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MANUAL DE PROCEDIMIENTO DE PRCTICAS


MATERIA
DOCENTE
PERIODO
CARRERA
SEDE

FITOQUMICA Y FARMACOGNOSIA
MARIA ELENA MALDONADO RODRGUEZ
45 OCTUBRE 2014 FEBRERO 2015
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS NATURALES
EL GIRN - QUITO

PRACTICA N 1
TEMA: RECONOCIMIENTO MACROSCOPICO DE LAS DROGAS.
OBJETIVO GENERAL: Identificar la calidad y la pureza de las drogas vegetales para
uso como fitofrmacos
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Conocer los parmetros fsicos de evaluacin de la calidad de una
droga.
2. Evaluar la cantidad de materias extraas en el material vegetal fresco
o seco y empacado.
MARCO TERICO
Se define a una droga vegetal como Toda materia prima de origen biolgico (vegetal o
animal), que directa o indirectamente sirve al farmacutico o a la industria farmacutica
para la elaboracin de medicamentos.
La identificacin de una droga se hace por comparacin entre una muestra certificada de la
planta tomada como referencia y la droga vegetal problema.
La pureza de una droga vegetal es un aspecto fundamental de la farmacognosia y la
fotoqumica, lo que hace que se hayan establecido normativas a este respecto y que son
parte de Farmacopeas, Normativas y otros documentos oficiales.
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

Aprobado por:
Consejo de Carrera de
Biotecnologa

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Los mtodos de evaluacin de las drogas pueden ser: la observacin, la microscopa,


anlisis fsico-qumicos, y biolgicos.
RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Placas Petri
Vaso de precipitacin de 50 ml
Vaso de precipitacin de 100 mL
Vaso de precipitacin de 500 mL
Varilla de Vidrio
Pinzas
Alcohol al 70% frasco rociador de 250 mL
Lminas de poliespuma de 2 x 2 cm de 0,5 cm de
espesor
Hojas de afeitar
Porta objetos
Cubreobjetos

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
1
1
1
1
1
4
1
2
2

REACTIVOS
DESCRIPCION
Agua destilada
ter de petrleo

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
150 Ml
30 mL

EQUIPOS
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DESCRIPCION
Plancha de calentamiento
Balanza tcnica
Microscopio ptico

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
3

PROCEDIMIENTO
1. Los estudiantes de cada grupo deben comenzar con las descripciones

macro

morfolgicas, para lo cual debe completar la siguiente informacin:


a. Nombre Cientfico
b. Uso tradicional reconocido.
c. Nombre vulgar.
d. Familia Botnica.
2. Identificar el Tipo de material Vegetal, entre los siguientes:
a. ORGANOS SUBTERRNEOS:
i. Tamao (dimensiones)
ii. Color
iii. Olor
iv. Forma y Consistencia: Ej. Recto, torcido, simple o ramificado.
v. Condicin: Ej. Fresca, seca, entera, cortada
vi. Caracteres superficiales: Lisa, arrugada, presencia de cicatrices y
yemas
vii. Seccin transversal: Tamao de la corteza y de la mdula.
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viii. Fractura: Describir como se rompe la pieza cuando se somete a


presin: ej. Completa, incompleta, corta, fibrosa, dura, dbil,
flexible, etc.
b. CORTEZA Y LEOS
i. Forma de la Pieza: Curvada, aplanada, acanalada, simple.
ii. Superficie Externa: Cicatrices de hojas, presencia de lenticelas,
mohos, lquenes, etc.
iii. Superficie Interna: Color, estriaciones, surcos, etc.
c. HOJAS
i. Forma: considerando: el pecolo, pice, base, bordes, lmina o
contorno y vernacin.
ii. Textura: Membranosa, coriceas, frgil y suculenta.
iii. Superficie: Glabra o pubescente
iv. Color
v. Dimensiones (largo y ancho)
vi. Condicin: Fresca, seca, completa, rota.
vii. Peculiaridades: Presencia de glndulas, puntuaciones, pelos, etc.
d. FLORES:
i. Estado de desarrollo.
ii. Condicin: Fresca, seca, completa.
iii. Color
iv. Olor

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v. Caractersticas especficas: tipo de inflorescencia, tipo de caliz, tipo


de ptalos, nmero de stos, tipo de ovario, estmbres.
e. FRUTOS:
i. Pericarpio: color, textura, uniforme o modificado.
ii. Dehiscencia.
iii. Forma
iv. Dimensiones.
v. Color
vi. Olor.
vii. Marcas externas o peculiares.
f. SEMILLAS
i. Caractersticas fsicas: Forma, dimensin, dureza, peso, etc.
ii. Color.
iii. Olor.
iv. Peculiaridades.
3. ALTERACIONES DE LAS DROGAS: Dadas las condiciones inadecuadas de
recoleccin y almacenamiento de las drogas para ser expendidas en mercados o
centros naturistas, las drogas vegetales pueden sufrir alteraciones, que pueden
afectar o no a los principios activos.
No se debe aceptar drogas que presenten evidencia del ataque de ratas, como pelos,
heces y orina.

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Los roedores son transmisores de diversas enfermedades como: tifoidea, peste


bubnica, etc., tambin albergan garrapatas y caros (pulgas y piojos) que pueden
transmitir otras enfermedades.
El deterioro de las drogas vegetales por elementos como los descritos, no solo las
hacen ineficientes sino las vuelven en potencialmente peligrosas para la salud
humana.
a. DETECCION DE PELOS DE ROEDORES: La droga se coloca
extendida en una placa Petri y se observa al microscopio
estereoscpico con el menor aumento. Con la ayuda de una pinza se
separan los pelos que se encuentran en la muestra. Observar los
caracteres morfolgicos del pelo con el lente de 400 X en el
estereoscopio. Comparar los caracteres con el de un cabello humano.
b. DETECCION DE HECES DE ROEDORES: las heces de roedores
pueden observarse al examinar la droga extendida en una placa petri.
Son de forma cilndrica terminando en punta ms aguda en uno de los
extremos. El color vara del caf obscuro al negro. El tamao es de 3
a 10 mm.
c. DETERMINACIN DE MATERIAS EXTRAAS. Se realiza el
examen visual de la droga cruda, con la ayuda de lupas o del
estereoscopio.
Las cantidades de droga que se utilizan en funcin de la droga
utilizada son:
Semillas y frutos pequeos

10 g

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Semillas y frutos grandes

20 g

De drogas pulverizadas y secas

20g

De flores, hojas, hierbas, cortezas y races

100g

En estos materiales detectar:


-

Partes de la droga que no se corresponden con las exigencias que


seala la monografa.

Determinacin de las partes de otra planta.

Determinacin de mezclas minerales.

Pesar los materiales extraos y sacar el porcentaje de elementos


extraos.
P= (X/M) x 100
P: Porcentaje de Materia Extraa
X: Peso de Materia Extraa
M: Peso inicial de la droga.
REGISTRO DE RESULTADOS
Se anexa formato de registro de la prctica correspondiente que debe ser llenado de
forma individual.
PRACTICA DE LABORATORIO DE FITOQUMICA Y FARMACOGNOSIA
FECHA:__________________________________ CURSO:__________________________
NOMBRE:________________________________________________________________
PLANTA ANALIZADA:
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NOMBRE: _______________________________________
USO TRADICIONAL O RECONOCIDO: _______________________________________
NOMBRE VULGAR O VERNCULO: _______________________________________
PLANTA ENDMICA O ACLIMATADA: _______________________________________
FAMILIA BOTNICA_______________________________________
A. ORGANOS SUBTERRANEOS:
a. TAMAO:_______________________________________
b. COLOR: _______________________________________
c. OLOR: _______________________________________
d. FORMA Y CONSISTENCIA: ____________________________________
e. CONDICIN: _______________________________________
f. CARACTERES DE LA SUPERFICIE: _____________________________
B. CORTEZA Y LEOS
a. FORMA DE LA PIEZA _______________________________________
b. SUPERFICIE EXTERNA _______________________________________
c. SUPERFICIE INTERNA _______________________________________
C. HOJAS
a. FORMA _______________________________________
b. TEXTURA _______________________________________
c. SUPERFICIE _______________________________________
d. COLOR _______________________________________
e. OLOR _______________________________________
f. DIMENSIONES _______________________________________
g. CONDICION _______________________________________
h. PECULIARIDADES _______________________________________
D. FLORES
a. ESTADO DE DESARROLLO _______________________________________
b. CONDICIN _______________________________________
c. COLOR _______________________________________
d. OLOR _______________________________________
e. PECULIARIDADES _______________________________________
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E. FRUTOS
a. PERICARPIO
b. DEHISCENCIA
c. FORMA
d. DIMENSIONES
e. COLOR
f. OLOR
g. MARCAS EXTERNAS PECULIARES
F. SEMILLAS
a. CARACTERES FSICOS _______________________________________
b. COLOR _______________________________________
c. OLOR _______________________________________
d. PECULIARIDADES
ALTERACIONES DE LAS DROGAS
A. DETECCION DE PELOS DE ROEDORES
_______________________________________
B. DETECCIN DE HECES DE ROEDORES
_______________________________________
C. DETECCIN DE INSECTOS _______________________________________
D. PORCENTAJE DE MATERIA EXTRAA:
a. PARTES DE LA DROGA QUE NO SE CORRESPONDEN_________________
b. DETERMINACION DE PARTES DE OTRAS PLANTAS ___________________
c. DETERMINACION DE MEZCLAS MINERALES ______________________

Firma del Estudiante _______________________________________


Firma del Profesor _______________________________________

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ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002.
2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,
Buenos Aires Argentina. 1979.
3. Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL
ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.

PRACTICA N 2
TEMA: OBTENCIN Y ANLISIS DE EXTRACTOS FLUIDOS OBTENIDOS POR
PERCOLACIN.

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OBJETIVO GENERAL: Capacitar a los estudiantes en la tcnica de obtencin de


extractos vegetales por percolacin, que cumplan los requisitos de calidad.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Extraccin de los principios activos vegetales mediante percolacin.
2. Hacer el control de calidad del extracto obtenido.
MARCO TERICO
El anlisis fitoqumico comprende 4 etapas bien definidas:

Recoleccin y clasificacin botnica de la especie en estudio.

Extraccin, separacin y purificacin de los constituyentes qumicos

Determinacin estructural

Ensayos farmacolgicos

Para lograr una extraccin adecuada de los principios activos contenidos en las plantas y
que su accin sea ms efectiva es necesario realizar diversos procedimientos mediante los
cuales sean extrados.
Los mtodos para extraccin de los principios activos pueden ser de tres tipos:

Extraccin mecnica.
Extraccin por destilacin
Extraccin mediante disolventes.

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EXTRACCION MECNICA: Se extrae de los tejidos animales o vegetales, los principios


activos disueltos en los lquidos que impregnan dichos tejidos. Los principales mtodos de
extraccin mecnica pueden resumirse en:
-

Extraccin por incisin: Se hace cortes en una parte de la planta


de donde se extrae el zumo. Ej. La extraccin de la trementina de

las hojas de adormidera.


Extraccin por calor: El calor acta sobre las clulas animales y
provoca su ruptura por dilatacin del protoplasma.

Ej. La

obtencin del aceite de hgado de bacalao.


Extraccin por expresin: Es el procedimiento ms usado y
consiste en presionar fuertemente la droga. Ejemplo obtencin
del aceite de oliva.

EXTRACCION MEDIANTE DISOLVENTES:


Los procesos de extraccin con disolventes se clasifican en dos tipos:

Slido Lquido: Consiste en la separacin de las porciones medicinalmente

activas, a partir de tejidos de plantas y animales.


Lquido Lquido: Consiste en la separacin de los componentes de una
solucin por contacto con otro lquido o disolvente no miscible en l.

A su vez cada uno puede clasificarse en continuo o dinmico y discontinuo o esttico.

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Los mtodos de extraccin permiten obtener los principios activos y dosificarlos en formas
farmacuticas adecuadas para su administracin oral o externa de acuerdo al lugar de
accin que se recomiende.
Estas preparaciones son conocidas como: decocciones, infusiones, extractos fluidos, densos
o secos (segn su contenido de lquidos) y tinturas.
Son conocidas tambin como preparados galnicos, en honor a Claudio Galeno precursor
de la preparacin de medicamentos a partir de los vegetales.
CONTROL DE CALIDAD DE EXTRACTOS
Para la determinacin de los parmetros de calidad de un extracto, se realizan los siguientes
anlisis:
-

Anlisis de los requisitos organolpticos.


Determinacin de la densidad relativa
Determinacin del ndice de refraccin
Determinacin del pH
Determinacin de slidos totales.

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RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Percolador de 1 litro
Papel filtro
Cristalizadores de vidrio de 30 cm de dimetro
Espatulas de metal con cuchareta
Probeta de 250 cc
Algodn
Tijeras
Lpiz
Papel de aluminio
Tapones de goma atravesados con un tubo de vidrio
Manguera delgada 15 cm
Pinza Mohr
Vaso de un 1000 cc
Soporte metlico
Aro metlico
Pinza de vidrio con su respectiva nuez
Frasco Ambar con tapa rosca de 1 L
Droga Pulverizada seca (traen los estudiantes)
Pipeta volumtrica de 5 cc
Cpsulas de porcelana taradas
Tubos de 1 cm de ancho por 10 cm de largo

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
500g
1
1
1

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REACTIVOS
DESCRIPCION
Alcohol Potable
Agua destilada

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1 lito

EQUIPOS
DESCRIPCION
Balanza granataria
Picnmetro
Refractmetro
Potencimetro
Bao Mara
Estufa de temperatura controlada a 105 grados C

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
3
1
2
3
1
1

PROCEDIMIENTO
a. OBTENCIN DE EXTRACTOS POR PERCOLACIN

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En el cristalizador de vidrio colocar la droga cruda pesada y humedecer con el


menstruo, sin que queden residuos lquidos del exceso.

Dejar reposar 15 minutos, se podra dejar hasta cuatro horas en funcin de la


dependencia de la dureza y caractersticas de la droga cruda.

En el percolador cubrir internamente el orificio de salida con un algodn.

Transferir al percolador la droga humectada.

Cubrir la superficie de la droga con papel filtro y presionar.

Para asegurar que no queden burbujas de aire en la masa vegetal, se vierte el


menstruo con el orificio de salida del percolador abierto y cuando ste comienza
a salir se cierra.

Se sigue vertiendo menstruo hasta que cubra la masa vegetal y quede a una
altura superior entre 3 y 5 cm.

Se recircula la tercera parte del volumen del lquido contenido en el percolador y


si baja el nivel del lquido, se lo repone con menstruo adicional.

Macerar durante 24 horas.

Abrir el orificio de salida y dejar salir el percolado a la vez que se aade ms


menstruo, establecindose un flujo de 3 a 5 mL por minuto, hasta obtener una
fraccin correspondiente al 85% del extracto.

El lquido obtenido se guarda en una botella mbar.

El resto del lquido permanece 24 horas ms

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Se completa la extraccin del lquido total remanente en el percolador y se


concentra en el rotavapor a 60 C , hasta el volumen requerido (15% del
extracto).

Mezclar este extracto blando con la primera fraccin y dejar reposar por 4 das
a una temperatura entre 8 y 10 grados C.

b. METODOS GENERALES PARA EL ANALISIS DE EXTRACTOS.

ANALISIS ORGANOLEPTICO:
o Determinacin del olor: Se toma una tira de papel filtro de 1 cm de
ancho por 10 cm de largo y se introduce un extremo en la muestra de
ensayo. Determinar si el olor corresponde al caracterstico del material
vegetal. Registrar los resultados.
o Determinacin del color: Se toma un tubo de ensayo limpio y se llena
hasta las partes con la muestra de extracto y se observa:

El color. Registrar los resultados.

La transparencia. Registrar los resultados.

La presencia de partculas. Registrar los resultados.

La separacin de capas. Registrar los resultados.

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DETERMINACION DE LA DENSIDAD RELATIVA: La densidad relativa es


la relacin entre la masa de un volumen de la sustancia a ensayar a 25 C y la
masa de un volumen igual de agua a la misma temperatura. . Registrar los
resultados.

DETERMINACIN DEL INDICE DE REFRACCIN: El ndice de refraccin


es una constante caracterstica de cada sustancia, y representa la relacin entre el
seno del ngulo de incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin cuando
la luz pasa oblicuamente a travs del medio. . Registrar los resultados.

DETERMINACION DEL pH: La acidez o la alcalinidad de las soluciones


acuosas se caracterizan por el valor del ndice de hidrgeno, pH. El pH es por
tanto el ndice numrico que se utiliza para indicar la mayor o menor acidez de
una solucin en funcin de la concentracin de los portones.

DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES: Es la variacin de masa, debido


a la prdida o de sustancias voltiles por accin del calor, mediante un proceso
de evaporacin de la porcin de ensayo y secado del residuo en la estufa, hasta
la obtencin de una masa de peso constante.

REGISTRO DE RESULTADOS

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Se anexa formato de registro de la prctica correspondiente que debe ser llenado de


forma individual.

PRACTICA DE LABORATORIO DE FITOQUMICA Y FARMACOGNOSIA


PRACTICA No. 2

PESO DEL MATERIAL VEGETAL SECO: _______


PESO DEL MATERIAL VEGETAL LUEGO DE LA EXTRACCIN SECO: ________
PORCENTAJE DE RENDIMIENTO: __________
VOLUMEN DE MENSTRUO UTILIZADO: ________

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VOLUMEN DE EXTRACTO OBTENIDO: ________


CONTROL DE CALIDAD DEL EXTRACTO OBTENIDO
ANALISIS ORGANOLEPTICO
OLOR
COLOR
TRANSPARENCIA
PARTCULAS EN SUSPENSIN
SEPARACIN EN FASES

DENSIDAD RELATIVA:
PESO DE PICNOMETRO SECO Y LIMPIO
PESO DEL PICNOMETRO CON MUESTRA A 20C DE
TEMPERATURA
DENSIDAD DEL AGUA
DENSIDAD RELATIVA DEL EXTRACTO

INDICE DE REFRACCIN:
1. LECTURA: ______
2. LECTURA: ______
3. LECTURA: ______
VALOR PROMEDIO: __________
DETERMINACIN DEL pH:
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1. LECTURA: ______
2. LECTURA: ______
3. LECTURA: ______
VALOR PROMEDIO: __________

DETERMINACIN DE SLIDOS TOTALES:


Peso capsula tarada: ___________
Peso cpsula con muestra lquida: _________
Pesos de cpsula con muestra seca:
1. _________ tiempo de secado: ________
2. _________ tiempo de secado: ________
3. _________ tiempo de secado: ________
Volumen de extracto: __________
Temperatura de la Estufa: _________
Porcentaje de rendimiento: _________________________

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PRACTICA N 3
TEMA: EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE AZCARES
OBJETIVO GENERAL: Identificacin general de azcares obtenidos de diferentes
matrices.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
3. Extraccin de fructosa a partir de frutas y su identificacin.
4. Extraccin de sacarosa a partir de caa de azcar y su identificacin.
5. Extraccin de lactosa a partir de leche y su identificacin.
MARCO TERICO
La fructosa, o levulosa, es un azcar encontrado en los vegetales, las frutas y la miel. Es un
monosacrido con la misma frmula emprica que la glucosa pero con diferente estructura,
es decir, es un ismero de sta. Es una hexosa (6 tomos de carbono), pero cicla en furano
(al contrario que las otras hexosas, que lo hacen en pirano). Su poder energtico es de 4
kilocaloras por cada gramo. Su frmula qumica es C6H12O6.

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Todas las frutas naturales tienen cierta cantidad de fructosa (a menudo con glucosa), que
puede ser extrada y concentrada para hacer un azcar alternativo. Junto con la glucosa
forman un disacrido llamado sacarosa o azcar comn.
La sacarosa, o azcar comn, es un disacrido formado por alfa-glucopiranosa y betafructofuranosa.
Su nombre qumico es alfa-D-Glucopiranosil - (12) - beta-D-Fructofuransido,2
mientras que su frmula es C12H22O11.
Es un disacrido que no tiene poder reductor sobre el reactivo de Fehling y el reactivo de
Tollens.
El cristal de sacarosa es transparente, el color blanco, es causado por la mltiple difraccin
de la luz en un grupo de cristales.
El azcar de mesa es el edulcorante ms utilizado para endulzar los alimentos y suele ser
sacarosa. En la naturaleza se encuentra en un 20% del peso en la caa de azcar y en un
15% del peso de la remolacha azucarera, de la que se obtiene el azcar de mesa. La miel
tambin es un fluido que contiene gran cantidad de sacarosa parcialmente hidrolizada.
La lactosa es un disacrido formado por la unin de una molcula de glucosa y otra de
galactosa. Concretamente intervienen una -D-galactopiranosa y una D-glucopiranosa
unidas por los carbonos 1 y 4 respectivamente. Al formarse el enlace entre los dos

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monosacridos se desprende una molcula de agua. Adems, este compuesto posee el


hidroxilo hemiacetlico, por lo que da la reaccin de Benedict, es decir es reductor.
A la lactosa se le llama tambin azcar de la leche, ya que aparece en la leche de las
hembras de los mamferos en una proporcin del 4 al 5 por ciento. La leche de camella, por
ejemplo, es rica en lactosa. En los humanos es necesaria la presencia de la enzima lactasa
para la correcta absorcin de la lactosa. Cuando el organismo no es capaz de asimilar
correctamente la lactosa aparecen diversas molestias cuyo origen se denomina intolerancia
a la lactosa.
Cristaliza con una molcula de agua de hidratacin, con lo que su frmula es:
C12H22O11H2O, luego se la puede tambin llamar lactosa monohidrato. La masa molar de la
lactosa monohidrato es 360,32 g/mol. La masa molar de la lactosa anhidra es 342,30 g/mol.
Pruebas para la identificacin de azcares.
A. El reactivo de Fehling, es una solucin descubierta por el qumico alemn
Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de
azcares reductores.
El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

Sulfato cprico cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

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Sal de Seignette (tartrato mixto de potasio y sodio), 173 g; solucin de hidrxido de


sodio al 40%, 3 g; agua, hasta 500 ml.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del
hidrxido de cobre (II).
El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de
un aldehdo. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de
cobre(I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es
que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad.
Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar
reductor.
Esta reaccin se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no
reductores como la fructosa (que contiene un grupo cetona) puede enolizarse a la forma
aldehdo dando lugar a un falso positivo.

RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
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DESCRIPCION
Cuchillos
Vaso de precipitacin de 250 mL
Probeta de 100 mL
Papel filtro
Embudo de vidrio / plastico
Papel indicador de pH

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
3
1
3
3
1

REACTIVOS
DESCRIPCION
Reactivo de Fehling A
Reactivo de Fehling B
Carbn Activado
Cal
Acido Clorhdrico al 10%
Acetona

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
10
10
10 g
10 g
10
10 mL

EQUIPOS
DESCRIPCION
Balanza
Plancha de calentamiento

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1

PROCEDIMIENTO
EXTRACCIN DE FRUCTOSA A PARTIR DE FRUTAS:
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1. Cortar en pequeos trozos la fruta y pesar.


2. Extraer el azcar con agua caliente durante una hora, con ayuda de
agitacin.
3. Filtrar y desechar el slido.
4. Decolorar con carbn activado.
5. Evaporar hasta sequedad en Bao Mara
6. Hacer la prueba con el Reactivo de Fehling.
EXTRACCIN DE SACAROSA A PARTIR DE JUGO DE CAA:
1. Pesar una muestra de jugo de caa.
2. Aadir agua de cal hasta pH 7.6 -7.8
3. Filtrar y desechar el slido.
4. Evaporar el filtrado en Bao Mara, con agitacin.
5. Hacer la prueba de Fehling.
EXTRACCIN DE LACTOSA A PARTIR DE LA LECHE.

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1. Pesar 100 mL de leche desnatada.


2. Aadir 100 mL de agua destilada.
3. Aadir gota a gota HCl al 10% hasta obtener la precipitacin de la leche.
4. Filtrar y desechar el slido.
5. Concentrar a llama directa o sobe una plancha de calentamiento hasta precipitacin
6. Filtrar y desechar el slido.
7. Concentrar a Bao Mara hasta consistencia de jarabe.
8. Precipitar con acetona.
9. Decantar
10. Hacer la prueba de Fehling.
REGISTRO DE RESULTADOS
Se anexa formato de registro de la prctica correspondiente que debe ser llenado de
forma individual.
PRACTICA DE LABORATORIO DE FITOQUMICA Y FARMACOGNOSIA
PRACTICA No. 3

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EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE AZCARES


FECHA:__________________________________

CURSO:__________________________

NOMBRE:____________________________________________________________________

INFORMACIN EXPERIMENTAL A REGISTRARSE:


EXTRACCIN DE FRUCTOSA:
FRUTA UTILIZADA:
COLORACIN LUEGO DE LA PRUEBA DE FEHLING: ______________
EXTRACCIN DE SACAROSA:
COLORACIN LUEGO DE LA PRUEBA DE FEHLING: ______________
EXTRACCIN DE LACTOSA:
COLORACIN LUEGO DE LA PRUEBA DE FEHLING: ______________
NOMBRE DEL ESTUDIANTE: ______________________________________
FIRMA DEL DOCENTE: ____________________________

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
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Revisado por:
Director/a de Carrera

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1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad


de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002.
2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,
Buenos Aires Argentina. 1979.
3. Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL
ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.

PRACTICA N 4
TEMA: IDENTIFICACIN Y RECONOCIMIENTO DE ALMIDONES
OBJETIVO GENERAL: Identificacin, reconocimiento y cuantificacin de almidones.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Extraccin de Almidones y Cuantificacin.

Aplicacin de pruebas de identificacin conocidas para la identificacin de los


almidones.

Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
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MARCO TERICO
El almidn es un polisacrido, de reserva energtica predominante en las plantas,
constituido por la unin de grandes cantidades de monmeros de glucosa.
El almidn se encuentra en los amiloplastos de las clulas vegetales, sobre todo en las
semillas, las races y los tallos, incluidos los tubrculos.
Qumicamente es una mezcla de dos polisacridos muy similares, la amilosa y la
amilopectina; contienen regiones cristalinas y no cristalinas en capas alternadas. Puesto que
la cristalinidad es producida por el ordenamiento de las cadenas de amilopectina, los
grnulos de almidn creo tienen parecido grado de cristalinidad que los almidones
normales. La disposicin radial y ordenada de las molculas de almidn en un grnulo
resulta evidente al observar la cruz de polarizacin (cruz blanca sobre un fondo negro) en
un microscopio de polarizacin cuando se colocan los polarizadores a 90 entre s. El
centro de la cruz corresponde con el hilum, el centro de crecimiento de grnulo.
El almidn que tiene origen en los leucoplastos se desdobla en hidratos de carbono solubles
en agua, y si stos son consumidos inmediatamente por la planta, son transportados a los
llamados depsitos de reserva: tubrculos, races, granos, etc.
Cuando la produccin de hidratos de carbono es abundante y si no es consumida
inmediatamente , y si adems las vas que conducen a los depsitos de reserva son
insuficientes, pequeos grnulos de almidn se depositan transitoriamente cerca de los
puntos de origen.
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La humedad se determina sobre base seca para que los valores del contenido del almidn
sean reproducibles.

RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Pipeta de 5 mL
Tubo de ensayo de 15 x 1,5 cm
Pipetas pasteur
Peritas para pipetas pasteur
Vaso de Precipitacin 250 cc
Cernidor ( debe traer cada estudiante)
Caja Petri
Desecador

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
5
5
1
1
2
2

REACTIVOS
DESCRIPCION
Acido Clorhdrico Concentrado
Reactivo de Fehling A y B
Solucin de Yodo

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
2 cc
2 cc
1 cc

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EQUIPOS
DESCRIPCION
Plancha de calentamiento
Estufa a 105 C
Balanza Analtica

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
2

PROCEDIMIENTO

La extraccin del almidn se basa en la insolubilidad de ste en agua, para lo que


previamente hay que desmenuzar la muestra, lavarla

con abundante agua, y

permitir la sedimentacin de los granos de almidn.

Pesar la muestra de materia hmeda y secarla hasta peso constante.

OBSERVACIN MICROSCPICA:

Mezclar en un portaobjetos una gota de solucin de almidn con una gota de agua.

Observar al microscopio.

Mezclar una gota de solucin de almidn con una gota de solucin de yodo y
observar.

HIDROLIZACION DEL ALMIDON

PARTE A

Tomar 5 cc de solucin de almidn.

Agregar gotas de cido Clorhdrico concentrado.

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Hervir durante un minuto.

Tomar gotas a los 2, 4, 6, y 8 minutos.

A cada muestra agregar 2 cc de Solucin de Fehling A y Fehling B

Hervir 5 minutos a Bao Mara.

Observar la coloracin.

PARTE B

Tomar 5 cc de solucin de almidn.

Agregar gotas de cido Clorhdrico concentrado.

Hervir durante un minuto.

Tomar gotas a los 2, 4, 6, y 8 minutos.

A cada muestra agregar dos gotas de solucin de yodo.

Observar la coloracin.

DETERMINACIN DE HUMEDAD:
De la muestra de almidn obtenida, se pesan 2 gramos de muestra (+/- 0.5 mg) y se colocan
en una caja petri, previamente tarada y desecada a 105C hasta peso constante,
seguidamente se deseca el almidn a 105C por dos horas. Se coloca la placa Petri con tapa
en el desecador se deja enfriar y se pesa nuevamente. Repetir el proceso dejando una hora
ms en la estufa. Volver a pesar. Reportar porcentaje de humedad.
REGISTRO DE RESULTADOS

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INFORME PRCTICA No. 4


NOMBRE: ____________________________________
CURSO: ______________________________________
EXTRACCION DEL ALMIDN:
NOMBRE COMN DE LA MUESTRA: _________________________________
PROCEDENCIA: _________________________________
CALCULOS DEL RENDIMIENTO DE LA EXTRACCIN DEL ALMIDN:
PESO DE LA MUESTRA HUMEDA: ___________________________
PESO DE ALMIDON OBTENIDO Y SECADO: ____________________
REPORTE DEL % DE HUMEDAD:
PESO DE LA MUESTRA HUMEDA: _________________________________
PESO DE LA MUESTRA SECA: _____________________________________

OBSERVACION MICROSCPICA:

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Grnulos de almidn observados: Grandes ____ Medianos _____ Pequeos _____


COLORACIN OBTENIDA DEL PRODUCTO AL MEZCLARLO CON LA SOLUCIN DE
YODO
_________________________________
COLORACIONES OBSERVADAS AL VERIFICAR LA HIDRLISIS:
ALICUOTA CON REACTIVO DE FEHLING

ALICUOTA CON SOLUCIN DE YODO

TIEMPO

COLOR

TIEMPO

COLOR

2 minutos

_________

2 minutos

________

4 minutos

_________

4 minutos

________

8 minutos

_________

8 minutos

________

10 minutos

_________

10 minutos

________

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002.
2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,
Buenos Aires Argentina. 1979.
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3. Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL


ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.

PRACTICA N 5
TEMA: ACEITES ESENCIALES
OBJETIVO GENERAL: EXTRACCIN, CUANTIFICACIN E IDENTIFICACIN
DE ACEITES ESENCIALES
OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Obtencin de Aceites Esenciales por la tcnica de Arrastre de Vapor

Obtencin de Aceites Esenciales por la tcnica de Enflorado

Control de Calidad de Aceites esenciales

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MARCO TERICO
Los aceites esenciales son mezclas de varias sustancias qumicas biosintetizadas por las
plantas, que dan el aroma caracterstico a algunas flores, rboles, frutos, hierbas, especias,
semillas y a ciertos extractos de origen animal (almizcle, civeta, mbar gris). Se trata de
productos qumicos intensamente aromticos, no grasos (por lo que no se enrancian),
voltiles por naturaleza (se evaporan rpidamente) y livianos (poco densos). Son insolubles
en agua, levemente solubles en vinagre y solubles en alcohol, grasas, ceras y aceites
vegetales. Se oxidan por exposicin al aire. Se han extrado ms de 150 tipos, cada uno con
su aroma propio y virtudes curativas nicas. Proceden de plantas tan comunes como el
perejil y tan exquisitas como el jazmn. Para que den lo mejor de s, deben proceder de
ingredientes naturales brutos y quedar lo ms puro posible.
El trmino esencias o aceites esenciales se aplica a las sustancias sintticas similares
preparadas a partir del alquitrn de hulla y a las sustancias semisintticas preparadas a partir
de los aceites naturales esenciales. El trmino aceites esenciales puros se utiliza para
resaltar la diferencia entre los aceites naturales y los sintticos.1
Los aceites esenciales ligeramente solubles en el agua se los puede extraer haciendo pasar
vapor a travs de la materia prima, este mtodo se conoce como destilacin por arrastre de
vapor.
Por presin en fro de los ptalos de las flores, entre dos capas de manteca desodorizada.

1 http://es.wikipedia.org/wiki/Aceite_esencial
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RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Placas de vidrio de 12 x 18 cm
Baln o Matraz de destilacin de 1000 cc
Klevenger
Refrigerante
Embudo de Separacin 500 cc
Frascos pesa sustancias
Frasco para saponificacin
Refrigerante
Molino manual
Frasco ambar de 100 cc traido por los estudiantes

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
2
1
1
1
1
1
1
1
3
1

REACTIVOS
DESCRIPCION
Agua destilada
Cloruro de Sodio 500 g

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
4L
1

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DESCRIPCION
Sulfato de Sodio Anhidro
ter Etlico
Alcohol etlico 90%
Solucin de Fenolftalena
Solucin alcohlica de KOH 0,1 mol/L
Etanol al 95%
Solucin acuosa de Na(OH) 0.1 M
Aceite esencial de: menta, canela o clavo de olor
trado por los estudiantes frasco de 5 10 cc
Ptalos de rosa de 5 flores de rosa roja, frescos

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
20 g
20 cc
25 cc
1 cc
100
100
1
1

EQUIPOS
DESCRIPCION
Balanza Analtica
Plancha de calentamiento
Bao Mara
Ncleos de Ebullicin
Manteca vegetal desodorizada
Refractmetro
Picnmetro de un cc
Solubilidad

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
2
1
1
20
200 g
1
1

PROCEDIMIENTO:
DESTILACIN
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4. Se colocan 100 gramos de droga vegetal fresca en un baln de


1000 cc.
5. Adicionar 400 cc de solucin 1% p/v de Cloruro de sodio, y
ncleos de ebullicin. Armar el aparato de destilacin colocando
primer lugar un embudo de decantacin y luego un refrigerante.
6. Armar el equipo de destilacin y calentar hasta ebullicin de la
solucin de Na Cl.
7. Destilar controlando la temperatura para que la frecuencia de goteo
sea de 2-3 cc por minuto.
8. Mantener la destilacin durante 2h00.
9. Una vez que finalizan las dos horas de destilacin, se apaga la
fuente de calor y se adiciona a travs del refrigerante unos 2 cc de
ter etlico y se extrae la fase etrea sobrenadante.
10. En la solucin salina remanente se hace una nueva extraccin con
10 mL de ter etlico.
11. Se recogen las fracciones etreas y se desechan las acuosas.
12. Dejar evaporar el ter y si hay trazas de agua en la fraccin de
aceite adicionar una pequea cantidad de sulfato de sodio.
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13. Extraer el aceite con una aguja de insulina y colocar en un


pesasubstancias , tarado previamente, y calcular el rendimiento de
la obtencin de aceite en base hmeda.
TECNICA DE ENFLORADO:
1. Colocar en cada una de las placas de vidrio una capa de manteca
de 0,5 cm de espesor.
2. Colocar una capa de ptalos de rosa.
3. Colocar cada una de las placas de vidrio frente a frente del lado
que contienen los ptoalos y dejar reposar durante 24 horas.
4. A las 24h00 fundir la fase grasa a una temperatura no mayor a 40
grados y filtrar.
5. Recolectar en un frasco.
6. Dejar enfirar
7. Identificar el aroma y reportar los resultados de la extraccin.
CONTROL DE CALIDAD DE ACEITES ESENCIALES:
-

Descripcin del Aceite esencial.

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Determinacin de la densidad relativa del aceite esencial.

Solubilidad: en alcohol al 70%; ter etlico y acido actico.2

Determinacin del ndice de acidez3:


-

Pesar de 2 a 5 g. de aceite esencial.

Adicionar alcohol en un volumen igual en mg a cinco veces el


peso de la muestra.

Adicionar 5 gotas de fenolftalena.

Agitar hasta disolucin total.

Titular con solucin alcohlica de K(OH) 0.1 mol/L

Determinacin del ndice de steres: (Prctica Demostrativa)


-

Pesar de 2 a 5 g. de aceite esencial.

Adicionar alcohol en un volumen igual en mg a cinco veces el


peso de la muestra.

2 Farmacopea Mexicana
3 Migdalia Miranda
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Adicionar 5 gotas de fenolftalena.

Neutralizar los cidos con solucin de Fenolftalena 0.1 M.

Aadir 10 mL de K(OH) 0.5 M y dejar en reflujo por 1 hora en


bao mara.

Se deja enfriar la solucin y se aade al refrigerante 10 cc de


alcohol etlico neutro.

Se retira el condensador

Se adiciona 5 gotas de solucin indicadora de fenolftalena

Se valora el exceso de lcali con solucin de HCl 0.5 M. Se debe


trabajar con un blanco.

Hacer el clculo del ndice de steres conforme la frmula de


Miranda M, reportada a continuacin:
IE: (56.1 x (V V) x N /g

56,1: Miliequivalentes de KOH expresados en mg.


V: cc de KOH 0.1 M consumidos
V: cc de KOH consumidos por el blanco
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N: Concentracin exacta del NaOH 0.1 M


g: Gramos de aceite empleados para el ensayo.

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002.
2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,
Buenos Aires Argentina. 1979.
3. Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL
ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.

PRACTICA N 6
TEMA: SAPONINAS
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OBJETIVO GENERAL:

Extraccin e identificacin de saponinas en plantas ecuatorianas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Extraccin de saponinas de tuberculos, hojas, frutos.

Identificacin de la saponina obtenida mediante mtodo cromatogrfico y por su


capacidad hemoltica

MARCO TERICO
Saponinas (del latn sapo, "jabn") son glucsidos esteroidales, llamadas as por sus
propiedades semejantes a las del jabn: cada molcula est constituida por un elemento
soluble en lpidos (el esteroide o el triterpenoide) y un elemento soluble en agua (el azcar),
y forman una espuma cuando se las agita en agua. Las saponinas, especialmente las
esteroidales, tienen mucho inters en la industria farmacutica, debido a que los ncleos
esteroidales sirven como fuente de materia prima para la sntesis de hormonas.
Las saponinas esteroidales generalmente estn presentes en las monocotiledneas,
particularmente en las familias Amarilidaceae, Agavaceae, Liliaceae y Dioscoriaciae.
Tambin estn presentes en las dicotiledneas como las Leguminosas y en especies de los
gneros Digitalis de la familia Scropgulariaceae y Strophantus de las Apocinaceas. Estos
ltimos contienen glicsidos cardiotnicos y saponinas esteroidales.
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Los glicsidos se forman a partir de un hidroxilo en la posicin 3 y se denominan


saponinas. El aglicn se nombra sapogenina.
Las saponinas son txicas, y se cree que su toxicidad proviene de su habilidad para formar
complejos con esteroles, por lo que podran interferir en la asimilacin de estos por el
sistema digestivo, o romper las membranas de las clulas tras ser absorbidas hacia la
corriente sangunea. Existe una gran variedad de plantas que contienen Saponinas en
distintas concentraciones, como por ejemplo la yuca, el ginseng, la quinua o el quillay,
entre otros.
Por hidrlisis de las saponinas se obtienen carbohidratos y una aglicona, llamada
genricamente sapogenina, la cual puede tener un esqueleto esteroidal de tipo colano como
la esmilagenina (a); de terpeno tipo -amirina como la chichipegenina (b); tipo -amiarina
como el cido asitico (c); tipo lupeol como la estallogenina (d) o tetraciclico como el
panaxadiol (e), con la excepcin de la cripotogenina (f). Las saponinas forman micelas y
cambian la tensin superficial de los lquidos. Su tamao molecular se encuentra entre los
600 Da y los 2700 Da, pero cuando forman micelas pueden llegar a tener un peso molecular
entre 70 y 150 KDa. Se ven afectas al pH de la solucin, ya que a altos pH sufren hidrlisis,
formndose saponinas de menor peso molecular.
Como fundamento terico se considera para esta prctica:

La solubilidad de las saponinas en agua y su propiedad de generar espuma, son


factores que pueden utilizarse para su separacin.

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Las saponinas precipitan con soluciones de hidrxido de Bario.

Las saponinas emulsionan inestablemente los aceites.

RECURSOS UTILIZADOS

MATERIALES
DESCRIPCION

Baln de 500 mL
Refrigerante
Equipo Soxhlet
Embudo
Cmara Cromatogrfica
Tubos de ensayo

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
1

REACTIVOS
DESCRIPCION

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO

cido Clorhdrico 4 M
n-Hexano
Cloroformo
Hidrxido de Bario
Placas cromatogrficas
cido sulfrico al 50%
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DESCRIPCION

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO

Solucin Reactiva de Salkowski


Solucin Reactiva de Rosenheim
cido Sulfrico
Anhdrido Actico

EQUIPOS
DESCRIPCION

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO

Plancha de calentamiento
Balanza tcnica

PROCEDIMIENTO:

A) EXTRACCION DE SAPONINAS E IDENTIFICACIN


TUBERCULOS

Lavar la materia prima, pesar y licuar con agua destilada, recoger la espuma
(espumacin), evaporar, secar y pesar.
HOJAS:

Lavar la materia prima, reducir a pequeos pedazos alargados, poner en agua


destilada y dejar por 7 das, evaporar a bao mara hasta concentracin adecuada,
secar y pesar.

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FRUTOS:

Lavar la materia prima, pesar y licuar con agua destilada, recoger la espuma
(espumacin), evaporar, secar y pesar.
REACCIONES DE IDENTIFICACIN:

En todos los casos la identificacin se realizar con la prueba de hidrxido de Bario.

Tambin se realizar la prueba de la formacin de espuma persistente.

Agitar fuertemente gotas de aceite mineral o vegetal con una solucin de la


saponina obtenida y observar.

B) EXTRACCION Y CARACTERIZACIN DE SAPOGENINAS ESTEROIDALES


EN DROGAS VEGETALES.

En el baln de 500 mL se coloca la droga y se adiciona 250 mL de HCl 4 M.

Mantener en reflujo por 1 hora.

Filtrar en caliente, lavando el residuo varias veces con agua fra.

El lquido cido del filtrado se elimina y el residuo se seca.

Colocar el residuo en un dedal de celulosa para Soxhlet.

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Realizar la extraccin con n-hexano durante 45 minutos (se deben realizar al menos
15 descargas del equipo)

El solvente se conentra y el residuo se pesa.

Se calcula el porcentaje de rendimiento.

El extracto as obtenido es el de saponinas.

Tomar una pequea porcin y disolver en cloroformo.

Preparar una placa cromatogrfica de silicagel G, utilizando como disolvente la


mezcla Cloroformo Acetona (7:3). Para observar las sapogeninas presentes,
revelando con Acido Sulfrico al 50% y calor.

En el resto del extracto de saponinas realizar las pruebas de:

Liebermann-Burchard, Rosenheim, Salkowski

REGISTRO DE RESULTADOS:
PORCENTAJE DE RENDIMIENTO.
RESULTADOS DE LA CARACTERIZACIN
DATOS DE REFERENCIA:
SAPOGENINA
Yucagenina
Diosgenina

Rf
0,4
0,9

COLOR A REVELAR
Morado azul
Rosado

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-Sitosterol
Hecogenina
Tigogenina

0,85
0,7
0,85

Morado gris
Amarillo
Caf grisaceo

MUESTRA: ________________________________
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
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PRACTICA N 7
TEMA: ANTRAQUINONAS
OBJETIVO

GENERAL:

Identificacin

de

antraquinonas

libres

glicsidos

antraquinnicos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
2. Identificacin de antraquinonas en plantas oficiales inscritas en las farmacopeas.
3. Identificacin de antraquinonas en medicamentos cuyo principio activo contiene
derivados antraquinnicos o antraquinonas libres
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MARCO TERICO
Los glicsidos son compuestos que producen por hidrlisis uno o ms azcares.
Desde el punto de vista qumico los glicsidos son acetales en los cuales el hidroxilo del
azcar se condensa con un grupo hidroxilo del componente no hidroxicarbonado, mientras
que el hidroxilo secundario se concentra dentro de la misma molcula del azcar para
formar un anillo oxidado.
El componente no hidrocarbonado se llama aglicona, en tanto que el componente
hidrocarbonado se llama aglicona.
Desde el punto de vista biolgico los glicsidos desempean un papel preponderante en la
vida del vegetal porque intervienen en sus funciones reguladoras, protectoras y defensivas.
Algunas drogas cardioactivas de mayor valor son glicsidos cardiotnicos, ejemplo
glicsidos de la digital, estrofanto, escila, etc.
Drogas laxantes como el sen, el aloe, el ruibarbo, la cscara sagrada y la frgula contienen
emodina y otros glicsidos antraquinnicos.
Con excepcin de la crisarobina (demasiado irritante) y de la cocinilla (que es un tinte)
stas drogas se emplean como agentes catrticos. Por hidrlisis estos glicsidos dan
agliconas que son di, tri, o tetrahidroxiantraquinonas o modificaciones de estos compuestos.

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En los materiales vegetales tambin existen glicsidos de antranoles y antronas derivados


reducidos de antraquinonas, que contribuyen mucho a la accin teraputica de estos
productos naturales.4
Fundamento de la prctica:
Las antraquinonas libres con soluciones amoniacales y con soluciones de hidrxido de solio
dan coloraciones caractersticas.
Los derivados de antraquinonas, previa una hidrlisis oxidativa, producen coloraciones
caractersticas.

RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Tubos de ensayo de 15cm x 1,5 cm
Tubos de ensayo de 10 cm x 1 cm
Gradilla para tubos de ensayo
Cuchillo para picar la planta
Esptula
Vaso de precipitacin de 100 cc
Agua destilada
Pipeta de 5 cc

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
5
10
1
1
1
1
1
1

4 Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,


Buenos Aires Argentina. 1979.
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

Aprobado por:
Consejo de Carrera de
Biotecnologa

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DESCRIPCION
Ruibarbo
Hojas de sen
Ciruelax

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
2
10
1
-

REACTIVOS
DESCRIPCION
Cloroformo (mililitros)
Hidrxido de Amonio al 10%
Hidrxido de sodio al 10%
cido clorhdrico al 10%
Cloruro frrico al 5%

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
10
2
2
2
5

EQUIPOS
DESCRIPCION
Plancha de calentamiento
Temporizador

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1

PROCEDIMIENTO
PARTE A :

Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

Aprobado por:
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1. En un tubo de ensayo de 15 cm de lago colocar una porcin del material vegetal


fresco. Colocar 5 mL de cloroformo y mediante agitacin extraer los glicsidos
cardiotnicos.
2. En un tubo de ensayo de 15 cm de lago colocar una porcin del fitofrmaco.
Colocar 5 mL de cloroformo y mediante agitacin extraer los glicsidos
cardiotnicos.
3. A una alcuota de 1cc de cada uno de los extractos clorofrmicos aadir una
solucin de hidrxido de amonio y observar la coloracin producida en la capa
amoniacal.
4. A una segunda alcuota del extracto as obtenido aadir una solucin de hidrxido
de sodio y observar la coloracin producida en la capa alcalino-acuosa.
PARTE B:
1. Colocar cada una de las muestras en un tubo de ensayo de 15 cm de largo.
2. Adicionar una solucin de cido Clorhdrico (HCl) al 10% en una proporcin de 5
veces en relacin al volumen de la muestra.
3. Adicionar 1,5 cc de Cloruro frrico al 5%
4. Colocar en Bao Mara durante 20 minutos. Medir el tiempo con un temporizador.
5. Separar la fase lquida y colocarla en otro tubo de ensayo.
6. Realizar la extraccin del aglicn de la fase lquida con 5 cc de cloroformo
7. Separar la fase clorofrmica de la fase acuosa.
8. Aadir 1 cc de solucin de amonaco a la fase clorofrmica
9. Observar el color que toma la solucin de amonaco.
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

Aprobado por:
Consejo de Carrera de
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REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS


INFORMACIN EXPERIMIENTAL
Muestra # 1: ____________________________
Muestra # 2: ____________________________
COLORACIONES OBSERVADAS EN EL LITERAL A
Nmero de Muestra

Coloracin son solucin

Coloracin con solucin de

amoniacal

hidrxido de sodio

1
2

COLORACIONES OBSERVADAS EN EL LITERAL B


Muestra

Coloracin observada

1
2

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

Aprobado por:
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1. Varro E. Tyler, FARMACOGNOSIA, segunda edicin., Editorial El


Ateneo, Buenos Aires Argentina, 1979.
2. Teresa Gordn Aldas, FARMACOGNOSIA EXPERIMENTAL, primera
Edicin, Editorial Universitaria de la Universidad Central del Ecuador.
Quito Ecuador. 1986

PRACTICA N 8
TEMA: EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE FLAVONOIDES
OBJETIVO GENERAL: Extraccin y caracterizacin de flavonoides vegetales.
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
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OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Obtener un extracto de flavonoides a partir de cortezas de ctricos y realizar la
caracterizacin del mismo.
MARCO TERICO
Flavonoide (del latn flavus, "amarillo") es el trmino genrico con que se identifica a una
serie de metabolitos secundarios de las plantas. Son sintetizados a partir de una molcula de
fenilalanina y 3 de malonil-CoA, a travs de lo que se conoce como "va biosinttica de los
flavonoides", cuyo producto, la estructura base, se cicla gracias a una enzima isomerasa.
Los glicsidos flavondicos y sus agliconas se denominan en general Flavonoides.
Existe gran cantidad de flavonoides en la naturaleza, como se mencion anteriormente
estn caracterizados por la presencia de pigmentos amarillos, y se hallan ampliamente
distribuidos en los vegetales superiores.
Entre los ms conocidos se puede mencionar: la rutina, la quercetina, y los bioflavonides
ctricos.
Como menciona Miranda en su manual de prcticas: responden al ncleo de las fenil
cromonas y desde el punto de vista farmacolgico su importancia es la de contrarrestar la
fragilidad capilar de los vasos sanguneos, favoreciendo los procesos circulatorios.5

5 Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad de


Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

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Es conocido tambin el uso de los citroflavonoides y compuestos afines en el tratamiento


del resfro comn.6
RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Cscara de ctricos (naranja, toronja, lima, etc)
Erlenmeyer de 500 cc
Embudo
Papel filtro
Vaso de precipitacin de 50 cc
Tubos de ensayo de 10 cm x 1 cm
Nebulizador de vidrio

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
50g
1
1
1
2
3
1

REACTIVOS
DESCRIPCION
Etanol 96 cc
Placa de cromatografa GF con factor de
fluorescencia
Fase mvil Acetona Etanol (2:1)
cido sulfrico al 50%
Cloruro Frrico al 5%
cido Clorhdrico concentrado

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
100
1
50cc
200 cc
1 cc
1 cc

6 Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo, Buenos Aires
Argentina. 1979.
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Mara Elena Maldonado R.

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DESCRIPCION
Cinta de Magnesio
Soluciones de Fehling A y B
cido Clorhdrico al 10%

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
5 mm
3 cc
10 cc

EQUIPOS
DESCRIPCION
Balanza
Plancha de calentamiento
Camara cromatogrfica

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
2
1
1

PROCEDIMIENTO
1. Pesar 50 g de corteza del ctrico que corresponde a su grupo de trabajo en un
erlenmeyer.
2. Cubrir con etanol.
3. Calentar por 30 minutos.
4. Filtrar el extracto en caliente.
5. Con el filtrado se realizan las siguientes pruebas:

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Mara Elena Maldonado R.

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a. Una alcuota se concentra en bao de agua y se realiza una TLC en placa


cromatogrfica. Correr en la fase mvil Acetona Alcohol (2:1) y
revelar con Acido Sulfrico al 50% y calor.

Registrar resultado

fotogrficamente.
b. Otra alcuota se trata con solucin reactiva de cloruro frrico. Observar
y reportar el resultado.
c. Otra alcuota se trata con reactivo de Fehling (A+B) se mantiene en un
bao de agua hirviente 5 minutos. Observar y reportar resultado.
d. Otra alcuota se trata con 1 mL de Acido Clorhidrico concentrado y un
pedazo de Mg metlico. Observar y reportar resultado.

REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS


ENSAYO
CROMATOGRAFA
CLORURO FERRICO
PRUEBA DE FEHLING
HCl y TIRA DE MAGNESIO

RESULTADO
Rf:

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

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2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,


Buenos Aires Argentina. 1979.
PRACTICA N 9
TEMA: TANINOS
OBJETIVO GENERAL: EXTRACCION E IDENTIFICACIN DE TANINOS.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Extraccin de taninos hidrolizables y condensados en semillas, races, hojas y
cscara de plantas ecuatorianas.
2. Identificacin de taninos mediante tcnicas cualitativas
3. Cuantificacin de taninos mediante tcnica cuantitativa.
MARCO TERICO
Los taninos comprenden un gran grupo de sustancias complejas que estn ampliamente
distribuidas en el reino vegetal, casi en todas las familias vegetales existen especies que los
contienen.
Cuando se presentan en cantidades considerables, los taninos suelen localizarse en
determinadas partes de la planta como: hojas, frutos, cortezas o tallo.
Los taninos son compuestos qumicos no cristalizables que forman con el agua soluciones
coloidales de reaccin cida y de sabor muy ocre. Producen la precipitacin de soluciones
de gelatina y de alcaloides, dan compuestos solubles de color azul oscuro o negro grisceo

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con las sales frricas, producen un color rojo intenso con ferrocianuro de potasio y
amonaco y precipitan las sales de cobre, plomo y estao.
La facilidad que tienen los taninos de precipitar las protenas se utiliza en el proceso de
curtiembre, por el que la piel de los animales puede ser utilizada como cuero. Adems de
actuar sobre la flexibilidad y resistencia del cuero, lo preserva debido a sus propiedades
antispticas.
Los taninos son sustancias qumicas complejas, con frecuencia se presentan como mezclas
de poli fenoles, muy difciles de separar debido a que no cristalizan.7
Los grupos fenlicos de los taninos son los responsables de sus propiedades astringentes y
antispticas, y de las diversas coloraciones que dan con las sales de hierro.
Los taninos hidrolizables dan coloracin azul con cloruro frrico, adems no precipitan con
agua de bromo.
Los taninos condensados dan coloraciones verdes con el cloruro frrico; y si precipitan con
agua de bromo.
RECURSOS UTILIZADOS

MATERIALES

7 Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo, Buenos Aires Argentina.
1979.
Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

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DESCRIPCION
Muestra vegetal: Guarango; trae cada grupo 100g
Erlenmeyer 500 mL
Papel filtro discos 14 cm dimetro
Baln aforado de 50 cc con tapa
Pipeta de 1 cc
Pipeta de 5 cc
Celda de cuarzo de expectrofotmetro UV VIS

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
2
5
2
3
2

REACTIVOS
DESCRIPCION
Agua destilada litros
Tungstato de Sodio
Carbonato de sodio
Acido tnico
Etanol cc
cido fosfomolbdico

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
4
10 g
10 g
50 mg
500
200 mg

EQUIPOS
DESCRIPCION
Agitador orbital
Espectrofotmetro UV-VIS
Balanza Analtica

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1
2

Elaborado por:
Mara Elena Maldonado R.

Revisado por:
Director/a de Carrera

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PROCEDIMIENTO
Parte 1 y 2: Extraccin de taninos hidrolizables y condensados en semillas, races, hojas y
cscara de plantas ecuatorianas e identificacin de los taninos con tcnicas cualitativas.
1. Realizar un extracto acuoso de la planta asignada al grupo.
2. A 3 ml del extracto acuoso de taninos hidrolisables de cada muestra aadir solucin
de cloruro frrico y observar la coloracin.
3. A 3 ml del extracto acuso de taninos condensados de cada muestra aadir solucin
de cloruro frrico y observar la coloracin.
Parte 3: MTODO DEL TUNGSTO-MOLIBDICO-FOSFRICO (Dra. Migdalia
Miranda)
10,0 g de la droga en polvo se lleva a un frasco cnico de 250 mL con 500 mL
de alcohol al 50 %. Se mantiene en agitacin durante 6 h en zaranda, se deja en
reposo 8 h y se agita nuevamente 30 min. y se filtra. Se transfieren 3 mL del
filtrado a un matraz aforado de 50 mL y se diluye con agua destilada hasta
enrase (Sm).
Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno (B, P, M 1 y M2) y
se procede de la siguiente forma:

Reactivo
Soln. muestra. (SM)
Soln referencia
Agua destilada
Reactivo para taninos.

M1 y M2

5,0 mL
2,0 mL

3,0 mL
2,0 mL
2,0 mL

1,0 mL
4,0 mL
2,0 mL

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Se agita se deja en reposo 5 min.


Soln. Sodio carbonato
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL
Se completa con agua destilada hasta enrase y se mezcla bien
Se leen la absorbancia de la solucin de referencia y las muestras a 700 nm en un
trmino no mayor de 2 min.
Los clculos se determinan segn:
X = ________Am x Pst x 50________
Ast x PM x Factor de Humedad
donde:
X = % de taninos en la droga.
Am = absorbancia de la muestra.
Ap = absorbancia de la soln de referencia.
P = masa de la sustancia de referencia (g).
P = % de humedad de la droga.
PM = masa de la droga (g)
Reactivo para tanino.
Se disuelven 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0,2 g de cido fosfomolbdico
y 5 mL de cido fosfrico al 85 % en 75 mL de agua destilada. Se refluja la
solucin por 2 h y despus se completa a 100 mL con agua.
Solucin de carbonato de sodio.
Se disuelven 10 g de carbonato de sodio anhidro en 50 mL de agua destilada.
Solucin de referencia.
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Se pesan con exactitud 25 mg de cido tnico (previamente secado a 100 C


durante 2 h) y se disuelven en agua hasta completar 100 mL. Se pipetean 20
mL de la solucin y se diluye a 100 mL con agua destilada (Solucin reactiva).
DETERMINACIN DE HUMEDAD:
De la muestra de laboratorio, con el grado de trituracin que determine la
norma
especfica, se pesan 2g con desviacin permisible de 0.5 mg y se
transfieren a una
o
cpsula de porcelana previamente tarada y desecada a 105 C hasta masa constante;
seguidamente se deseca a 105 oC durante 3h. La cpsula se coloca en la desecadora donde
se deja enfriar a temperatura ambiente y se pesa, colocndose nuevamente en la estufa
durante 1h, volvindose a pesar, hasta obtener una masa constante.
Expresin de los resultados.
Hg =

M2 - M1
M2 - M

x 100

Hg = prdida en peso por desecacin (%).


M2 = masa de la cpsula con la muestra de ensayos (g)
M1 = masa de la cpsula con la muestra de ensayo desecada (g)
M = masa de la cpsula vaca.
100 = factor matemtico.

Los resultados se aproximan a las dcimas.

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REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS


RESULTADOS FRENTE A LA ADICION DE CLORURO FRRICO Y GELATINA
MUESTRA

COLOR CON

REACCIN CON

CLORURO

SOLUCIN DE

FRRICO

GELATINA

MUESTRA 1
MUESTRA 2
MUESTRA 3

PORCENTAJE DE TANINOS OBTENIDOS EN LA MUESTRA PARA


CUANTIFICACIN DE TANINOS
% TANINOS: ___________

ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
3. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002
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PRACTICA N 10
TEMA: ALCALOIDES
OBJETIVO GENERAL: VALORACION DE ALCALOIDES TOTALES EN HOJAS DE
COCA
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
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45 OCTUBRE 2014 FEBRERO 2015
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS NATURALES
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1. Extraccin de los alcaloides totales de una planta.


2. Valoracin de los alcaloides totales extraidos mediante una tcnica volumtrica
MARCO TERICO
Se llaman alcaloides (de lcali, carbonatos de alcalinos, y -oide, parecido a, en forma de) a
aquellos metabolitos secundarios de las plantas sintetizados, generalmente, a partir de
aminocidos, que tienen en comn su hidrosolubilidad a pH cido y su solubilidad en
solventes orgnicos a pH alcalino. Los alcaloides verdaderos derivan de un aminocido, son
por lo tanto nitrogenados. Todos los que presentan el grupo funcional amina o imina son
bsicos. La mayora de los alcaloides poseen accin fisiolgica intensa en los animales aun
a bajas dosis con efectos psicoactivos, por lo que son muy usados en medicina para tratar
problemas de la mente y calmar el dolor. Ejemplos conocidos son la cocana, la morfina, la
atropina, la colchicina, la quinina, cafena, la estricnina y la nicotina.8
Los alcaloides son extremadamente difciles de definir debido a que no pertenecen a un
grupo de compuestos homogneos, sea desde el punto de vista qumico, bioqumico o
fisiolgico.
La diversidad estructural y la variedad en la actividad biolgica, de los alcaloides y los
antibiticos, hacen de estos dos grupos, los ms importantes entre las sustancias naturales
de inters teraputico. 9

8 http://es.wikipedia.org/wiki/Alcaloide#Fitoqu.C3.ADmica, ALCALOIDES
9 http://farmacia.udea.edu.co/~ff/alcaloides.pdf, Arango Acosta, Gabriel JaimE,
ALCALOIDES Y COMPUESTOS NITROGENADOS, Universidad de Antioquia,
Colombia2 2008
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La dosificacin de los alcaloides en las plantas, es un problema de gran importancia


farmacutica, debido a que las drogas no contienen generalmente un alcaloide sino mezcla
de ellos, aprovechando, en el segundo caso el comportamiento particular de

algunos de

ellos.
As por ejemplo unos son voltiles (conicina), otros se descomponen (lobelina); otros se
racemizan (hiosciamina), otros se saponifican por los lcalis (cocana),etc. Por estas
razones se procura encontrar para alcaloides el mtodo preciso de dosificacin, lo cual
explica las diversas tcnicas que se conocen ante la imposibilidad de encontrar una sola
lnea general.
En los diferentes mtodos de determinacin cuantitativa de alcaloides en el anlisis de
las drogas, debe tenerse en cuenta tres pasos fundamentales:
a) Extraccin total de los alcaloides.
b) Purificacin del extracto.
c) Dosificacin.
Los mtodos de purificacin de alcaloides ms usuales son los mtodos qumicos, fsicoqumicos y biolgicos.

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Entre los mtodos qumicos, los ms empleados son el gravimtrico, el volumtrico y entre
los fsico-qumicos el colorimtrico.10
La valoracin volumtrica de los alcaloides se basa en los mismos principios que la
volumetra de sustancias qumicas inorgnicas.
Los alcaloides forman compuestos de adicin con los cidos. Consecuentemente, si se
aade un volumen conocido de cido valorado en exceso, se retitula el cido, para calcular
la cantidad del cido que ha reaccionado con la muestra.
El objetivo de esta prctica es la determinacin cualitativa y cuantitativa de alcaloides
totales.
RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
Hojas de coca secas (peso en gramos)
Frasco mbar de 250 cc con tapa rosca resistente a
solventes
Erlenmeyer de 250 cc
Probeta de 100 cc
Embudo de separacin 250 cc
Esptula

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
10
1
1
1
1
1

10 Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad de Farmacia,


Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002
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DESCRIPCION
Bureta
Goteros plsticos

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
1
1

REACTIVOS
DESCRIPCION
Solucin de Carbonato de Sodio cc
Mezcla Eter de Petrleo: Eter Etlico (1:1)cc
Acido sulfrico 2N cc
Hexano cc
Sulfato de sodio Anhidro
Acido sulfrico 0.1 N cc
Indicador rojo de metilo cc

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
5
50
100
100
5g
100
20

EQUIPOS
DESCRIPCION
Rotavapor
Agitador magntico
Balanza granataria

CANTIDAD
POR CURSO
POR GRUPO
3

PROCEDIMIENTO

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Se procede, conforme metodologa descrita en el texto de la Prof. Olga Lock11


1. Pesar 10 gramos de muestra seca y pulverizada de hojas de coca.
2. Humedecer con una solucin saturada de Na2CO3.
3. Degar en reposo durante 24h00 con 50 cc de una mezcla de ter de petrleo y ter
etlico (1:1).
4. Separar el extracto etereo.
5. El extracto etero se extrae con cido sulfrico 2N (1x40cc, 1x30 cc, 1x20 cc).
6. Los extractos cidos

reunidos se alcalinizan con una solucin saturada de

Carbonato de Sodio.
7. Se extraen con hexano ((1x40cc, 1x30 cc, 1x20 cc).
8. Se renen los extractos hexnicos y se secan con Sulfato de Sodio Anhidro.
9. Se concentran a sequedad.
10. La mezcla s{olida de alcaloides se disuelve en 30 mL de H2SO4 0,1N
11. Se agrega el indicador rojo de metilo
12. Titular con Na(OH) 0,1 N.
13. Se titula el exceso de cido, para calcular la cantidad de cido que ha consumido la
muestra.
14. El resultado se expresa como porcentaje de cocana.

REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS


11 Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL
ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.
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% de Cocaina en las hojas de Coca: ____________________


Indicar el clculo correspondiente.
ANEXOS.
BIBLIOGRAFA
1. Miranda Migdalia, FARMACOGNOSIA Y PRODUCTOS NATURALES, Facultad
de Farmacia, Universidad de la Habana. La Habana Cuba, 2002.
2. Varro Tyler et al, FARMACOGNOSIA, Segunda Edicin, Editorial el Ateneo,
Buenos Aires Argentina. 1979.
3. Lock de Ugaz, Olga; INVESTIGACIN FITOQUIMICA, METODOS EN EL
ESTUDIO DE PRODUCTOS NATURALES, Segunda Edicin, Editorial Pontificia
Universidad Catlica del Per, Lima Per, 1994.

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