UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FILIAL AREQUIPA
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA
SALUD
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA
Y BIOQUMICA
ANTEPROYECTO:
DETERMINACIN DE LA PRESENCIA DE
MICROORGANISMOS PATGENOS EN LOS
LAVATORIOS DE LOS BAOS DE MUJERES DEL
PABELLN G REALIZADO EN LA UNIVERSIDAD
ALAS PERUANAS -AREQUIPA 2015
PRESENTADO POR:
ARONI ARIAS MAURA
CONDORI CUEVA MELISA
AREQUIPA 2015

1. INTRODUCCIN
Algunos microorganismos son capaces de penetrar y multiplicarse en otros seres
vivos, a los que perjudican, originando una infeccin; son los denominados
microorganismos patgenos. Los problemas que causa una infeccin dependen del
tipo de patgeno, el modo en que se transfiere, dosis o concentracin de patgenos,
persistencia de los microorganismos y la resistencia del organismo infectado.
En un bao pblico puede haber estreptococo, estafilococo, E. coli y bacterias

Shigella, hepatitis A virus y el virus de la gripe estacional. Pueden causar

infecciones leves en la piel que a veces, por falta de higiene, se diseminan a la
cara y otras partes del cuerpo.
Las manillas de las puertas, el inodoro y el lavamanos, entre otros, son artefactos
que concentran bacterias y grmenes. Sin embargo, en los lavaderos es donde
ms se encuentran estos microbios, principalmente debido a la cantidad de gente
que los usa diariamente.
En estos recintos, si no se toman las medidas apropiadas, se pueden contraer
enfermedades de varios tipos. Entre las ms comunes estn las infecciones de la
piel (sobre todo si hay heridas expuestas) y las patologas de tipo digestivas como
la gastroenteritis infecciosa.
Los

causantes

de

estas

alteraciones

son

las

bacterias

Micrococcuss,

Streptococcus Staphylococcus y Enterococcus, las cuales atacan la piel. Tambin

estn presentes las ambientales de reas hmedas como las Pseudomonas,
Aeromonas y enteropatgenos de los tipos Escherichia coli y Salmonella. Adems,
se pueden presentar enterovirus, norovirus, adenovirus e,incluso, hasta parsitos
como las amebas.
Para la determinacion de microorganizmos patgenos ser realizaran diferente
tinciones (tincin gram . tincion simple , tincion pr esporas) Y medios de cultivo.
2. ANTECEDENTES

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AUTOR: Guevara Nestor
TITULO: Identificacin de microorganismos existentes en el edificio Torre de Cristal
Jose Lopez Portillo, Chile (2004)
RESUMEN: Este trabajo nos brinda informacin sobre los factores que pueden
afectar El crecimiento bacteriano ya que se necesita de una serie de sustancias y
de ambientes que faciliten su desarrollo. Estas pueden ser:
Temperatura: teniendo en cuenta la temperatura, podemos clasificar a los
microorganismos en:
Mesfilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas que pueden oscilar entre
los 20-45C. Temperatura ptima = 35-37C.
Termfilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas superiores a los 45C.
Sicrfilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas que oscilan entre 0-20C.
Ph: el Ph ptimo en el que se desarrollan la mayora de los microorganismos es
neutro, que oscila entre 6,5-7,5. Los microorganismos que se desarrollan a pH = 4
se denominan acidfilos. En ocasiones, como consecuencia del metabolismo
bacteriano, se producen residuos que acidifican el medio. Para mantener el medio
neutro se utilizan tampones. El ms utilizado es el de sales fosfato, que adems
sirven de alimento a los microorganismos.
Condiciones adecuadas de humedad y la luz ambiental son tambin uno de los
factores que puede afectar el crecimiento bacteriano.

.
Autor: Osanz Mur Ana Cristina
Ttulo: Recuento de bacterias aerobias mesofilas totales en canales bovinas
mediante el mtodo de hisopado en un camal de Lima Metropolitana (2010)
Resumen:

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Este trabajo nos brinda informacin sobre el mtodo por hisopado , para la toma de
muestra de las superficies :se utilizaron hisopos estriles de algodn para la toma
de muestra para cada rea, el primer hisopo fue humedecido en la solucin de
peptona 0.1% y cloruro de sodio al 0.85% durante cinco segundos ,(diluyente
recomendado por

NTP ISO 3100-2) luego de escurrirlo se froto el rea de

muestreo en varios sentidos: vertical ,horizontal y diagonal; durante veinte

segundos para concluir rompiendo la cabeza del hisopo en el interior de una bolsa
polietileno , luego la misma rea se froto con un segundo hisopo seco el cual
tambin se rompi en la bolsa de poli etileno, una vez que las muestras fueron
tomada en el camal se transportaron al laboratorio del mismo, se utilizo 8 hisopos
por camal ;cuatro hmedo y cuatro secos, todos se colocaron en la bolsa esteril y
se agrego100ml del diluyente (solucin acuosa de peptona al 0.1% y cloruro de
sodio al 0.9%) y se homogenizo durante dos minutos quedando as constituida la
dilucin primaria .A partir de la dilucin primaria se prepararon otra diluciones
decimales , luego se inoculo 1ml de cada dilucin en dos placas Petri ,luego se
encubaron las placas Petri durante 48horas mas tres horas , en una estufa.

3. HIPTESIS
Es probable que en los lavatorios de los baos de mujeres del pabelln G se
encuentren microorganismos patgenos debido a los malos hbitos de higiene y a
la cantidad de personas que lo usan diariamente.

4. OBJETIVOS
4.1. Objetivos general
Determinar la presencia de microorganismos patgenos en los lavatorios de
los baos de mujeres del pabelln G Realizado en la universidad Alas
Peruanas, utilizando distintos mtodos.
4.2. Objetivos especficos
Diferenciar bacterias Gram + y Gram - por Tincin Gram
Identificar bacterias segn su morfologa por Tincin simple
Comparar las distintas morfologas y disposiciones que adoptan las
endosporas porTincin usando el mtodo de Wirtz
Determinar la presencia de hongos y levaduras por medio de cultivo
con Agar glucosa Sabouraud

5. ALCANCE,

TRASCENDENCIA,

IMPORTANCIA

CONTRIBUCIN

DEL

ESTUDIO
El presente anteproyecto tiene alcances significativos ya que los lavatorios de los
baos son sitios empleados por mayora de personas para realizar una higiene
adecuada despus de utilizar los servicios higinicos.
La trascendencia del anteproyecto de investigacin se basara en

realizar la

determinacin de la presencia de microorganismos en los lavatorios de los baos

de mujeres por diferentes medios de tinciones.
La presente investigacin ser importante porque permitir determinar la presencia
de microorganismos que probablemente se encuentren en los lavatorios de los
baos ya que en un bao pblico puede haber estreptococo, estafilococo, bacilos,
hongos, etc. que pueden producir un foco infeccioso causando infecciones en la
piel y que pueden diseminarse a otras partes del cuerpo.
Por ello, esta investigacin podra contribuir a la comunidad universitaria, ya que
los lavatorios de los baos son de gran importancia despus de haber usado los
servicios higinicos.

6. METODOLOGA DEL TRABAJO

6.1. MUESTREO POR HISOPADO
Fundamento: es utilizado para muestrear las superficies del rea (ej. Muros,
pisos, vidrios) con un rea medida; partes completas de equipos. El dispositivo

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a utilizar consiste en un tubo de ensayo provisto de un hisopo estril
sumergido en 10 ml de solucin diluyente estril y un tampn que evita la
evaporacin del solvente y/o contaminacin de la muestra a analizar.
Procedimiento: humedecer el hisopo con la solucin diluyente estril (agua
peptona), humedecer en una direccin determinada la superficie del equipo o
utensilio, repetir el hisopado pero en direccin perpendicular al pasado inicial.
Las muestras debern ser contenidas en un contenedor, si la muestra va a
tardar en ser analizada se debe mantener en refrigeracin menor a 10 C por
un periodo de tiempo no mayor a 1 hora.
6.2. MTODOS
6.2.1. TINCIN SIMPLE
Fundamento: La tincin simple se basa en la afinidad del colorante por
los componentes celulares. La tincin puede ser uniforme o presentar
algunos grnulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de
genciana, azul de metileno, fuscina diluida).
Procedimiento: Sobre el extendido seco se colocan unas gotas de azul
de metileno y se deja actuar unos minutos. Se elimina el exceso de
colorante con agua de forma suave, con ayuda de una piseta. Se seca
el extendido y se observa al microscopio.
6.2.2. TINCION GRAM
Fundamento: La tincin gran requiere cuatro soluciones, primer
colorante es un colorante bsico que en contactos con las clulas
cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El ms
utilizado es el cristal de violeta y aumenta la afinidad entre el colorante y
las clulas .los mordientes empleados suelen ser sales metlicas ,
acidos o bases , como por ejemplo una solucin diluida de yodo . el
agente decolorante , es un disolvente organico por ejemplo , alcoholacetona (1:1). Colorante de contraste, es un colorante bsico de distinto
color que el primer colorante como, por ejemplo la safranina . las
bacterias gram positivas se tien de color azul por el cristal de violeta y

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no pederan esta coloracin durante los pasos sucesivos . las bacterias
gram negativas perderan la coloracin incial del cristal de violeta en ,los
siguientes pasos y se teirn de color rosa debido a la safranina
Procedimiento: Sobre un portaobjetos se coloca una pequea muestra.
Se coloca un gota de cristal violeta por un minuto, lavar con abundante
agua, cubrir con lugol por un minuto, lavar con agua el exceso de lugol ,
decolorar con alcohol acetona hasta la que la preparacin deje de
perder color ( unos 30seg.) , lavar con abundante agua para eliminar el
resto de disolvente , teir con safranina durante un minuto , lavar con
agua para eliminar el colorante de contraste , secar la preparacin y
examinar al microscopio .
6.2.3. TINCIN DIFERENCIAL POR EL MTODO DE WIRTZ
Fundamento: Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que
las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Adems,
estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio
como estructuras refrigerantes y de difcil tincin la tincin especfica de
esporas requiere dos colorantes. Verde malaquita, capaz de teir las
esporas en calientes. Safranina colorante de contraste que tie las
formas negativas
Procedimiento: Se teir con verde malaquita .colocar un pedacito de
papel del filtro encima de la muestra sobre el porta. Aadir el colorante
hasta empapar bien el papel de filtro. De esta forma se evitara que el
colorante salpique y manche toda la zona de trabajo. Con unas pinzas
de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma
que el colorante humee durante cinco minutos , lavar con abundante
agua el exceso de colorante , teir con safranina por un minuto , lavar
con abundante agua el exceso de colorante ,secar la preparacin y
observar la preparacin en el microscopio.
6.2.4. MEDIO DE CULTIVO A SABOURAUD GLUCOSADO AGAR

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Fundamento: Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y
desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones
cutneas (piel, pelo, etc.).
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes
para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de
hongos por sobre el de bacterias.
Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos
de crecimiento.
Procedimiento: Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de
agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante
1 minuto para disolver completamente los ingredientes. Evitar el
sobrecalentamiento. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Distribuir y
enfriar a temperatura ambiente antes de su utilizacin.

7. CALENDARIO DE ACTIVIDADES
El presente cronograma es elaborado de acuerdo a la temporalidad del presente
anteproyecto y proyecto de investigacin, se da a partir de marzo del 2015 a junio
2015 y el tiempo que se considera necesario para su presentacin y sustentacin.
Cronograma de actividades
MARZO

Actividades

seleccin del tema

Formulacin metodolgica
del problema
Elaboracin
del
anteproyecto
Primera correccin del
anteproyecto
Segunda correccin
del
anteproyecto

ABRIL

X
X

MAYO

JUNIO

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Ultima
correccin
del
anteproyecto
Aprobacin
del
anteproyecto
Elaboracin del proyecto
Primera correccin del
proyecto
Segunda correccin del
proyecto
Ultima
correccin
del
proyecto
Aprobacin del proyecto
Recoleccin de datos
Anlisis de datos
Elaboracin del informe
final
Presentacin del informe
final
Sustentacin del informe
final

8. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES, INSUMOS Y REACTIVOS A UTILIZAR

EN LA INVESTIGACIN
8.1.Materiales
El presente cuadro est elaborado de acuerdo a la cantidad y material de
laboratorio que se considera necesario para la realizacin de los diferentes
mtodos.
CUADRO N 2

Cantidad/

Materiales

unidades
20

porta objetos

50

hisopos

vasos de precipitado 250 ml

tubos de ensayo

matraz

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autoclave

balanza

bagueta

luna de reloj

pizeta

Microscopio

mechero

10

Placas Petri

Asa de micrn

8.2.Reactivos
El presente cuadro da a conocer los reactivos que se van a utilizar para la
determinacin de microorganismos patgenos.
CUADRO N 3

REACTIVOS
Violeta de cristal
Lugol
Alcohol
Safranina
Verde malaquita
Azul de metileno
Agua peptonada
9.

PRESUPUESTO
Agar sabouraud
glucosado

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El presente cuadro de presupuesto es elaborado de acuerdo al precio unitario y
el precio total dependiendo de la cantidad y/o tiempo empleado por cada rubro
designado en el cuadro.
CUADRO N 4

Rubros

Precio

Cantidad

Total

unitario

y/o tiempo

S/.

Materiales biolgicos

1.00

50 g

50.00

Internet

1.00

20 horas

20.00

Copias

0.10

50

50.00

Impresiones

0.10

50

50.00

Pasajes

0.80

15.00

Otros gastos

40.00

Total

225.00

9.1. Lugar de trabajo

El trabajo de experimentacin se realizara en el laboratorio de la
Universidad Alas Peruanas.

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10. BIBLIOGRAFA
1. Guillem P. Microbiologa y Parasitologa Mdicas Ed.Mdica Panamericana
2013
2. Ral Romero Cabello Microbiologa y Parasitologa Humana Bases etiolgicas
de las enfermedades infecciosas y parasitarias Editorial Mdica Panamericana
2007
3. Lopez I. Manual prctico de microbiologa 2da edicin Barcelona .