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Subsecretaria De Educacin Superior

Tecnolgico Nacional De Mxico


Instituto tecnolgico de Tuxtla Gutirrez Chiapas
Departamento de ingeniera Qumica y Bioqumica
Ingeniera Bioqumica
Materia:
Microbiologa
Catedrtico:
QBP. Aura Flores Prez

Reporte de Prctica n1:


Efecto de los factores fsicos y qumicos sobre el desarrollo microbiano.

Presentan:
Araujo LLaven Carlos Mario
Garca Cruz Damaris Itzel.
Gonzales Hernndez Arnulfo
Ovando Ovando Cesar Ivan
Silva Garca Yarabi Cecilia

Tuxtla gutierrez Chiapas. Viernes 06 de marzo de 2015

ndice
Objetivo 3
Introduccin.. 4
Materiales y mtodos 6
Resultados y discusin 8
Conclusiones. 10
Bibligrafa.. 14

Anexos . 15

Objetivo general.
Determinar el efecto de los factores fsicos y qumicos sobre el desarrollo de la poblacin celular.

Objetivos especficos.

Determinar los niveles de contaminacin del laboratorio como mtodo de control


Determinar los efectos de la temperatura de inoculacin en el desarrollo microbiano.
Determinar los efectos del pH sobre el desarrollo celular.
Determinar la capacidad de inhibicin de diferentes compuestos qumicos sobre el
desarrollo celular.

Introduccin.
En la vida diaria controlar el desarrollo microbiano es de gran importancia para el profesional que
trabaja con organismos vivos, o bien con materiales estriles. Es importante conocer el
fundamento de las diferentes tcnicas y aplicarlas correctamente, algunos de los factores fsicos
que se utilizan para esterilizar es utilizar una temperatura elevada, en un medio hmedo y con
presin dentro del recipiente como es el caso de la autoclave la cual usado de manera correcta
inhibe el desarrollo por completo de todo microorganismo. Sin embargo este mtodo es limitado
al momento de tratar con instrumentos o reactivos sensibles al calor o de fcil volatilizacin.
La modificacin de los valores de pH en los microorganismos altera su actividad metablica e
incluso la puede inhibir, las diferentes temperaturas influyen en el crecimiento de los organismos
el efecto se observa desde las temperaturas bajas donde se disminuye la velocidad de reaccin
hasta la inactivacin en las enzimas, o desnaturalizacin debido a un aumento en la temperatura
como la usada en los hornos para esterilizar.

As pues de igual manera se propone probar el efecto de algunos compuestos qumicos que se
emplean como antimicrobianos, dejando abierta la propuesta para probar el efecto de algn
extracto vegetal con propiedades bacteriostticas o bactericidas.
En relacin a los compuestos propuestos en la bibliografa por su efecto desinfectante son:
metales pesados, halgenos, desinfectantes comunes como fenol, benzal, alcohol. Determinando
si el efecto es bactericida o no, y la eficacia de los compuestos probados observando su efecto
en el crecimiento microbiano.
Cuando una clula aislada comienza a crecer sobre un substrato slido, el resultado del
crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a
una clula viva y aislada que se encuentra en un substrato y en condiciones ambientales
adecuadas y produce una colonia en un breve lapso de tiempo.

Desde el punto de vista microbiolgico, un microorganismo muere cuando pierde de forma


irreversible la capacidad de dividirse. El fundamento de esta definicin es que si un
microorganismo ha perdido la capacidad de dividirse no podr formar una colonia sobre un medio
de cultivo y no ser posible detectar su presencia por los mtodos microbiolgicos tradicionales.
Es decir: cuando no se produce aumento en el nmero de microorganismos no hay crecimiento.
Sin embargo, un microorganismo puede estar muerto desde el punto de vista microbiolgico y
continuar desarrollando una actividad metablica que se traduzca, por ejemplo, en liberacin de
toxinas.
El crecimiento de los microorganismos est influenciado por factores fsicos y qumicos. Los
principales factores que afectan al crecimiento son:

Temperatura
pH
Disponibilidad de agua (Presin osmtica)
Oxgeno

Efecto de la temperatura
Cada microorganismo tiene una temperatura
de crecimiento adecuada. Si consideramos la
variacin de la velocidad de crecimiento en
funcin de la temperatura de cultivo, podemos
observar una temperatura mnima por debajo
de la cual no hay crecimiento; a temperaturas
mayores se produce un incremento lineal de la
velocidad de crecimiento con la temperatura de
cultivo hasta que se alcanza la temperatura
ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta temperatura ptima, la velocidad de
crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular.

pH
Es un parmetro crtico en el crecimiento de
microorganismos ya que cada tipo de microorganismo
tiene un rango de pH en el que puede vivir
adecuadamente, fuera de este rango muere.

Compuestos qumicos
Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las bacterias, pudiendo
ejercer dos tipos de efectos diferentes:

bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;


bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

En general, no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos,
hablamos respectivamente de agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para una
misma sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y otro
microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante el
que acta.
Cmo podemos saber que un microorganismo est muerto? El nico criterio vlido es la
prdida irreversible de la capacidad de divisin celular, es decir, de la prdida de viabilidad, y se
suele comprobar empleando tcnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en
medios slidos adecuados).

Agentes esterilizantes: son aquellos que producen la inactivacin total de todas las formas de vida
microbiana (o sea, su muerte o prdida irreversible de su viabilidad). (Tambin existen agentes
fsicos esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos anteriores).
Agentes desinfectantes (o germicidas): son agentes (sobre todo qumicos) antimicrobianos
capaces de matar los microorganismos patgenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en
muchos casos suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear
slo sobre materiales inertes.
Agentes antispticos: son sustancias qumicas antimicrobianas que se oponen a la sepsis o
putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja actividad txica hacia los
tejidos vivos donde se aplican.
Quimioterpicos: son compuestos qumicos con actividad microbicida o microbiosttica, con una
toxicidad suficientemente baja como para permitir su administracin a un organismo superior, en
cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que
los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.
Todos los das usamos agentes qumicos para controlar el crecimiento microbiano: detergentes y
jabones para el cuerpo y la ropa, cloracin de las aguas potables, antispticos para la piel y el
tratamiento de heridas, desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios,
quimioterpicos y antibiticos para tratar enfermedades bacterianas, etc.

Materiales y mtodos.
A continuacin se enlistan los materiales, los reactivos y el material biolgico que fueron
empleados para el desarrollo de la prctica:
Materiales
Tubos de 16 X 150 con tapn de
rosca
Cajas de Petri estriles.
Hisopos estriles.
Asa y porta asa.
Tubos de ensaye pequeos para
perforar el agar.
Matraces Erlenmeyer.
Mechero Bunsen.
Algodn.
Papel de estraza.
Gradilla para tubos

Reactivos
Material biolgico
Caldo nutritivo.
Cepa bacteriana de:
Agar nutritivo
Escherichia coli.
Benzal
Alcohol (presentacin
comercial)
Fenol (2, 4,8%)
Agua destilada
Flor
Yodo 2%

Tabla 1: materiales y reactivos empleados en esta Prctica.

Microorganismo.
Para el desarrollo experimental se emple una cepa bacteriana de Escherichia coli donada por el
cepario del laboratorio de microbiologa del instituto tecnolgico de Tuxtla Gutirrez la cual se
inoculo en caldo nutritivo para las pruebas fsicas y en agar nutritivo para las pruebas qumicas. El
procedimiento se desarroll de la siguiente manera y siguiendo diferentes experimentos.
Efecto de la temperatura
Para este experimento se incub a diferentes temperaturas por 482 horas siguiendo el desarrollo
del esquema 1. Luego de este tiempo se midi la turbidez y se enumer del ms turbio al menos
turbio. La turbidez en el medio es un indicativo de la poblacin celular pues la turbidez es
proporcional a la masa de las partculas en suspensin (clulas) y su medida nos permite estimarla.

Fig. 1. Diagrama de flujo de las pruebas del efecto de la temperatura en el desarrollo celular.

Efectos del pH
Para este experimento se inocularon cepas E. coli a en caldo nutritivo a diferentes pH (fig. 2). Se
incubo a 35 por 482 hrs. Terminado este tiempo se midi la turbidez de cada tubo del mas
turbio al menos turbio.

Fig. 2. Diagrama de flujo de las pruebas del efecto del pH en el desarrollo celular.

Contaminacin ambiental del laboratorio de microbiologa


Se prepararon cajas Petri con medios de cultivo estriles y se colocaron a prueba de esterilidad
por 482 hrs. Las cajas se abrieron en diferentes zonas del laboratorio y se evalu la
contaminacin en el ambiente midiendo la formacin de colonias en cada caja Petri(fig. 3).

Fig. 3. Diagrama de flujo de las pruebas de contaminacin ambiental en el laboratorio

Efecto de los factores qumicos antimicrobianos en el desarrollo celular.


Compuestos
Aceite esencial (recino)
Yodo
Etanol
Sulfato de cobre
Fenol
Benzal

Concentracin (%)
2
2
2
2,4,8
100

Se emplearon diferentes compuestos qumicos


para probar su efectividad de reducir la capacidad
de colonizacin de los MO que le confieren su
capacidad esterilizante.

Tabla 2. Compuestos qumicos probados

Fig. 4. Diagrama de flujo de las pruebas de capacidad de inhibicin de los diferentes compuestos

Resultados y discusin.
Temperatura y PH
Existieron temperaturas que disminuyeron la cantidad de microorganismos y se vio reflejada en la
turbidez de los medios. Se presenta en la tabla 3.
Temperatura ndice de turbidez
15
1
28
3
4+
35
4
4+
55
2
-

pH
ndice de turbidez
1
2
4
3
4+
Neutro
4
4+
Base
1
-

Tabla 3. Resultado de factores Fsicos en el desarrollo microbiano a) temperatura, b)


pH

Se han reportado que las cepas de E.coli del serotipo verotoxignica (ECVT) sobreviven durante
meses en el estircol contaminando las aguas superficiales (bebida y riego), las verduras y frutas y
la superficie de las tierras de cultivo. Estas bacterias se multiplican a temperaturas entre 6 y 50
C, con una temperatura ptima alrededor de 37 C. Tambin, pueden crecer en presencia de un
6% de NaCl, ya que son ms resistentes a estos compuestos que otras bacterias, como la
Salmonella. Para controlar el crecimiento hay que mantener los alimentos refrigerados y durante
la congelacin se inactiva. Son termorresistentes, pero se pueden eliminar con un tratamiento
trmico a 65 C.

Se desarroll adems de manera satisfactoria con un pH de 7 o neutro tomando en cuenta que su


PH optimo es 6-7. Se corroboran los resultados esperados.
Contaminacin ambiental del laboratorio de microbiologa.
De las pruebas preliminares; se puso a prueba de esterilidad 10 cajas Petri que posteriormente se
utilizaran para las inoculaciones. La prueba resulto positiva en todos los casos y nos dio como
resultado una efectividad del 100% en los protocolos de desinfeccin y esterilizacin. En el
recuento de la contaminacin en el rea de trabajo se obtuvo crecimiento de colonias no
especificadas pero con una morfologa irregular ondulada y plana (fig 5). Lo cual nos indica la
existencia de una considerable cantidad de MO en el laboratorio, sin embargo las medidas de
esterilizacin y las buenas prcticas demuestran sobreponerse a esto demostrando una eficacia
del 100%

Fig. 5. Caja Petri a prueba de contaminacin ambiental

Efecto de los factores qumicos antimicrobianos en el desarrollo celular.


Existen diferentes mecanismos de accin de los agentes qumicos que usamos comnmente como
desinfectantes algunos deben a este mecanismo su eficacia.
En esta prctica exponemos algunos agentes qumicos que se emplean comnmente como
desinfectantes y tambin probamos la eficacia de otros compuestos que no se conocen su
actividad desinfectante pero que sus compuestos podran o no funcionar como tales, para este
trabajo se encontr una mayor eficacia en el benzal (tabla 4). Se encuentra reportado que su
accin se atribuye a la inactivacin de las enzimas productoras de energa, desnaturalizacin de las
protenas celulares esenciales y la ruptura de la membrana celular.
9

Compuestos
Aceite esencial (recino)
Yodo 2%
Etanol 2%
Sulfato de cobre 2%
Fenol 2%
Fenol 4%
Fenol 8%
Benzal 100%

Dimetro de halo de inhibicin (cm)


0
1.7
0
2.8
1.25
1.35
1.60
3

Tabla 4. Resultado de los compuestos qumicos probados

La inhibicin por los fenoles se le atribuye a la destruccin que este genera en la membrana
citoplasmtica y la desnaturalizacin de las enzimas.

Conclusiones.
Con esta prctica podemos concluir que la temperatura afecta a los microorganismos esto quiere
decir que a medida que la temperatura aumenta las reacciones qumicas y enzimticas se
aceleran ya que cada uno de las bacterias tiene una temperatura ptima para su crecimiento,
dentro del laboratorio de microbiologa hay un alto ndice de contaminacin bacteriolgica
aunque este encendido el mechero, pero tambin afirmamos que cuando se abren las puertas del
laboratorio la masa bacteriolgica aumenta ms y es debido al aire que arrastra a todo tipo
de microorganismo que se encuentre en su camino, debido a eso se tiene que desinfectar y para
eso la manera ms efectiva para desinfectar son con el uso de los agentes antimicrobianos que
son aquellas sustancias naturales, sintticas o semisnnteticas que son capaces de inhibir el
desarrollo o de destruir los microorganismos patgenos infectantes, los efectos que causan estos
son bacteriosttico impiden el desarrollo del germen si causar destruccin, bactericida produce la
destruccin de los microorganismos.
Araujo LLaven Carlos Mario

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En el caso de la temperatura nos demuestra que este es un factor fsico que influye en el
crecimiento de la cepa bacteriana de E. Coli y que permite su supervivencia, si esta temperatura
est por debajo no hay crecimiento debido a que no existe un buen transporte de nutrientes.
Temperatura. 15C. 28C. 35C 55C.
Calificacin.

El pH ptimo para el crecimiento de la E. coli est entre 6 y 7, esto se ve reflejado en los


resultados obtenidos.
pH
Neutro. 1 4 14
Calificacin.
1
3 2 4

Los agentes qumicos son buenos antimicrobianos, puesto que inhiben el crecimiento de
E. coli; evitan la sntesis de sus cidos nucleicos, de protenas, o para el procesamiento de
aminocidos o azcares del medio, necesarios para la biosntesis de sus paredes o
membranas celulares.

Agente
Qumico:
Calificacin:

Benzal. Yodo
al 2%
3
7

Aceite
esencial.
8

Fenol
al 2%
1

Fenol
al 4%
2

Alcohol
al 1%
6

Fenol
al 8%
4

CuSO4
al 2%.
5

Halo (cm):

1.25

1.35

1.6

2.8

1.7

Garca Cruz Damaris Itzel.

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No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor ambiental. As,
unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie bacteriana, y en cambio ser
neutras o beneficiosas para otra.
Entendemos por factores ambientales, una serie de agentes fsicos y qumicos que modifican la
velocidad de crecimiento, provocando cambios que, a determinados valores de dichos factores
pueden llegar a ocasionar la muerte de los microorganismos, adems condicionan la distribucin
de los microorganismos en sus ecosistemas y hbitats naturales. Estos factores permiten a los
humanos controlar el crecimiento microbiano, por medio de la fijacin de parmetros para: la
mutagnesis, la esterilizacin y desinfeccin e inclusive la quimioterapia.
Es normal que como individuos medianamente perceptibles solemos visualizar un cambio en
nuestro entorno hasta el momento que este es demasiado grande en dimensiones y en impacto.
Es normal buscar el asombro en lo extraordinario, sin tener en cuenta que a la sombra de lo
ordinario se esconde lo verdaderamente extraordinario. En palabras de Antoine De Saint-Exupry:
Lo esencial es invisible a los ojos cunta razn tiene; fuera de un contexto metafrico, y es que
es a nivel celular donde se desencadenan los mecanismos que sostienen la vida en el planeta,
estos pequeos cambios fsicos, qumicos o ambientales son los que logran ser en impacto y
magnitud factores tan determinantes en la capacidad de prevalencia o adaptabilidad de una
especie. Pues debido a su pequeo tamao y a su estilo de vida individual, las clulas procariotas
sufren los cambios ambientales de un modo mucho ms directo e inmediato que las clulas de los
organismos pluricelulares. A lo largo de miles de millones de aos, los procariotas han venido
estando sometidas a diversas presiones ambientales, y han respondido evolutivamente creando
numerosos mecanismos de adaptacin. Un ejemplo de ello es que actualmente, las nicas formas
de vida existentes en determinados ambientes extremos son exclusivamente procariotas.
Desafiando a nuestras ideas preconcebidas de lo que es la vida normal, encontramos
extraordinarios seres vivos unicelulares viviendo cmodamente a pHs muy cidos o muy
alcalinos, medrando en salmueras y salinas, o reproducindose a temperaturas de ms de 100C y
a grandes presiones.

Ovando Ovando Cesar Ivan

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En el informe de desarrollo experimental se logr observar que tanto a altas como bajas
temperaturas el microorganismo no se desarroll adecuadamente. En consecuencia dentro de
un cierto margen, un aumento de temperatura supone un incremento en el crecimiento y
en el metabolismo hasta un punto que tienen lugar las reacciones de inactivacin. Es decir
que por encima de tal punto, las reacciones celulares caen rpidamente inclusive llegan a ser
cero. As para cada organismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no es
posible el crecimiento, una tempera optima a la que se produce el crecimiento ms rpido
y una temperatura mxima por encima de la cual no es posible el crecimiento. Estas tres
temperaturas que se llaman temperaturas cardinales o fundamentales, generalmente son
caractersticas de cada tipo de organismos, pero no son fijas, pues pueden ser ligeramente
modificados por otros factores del ambiente, en particular por la composicin del medio. La
temperatura mxima de crecimiento de un organismo determinado refleja probablemente la
inactivacin de una o ms protenas en la clula.
En este caso y trabajando con la E. Coli que es una enterobacteria que se encuentra generalmente
en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras, llegamos a la conclusin de que esta
cepa trabaja de mejor manera en pH neutro o cido y a una temperatura de 35 grados centgrados
por lo que en los animales se reproduce con toda facilidad. Tambin se comprob que los mejores
antimicrobianos para esta bacteria experimentalmente son el benzal y el sulfato de cobre ya que
previenen el crecimiento ya sea por accin esttica o por muerte Y finalmente que el atar nutritivo
es un medio excelente para su crecimiento. Por lo que en pruebas posteriores se seguir utilizando
Silva Garca Yarabi Cecilia

En esta prctica pudimos observar que cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual
es posible el crecimiento y normalmente posee un pH optimo bien definido. Al igual que una
temperatura donde se desarrolla adecuadamente. la mayora crece en un margen de pH de
2- 3 unidades. Esto concuerda con el hecho de que la mayora de los amientes naturales tiene
un valor de pH entre 5 y 9 y los microorganismos con pH ptimo de estn orden son los ms
comunes al igual que una temperatura de 35c.

Gonzales Hernndez Arnulfo

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Bibliografa

Brock, Biologa de los microorganismos, Pearson Prentice Hall, Mxico 2004, 151 165 pp.

EFSA- European Union Summary Reports on Trends and Sources of Zoonoses, Zoonotic
Agents and Food-borne Outbreaks in 2009 and 2010 - specifically for the data on
Salmonella, Campylobacter, verotoxigenic Escherichia coli, Listeria monocytogenes and
foodborne outbreaks.

AESAN- Informe sobre medidas de prevencin y recomendaciones aplicables para evitar


posibles
infecciones
alimentarias
por
cepas
de
Escherichia
coli
verotoxignicos/productores de toxinas Shiga/enterohemorrgicos (VTEC/STEC/EHEC).

http://web.archive.org/web/http://www.feriadelasciencias.unam.mx/anteriores/xviiferia/
23.pdf

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Anexos

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