para la determinacin de muestras de sangre, con pequeos inconvenientes
en las preparaciones de estos, ya que en el caso de la de Teichmann si el c. Actico no ebulle
en su totalidad queda lquido que impide su visualizacin y la totalidad de la reaccin. Pero en la
reaccin de Takayama si se expone demasiado tiempo a la llama el portaobjetos, se puede
caramelizar el reactivo lo que provocara que no se lograra ver nada en el microscopio y de igual
forma la reaccin con la sangre no se llevara a cabo.
Es posible que en la muestra diluida no se lograra encontrar los cristales, porque, en todas las
pruebas que se realizaron no se realizaron en su totalidad las reacciones correspondientes o de
igual forma con el reactivo de Takayama hubo muchas partes caramelizadas. No se puede decir
que haba poca cantidad de sangre y que por esto no se vio nada, ya que este tipo de pruebas
pueden realizarse con una concentracin baja de sangre, por lo que no es un factor que pueda
impedir su visualizacin.
Cuestionario
1. Explique el fundamento de la reaccin del cido actico con la sangre.
La hemoglobina, cuando es tratada con cido actico, se separa inmediatamente de las
protenas y del grupo prosttico. Durante la hidrlisis la globulina se desnaturaliza.
2. Explique el fundamento de la reaccin de la sangre con el reactivo de Takayama.
El hidrxido de sodio efecta una hidrlisis alcalina, liberando el grupo prosttico de la globina; el
fierro del Hem en este momento se encuentra como in frrico (+3) debido a la formacin de la
metahemoglobina en el proceso de desecacin de la mancha de sangre. La carga (+3) del fierro
se neutraliza por el in OH. Calentando la glucosa (a azcar reducida), se reduce el in frrico a
ferroso (+2) y la piridina se combina con ste para formar un producto cristalino insoluble: el
hemocromgeno o piridinferroprotoporfirina.
3. Cules son las caractersticas cristalogrficas de los cristales de
hemocromgeno?
Cristales romboidales de color rosa alrededor de la muestra.

4. A qu se le llama rastreo hematolgico?

El rastreo de sangre en el sitio de suceso tiene por objeto detectar, mediante una bsqueda
metdica, toda clase de vestigio de sangre, tanto en el sitio de suceso mismo, como en el
cadver, en vestimentas y tambin en el sospechoso. Una vez detectada la imagen sangunea se
aplica el procedimiento criminalstica normal, que es proteger el vestigio para evitar que sea
alterado o borrado; fijar mediante la fotografa, planimetra y descripcin escrita; transportar
vestigio al laboratorio de criminalstica ( Cuando sea procedente); la imagen sangunea, es decir,
reconstruir su origen y mecanismo.
Referencias

Tcnicas Utilizadas En Hematologa Forense.

http://criminalistica.mx/descargas/documentos/pdf/TecnicasHematologiaForense.pdf
Consultado 08/04/2015.
Introduccin, Hematologa Forense.
http://www.uv.es/acastell/1-Introduccion.pdf
Consultado 05/04/2015.
Anlisis Forense de la sangre.
http:// www.criminalistica.com.mx/areas-forenses/hematologia-y-serologia/1347-varios
Consultado 05/04/2015.
Hematologa forense.
http://www.mexicoforense.org/biblioteca/criminalistica/hemotologia_forense.pdf
Consultado 05/204/2015.
Hematologa forense.
http: //invesjudiciala.blogspot.mx/
Consultado 08/04/2015.
Manchas hemticas.
http: //es.slideshare.net/adnestelamartin/captulo-10-anlisis-de-manchas-de-sangre
Consultado 08/05/2015.