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PRÁCTICA Nº 41

RESPIRACIÓN CELULAR
I. FUNDAMENTO

La levadura tiene un tipo de nutrición saprófita, es decir, absorben las sustancias nutritivas
directamente a través de la membrana celular. Los saprófitos solo pueden desarrollarse donde
se encuentren cuerpos de animales o vegetales en descomposición, o masas de productos de
desechos de los mismos. Las levaduras solo necesitan sales inorgánicas, oxígeno y algunas
clases de azúcares. A partir de éste obtienen energía y con ella sintetizan todas las demás
sustancias necesarias para la vida(proteinas, grasas, ácidos nucleicos, vitaminas, etc.).
Cuando disponen de mucho oxígeno, logran energía por oxidación completa de la glucosa a
dióxido de carbono y agua a través del ciclo del ácido tricarboxílico. Las levaduras al
respirar liberan dióxido de carbono, si se lleva a cabo una práctica en medio acuoso, se
formará ácido carbónico, que va acidificando el medio. La intensidad y velocidad de la
respiración se detecta con ayuda de bromotimol, que es un indicador de pH. El mismo tiene
color azul en Ph alcalino, verde en Ph neutro y amarillo en pH ácido.

II. APRENDIZAJES ESPERADOS

• Realizar un experimento para demostrar la liberación de CO2 por respiración y


fermentación.

III. MATERIALES
• Crisoles, triángulos porta crisoles.
• Tubos de ensayo. • Pipetas de 1 ml y 10 ml.
• Gradilla. • Azul de bromotimol.
• Mechero. • Vaselina.
• Malla metálica. • Glucosa.
• Trípode. • Levadura de cerveza.

IV. PROCEDIMIENTO

1. Parte de las levaduras se matan por ebullición durante al menos 15 min.


2. Otra parte de las mismas se calcinan en un crisol.
3. Se rotulan 8 tubos (que tendrán composición diferente).
4. El azul de bromotimol se agrega cuando todos los tubos ya contengan la levadura y/o
glucosa, según lo indique.
5. La vaselina se agrega a lo último, ya que su función es formar una capa aislante que
impida el intercambio de gases con la atmósfera.
6. Se observa el color de los tubos inicialmente, y a los 5, 10, 15, 30 y 60 min.
7. En el tubo nº 8 el alumno soplara mediante una pipeta, para ver el viraje del
indicador.
8. Los resultados se anotaran en forma de cuadro.

Composición de los tubos de ensayo:

Tubo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8

0,1 0,1
Levaduras muertas (g) - - - - - -
(calcinada) (ebull)

Levaduras vivas (g) - - 0,1 0,1 0,1 - - 0,1

Glucosa (mg) - - - 10 10 - 10 -

Azul de bromotimol 10 10 10 10 10 10 10 10

Vaselina líquida (ml) 1 1 1 1 - 1 1 1

V. RESULTADOS

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PRÁCTICA Nº 42
OBTENCIÓN Y TRATAMIENTO DE MUESTRAS PARA CUANTIFICACIÓN DE
SU CONTENIO PROTEICO

I. APRENDIZAJES ESPARADOS
• Utiliza semillas y frutos, analizaremos el contenido de la proteína. Antes haremos un
homogenado del material, una centrifugación diferencial para separar materiales.

II. MATERIALES

• semillas o frutos • Placas de Petri (donde


• Homogeneizador de vidrio depositaremos la muestra inicial).
• Tampón de homogeneización • Tubos cónicos y eppendorf (donde
(Tris-Mes 50 mM, pH 7,5, EDTA depositaremos la sustancia final
5 mM, DTT 5mM, PMSF 0,5 mM) para que su composición sea
• Pipetas de vidrio. analizada).
• Pipetas de plástico de un solo uso • Pinzas
• Pipetas automáticas (para extraer • Centrifugadora de mesa
pequeñas cantidades de una • Balanza granatario y estufa de
sustancia). desecación

III. PROCEDIMIENTO
1. Utilizando una naranja, pesamos por duplicado 5 gramos de esta sustancia. Una
pesada va al horno de desecación (el cual va a extraer toda el agua de la muestra).
2. Los otros 5 gramos, los trituraremos y homogeneizaremos con el liquido
homogeneizador de vidrio y el tampón homogeneizador.
3. una vez bien triturada la muestra de fruta, con el tampón introducido al máximo en el
homogeneizador de vidrio extraeremos con pipetas de plástico de un solo uso. Los
depositaremos en una probeta de plástico graduada. Enrasamos hasta llegar a la
cantidad de 10 ml.
4. A continuación, utilizamos las pipetas de un solo uso para transportar estos 10 ml a
una probeta de vidrio mar cada con la letra N.
5. Esta probeta se introducirá en la centrifugadora de mesa a 1800 revoluciones por
minuto.
6. cuando extraemos la probeta tras ser centrifugada vemos una clara separación del
material pesado en el fondo, y la disolución sin posos situada por encima.
7. Extraemos el máximo de líquido posible de la probeta de vidrio(N). La cantidad
extraída es 9 ml.
8. Con la pipeta automática extraeremos 500 µl, y los depositaremos en el Eppendorf
marcado con la letra N para analizarlo en el laboratorio.

A continuación hacemos un proceso similar al anterior con zumo comercial:

1. 1. Extraemos 10 ml de zumo comercial a la probeta graduada.


2. 2. Estos 10 ml se traspasan a la probeta de vidrio marcada con la letra C, y se llevan a
la centrifugadora de mesa. Se centrifuga a 1800 revoluciones por minuto.
3. 3. Al ser centrifugado el zumo comercial, vemos al igual que el zumo natural hay una
clara separación entre los posos y el liquido. De los 10 ml iniciales, sacamos 8,5 de
líquido. Y de estos, trasportamos con la pipeta automática 500 microlitros, que
depositamos en el Eppendorf(C).
4. Las dos muestras del Eppendorf: C y N serán utilizadas en la próxima práctica para
analizar la composición de los zumos.

IV. RESULTADOS
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PRÁCTICA Nº 43
DIGESTIÓN IN Vitro EFECTO DE LA PTIALINA
OBJETIVOS
 Conocer la acción de las enzimas.
 Conocer el efecto de la ptialina en almidones.

FUNDAMENTO
La enzima es una proteína, generalmente globular y conjugada, capaz de aumentar hasta
1020 veces la velocidad de una reacción debido a su alto poder de activación, específico para
cada reacción su parte proteínica se llama apoenzima, que al unirse a un cofactor produce la
enzima.
PTIALINA Se denomina también tialina, el cual es un sistema enzimático que se encuentra
en la saliva producido por las glándulas salivales constituido principalmente por amilasas
cuya activación requiere aniones, como los cloruros; su acción en los almidones es escasa
debido al corto tiempo de resistencia en la boca, y una vez en el estomago se inactiva por la
alta acidez del medio.

MATERIALES Y METODOS
De acuerdo a los resultados y discusiones, mencionar las conclusiones del efecto de ptialina
sobre el almidón.
MATERIALES
• 04 Tubos de prueba MUESTRAS
• Termómetro • Almidón
• 01 gotero • Ptialina
• 01 Piceta REACTIVOS
• 01 varilla de vidrio  Solución de yodo
• Agua destilada

PROEDIMIENTO
1. Preparar una solución al 20% de almidón en una fiola de 100ml.
2. En un vaso de precipitación contener la ptialina salival.
3. En cada uno de los cuatro tubos de prueba poner 10mL de la solución de almidón y
etiquetarlos enumerándolos del 1 al 4.
4. El tubo N° 1 será la muestra patrón, el cual estará a temperatura ambiente y sin
ptialina.
5. A los tubos N° 2, 3 y 4 adicionarles 10mL de ptialina agitando bien hasta obtener una
solución homogénea, los cuales serán sometidos a una temperatura de 20°C (tubo 2),
a 40°C (tubo 3) y 60°C (tubo 4). Por espacio de 10 minutos agitando constantemente.
6. Después de los 10 minutos agregarle 3 gotas de la solución de yodo, agitarlo bien y
observar la variación de colores.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Reportar los resultados obtenidos y discutir con los datos obtenidos en la revisión
bibliográfica, anotar los cambio de color de cada tubo, comparar con la muestra en blanco y
discutir.
PRACTICA Nº 44
REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS (CISTEÍNA Y METIONINA)

I. FUNDAMENTO:
Esta reacción se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro
de plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los
aminoácidos azufrados, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el
sulfato de plomo.

II. PROCEDIMIENTO

1. En un tubo de ensaye de 16 x 150 mm, con una pipeta de 5 ml poner 3 ml de la solución


de clara de huevo (albúmina de huevo)
2. Con una pipeta de 5 ml añadir al tubo de ensaye 2 ml de una solución de hidróxido de
sodio al 20%
3. Con una pipeta Pasteur con gotero, añadir 10 gotas al tubo de ensaye de una solución de
acetato de plomo al 5%
4. Calentar el tubo de ensaye tomado con una pinzas para tubo de ensaye y a la flama de un
mechero, cuide de que la solución ni hierva y no se derrame la solución.
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de
plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar
proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre (metionina y cistepina).

III. RESULTADOS
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PRÁCTICA Nº 45

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
I. FUNDAMENTO
Las enzimas son proteínas que tienen la función de regular el metabolismo, interviniendo
en todas las reacciones químicas de los seres vivos acelerando o disminuyendo la velocidad
de las reacciones. Las enzimas son específicas para cada proceso celular y actúan de forma
ordenada.
Específicamente la sustancia que acelera la reacción recibe el nombre de catalizador, una
célula puede poseer 2000 enzimas diferentes que catalizan diferentes reacciones. Las
enzimas aceleran la reacción al asociarse con un reactivo o sustancia química que se integra
a la reacción, dicha sustancia recibe el nombre de sustrato y el sitio de unión se llama sitio
activo.
Específicamente la enzima catalasa se encuentra presente en todos los tejidos animales y
vegetales, y provoca la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y burbujas de
oxígeno.

II. APRENDIZAJES ESPERADOS


 identificar la acción de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.

III. MATERIAL Y EQUIPO


 4 tubos de ensayo
 1 gradilla
 1 probeta de 10 mil
 1 navaja
 1 zanahoria
 1 trozo de hígado de pollo
 Solución de peróxido de hidrógeno
al 3 %
 Detergente líquido para trastes
 1 Regla
IV. PROCEDIMIENTO
1. Marca los tubos de ensayo del 1-4, y coloca 5 gotas de detergente líquido en cada
uno para atrapar las burbujas de gas.
2. Con la navaja corta dos cubos de zanahoria y dos trozos de hígado, pon a hervir
por dos minutos un cubo de zanahoria y un trozo de hígado. Realiza esto con
guantes para no tocar las muestras con tus manos.
3. Coloca en el tubo # 1 la muestra de zanahoria cruda y agrega 5 ml de la solución
de peróxido de hidrógeno. Observa lo que sucede y mide con una regla por
intervalos de 2 min. durante 10 minutos la cantidad de gas (oxígeno atrapado en
las burbujas de jabón).
4. Repite el paso 3 con las demás muestras en los tubos # 3, 4 y 5. Anota tus
observaciones y resultados.
V. RESULTADOS
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