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(19) REPUBLICA DE CUBA

(11) No de publicación:
CU 22496 A1
(21) No. de solicitud : 37/95
(51) Int. Cl6:

A01C 1/08

Oficina Cubana de la
Propiedad Industrial

Certificado de Autor de Invención

(12)

(71) Solicitantes: Universidad Central de las Villas; (CU)
(22) Fecha de presentación

: 1995.04.06

(72) Inventor/es: Hernández Pérez, Ricardo (CU) ;
(30) Prioridad :

Fontanella Ríos, Yoel (CU) ; Noa Carrazana, Juan C. (CU) ;
Manso Muro, Rolando (CU) ; Pichardo Moya, Tatiana
(CU); Cárdenas Pérez, Heriberto ; (CU)

(45) Fecha de publicación : 1997.12.24

(73) Titular: Universidad Central de las Villas,
domiciliado en carretera de Camajuaní km 5 1/2 , Santa
Clara; (CU)

(74) Agente:

Quintero Alvarez, Ana Gloria ; (CU)

(54) Título: EQUIPO Y PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA PARA EL SANAMIENTO
A VIRUS EN AJO ALLIUM SATIVUM L.

(57) Resumen:
Con el objetivo de hallar otros métodos más económicos y rápidos para
obtener plantas libres del complejo viral del ajo (ALLIUM SATIVUM L.
), se desarrolló un nuevo procedimiento a partir del uso de la corriente
eléctrica, para obtener plantas libres de estos patógenos. Se construyó un
equipo con el que se aplicaron los diferentes tratamientos, el cual está
formado por una fuente de voltaje estabilizada y regulable y una cubeta
de tratamiento. Con la aplicación de corriente directa a los dientes de ajo y
luego la siembra "in vitro" de los ápices se logra regenerar hasta el 98%
de los explantes, lo cual permite realizar el diagnóstico serológico en
menor tiempo para la determinación de las enfermedades virales. Por otra
parte los tratamientos permiten obtener desde un 53 - 100% de plantas
sanas, comprobándose que al aumentar la corriente y/o la duración de ésta
la posibilidad de saneamiento aumenta. Hasta ahora los métodos para la
eliminación de virus traen como consecuencia grandes pérdidas de
material
vegetal
y
de
recurso.

Además. En países donde han conseguido plantas libres de estos patógenos se han reportado aumento en los rendimientos que van entre 30 y 70% (Marrou et. Según las técnicas más sensibles utilizadas actualmente para el diagnóstico de estos virus se emplea la técnica ELISA según Clark y Adams (1977) y como comprobación la técnica de inmunoelectromicroscopía (IEM. llamado Shallot Latent Virus (ShLV. Arabia Mosaic. En los últimos años Quacquarelli et. al. (1980) aplicó corriente eléctrica a estacas de árboles del cultivo Cactanucia los que mostraban síntomas de mosaico producido por infecciones virales. al. Conci.. se encuentra naturalmente afectado por distintos virus. 1981) y Onion Yellow Dwarf Virus (OYDV. El mismo comprobó que con los tratamientos de 500 V/ 10 – 5 min. Esta enfermedad se encuentra asociada a la presencia de dos o más virus diferentes de características muy semejantes. La presente invención se relaciona con la rama agrícola y el empleo en el campo de la virología vegetal para el saneamiento a virus.MEMORIA DESCRIPTIVA 37/95 EQUIPO Y PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA PARA EL SANEAMIENTO A VIRUS EN AJO ALLIUM SATIVUM L. El cultivo del ajo Allium sativum L. interelacionándose con el campo de la energía eléctrica. pero la regeneración del material es sólo del 8% ( Conci. sembrados en medio de cultivo adecuado para generar (Hernández et. 1994). un carlavirus de 650 – 700 nm que no produce síntomas. 1978. Ellos son los causantes de la enfermedad conocida como “Mosaico del Ajo”. al. Bos et al. además el uso de la termoterapia seguido de la extracción de meristemos logra entre 50 a 60% de plantas sanas. 1991). 1974) y 45% (Harranek. el cual produce mosaico leve en las hojas llamado Leek Yellow Strep Virus (LYSV. vegetales así como sustancias nutritivas. 1976). 1991).. Bos. animales. Bos. 1982). al. mientras que al utilizar termoterapias alternas seguido del cultivo de meristemos se puede lograr un 18 % de establecimiento y un 48 % de saneamiento (Hernández et. tejidos e individuos bacterianos. Para la obtención de plantas libres la técnica más difundida es la extracción de meristemos menores de 0.. Se ha logrado aislar dos potivyrus con un largo normal de 700 – 850 nm. 1974). Una de las primeras experiencias con la aplicación de la corriente eléctrica fue patentada por Wagele (1978) el cual la utilizó para influir en el crecimiento de células. se obtienen hasta 90 % de plantas sanas. 1995). que se manifiesta en forma de estrías que varían desde el verde claro hasta el amarillo intenso. Bos. Por lo que recomienda finalmente el efecto de los tratamientos eléctricos para obtener plantas libres de virus tales como Cacumis Mosaic Virus.3 mm. .

los cuales degradan cuando se exponen a campos eléctricos.5 . la cual contiene varias Peinetas Portamuestras o Electrodos Superiores (5) cargadas con dientes de ajo a través de los cuales se hace circular una corriente eléctrica entre el Electrodo Superior o Peineta Portamuestra (5) y la Esponja (6) impregnada con una solución de NaCl 1 Mol. 2 que muestra una vista de un corte seccional de la Cubeta de Tratamiento donde se aprecia la Cubeta Plástica (9) que contiene en su fondo al . a la Cubeta de Tratamiento (4).1 . que hace de puente eléctrico entre la parte inferior del diente de ajo y el Electrodo Inferior (7).3 .Partes componentes del Equipo de Electroterapia para Ajo. Para la aplicación de la corriente eléctrica directa a los dientes de ajo.Grapevine Franleaf. Figura No.8 .Guía de Montaje (Vista en corte).Peineta Portamuestra (Vista superior) Figura No. Chicory Yellow Mottle y Tabaco Mosaic.Cubeta de Tratamiento (vista lateral) Figura No. El mismo está compuesto por una Fuente de Voltaje (1) que as su vez contiene un Estabilizador de Voltaje (2) y un Voltímetro o Unidad de Lectura (3).6 . se diseñó un equipo el cual se describe a continuación. En la figura No.Diagrama de barras de la sobrevivencia a diferentes tratamientos. Figura No. Como accesorio para lograr uniformidad en el montaje de los dientes de ajo en la Peineta Portamuestras (5). En la figura No. se construyó un aditamento de plástico llamado Guía de Montaje (8).7 . RELACION DE FIGURAS Figura No.Cubeta de Tratamiento cargada con dientes de ajo.2 .9 – Foto de las vitroplantas tratadas. Esta Fuente suministra un voltaje estabilizado y regulable en un rango de 0 – 30 volt. 1 se muestran en forma de diagframa de bloques las partes que componen el equipo de electroterapia para dar tratamiento a los dientes de ajo. donde se debía comprobar el efecto de la corriente directa aplicada con un equipo construido especialmente para obtener plantas sanas al complejo viral formado por: (LYSV) Y (OYDV).Peineta Portamuestra (Vista lateral) Figura No.4 . Figura No.Cubeta de Tratamiento (Vista en Corte) Figura No. se Todo lo anterior constituyó la base para realizar nuestro trabajo. Figura No.

8 se muestra un diagrama de barra donde se explica el porciento de sobrevivencia de las vitroplantas tratadas con diferentes voltajes y tiempos. En la figura No. lo que trae como consecuencia que la corriente eléctrica que circula por cada Diente (19) sea aproximadamente de la misma magnitud. existiendo una distancia aproximada de 1 cm. De esta forma los Dientes Ajo (19) quedan uniformemente montados. que en realidad no es más que un conector de tarjeta electrónica y que está compuesta por un cuerpo de la Peineta (15) de material aislante y unos Electrodos (16) en forma de aguja para encajar los dientes de ajo que van a ser tratados. 3 se muestra una vista lateral de la cubeta de tratamiento donde se puede ver el Electrodo colector (12) que se encarga de distribuir a través de los cinco Conectores de Peineta (13).Electrodo Inferior (7) y la Esponja (6). como su nombre lo indica. La Cubeta Plástica (9) contiene por sus dos laterales Interiores unos soportes en forma de “U” llamados Soporte para Peineta (11) y que sirven. 4 se puede ver una vista superior de una de las Peinetas Portamuestras (5). En la figura No. La parte inferior de los dientes de ajo se apoyan en la Esponja (6) que está impregnada de una solución conductora eléctricamente y que sirve de unión eléctrica con el Electrodo Inferior (7) el cual se conecta a la Fuente Voltaje (1) a través del Jack (10). En la figura No. además de las partes ya descritas se puede ver más claramente las dos hileras de Electrodos (16). Se puede ver el recorrido de la corriente eléctrica que entra por el Poste (18) que está soldado a la Lámina de Circuito Impreso (17) que a su vez conecta con los electrodos (16) que sostiene a los Dientes de Ajo (19). . 6 se representa la Cubeta de Tratamiento (4) con una Peineta Portamuestra (5) cargada con dientes de Ajo (19) listos para ser tratados. la Lámina de circuito Impreso (17) y el Poste (18). entre el Fondo del Diente (19) y la hilera inferior del electrodo (16). El Electrodo Inferior (7) posee en su extremo superior un Jack o Conector Eléctrico (10) que lo une eléctricamente con uno de los bordes de la fuente de Voltaje (1). En la figura No. Este se hace con el objetivo de que la distancia interelectrodos en el diente (19) sea la misma para todos y por ende la resistencia eléctrica que ofrecen al paso de la corriente. para sostener las cinco Peinetas Portamuestras (5) dentro de la Cubeta de Tratamiento (4). En la parte interior de los dos Laterales (20) se encuentran los Soportes (21) en los cuales se inserta una Peineta Portamuestra (5) con los Electrodos (16) hacia delante y se van montando los dientes de Ajo (19) apoyándolos contra la Mesa de Apoyo (22). 7 se da una vista en corte de la Guía de Montaje (8). En la figura No. Por el otro borde de la Peineta Portamuestra (5) se encuentra una Lámina de Circuito Impreso (17) que hace contacto eléctrico con los electrodos (16) y que en su extremo derecho posee un Poste o Conector Eléctrico (18) que se une posteriormente con los Conectores de Peinetas (13). el otro polo eléctrico que suministra la Fuente de Voltaje (1) y que se conecta a dicha Fuente por medio del Cable de Conexión (14). 5 se da una vista lateral de la Peineta Portamuestra (5) donde. En la figura No.

En la figura No. 7. PRECAUCIONES Y RECOMENDACIONES PROCEDIMIENTO DE ELECTROTERAPIA. En el caso de tratamientos al ajo se recomienda probar con voltajes bajos del orden de 5 y 10 v para no dañar la zona de crecimiento lo que inutiliza el diente. solo abarcándose a las condiciones creadas. tomate. 1. 4. Al trabajar con el equipo para aplicar la técnica no debe cortocircuitar nunca los cables de salida de la fuente o los electrodos de la cubeta con el equipo en funcionamiento. La variante a seleccionar con el ajo puede ir desde 2 volt hasta 30 volt y desde 1 a 30 min. Los dientes se colocarán en los peines utilizando la guía de montaje. caña. 4. así como las peinetas portadientes. Pero nosotros le recomendamos en este procedimiento utilizar 10 v/5. Los peines con los dientes serán ubicados en el interior de la cubeta de tratamiento (figura 1). se podría emplear en similares tratamientos a otros cultivos como papa. Preparar 300 ml de NaCl 1M. 3. Se recomienda 4 dientes por peine para un total de 20 dientes. Al terminar el trabajo debe lavar bien y secar la cubeta. Seleccionar el material de partida (Allium sativum L. 3. quiere decir que los dientes recibirán la electricidad desde la zona meristemática hasta la superficie del diente a 1 cm de altura. 5. Aunque el equipo fue diseñado para dar tratamiento de electroterapia al ajo. DURANTE EL 1. 9 se muestra una foto donde se puede apreciar el efecto de los diferentes tratamientos sobre el crecimiento de las vitroplantas. Desgranar los bulbos y eliminar la túnica que los protege si van a ser pasados a cultivo in vitro. El tiempo del tratamiento será contado mediante cronómetro o reloj parando el mismo según lo previsto el las precauciones y recomendaciones. No debe emplear más de 20 dientes como carga total de la cubeta. lo que garantiza que todos los dientes queden con el platin apoyado en la esponja a una misma altura. Siempre que se use la fuente para dar tratamiento a otros cultivos o variedades de plantas comenzar con pequeñas cantidades de éstas y con voltajes pequeños. Los dientes posteriormente al tratamiento serán desinfectados con Hipoclorito de Sodio al 3% durante 15 min. 2. para añadir a la cubeta de tratamiento. 6. 7. Seleccionar siempre el voltaje deseado antes de conectar la cubeta a la fuente para evitar voltajes inadecuados. enfermedades (no virales) u otras causas.) teniendo en cuenta que los bulbos no estén afectados por plagas.. y en condiciones de flujo laminar serán . etc. los electrodos. 6. aumentando ambas variables progresivamente para no sobrecargar la capacidad de la fuente. 5. 2. malanga. Así como asegurarse que los dientes han superado la dormición. PROCESAMIENTO DEL MATERIAL PARA APLICAR LA TECNICA DE ELECTROTERAPIA.

2. dicha cubeta tiene en su interior a ambos lados unos soportes que sostienen y guían las peinetas o electrodos superiores cargados con los dientes de ajo y una guía de montaje para estandarizar la posición de los dientes. O si lo prefiere después del tratamiento eléctrico no tiene que quitar las túnicas envolventes y puede ser llevados directamente al campo. 8. Equipo de electroterapia de acuerdo a la reivindicación 1. REIVINDICACIONES 1. Equipo de electroterapia para el saneamiento a virus en ajo Allium sativum L. que comprende una fuente de voltaje de corriente directa estabilizada y regulable. se caracteriza porque la peineta o electrodo superior compuesta de material aislante que tiene unos salientes que permiten su colocación en la cubeta. Además se comprueba que hay saneamiento a los virus desde un 50 – 100 % en dependencia al voltaje y tiempo que se emplee en el tratamiento. u otro método adecuado para saber la sanidad del material en cuanto a virus. VENTAJAS DE LA SOLUCION Las ventajas de la solución dada son las siguientes: Permite acelerar el crecimiento del material tratado. 4. de la última hilera de dientes para lograr uniformidad en el montaje de las muestras vegetales en la peineta. Equipo de electroterapia de acuerdo a la reivindicación 1 caracterizada por la guía de montaje que comprende un soporte plástico donde se inserta la peineta y con una mesa de apoyo inferior separada a 1 cm. Al cabo de 50 ó 60 días podrá realizar la comprobación por la técnica UMELISA. en condiciones “in vitro” la regeneración aumenta en por ciento con respecto a materiales que se implantan sin tratamiento. 3. 1994). con unos electrodos metálicos en forma de aguja conectados entre sí eléctricamente por una barra de cobre. caracterizado porque a cada diente de ajo se le aplica un potencial de voltaje directo con el objetivo de hacer circular una corriente eléctrica a través de la zona meristemática con voltaje de 5 – 30 volt y durante un tiempo de 5 – 30 min. Procedimiento de electroterapia para el saneamiento a virus en ajo Allium sativum L.mondados hasta encontrar la zona meristemática y sembrados “in vitro” aproximadamente de 0. mucho más rápido por lo que la respuesta en un programa de producción de semilla se hace más aceleradamente.7 mm. sobre la cual se coloca una esponja rectangular que abarca todo el fondo de la cubeta impregnada en solución de CINa 1 Mol saturada. por lo que las vitroplantas llegan a tener el tamaño y peso adecuado para hacer el diagnóstico de los patógenos presentes.. En medio de establecimiento sugerido por (Hernández et al. . caracterizado por una cubeta de tratamiento de material aislante que comprende en su fondo una lámina o electrodo plano rectangular inferior.

DIBUJOS .