UROCULTIVO

El urocultivo o urinocultivo es un anlisis microbiolgico de la orina que sirve

para determinar si existe presencia de bacterias en la orina de la gestante. Es
el anlisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y presin cual
es el agente microbiano que est causando una infeccin en un organismo. En
el embarazo, por los cambios fsicos que se producen, existe una mayor
predisposicin a las infecciones de orina y muchas veces cursan sin sntomas,
por lo que puede ser que la embarazada no note nada. Sin embargo, si se
detecta que existe la presencia de bacterias en la orina, deber de tratarse
administrando antibitico a la paciente. Si existen microorganismos en la orina,
que son los que han producido la infeccin, crecern colonias de ese grmen
en toda la superficie de una o ms placas de cultivo. Los resultados del cultivo
informan de la identificacin del grmen, as como del nmero de colonias que
han crecido en las placas de cultivo.
La confirmacin de la infeccin urinaria representa que han crecido ms de
100.000 colonias de microorganismos por mililitro y ello representa la
necesidad de tratamiento. Cuando crecen menos colonias (por ejemplo entre
50.000 y 90.000) se denomina bacteriuria o presencia de bacterias en la orina,
que normalmente no requiere tratamiento, excepto en caso de mujeres
embarazadas y pacientes diabticos.
LA MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO
Para muestras de orina recolectadas por miccin se debe realizar una
cuantificacin del nmero de microorganismos presentes por volumen de
muestra mediante recuento en medios slidos, determinando el nmero de
unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro de muestra. Esta
metodologa se puede aplicar a muestras de orina recolectadas por
cateterizacin, pero no se debe aplicar a aquellas muestras de orina
recolectadas por puncin suprapbica por cuanto se evita la contaminacin
uretral o periuretral.
En pacientes sintomticos (dolor al orinar, urgencia, frecuencia) usualmente
una nica muestra es usualmente suficiente y adecuada para el diagnstico,
siempre y cuando el paciente no haya sido sometido an a tratamientos con
antimicrobianos. En pacientes asintomticos (bacteriuria asintomtica) se
pueden necesitar hasta dos o tres muestras recolectadas en tres das
consecutivos para poder hacer el diagnstico de laboratorio.
En casos de que se sospeche de tuberculosis renal, se deben procesar tres
muestras recolectas en tres das consecutivos. Las muestras de orina deben
provenir de la primera miccin de la maana para asegurar un mejor
diagnstico. La solicitud de anlisis que acompaa la muestra clnica debe

indicar si el paciente es sintomtico o asintomtico, y no debe indicar

simplemente infeccin urinaria o sepsis urinaria.
La orina puede ser un buen medio de cultivo para los diferentes
microorganismos, tanto los causantes de infecciones como los contaminantes
provenientes de la uretra o de la regin periuretral. Por lo tanto, las muestras
de orina deben ser refrigeradas a 4C hasta por 24 horas si no van a ser
procesadas inmediatamente en el laboratorio.
Recoleccin de muestras de orina
1. Nios que controlan esfinteres
La muestra de eleccin es el chorro medio miccional. El tiempo de retencin
deseado es de por lo menos 3 horas.
Nias
Se debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs,
secar con toalla limpia. Se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en
frasco estril la fraccin siguiente (10-20 ml). Se recomienda orinar separando
los labios mayores.
Nios
Se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balanoprepucial con
agua y jabn. Luego se deber secar con una toalla limpia. Se elimina el primer
chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (ms de 20
ml).
Se desaconseja el uso de antispticos, ya que pueden afectar el resultado del
urocultivo, provocando un descenso en el recuento de colonias.
2. Nios que no controlan esfinteres
Nunca utilizar bolsas colectoras para el estudio de urocultivo. Su especificidad
es muy baja: 0,62 contra 0,97 de la orina obtenida por cateterismo vesical.
Existen, al menos, tres alternativas. Recordar que la mayora de estas muestras
no cumplen con el tiempo de retencin deseado. Se recomienda alguno de los
siguientes procedimientos:
Al acecho El mtodo se aplica con los lactantes y es similar al descrito para
los pacientes que controlan esfnteres. La dificultad estriba en que se
desconoce cual ser el momento en que se va a producir la miccin. El
operador deber esperar entonces a que la misma se produzca y recoger en
un frasco estril lo que seguramente ser la porcin media del chorro
miccional. Su especificidad es de aproximadamente 80%.

Puncin suprapbica
Este procedimiento deber ser efectuado por mdicos entrenados. En principio,
se reserva para casos especiales, como neonatos graves, pacientes cuyos
urocultivos previos presenten resultados conflictivos, sospecha de
microorganismos de difcil desarrollo, etc. Primeramente se verifica que el
paciente presente un globo vesical palpable, se desinfecta la zona pubiana con
iodopovidona y se deja actuar un minuto, se limpia con alcohol al 70% y se
punza con aguja adecuada en la zona ubicada 1 o 2 cm por encima de la
snfisis pubiana. Se aspira la orina y se vuelca en frasco estril.
Cateterizacin
Es el mtodo de eleccin para pacientes en los que habitualmente se practica
el cateterismo intermitente (enfermos con vejiga neurognica). En algunos
centros lo utilizan para lactantes en lugar de la toma al acecho, ya que
presenta la ventaja de ser una toma ms rpida y confiable cuando se realiza
por personal entrenado. Sin embargo, presenta el riesgo de producir el ascenso
de los microorganismos desde la uretra a la vejiga y generar as una IU
iatrognica. Para efectuar este mtodo se desinfecta la zona perineal, se
introduce la sonda por la uretra y se recoge la porcin media del chorro de
orina que sale por la sonda.
Del mismo modo pueden obtenerse muestras a partir de ureterostomas,
nefrostomas o vesicostomas. La diferencia puede radicar en que los catteres
a utilizar podran ser de menor dimetro. En estos casos, se deja fluir la orina
retenida en la boca del conducto, se limpia la misma con un hisopo
humedecido en alcohol, se introduce el catter en el conducto y se permite el
drenaje de la orina al exterior. La parte media del chorro se recoge en un
recipiente estril.
3. Mujeres adultas
La muestra de eleccin es el chorro medio miccional. El tiempo de retencin
deseado es de, por lo menos, 3 horas.
Se debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs,
secar con toalla limpia y se debe colocar un tapn vaginal (de tipo comercial o
fabricado con una torunda de gasa o algodn).
Se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin
siguiente (10-20 ml).
Se recomienda orinar separando los labios mayores. El efecto de una buena
higiene puede verse en la tabla 1.

Como se dijo, el uso de antispticos est contraindicado porque puede resultar

en una reduccin artificial del recuento de colonias. En ancianas y en
embarazadas asintomticas conviene tomar ms de una muestra para tener
seguridad del grado de significacin de los hallazgos.
4. Varones adultos
La muestra de eleccin tambin es el chorro medio miccional. El tiempo de
retencin deseado tambin es de, por lo menos, 3 horas. Se debe retraer el
prepucio e higienizar el glande y surco balanoprepucial con agua y jabn.
Luego se seca con una toalla limpia. Al comenzar a orinar, se elimina el primer
chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (20 ml).
5. Pacientes con sonda permanente
Puncin de la sonda
Este procedimiento se utiliza en aquellos enfermos con sonda permanente en
los que no es posible retirar o reemplazar la sonda. Se obtura la sonda con una
pinza ad hoc. Se espera unos minutos, se desinfecta la parte externa de la
sonda en la zona proximal con alcohol yodado o iodopovidona y se punza la
sonda con aguja y jeringa estril. Se vuelca el contenido en forma asptica en
un frasco estril.
Recoleccin a travs de una sonda estril recin colocada Aprovechando la
colocacin o el cambio de sonda, se recoge directamente la orina que fluye por
el extremo distal de la sonda nueva en un frasco estril. Si se trata de un
recambio de sonda, es importante considerar la posibilidad que se produzca la
resuspensin de bacterias de la zona uretral en la orina vesical. Esto puede
resultar en la presencia transitoria de bacterias colonizantes de la sonda previa
en la orina y dar lugar a cultivos falsamente positivos. En estos casos, es
recomendable tomar una nueva muestra a posteriori.
CONTAMINACION DE LA MUESTRA DE ORINA
Si exceptuamos la presencia de microorganismos en la uretra anterior, la va
urinaria es estril, por lo que, en general y si la muestra est recogida de una
forma adecuada, el aislamiento de cualquier microorganismo en la orina es
diagnstico de infeccin. A pesar de ello, el diagnstico de una infeccin
urinaria no siempre es sencillo. La dificultad ms importante es la posible
contaminacin de la orina recogida, con microorganismos presentes de forma
natural en la uretra anterior, regin genital y perineal. Este hecho puede
condicionar el desarrollo de microorganismos en los medios de cultivo, lo cual
no indica la existencia de una verdadera infeccin. De hecho, en ocasiones,
este desarrollo de microorganismos a veces oculta al verdadero patgeno, que

es incapaz de crecer sobre los medios de cultivo debido al sobrecrecimiento de

microorganismos contaminantes.
Otra dificultad es el hecho de que si la muestra de orina no se transporta y se
procesa de una manera rpida al Laboratorio de Microbiologa, se puede
producir una multiplicacin de los recuentos reales de microorganismos
presentes en la orina originando recuentos falsamente elevados. Adems, en
ocasiones, los microorganismos causantes del episodio de infeccin urinaria no
crecen sobre los medios de cultivo que se emplean habitualmente en el
laboratorio, por lo que si no hay sospecha clnica concreta el cultivo puede ser
informado como negativo; es el caso de microorganismos como Mycoplasma
spp, o Chlamydia spp.
PROCEDIMIENTO EN LA SIEMBRA DE UROCULTIVO
La siembra debe realizarse de la orina sin centrifugar con un ansa calibrada, lo
que permitir obtener una estimacin semicuantitativa del desarrollo
microbiano. Existen numerosos medios de cultivo para sembrar una muestra
de orina. La eleccin del medio de cultivo debe contemplar la relacin costobeneficio, de modo de elegir la opcin que permita la recuperacin de la
mayora de los patgenos con el menor costo posible.
Para tal fin, el microbilogo debe tener en cuenta cierta informacin bsica:
i. El 70-80% de los urocultivos enviados al laboratorio resultan "negativos".
ii. El 85-90% de las IU son producidas por enterobacterias.
iii. De los grmenes gram-positivos, los que se aislan con mayor frecuencia son
enterococos y estafilococos.
iv. El medio CLED permite el desarrollo de bacilos gram-negativos, estafilococos
y enterococos. Los medios de Levine, EMB o MacConkey permiten nicamente
la recuperacin de bacilos gram-negativos. La mayora de los grmenes
(incluyendo estreptococos y corinebacterias) desarrollan en agar sangre, pero
este medio no permite la recuperacin de Haemophilus spp., ni neisserias
patgenas (gonococos y muchas cepas de meningococos).
El agar chocolate posibilita la recuperacin de todos los microorganismos
mencionados anteriormente.
Teniendo en cuenta estos conceptos, el microbilogo tiene varias opciones para
la siembra racional de la orina.
a. Siembra de acuerdo a la observacin previa del sedimento. Este
procedimiento ofrece la ventaja de cultivar el microorganismo en el medio ms
apropiado, tanto para su desarrollo, como para su caracterizacin

macroscpica (aspecto de la colonia, fermentacin de lactosa, tipo de

hemlisis, etc), por lo que posibilita orientar con mayor certeza el esquema
inicial de identificacin. La desventaja es que demanda ms tiempo que la
siembra "a ciegas".
Uno podra entonces establecer el siguiente esquema de siembra de acuerdo al
sedimento:
i. Sedimento normal y ausencia de grmenes: media placa de CLED.
ii. Sedimento patolgico y ausencia de grmenes: media placa de agar sangre
o chocolate y media de CLED, Levine o MacConkey.
iii. Presencia de bacilos, independientemente del sedimento: placa entera de
CLED, Levine o MacConkey.
iv. Presencia de cocos, independientemente del sedimento: placa entera de
agar sangre o agar chocolate.
b. Siembra "a ciegas". Esta opcin es ms prctica y sencilla que la anterior.
Sin embargo, tiene la desventaja de la demora potencial en la recuperacin o
identificacin del microorganismo. En la Argentina y en Europa el medio ms
utilizado es el CLED. Se puede sembrar media placa, pero esto muchas veces
entorpece la obtencin de colonias aisladas o la visualizacin de mezcla de
grmenes. Se debe recordar adems, que en este medio no desarrollan varias
especies que pueden causar IU (corinebacterias, estreptococos y otros), por lo
que un sedimento patolgico sin recuperacin de grmenes, o cualquier otro
elemento que sugiera IU, debe promover la resiembra de la orina en agar
sangre o agar chocolate, antes de asumir la muestra como "negativa". En los
EEUU se prefiere realizar la siembra inicial en agar MacConkey y agar sangre.
c. Segn patologa de base. Si se tiene oportunidad de conocer la patologa de
base del paciente mediante una buena comunicacin con el mdico tratante, o
de la solicitud expresa por escrito en forma rutinaria al recibir la muestra, se
puede establecer alguna discriminacin en los medios a emplear. Los
urocultivos
de
pacientes
urpatas,
con
malformaciones,
tumores,
instrumentacin o traumatismos de las vas urinarias merecen la utilizacin de
2 medios (CLED y agar chocolate). Para el resto de pacientes, alcanzara slo
con la siembra de una placa de CLED.
INTERPRETACION Y VALORACION DE UN UROCULTIVO
Para la valoracin del urocultivo se cuantifica el nmero de colonias crecidas
por mililitro de orina. Resultados:
1. Menos de 10.000 UFC/ml. Se informar se aslan menos de 10.000 UFC/ml.
En casos especiales, como nios que precisan un urocultivo de control despus

de una infeccin pasada, embarazadas o diabticos, y siempre en caso de

cultivo puro, puede informarse del nmero de colonias y una identificacin
mnima.
2. De 10.000 a 100.000 UFC/m. Si corresponde a un nico microorganismo
patgeno, se indicar el nmero de colonias, identificacin a nivel de especie y
antibiograma con la indicacin de valorar clnicamente. Con dos
microorganismos aparecer el nmero de colonias, una identificacin de
gnero y se solicitar una nueva muestra. Con tres o ms uropatgenos se
considera muestra contaminada, pues es difcil saber si alguno de ellos est
causando la ITU.
3. Ms de 100.000 UFC/ml. En cultivo puro de uno o dos uropatgenos, en el
informe aparecer la identificacin por especie y el antibiograma de cada uno
de ellos. Si crecen tres o ms, consideraremos la orina contaminada.
El urocultivo puede ser negativo o tener recuentos bajos en caso de: a)
tratamiento antibitico previo; b) miccin reciente, a menudo secundaria al
sndrome cstico; c) obstruccin uretral; d) pH urinario muy bajo; e) infeccin
por microorganismo exigente o de crecimiento lento. Especial atencin
merece cualquier cantidad de colonias de SGB en gestantes.
Urocultivo negativo.
No hay infeccin de orina. Se puede expresar como: Cultivo negativo,
crecimiento negativo o no se aslan bacterias patgenas. Todas estas son las
distintas maneras de expresar lo mismo, que no existe infeccin, que todo est
bien.
Contaminacin, o muestra contaminada.
La contaminacin se produce cuando ha habido algn fallo en el proceso de
recogida de la muestra. En las muestras contaminadas suele haber crecimiento
bacteriano, pero, o bien es una cantidad demasiado pequea para pensar que
existe infeccin y es necesario comprobarlo con una nueva muestra, o hay una
mezcla de bacterias que hacen pensar en errores en el proceso de recogida de
la orina. Las causas de un cultivo contaminado pueden ser por que no se ha
lavado bien la zona o por que no se ha desechado la porcin inicial de la
miccin.
Cultivo positivo.
Este resultado se da cuando realmente hay una infeccin de orina. En el
informe se debe indicar el nmero de UFC/cc (Unidades Formadoras de
Colonias por centmetro cubico), el tipo de bacteria que est produciendo la
infeccin (las ms comunes son Escherichia coli o Proteus spp). El informe se
complementa con un antibiograma.

Cada mes hay que realizar el urocultivo para "vigilar" todo el embarazo que no
se repita la "situacin de riesgo" para la infeccin urinaria. Podramos
considerar que esa mujer embarazada ha sufrido alteraciones en vas urinarias
que predisponen a la colonizacin del aparato urinario y hay que vigilar.
El problema es cuando este cultivo de control sigue siendo positivo. Existe
predisposicin en este aparato urinario a la colonizacin durante el embarazo
con el consiguiente riesgo de infeccin y debemos volver a tratar de suprimir la
bacteriuria con otro ciclo de tratamiento. Si no logramos en un segundo ciclo
de tratamiento que remita la bacteriuria hay que plantearse tratamiento
supresor durante todo el embarazo
DISCOS DE ANTIBIOTICOS PARA UROCULTIVOS
Estos discos se utilizan para la evaluacin semicuantitativa de la
susceptibilidad in vitro a los agentes antimicrobianos de bacterias de rpida
proliferacin y varias especies difciles mediante un mtodo de difusin en
agar.
Este mtodo se basa en un procedimiento normalizado publicado por la WHO y
adoptado como estndar consensuado por la CLSI, CA-SFM y EUCAST (se revisa
peridicamente).
El principio del mtodo involucra la aplicacin de una cantidad determinada de
antimicrobiano en un reservorio (disco de papel, pastillas con drogas en estado
cristalino, etc.) en la superficie del agar sobre la cual se ha distribuido un
inculo del microorganismo en cuestin; se formar as, por difusin, un
gradiente de concentracin de antimicrobiano alrededor del reservorio y la
sensibilidad del microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de
inhibicin del crecimiento bacteriano.
El dimetro obtenido depender no slo de la sensibilidad del microorganismo
y la carga del disco, sino tambin del espesor de la capa de agar Mueller
Hinton, su pH y composicin, de la capacidad de difusin de la droga en ese
medio, de la temperatura y atmsfera de incubacin, de la velocidad de
duplicacin bacteriana, del tamao del inculo y la fase de crecimiento de la
bacteria, etc. Todas estas son las variables ms importantes que afectan el
resultado del antibiograma.
Una vez colocado el disco en la superficie del agar, la difusin del antibitico
que contiene comienza instantneamente y sigue hasta alcanzarse un
gradiente continuo de concentraciones alrededor del reservorio. Este gradiente
se alcanza aproximadamente a las 6 hs. El tamao de la zona de inhibicin
depender del equilibrio entre la difusin del antibitico y la velocidad de
crecimiento del microorganismo. Las recomendaciones del CLSI son: colocar los
discos dentro de los 15 minutos de inoculada la placa y proceder a la

incubacin de la misma dentro de los 15 minutos posteriores a la colocacin de

los discos. Cualquier variacin en estos tiempos ocasionar un desplazamiento
del equilibrio antes mencionado que se traduce en errores en el tamao de la
zona de inhibicin. Como la difusin del disco comienza instantneamente
despus de apoyado sobre el agar, estos nunca deben levantarse para
cambiarlos de lugar en el antibiograma porque seguramente ya no tendrn la
carga de antibitico original.
CONSERVACIN DE LOS SENSIDISCOS
Los discos deben ser almacenados como sigue:
-Refrigerar los viales a 8C o menos, o congelar a -14C o ms bajo, en un
frezeer "non Frost o frost free".
-Viales de discos sellados que contienen drogas de la clase -lactmicos deben
ser almacenados congelados, excepto pequeas cantidades para trabajo
inmediato, las que pueden ser refrigeradas slo para una semana. Algunos
agentes como por ejemplo combinaciones de imipenem, cefaclor,
combinaciones de antibiticos -lactmicos con inhibidores de lactamasas.
Pueden conservar mayor estabilidad si se almacenan congelados hasta el da
de uso.
-Los viales de discos que no han sido abiertos deben ser sacados del
refrigerador o frezeer, 1 o 2 horas antes de usar para que igualen su
temperatura a la del ambiente antes de abrir. Este procedimiento minimiza la
cantidad de condensado que se forma cuando aire caliente toca los discos
fros.
-Una vez que un vial de discos se ha sacado de su paquete sellado, debe ser
puesto en un desecador bien sellado. Cuando se usa un dispensador de discos,
ste debe ser puesto con una cubierta ajustada y con un adecuado agente
desecante. El dispensador debe alcanzar la temperatura ambiente antes de
abrir.
La excesiva humedad se debe evitar remplazando el desecante cuando el
indicador cambia de color.
-Slo aquellos discos con fecha de expiracin del fabricante dentro del plazo
pueden ser usados.

METODO DE UROCULTIVO
Antes de iniciar el estudio de la muestra, el microbilogo debe conocer algunos
datos concernientes al paciente: edad, gnero, factores predisponentes,

sntomas, antecedentes de ITU, tratamiento actual o previo con antibiticos. El

paciente no debe haber recibido terapia antimicrobiana durante los tres das
anteriores a la recoleccin, excepto en los casos de control de tratamiento y
pacientes gravemente enfermos.
Cuando las muestras de orina son recolectadas por miccin puede ocurrir la
contaminacin de la muestra con bacterias habitantes de la uretra o de la
regin periuretral. Para descartar el aislamiento y la identificacin de una
bacteria contaminante como agente causal de una infeccin urinaria, se
recomienda realizar un recuento del nmero de UFC/ml de muestra de orina
recolectada por miccin. Este criterio puede ser aplicado tambin a las
muestras de orina recolectadas por cateterizacin pero, sin embargo, no se
aplica cuando la muestra ha sido recolectada por puncin suprapbica, por
cuanto se evita la contaminacin uretral o periuretral.
Durante mucho tiempo se ha aceptado el criterio que si una persona sufre de
una infeccin urinaria o una bacteriuria asintomtica tendr un recuento de
105 UFC/ml de un solo morfotipo colonial, dado que la mayora de las
infecciones urinarias son causadas por un solo tipo de microorganismo,
mientras que una persona sin infeccin urinaria tendr un recuento de <102
UFC/ml de dos o ms morfotipos bacterianos. Sin embargo, como se discute
ms adelante, si una persona con sintomatologa urinaria tiene un recuento de
<105 UFC/ml, el microorganismo aislado puede tener importancia clnica y no
puede ser simplemente descartado por haber resultado de un recuento ms
bajo.
Procedimiento.
a. Recuento por dilucin en tubo.
1. Aadir 0.1 ml de la muestra de orina (bien mezclada y sin centrifugar) a 9.9
ml de solucin salina estril (10-2).
2. Mezclar bien y transferir 0.1 ml de esta dilucin a cada una de las placas con
medio (10-3).
3. Distribuir bien el inculo sobre la superficie del agar utilizando un asa estril
o una esptula de Drigalski.
4. Incubar las placas de los medios inoculados a 35 a 37C por 18-24 horas. Las
placas de agar sangre deben ser incubadas en jarra con candela.
5. Luego del periodo de incubacin determinar el nmero de colonias en la
superficie y el nmero de UFC/ml multiplicando el nmero de colonias por el
factor de dilucin (103).
b. Recuento por inoculacin directa con asa calibrada.

1. Introducir verticalmente un asa calibrada de 0.01 ml (10 l) o de 0.001 ml (1

l) estril justamente por debajo de la superficie de la muestra de orina (bien
mezclada y sin centrifugar).
2. Inocular por estra sobre toda la superficie del medio de cultivo.
3. Sin flamear nuevamente el asa, repetir el procedimiento para el segundo
medio de cultivo a utilizar.
4. Incubar las placas de los medios inoculados a 35 a 37C por 18-24 horas. Las
placas de agar sangre deben ser incubadas en jarra con candela.
5. Luego del perodo de incubacin determinar el nmero de colonias en la
superficie del medio de cultivo y el nmero de UFC/ml multiplicando el nmero
de colonias por el factor de dilucin (10 2 para un inculo de 0.01 ml [una
colonia representa 100 UFC/ml], 103 para un inculo de 0,001 ml [una colonia
representa 1,000 UFC/ml]).
c. Recomendaciones para la inoculacin e incubacin de las placas.
Se recomienda utilizar para cada una de las muestras de orina una placa de
agar sangre y una placa de agar MacConkey. El agar MacConkey puede ser
alternativamente sustituido por agar Eosina-Azul de Metileno).
No se deben sembrar medias placas No se deben inocular dos o ms
muestras en una misma placa por el riesgo de provocar una contaminacin
cruzada de las muestras, particularmente por el fenmeno de swarming
provocado por especies de Proteus.
La superficie del medio de cultivo debe estar libre de humedad evidente, por
lo que se recomienda incubar los medios a 35 a 37C por 1-2 horas antes de
ser inoculados.
La incubacin de las placas a 35 a 37C en condiciones se realiza en
condiciones anaerbicas solamente cuando la muestra ha sido recolectada por
puncin suprapbica.
Examen de los medios de cultivo.
1. Examinar las placas que han sido incubadas a 35 a 37C por 18-24 horas.
2. Si no se observa crecimiento y la muestra ha sido recolectada por miccin o
por cateterizacin, reportar:
No se observa crecimiento > 103 UFC/ml, si se inocularon las placas por
dilucin en tubo (10 -3) o con asa calibrada de 1 l.

 No se observa crecimiento > 102 UFC/ml, si se inocularon las placas con

asa calibrada de 10 l.
3. Si no se observa crecimiento y la muestra fue recolectada por puncin
suprapbica, incubar las placas por 18-24 horas adicionales.
4. Si se observan colonias muy pequeas o diminutas, incubar las placas por
18-24 horas adicionales.
5. Si no se observa crecimiento y este resultado no correlaciona con lo
observado en la tincin de Gram de la muestra o con la condicin clnica del
paciente, incubar las placas por 18-24 horas adicionales.
6. Sin tampoco se observa crecimiento luego de una incubacin de 48 horas y
este resultado no correlaciona con lo observado en la tincin de Gram de la
muestra o con la condicin clnica del paciente, solicitar una muestra de orina
recolectada por puncin suprapbica para hacer un cultivo para bacterias
anaerobias.
7. Si se observa crecimiento, examine los cultivos por nmero de colonias
(UFC/ml) y por los diferentes morfotipos coloniales.
8. Realizar cuantificaciones adicionales segn la condicin clnica del paciente,
como se muestra a continuacin:
Tipo de
infeccin

Sintomatologa

Agentes

Pielonefritis

Fiebre,
dolor
en
flancos,
escalofros,
nuseas,
cilindros
leucocitarios
Asintomtica o disuria
y frecuencia
Dolor dorsal, fiebre,
escalofros
Disuria y frecuencia

Bacilos
Gram-negativos
Staphylococcus aureus

Cistitis
Prostatitis
Uretritis

Recuent
o
significa
tivo
105

Escherichia coli y otros

bacilos Gram-negativos
Bacilos Gram-negativos

105

Escherichia
Staphylococcus
saprophyticus

105

coli

105

Interpretacin de los resultados.

1. El criterio de un recuento de 10 5 UFC/ml se puede aplicar a la mayora de
las muestras de orina recolectadas por miccin y enviadas para cultivo.

2. En el caso de recuentos inferiores a 10 5 UFC/ml se puede aplicar una gua de

anlisis de los resultados (Anexo )
CONDICIONES AMBIENTALES Y DE LABORATORIO PARA LA SIEMBRA DE
UROCULTIVO
La mayora de las bacterias que se aslan en el laboratorio de microbiologa
clnica son agentes biolgicos del grupo 2 (Anexo ), aunque algunas estn
clasificadas dentro del grupo 3, y pueden crecer en medios de cultivo
bacteriolgicos
habituales.
Unas
son
muy
infrecuentes,
asociadas
principalmente a bioterrorismo, pero otras como Brucella spp o Salmonella
typhi no son infrecuentes en un laboratorio clnico. La manipulacin de cultivos
de bacterias del grupo 3 debe realizarse con un nivel de contencin 3. Si el
laboratorio no dispone de estas infraestructuras debe enviar los cultivos a un
laboratorio de referencia, con las condiciones de transporte dispuestas en las
normativas vigentes. El problema principal es que una bacteria del grupo 3, se
puede aislar sin que el microbilogo haya sido alertado de su posible presencia
y en un principio puede no ser reconocida. Como el mayor peligro que entraan
estas bacterias es la infeccin adquirida a travs de aerosoles, es importante la
utilizacin de cabinas de seguridad para la manipulacin de materiales
infecciosos que pueden producir salpicaduras o aerosoles y que el manejo de
los agentes patgenos sea realizado siempre, por personal especializado en
tcnicas microbiolgicas.
El laboratorio de bacteriologa general debe contar obligatoriamente con una
cabina de seguridad biolgica clase I, II o III (generalmente I o II), un
almacenamiento de seguridad para agentes biolgicos y al menos una
autoclave. Las autoclaves deben instalarse en reas separadas pero cercanas
al laboratorio de bacteriologa general, habitualmente en el rea de
preparacin de medios de cultivo y/o de limpieza de material y esterilizacin.
La existencia de un rea especfica para almacenamiento de medios y
reactivos se recomienda siempre que el espacio lo permita, pues de otra
manera es difcil garantizar un suministro gil. En la prctica, los mayores
requerimientos para el laboratorio de microbiologa se refieren al
almacenamiento en fro, por lo que la cmara fra (2-8C) debe ser el elemento
central. En los de pequeo tamao y complejidad se podr recurrir a
refrigeradores y armarios individuales alojados en diferentes partes del
laboratorio, preferentemente diferenciados de los destinados a las muestras. Si
se disea de nuevo el laboratorio, la previsin de este espacio debera ser un
requisito, con independencia de su tamao.
Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un
microorganismo necesita para crecer, pero esto no es suficiente. En el
laboratorio, tambin es preciso aportar las condiciones ambientales adecuadas.

Tanto la temperatura como el pH deben estar dentro del intervalo apropiado;

con respecto al oxgeno, segn el caso, ser aportado o eliminado.
Temperatura
Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el
cual presenta su crecimiento ptimo. Pero, en general, los microorganismos
crecen ms rpidamente cuando se aumenta la temperatura, sin llegar hasta
un punto en el cual se daan las protenas. As pues, para favorecer un
crecimiento rpido, las bacterias se suelen cultivar a la temperatura ms alta a
la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio natural. Escherichia coli la
bacteria que ms frecuentemente se utiliza en investigacin, se encuentra en
el intestino humano y de otros mamferos. Este microorganismo crece
ptimamente a 37C, la temperatura del cuerpo humano. Los cultivos se
mantienen a temperatura constante en incubadores o en baos de agua,
ambos controlados termostticamente. Los incubadores, o estufas, son
cmaras con aire adecuados para el crecimiento tanto de cultivos slidos como
lquidos, preparados en cualquier recipiente, incluyendo placas Petri, tubos de
ensayo, o matraces. Los medios lquidos, distribuidos en tubos o matraces,
tambin pueden ser incubados en baos de agua caliente. Estos baos resultan
cmodos para incubar los cultivos que tienen que manipularse con frecuencia,
en la misma mesa de trabajo.
pH
El pH ptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece
en un intervalo de pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen
mejor a valores de pH prximos a la neutralidad, en el intervalo de 6,5 a7,5. Sin
embargo, los hongos crecen mejor entre 4,5 y 6,0.Aunque el pH de un medio
sea el adecuado cuando se inicia el cultivo, a menudo el crecimiento
microbiano lo modifica. Esto sucede porque algunos microorganismos usan
selectivamente algn componente cido o bsico del medio; o bien, porque
algn producto de su metabolismo es un cido o una base. Para disminuir los
cambios de pH en los medios definidos se suelen utilizar tampones. En los
medios complejos no suele ser esencial, porque sus materiales naturales
actan como tampones dbiles. Los tampones ms eficaces para valores
neutros de pH son los fosfatos y el carbonato clcico. Ambos se aaden
normalmente como nutrientes (fuente de fsforo y calcio); pero si se desea que
acten como tampones se precisarn cantidades mayores.
Oxgeno
La concentracin de oxgeno del medio es un determinante crtico para el
crecimiento bacteriano. Algunos microorganismos, a los cuales se denomina
aerobios estrictos, no pueden vivir sin oxgeno porque lo necesitan para
obtener energa. Otros microorganismos, llamados anaerobios estrictos, no

pueden vivir en presencia de oxgeno, para ellos es un agente txico. Otros

tipos de organismos, como los anaerobios facultativos o los anaerobios
aerotolerantes, pueden crecer tanto en presencia de oxgeno como en su
ausencia. Los anaerobios facultativos utilizan el oxgeno si disponen de l, pero
tambin pueden crecer sin l. Los anaerobios aerotolerantes no utilizan el
oxgeno, pero tampoco les afecta negativamente. Los organismos
microaerfilos requieren ambientes con bajas tensiones de oxgeno; las altas
tensiones, como las que existen en el are son txicas para ellos. Por tanto,
dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar, se tendr que
suministrar, restringir o eliminar el oxgeno. Suministrar oxgeno a las bacterias
que lo necesitan para crecer, o que crecen ms rpidamente en su presencia,
representa una dificultad tcnica. Los organismos aerobios que crecen en la
superficie de las placas de agar, obtienen suficiente cantidad de oxgeno de la
atmsfera, aunque el interior de toda colonia es completamente anaerobio.
Cuando los microorganismos crecen en medios lquidos es ms difcil, porque
no existe demasiado oxgeno disuelto en el agua y los microorganismos
aerobios lo consumen rpidamente. Todos los cultivos lquidos con ms de uno
o dos centmetros de profundidad deben oxigenarse. Esto se lleva a cabo
haciendo pasar una corriente de aire a travs del cultivo o agitndolo
vigorosamente de forma continua. En casi todos los laboratorios de
microbiologa existen agitadores, que son plataformas en las cuales se pueden
colocar los matraces convenientemente sujetos, para ser sometidos a un
movimiento de rotacin o a una agitacin de vaivn, que mezclan el aire con el
cultivo. El suministro de oxgeno a los cultivos de cientos de litros, como los
que se utilizan para producir antibiticos, es un desafi para la ingeniera.
Estos cultivos se remueven vigorosamente mediante grandes propulsores,
mientras se fuerza a que pasen a travs de ellos enormes cantidades de aire.
La exclusin del oxgeno del ambiente de los anaerobios tambin plantea
problemas tcnicos. Muchos microorganismos anaerobios se pueden cultivar en
tubos de ensayo expuestos al oxgeno, s el medio contiene un compuesto
qumico que reaccione con el mismo, como el tioglicalato, que reacciona con el
oxgeno manteniendo la parte inferior del tubo libre de oxgeno. Los anaerobios
tambin pueden cultivarse en placas Petri, si estas se incuban dentro de unos
contenedores, en los cuales se haya eliminado totalmente el oxgeno y se haya
reemplazado por un gas inerte como nitrgeno o argn. Tambin se puede
llevar a cabo una eliminacin qumica del oxgeno. Para ello, se comercializan
paquetes con unas mezclas (le reactivos que producen hidrgeno cuando se les
aade agua; el hidrgeno reacciona con el oxgeno en presencia de un
catalizador; la reaccin consume el oxgeno produciendo agua. Un mtodo muy
sencillo para disminuir la concentracin de oxigeno (y al mismo tiempo
producir anhdrido carbnico, el cual es beneficioso para ciertos
microorganismos) es encender una vela dentro de un recipiente y cerrarlo
hermticamente; la vela consumir oxgeno hasta que se extinga. Esta tcnica
se utilizaba para cultivar anaerobios aerotolerantes, como las bacterias del

cido lctico. Tambin ha sido utilizada para microacrfilos, especialmente

cuando el dixido de carbono les favorece. Los microorganismos anaerobios
estrictos, que mueren incluso con una breve exposicin al aire, pueden
cultivarse en jarras de cristal hermticamente cerradas. Cuando se abren estos
contenedores para aadir medio o tomar muestras, se utiliza una corriente de
nitrgeno para sacar el aire de la vasija. A veces, se requieren tcnicas ms
elaboradas. Es frecuente el uso de cmaras libres de oxgeno, en las cuales se
trabaja usando unos guantes conectados a las mismas. Algunos laboratorios
tienen habitaciones libres de oxgeno, donde los tcnicos trabajan con
mscaras de oxgeno.
Los medios pueden prepararse en el laboratorio o comprarse, ya sea parcial o
totalmente preparados. Los proveedores de los medios deben estar aprobados
y calificados. El proveedor calificado puede certificar algunos de los parmetros
de calidad detallados posteriormente. La prueba de promocin del crecimiento
y, si fueran apropiadas, otras pruebas de desempeo adecuadas, deben
realizarse para todos los medios, en cada lote y en cada envo. Cuando el
proveedor de medios totalmente preparados est calificado y provee
certificacin de la promocin del crecimiento para cada lote de medio y las
condiciones de transporte han sido calificadas, el usuario puede confiar en el
certificado del fabricante con una verificacin peridica de sus resultados.
Las materias primas (tanto formulaciones comerciales deshidratadas como
componentes individuales) y los medios deben almacenarse bajo las
condiciones apropiadas recomendadas por el fabricante, ej. ambiente fresco,
seco y oscuro. Todos los envases, especialmente aquellos de medios
deshidratados,
deben
estar
hermticamente
sellados.
Los
medios
deshidratados que estn apelmazados o agrietados o muestren un cambio de
color no deben utilizarse.
Los medios conteniendo antimetabolitos o inhibidores se deben preparar
utilizando material de vidrio dedicado para esos medios, debido a que el
arrastre de estos agentes dentro de otros medios podra inhibir el crecimiento y
la deteccin de microorganismos presentes en la muestra en anlisis. Si no se
emplea material de vidrio dedicado, los procedimientos de lavado para el
material de vidrio deben estar validados.
La distribucin de los medios despus de la esterilizacin debe realizarse bajo
flujo de aire unidireccional (UDAF, por sus siglas en ingls) para minimizar la
posibilidad de contaminacin ambiental. Esto debe considerarse como un
requisito mnimo para los medios que se usan en ensayos de productos
estriles, e incluye el enfriamiento de los medios, ya que las tapas de los
envases necesitarn ser retiradas durante el enfriamiento para prevenir la
condensacin.

Los dispositivos de microondas no deben utilizarse para la fusin de los medios

debido a la distribucin desigual del proceso de calentamiento.