Trabajo prctico N3

Microscopa

INTRODUCCIN
El uso del microscopio se remonta a 1665 cuando Robert Hooke observ los restos
celulares que permanecan en un trozo de corcho, con un microscopio de luz, posteriormente

a esto, se pudieron observar varios tipos de clulas hasta que en 1838 Scleiden y Schawn
propusieron la teora celular, Toda clula proviene de otra prexistente, gracias a las
muestras observadas durante aos.
Debido a que las clulas pertenecen al mundo microscpico, es decir, a aquel que no es
visible por el ojo humano debido a su limitado poder de resolucin, es necesario utilizar un
instrumento que nos permita observar y estudiar los fenmenos que ocurren en el, para ello,
la invencin del microscpico a sido de gran ayuda y cada da evoluciona ms haciendo
posible la visualizacin de organismos y estructuras cada vez ms pequeas.

OBJETIVOS
El objetivo de este trabajo prctico es observar muestras frescas a travs del microscopio
ptico para conocer sus partes, funciones, poderes y lmites mediante el desarrollo emprico,
previo anlisis terico.

MATERIALES Y MTODOS
El prembulo del experimento fue conocer la herramienta principal para ejecutarlo, el
Microscopio; de l se conoci el revlver, los objetivos, el foco y el condensador, entre otros
(destacando de estas partes su importancia para el experimento).

Al iniciar, se explor el poder de resolucin (4X, 10X, 40X y 100X),calibrar las imgenes,
entre otras facultades. Esto ayud en el resto del experimento, al tener experiencia adquirida
sobre los microscopios. Con estos hubo que realizar unos clculos de dimetro, observar las
muestras fijadas anteriormente (muestras arregladas y no frescas), entre ellas mencionamos
el frontis sanguneo, el intestino delgado de rata y el tejido heptico.
Las muestras estaban dispuestas sobre un portaobjeto y hermticas con el cubreobjetos. En
el caso de la hoja de Elodea sp y del catafilo de cebolla, hubo que agregarles agua para que
el cubre objeto se uniera a la muestra y al portaobjeto, dando una un ambiente hermtico a
estas muestras frescas (adhesin por ambiente acuoso).
Las muestras fijas puestas a una resolucin de aumento de 4 y 10 veces, estn fijadas con
formaldehido-alcohol-cido actico, lo que nos permite observar slo algunos componentes,
ya que los vivos (frescos) han desaparecido con el paso del tiempo.
Los protozoos (paramecios) fueron encontrados, y se not a travs del microscopio su
objetivo, salir del medio acuoso.
El mtodo de crear una muestra eficiente fue dado en la gua, citando es:
1) Coloque una gota de la muestra real lquida en el centro de un portaobjetos limpio,
utilizando una pipeta Pasteur con gotario.
2) Tome cuidadosamente un cubreobjeto (sin dejar marcas de huellas dactilares) y colquelo
en un ngulo de 45 sobre el portaobjetos. Deslcelo hasta ponerlo en contacto con la gota de
agua y djelo caer gradual y lentamente sobre ella. Trate de evitar la formacin de burbujas
de aire pues interferirn con su observacin.
3) Limpie el exceso de agua con un trozo de papel absorbente, cuidando de no dejar pelusas
sobre el cubreobjeto.
4) Comience la observacin microscpica de su preparacin en el objetivo 10x y prosiga
aumentando gradualmente el aumento.
Cita de la gua de Lab Bio Cel pagina 35. Microscopia gua 3, BIO 035 2012.

RESULTADOS
Actividad N 1: Clculo del aumento y lmite de resolucin del microscopio
Lentes Objetivos
AUMENTO
4X
10X
40X
100X

APERTURA NUMRICA
0,10
0,25
0,65
1,25
Lentes Oculares

AUMENTO
10X

APERTURA NUMRICA
18
Condensador

APERTURA NUMRICA (NA)

1,25
Resolucin Mxima
Apertura del Lente 100x: 1,25
Apertura del Condensador: 1,25
Apertura numrica de la interfase de aire: 1,0
Apertura numrica de la interfase de aceite: 1,3 - 1,5
Lmite de resolucin:

0,61 x 400 nm
Na

0,61 x 400 nm
1,25

= 195,2 nm = 0,1952m

Resolucin:

Na
0,61 x 400 nm

1,25
0,61 x 400 nm

= 5,12x10-3 nm = 5,12x10-6m

Qu conclusin se pueden sacar de estos resultados?

Actividad N 2: Manejo de Microscopio.

Observacin de letra e impresa

40 veces

Fig.1: Letra
Fig.2: Letra e aumentada 100 veces

e Aumentada

La letra e sobrepuesta en el portaobjetos,al ser observada mediante el microscopio, se ve

invertida y aumentada dependiendo el objetivo utilizado. Por los conocimientos tericos
previos se considera una imagen virtual.

Actividad N 3: Determinacin del dimetro del campo visual

DCV obj.x =

DCV obj .4 X aumento obj.4 X

aumento obj . X

Fig 3: Papel milimetrado aumentado 40 veces

veces
Objetivos
4X
10X
40X
100X

Fig 4. Papel milimetrado aumentado 100

DCV (En cm)

4,25 cm
1,7 cm
0,425 cm
0,17 cm

DCV (En m)
4,25x104 m
1,7x104 m
4,25x103 m
1,7 x 103 m

Actividad N 3: Observacin de preparaciones biolgicas permanentes

Fig 5: Frotis sanguneo 40 veces aumentado

aumentado

Fig 6: Frotis sanguneo 100 veces

Fig7: Frotis sanguneo 400 veces aumentado

aumentado

Fig 9: Corte Intestino delgado de rata

40 veces aumentado

Fig 8: Frotis sanguneo 1000 veces

Fig 10: Corete intestino delgado de rata

100 veces aumentado

Fig 11: Tejido heptico

40 veces aumentado

Fig 12: Tejido heptico

100 veces aumentado

Actividad N 4. Observacin de una preparacin fresca (muestra real)

En el siguiente procedimiento se analizara una muestra liquida para observar los organismos que
se encuentran en ella, esperando, con el aumento ver la movilidad y forma de los mismos.
1.- Primero con el objetivo del revlver en 4x.
En esta imagen se observa euglenas esparcidas por
todo el campo visible del microscopio, no se
observa pero estas presentan un movimiento
flagelar el cual es regularmente lento y dentro de
un mismo rango de espacio a diferencia del
movimiento ciliar que es ms rpido y puede
abarcar mayor cantidad de espacio.
Fig. Muestra liquida, Aumentado 40 veces

Fig. Paramecios, Muestra liquida aumentada 40 veces + zoom de cmara

Los Paramecios tienen un movimiento ciliar, el cual es ms rpido y abarca un mayor

rango de espacio, por lo cual resulto mas difcil y difuso en la imagen encontrarlos.
En los costados de la muestra, al pasar de los minutos, es donde se concentraba la mayor
cantidad de protozoos, ya que se desplazaban buscando una salida.
Al intentar aumentar el tamao a 10x y 40x, no logramos ver con claridad la muestra, y las
imgenes , y mucho menos se pudo capturar una toma.

Actividad N 5: Determinacin del tamao celular

TC =

DCV obj . X
n de clulas

para la determinacin dl tamao celular se ocupara la muestra de frotis sanguneo aumentada

en 400 veces (40x), y usando un DCV de 4,25x103 m. al contabilizar el numero de clulas
se cuncluyo que hay 348 celulas aproximadamente en el campo visual observado. Por lo
tanto:

TC =

4,25 x 10 3 m
348 clulas

= 12,2 m