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1. Introduccin
La Enfermedad de Huntington es una patologa neurodegenerativa hereditaria autosmica dominante. El gen que codifica para la protena huntingtina se encuentra mutado con una
expansin del triplete de nucletidos CAG. Esto desregula su funcin en neuronas de diferentes regiones del Sistema Nervioso Central, que mueren originando la sintomatologa
caracterstica: corea, debilidad, demencia y trastornos de comportamiento. La terapia gnica es una importante va en la bsqueda de un posible tratamiento de la enfermedad.
Consiste en la introduccin de diferentes constructos gnicos a nivel celular para inhibir la transcripcin o traduccin de la protena mutada, incluso se puede restituir su funcin
normal sustituyendo el gen defectuoso por uno nuevo. En la actualidad la mayora de ensayos se encuentran en fase pre-clnica pero con notables resultados positivos.
2. Objetivo y metodologa
Objetivo: realizar una revisin bibliogrfica para aprender cul es el estado actual de las terapias con RNA de interferencia (RNAi), ASOs (antisense oligonucleotides) y Zinc Finger
Nucleasas (ZFN) en modelos animales de la enfermedad de Huntington.
Metodologa: bsqueda bibliogrfica en PubMed y webs de divulgacin cientfica, seleccin de los artculos recientes del grupo de la Dra.Davidson y colaboradores, los ms activos
en la investigacin en el campo. Palabras clave: terapia gnica, Enfermedad de Huntington, RNA de interferencia, short hairpin RNA, small interference RNA, ASOs, ZFN.
3. RNAi
mG
DNA
transcripcin
miRNA
artificial
AAA
RNAi
shRNA
Vector de
-Plsmidos,
introduccin al -AAV2
SNC
-AAV5
Drosha
Ncleo
DGCR8
pre-miRNA
siRNA
-AAV2
Procesamiento
shRNA
Exportina 5
RanGTP
dsRNA
poro
Citoplasma
Dicer
siRNA
PACT
Mtodo de
inyeccin
TRBP
Escisin mediada
por Dicer
Escisin mediada
por Dicer
5PO4
3OH
Eficacia
(in vivo)
60-70%
reduccin mRNA
mutante 4
meses con
inyeccin nica
60% reduccin
mRNA mutante 3
semanas con
inyeccin nica
Mejora
fenotpica
Toxicidad
70% reduccin
mRNA mutante 4
meses con
inyecciones
durante dos
semanas
XX
60% reduccin
mRNA mutante
inyeccin nica
+ restauracin
funcin normal
de la protena
X
-No se han
observado
-off target
Mecanismo
activacin
Poco GC
Pre-RISC
Pre-RISC
AGO
-Inyeccin
intraparenquimal
a estriado
3OH
5PO4
Mucho GC
ASOs
-Desnudos
-AAV2
endocitosis
directa,
electroporacin,
microinyeccin
-Dentro de
micropartculas
cationes lipdicos
-Inyeccin
-Inyeccin
-Inyeccin
intraparenquimal intraparenquimal intraparenquimal
a estriado
a estriado
a estriado
-Catter a
lquido
cefalorraqudeo
Va endgena
Va endgena
Va de la
del miRNA
del dsRNA
RNAsa-H
siRNA
AGO
ZFN
Seleccin de
cadena
Seleccin de
cadena
RISC
activo
RISC activo
Escisin de la cadena
antisentido
Unin al mRNA
complementario
Unin al mRNA
complementario
Degradacin
mRNA
AAA
Escisin mRNA
mG
AAA
Existen diferentes tipos de RNAi que en su accin utilizan las vas endgenas de
inhibicin presentadas en la imagen. El shRNA (short hairpin RNA) se introduce a
nivel nuclear imitando al pre-miRNA (pre-micro RNA) en donde diversos
complejos proteicos lo transportan y transforman para que pueda unirse al mRNA
(mensajero), degradndolo. Por otro lado los siRNAs (small interference RNA)
mucho ms pequeos, actan en la va de inhibicin del dsRNA (double stranded
RNA) endgeno usando los mismos complejos proteicos para silenciar el mRNA
de inters. Los ASOs (antisense oligonucleotides) que no se muestran en la
imagen, son nucletidos de unas 20pb, los ms pequeos usados en terapia,
que pueden actuar sobre el mRNA a nivel nuclear o citoslico para degradarlo o
Factor de
transcripcin +
endonucleasa
FokI: corte del
DNA
SI: HuASOs
SI: ZFxHunt
(human-selective
ASO)
- Especificidad
de alelo
6. Conclusiones
4. ZFN
Se trata de dmeros proteicos
en
forma
acoplados
con
de
a
zinc
finger
endonucleasas
especificidad
para
una
para
cortarlo.
Escisin
Aade
donante
DNA
pero que, en cambio, todas presentan limitaciones que hacen difcil su uso y
Existe
Recombinacin
no homloga
riesgo de mutagnesis si el
DNA se reconstituye de forma
no
homloga.
insertar
en
Se
puede
cambio,
Reemplazamiento gnico
Recombinacin
homloga
un
Mutaciones
Adaptado de: Carroll D. Genome engineering with zinc-finger nucleases. Genetics 2011 Aug;188(4):773-782