Conceptos

El microbiotendrla ltima palabra.

1. Los microorganismo s se utilizan en microbiologa industrial y

biotecnologa para crear una gran variedad de productos y para ayudar
en el mantenimiento y mejora del ambiente
2. La mayor parte del trabajo en microbiologa industrial se est
realizando utilizando microorganismos aislados de la naturaleza o
modificados mediante mutaciones. Mediante la biotecnologa moderna
se pueden producir microorganismos con las caractersticas genticas
deseadas.
3. La mayora de los microorganismo s an no se han cultivado en el
laboratorio ni descrito. Un desafo importante de la biotecnologa es la
bioprospeccin, el cultivo y caracterizacin de estos microorganismo s
observados pero no cultivados.
4. La evolucin forzada y las mutaciones adaptativas son algunos de los
mtodos de la biotecnologa moderna. Estos mtodos se emplean
en procesos que genricamente se denominan ingeniera gentica
natural.
5. El desarrollo de medios de cultivo y condiciones especficas para el
crecimiento de microorganismos es una parte principal de la microbiologa
industrial y la biotecnologa. Los microorganismo s pueden multiplicares en
ambientes controlados con limitaciones especfi.cas para maximizar la
sntesis de los productos deseados.

Louis Pastur.

a microbiologa industrial y la biotecnologa emple;

an microorganismos para sus objetivos especficos,
ya sean la obtencin de nuevos productos de inters
econmico, o para una mejora ambiental. La microbiologa
industrial fue inicialmente desarrollada para la obtencin
de productos, como compuestos farmacuticos o mdicos
(antibiticos, hormonas, esteroides modificados), materias

primas en general, solventes, cidos orgnicos, compues...

tos qumicos aminocidos y enzimas de valor econmico.
Los microorganismo s empleados en la industria se hanais-"

lado de la naturaleza y, en muchos casos, fueron modificaS!

dos mediante los procedimientos
seleccin.

clsicos de mutacin;:

6. El crecimiento microbiano en suelos, aguas y otros ambientes, en donde ya

se encuentran complejas comunidades microbianas, no se puede controlar
completamente, y no es posible precisar los factores limitantes o las
condiciones fsicas.

La era de la biotecnologa se ha desarrollado muy

7. El crecimiento microbiano en ambientes controlados es caro; se utiliza

para sintetizar metabolitos microbianos de gran valor y productos para su
uso en salud animal y humana. Comparativamente, la utilizacin de
microorganismos en los ambientes naturales y en la agricultura son de bajo
coste, ya que no requieren la sntesis de productos microbianos
especficos.

mente en las ltimas dcadas, y se caracteriza por la modifi-,

cacin de microorganismosmediante tcnicas de biologa
molecular, como la tecnologa del DNA recombinant6:
(vase el Captulo 14). Actualmente, es posible manipularla
informacin gentica y disear productos tales como prote~

8. En sistemas de crecimiento controlado, los diferentes productos son

sintetizados durante y despus del crecimiento. La mayora de los
antibiticos se producen despus del crecimiento activo.

nas, o modificar la expresin de genes especficos. Adems;

9. Los antibiticos y otros productos microbianos siguen contribyendo al

bienestar de animales y de los seres humanos. Los productos ms recientes
incluyen compuestos antitumorales. La biologa combinatorial est
haciendo posible la produccin de antibitico s hbridos con propiedades
exclusivas.
10. Los productos de la microbiologa industrial tienen un gran impacto sobre
todos los aspectos de nuestras vidas. A menudo, los empleamos como
suplementos alimenticios o agentes acidificantes. Otros productos se
utilizan como biosurfactantes y emulsificantes en una gran variedad de
aplicaciones.
11. La degradacin es crtica para comprender las contribuciones microbianas
en los medios naturales. La estructura qumica de los sustratos y las
caractersticas de la comunidad microbiana influyen extraordinariamente en
el destino final de los elementos qumicos. Los procesos de degradacin
anaerbica son importantes en la iniciacin de las modificaciones de
numerosos compuestos, especialmente de los clorados y halogenados. La
degradacin puede producir compuestos ms simples o modificaciones que
sean menos txicos que los originales.
12. La utilizacin de biosensores est en amplio desarrollo, nicamente
limitado por los avances en biologa molecular y otras ciencias.
Actualmente es posible, gracias por ejemplo al empleo de los
sistemas biotina-estreptavidina, detectar a tiempo real patgenos
importantes.
13. Microarrays de genes, basados en la tecnologa del DNA
recombinante, permiten el estudio de la expresin gnica. Estos sistemas
se estn empleando para el anlisis de los sistemas microbianos
complejos.
14. Bacterias, hongos y virus se estn empleando como biopesticidas,
reduciendo la dependencia de los pesticidas qumicos.
15. Las aplicaciones de los microorganismo s y su tecnologa especial tiene
tanto aspectos positivos como negativos. Es necesario considerar los
posibles impactos a gran escala de estas aplicaciones en tan rpido
desarrollo.

rpida...

la informacin gentica puede ser transferida entre organis""

mos muy diferentes, como entre bacterias y plantas.

La seleccin y uso de microorganismos en microbiologa industrial y biotecnologa son desafos que requierenun
conocimiento profundo del crecimiento y manipulacin

microbianos, as como de las interacciones con otros organismos. La utilizacin de microorganismos en microbiologa industrial y biotecnologa sigue una secuencia lgica.En
primer lugar, es necesario identificar o crear unos microoH
ganismos que realicen el proceso deseado de la formams
eficiente. A continuacin, estos microorganismos se utilizan
en un ambiente adecuado, como un gran incubador (fermen~,
tador), o en un sistema complejo, como en el suelo o las
aguas, para lograr los objetivos especficos.

42.1

Eleccin de microorganismos
para la microbiologa industrial
y biotecnologa

El primer objetivo para un microbilogo industrial es

encontrar un microorganismo adecuado para su empleoen
el proceso deseado. Para ello, se pueden emplear variosprocedimientos, que van desde el simple aislamiento del micro-.
organismo en la naturaleza, hasta el empleo de sofisticadas
tcnicas molecularespara modificarun determinadomicro~

organIsmo.

in vitro.
Adaptado de: D. A. Cowan. 2000. Microbial genomes-the
Tibtech 18:14-16. Tabla 1, p. 15.

untapped resource.

Bsqueda de microorganismos en la naturaleza

Hasta hace relativamente poco tiempo, las fuentes principalesde cultivos microbianos fueron las naturales, como muestrasdel suelo, agua, o incluso el pan y la fruta en descomposicin. Los microbilogos examinaron cultivos de todas las
regiones del mundo en un intento de identificar cepas con
lascaractersticas adecuadas. En cualquier caso, hoy en da,
apesarde las nuevasmetodologas,el interspor la caza

denuevos microorganismos en la naturaleza contina con

muchoentusiasmo.

Debido a que slo una pequea parte de las especies

microbianas de los entomos naturales pueden ser aisladas y
cultivadas (Tabla 42.1), hay un continuo esfuerzo en todo el
mundo por encontrar nuevos microorganismos, incluso en los
ambientes que se han estado examinando durante dcadas. A
pesar de estos esfuerzos tan continuados, pocos microorganismos se han podido cultivar y estudiar; la mayor parte de
los microorganismos aislados en la naturaleza no han sido
cultivados o identificados, aunque las tcnicas moleculares
estn ahora haciendo posible obtener informacin de estos
micrnorganiWIos no cultifl'ados (Tabla 42.2). El continua
inters por el estudio de la ecologa y diversidad microbiana,
especialmente en los ambientes extremos (Recuadro 42.1),
est facilitando la incorporacin de nuevos microorganismos en la industria. Asimismo, se estn identificando micro-

1084

Captulo 42

Microbiologa industrial y biotecnologa

Estas mutaciones dirigidas por el entorno tienen la capacidad potencial de producir microorganismos con nuevas
propiedades degradativas o biosintticas.
Aunque est generando mucha controversia, las respuestas de microorganismos al estrs proporciona un nuevo
potencial en la generacin de microorganismos con nuevas
capacidades para su empleo en la microbiologa industrial y
la biotecnologa.

Conservacin de microorganismos
Una vez que se selecciona o crea el microorganismo deseado
para ser utilizado con un propsito especfico, el inters se
centra en la conservacin del mismo para su posterior
empleo. La transferencia peridica de cultivos a medios frescos se ha empleado en el pasado, aunque este mtodo puede
derivar en mutaciones y cambios fenotpicos en los microorganismos. Para evitar estos problemas, pueden utilizarse
diversas tcnicas de conservacin de cultivos para mantener
las caractersticas deseadas del cultivo (Tabla 42.6). Con frecuencia se utilizan la liofilizacin o deshidratacin por congelacin, y el almacenamiento en nitrgeno lquido de los
microorganismos. Aunque estas dos tcnicas son complicadas y requieren un equipo costoso, permiten almacenar los
cultivos microbianos durante aos sin que pierdan viabilidad
ni acumulen mutaciones.

1. Qu tipos de tcnicas de DNA recombinante se estn

utilizando para modificar la expresin gnica de
microorganismos?

Tabla 42.6

2. Defina los trminos ingenierapara el controlmetablico,

ingeniera de vas metablicas, evolucin forzaday
mutaciones adaptativas?
3. Por qu la ingeniera gentica natural puede ser deutilidaa
en la biotecnologa microbiana moderna?
4. Qu mtodos pueden utilizarse para la conservacind~
microorganismos?

Crechniento de microorganismos
en ambientes controlados
En numerosos procesos industriales, los microorganisD;lQs
deben multiplicarse utilizando medios especficamentedis~
ados y en condiciones cuidadosamente controladas,in~u::!
yendo la temperatura, aireacin y adicin de nutri&J1t~
durante el curso de la fermentacin. El crecimientod~

microorganismos en tales condiciones controladases cQstQ~

so, y este enfoque nicamente se emplea cuando el produ~to
deseado puede venderse con un gran beneficio. Estoscost&S
tan elevados derivan del cultivo del microorganismoenfiir~

mentadores a gran escala, del propio equipo, la prepara~in

del medio, la purificacin del producto y el empaquetadg,
~
los esfuerzos de marketing. Adems, si es un productopar~
su uso para la salud animal o humana, se puede requeriruna
inversin de millones de euros. Estos sistemas suelenpat~n;,t
tarse para asegurar la recuperacin de la inversin a largo
'"
plazo. Evidentemente, los productos que se intentenintrogy..;;,
cir en el mercado deben tener un alto valor econmico.11
desarrollo de los medios de cultivo adecuados y el cr~~...

Mtodos empleados para conservar cultivos de inters en microbiologa industrial

y biotecnologa

Mtodo

Comentarios

Transferencia peridica

Las variables de transferencia peridica a los nuevos medios son: la frecuencia de transferencia,
eJ
medio utilizado y la temperatura de conservacin; esto puede conducir a aumentarlastasasde
mutacin y la produccin de variantes

Slant cubierto con aceite mineral

El cultivo madre crece sobre un slant cubierto con aceite mineral esterilizado; el slantpuede
almacenarse a la temperatura del refrigerador

Medio mnimo, agua desionizada o agar-agua

Los cultivos lavados se almacenan en condiciones de refrigeracin; estos cultivospueden

permanecer viables durante 3 a 5 meses o ms

Congelacin en medios de cultivo

No es fiable; puede producir daos en las estructuras microbianas; sin embargo, en algunos
microorganismos puede constituir un medio til para mantener el cultivo

Deshidratacin

Los cultivos se secan en suelo estril, en discos de papel de filtro estriles o en gotasde gelatina;
stos pueden almacenarse en un desecador a temperatura de refrigeracin o congelarsepara
mejorar la viabilidad

Deshidratacin por congelacin (liofilizacin)

El agua se elimina mediante sublimacin en presencia de un agente crioprotector; el sellado

hermtico en una ampolla puede permitir la viabilidad a largo plazo, que segn se ha informado
ha alcanzado en algunos casos los 30 aos

Ultracongelacin

Se utiliza nitrgeno lquido a -196 cC, y se han conservado cultivos de microorganismosdelicados

durante ms de 15 aos

42.2

Tabla 42.7

Fermentacin: un trmino
con muchos significados

1. Cualquier proceso que implique el cultivo en masa de

microorganismos, en aerobiosis o en anaerooiosis
2. Cualquier proceso biolgico que se produzca en ausencia de
oxgeno
3. Deterioro de alimentos
4. Produccin de bebidas alcohlicas
5. Empleo de sustratos orgnicos como aceptores y dadores de
electrones
6. Empleo de un sustrato orgnico como reductor, y del mismo
compuesto, parcialmente degradado, como oxidante
7. Crecimiento dependiente de fosforilacin a nivel de sustrato

miento de los microorganismos en condiciones industriales

se tratarn a continuacin en esta seccin.
Sin embargo, antes ser necesario clarificar la terminologa. El trmino fermentacin, usado en un sentido fisiolgico en las primeras secciones del libro, se utiliza de una forma
ms general en relacin con la microbiologa industrial y la
biotecnologa. Tal y como se destaca en la Tabla 42.7, el
trmino puede tener varios significados, entre ellos el cultivo masivo de microorganismo s (o incluso de clulas vegetales y animales). El desarrollo de las fermentaciones industriales requiere medios de cultivo apropiados y la
seleccin a gran escala de los microorganismos. Con frecuencia se precisan aos para lograr producciones ptimas
del producto. Se prueban muchos aislamientos en cuanto a
su capacidad para producir un producto nuevo en la cantidad deseada. Pocos tienen xito. La fermentacincomoproceso fisiolgico (pp. 192-194).

Desarrollo del medio de cultivo microbiano

El medio utilizado para cultivar un microorganismo es decisivo,ya que puede afectar a la competitividad econmica de

Tabla 42.8

Crecimiento de microorganismos en ambientes controlados

un proceso concreto. Como fuentes de carbono, nitrgeno y

fsforo suelen emplearse materiales sin refinar de menor
coste (Tabla 42.8). A menudo, se utilizan hidrolizados vegetales crudos como fuente compleja de carbono, nitrgeno y
factores de crecimiento. Los productos de desecho procedentes de la industria de elaboracin de bebidas se utilizan
con frecuencia debido a su menor coste y a su mayor disponibilidad. Otras fuentes de carbono tiles son las melazas y
el suero procedente de la elaboracin del queso. Mediosde
cultivo microbiano (pp. 109-112).

Los niveles y el equilibrio de los minerales (especialmente hierro) y los factores de crecimiento pueden ser cruciales en la formulacin del medio. Por ejemplo, la biotina y
la tiamina controlan la acumulacin del producto en muchas
fermentaciones al influir en las reacciones biosintticas. El
medio tambin puede disearse de forma que el carbono, el
nitrgeno, el fsforo, el hierro o un factor de crecimiento
especfico se haga limitante tras un tiempo de fermentacin
dado. En tales casos, esta limitacin suele ocasionar un desplazamiento del crecimiento a la produccin de los metabolitos deseados.

Crecimiento de microorganismos
en un sistema industrial
Una vez que se desarrolla un medio, se debe definir el
ambiente fsico para el funcionamiento microbiano en el sistema de cultivo masivo. Esto suele conllevar un control preciso de la agitacin, refrigeracin, cambios de pH y oxigenacin. Pueden utilizarse bferes fosfato para controlar el
pH al mismo tiempo que actan como fuente de fsforo. Las
limitaciones de oxgeno pueden ser especialmente decisivas
en los procesos de crecimiento aerbicos. La concentracin
de O2y la tasa de flujo deben ser suficientemente altas como
para disponer de O2 en exceso en el interior de las clulas
con objeto de que esto no constituya un factor limitante.
Esto es especialmente cierto en el crecimiento de un cultivo
microbiano denso. Cuando se cultivan hongos filamentosos

Principales componentes de los medios de cultivo utilizados en procesos industriales

Fuentede

Materia prima

Fuente de

Materia prima

Carbono y energa

Melazas
Suero
Semillas
Desechos de agricultura (mazorcas de maz)

Vitaminas

Preparaciones sin refinar de productos

vegetales y animales

Hierro, trazas de sales

Productos qumicos inorgnicos crudos

Bferes

Yeso o carbonatos crudos

Fosfatos para fertilizacin

Agentes antiespumantes

Alcoholes de alta graduacin

Siliconas
steres naturales
Manteca de cerdo y aceites vegetales

Nitrgeno

Lquido de macerar maz

Harina de soja
Desechos de matadero
Amonaco y sales de amonio
Nitratos
Sustancias solubles de destiladores

1085

y actinomicetos, estos procesos de aireacin fsica pueden

verse incluso ms limitados por el crecimiento filamentoso
(Figura 42.6). Este crecimiento filamentoso da lugar a un
medio viscoso y plstico conocido como caldo no newtoniano. Este medio ofrece incluso gran resistencia a la agitacin y la aireacin. Para reducir al mnimo este problema,
los cultivos pueden cultivarse como partculas o unidos a
partculas artificiales.
Es fundamental asegurarse de que estos factores fsicos
no limitan el crecimiento microbiano. Esto es an ms crtico durante el incremento en escala (scaleup), en el que un
procedimiento desarrollado con xito en un pequeo matraz
se modifica para usarIo en un fermentador de gran tamao.
Es preciso conocer el microambiente del cultivo y mantener
unas condiciones similares cerca de la clula individual a
pesar del incremento del volumen del cultivo. Si se consigue
una transicin con xito desde un proceso originalmente
desarrollado en un matraz ErIenmeyer de 250 mL a un reactor de 100 000 litros, el incremento en escala se ha llevado a
cabo correctamente.
El cultivo de microorganismos se realiza en tubos,
matraces y fermentadores con agitacin u otros sistemas de
cultivo masivo. El tamao de los fermentadores con agitacin puede variar entre 3 4 y 100 000 o ms litros, dependiendo de las necesidades de produccin (Figura 42.7). En
la Figura 42.7b se representa una tpica unidad de fermentacin a gran escala con agitacin. Esta unidad requiere
una gran inversin de capital y operarios especializados.
Todos los pasos necesarios en el crecimiento y en la recoleccin de los productos deben llevarse a cabo en condiciones de asepsia. No slo se debe esterilizar el medio, sino
que la aireacin, la regulacin del pH, el muestreo y la
vigilancia del proceso han de realizarse en condiciones
estrictamente controladas. En ciertos casos hay que aadir
agentes para limitar la formacin de espuma, sobre todo
con medios de alto contenido proteico. Con frecuencia se
utilizan ordenadores para controlar y determinar el rendimiento mediante sondas que determinan la biomasa microbiana, los niveles de los productos metablicos crticos, el
pH, la composicin del gas de entrada y de salida, y otros
parmetros. Esta informacin es necesaria para conseguir

un proceso y control del producto meticulosos. Las condiciones ambientales pueden ser cambiadas o mantenerse
constantes en el tiempo, dependiendo de los objetivos particulares del proceso.
A menudo, se aade de forma continua -alimenta.
cin continuaun componente esencial del medio, que
suele ser la fuente de carbono, de forma que el microorganismo no disponga en ningn momento de un exceso d~
sustrato. Un exceso de sustrato puede originar una acumulacin indeseable de productos metablicos de desecho.
Este fenmeno es particularmente importante con glucosay
otros carbohidratos. Si existe un exceso de glucosa en el
inicio de la fermentacin, podr ser catabolizada para pro.
ducir etanol, que se pierde como producto voltil reduciendo el rendimiento final. Esto puede ocurrir incluso en condiciones aerbicas.
Adems del tradicional fermentador de agitacin aer-

bico o anaerbico, se pueden emplear otros mtodos para

cultivar microorganismos. Entre estos mtodos alternativos,
detallados en la Figura 42.8, se encuentran los fermentadores con aspiracin (Figura 42.8a) que eliminan la necesidad
de agitadores que pueden causar problemas con los hongos
filamentosos. Tambin se dispone de la fermentacin de
estado slido (Figura 42.8b), en la que el sustrato no se dilu:
ye en agua. En varios tipos de reactores de lecho fijo (Figura 42.8c) y de lecho fluidizado (Figura 42.8d) los microorganismos se asocian a superficies inertes como biofilms
(vanse las pp. 668-669), Yel medio fluye por delante delas
partculas fijas o suspendidas.
Tambin pueden utilizarse las unidades de cultivo en
dilisis (Figura 42.8e). Estas unidades permiten que los productos finales o los metabolitos de los residuos txicos
difundan desde el cultivo microbiano, y que nuevos sustratos difundan hacia el cultivo a travs de la membrana de dilisis. Las tcnicas de cultivo continuo en quimiostatos (Figu;;o
ra 42.8.1)pueden mejorar en gran medida la produccin de
clulas y la velocidad de utilizacin del sustrato, ya quelos
microorganismos pueden mantenerse en una fase logartmica continua. Sin embargo, en muchos procesos industriales
no es deseable mantener continuamente un microorganismo
en una fase de crecimiento activo.

Los productos microbianos a menudo se clasifican

como metabolitos primarios y secundarios. Como se muestra en la Figura 42.9, los metabolitos primarios son compuestos relacionados con la sntesis de clulas microbianas
en la fase activa de crecimiento. Entre ellos se encuentran
los aminocidos, los nucletidos y los productos finales de
la fermentacin como el etanol y los cidos orgnicos. Adems, es frecuente que los microorganismos sinteticen durante su crecimiento enzimas con aplicacin industrial asociadas a clulas microbianas o a exoenzimas. Estas enzimas
tienen numerosas aplicaciones en la produccin de alimentos y en el acabado de productos textiles.
Los metabolitos secundarios suelen acumularse durante el perodo de limitacin de nutrientes o de acumulacin
de productos de desecho que sigue a la fase de crecimiento
activo. Estos compuestos no tienen relacin directa con la
sntesis de las estructuras celulares ni con el crecimiento
normal. La mayora de los antibiticos y micotoxinas se
incluye en esta categora.
1. Cul es el coste de los medios de cultivo durante las
operaciones industriales? Discuta el efecto de cambiar
los balances en nutrientes tales como minerales, factores

de crecimiento, y fuentes de carbono, nitrgeno

y fsforo.
2. Qu factores incrementan los costes de los productos
microbianos, como los antibiticos, utilizados para la salud
animal y humana?
3. Qu son los caldos no-Newtonianos, y por qu son
importantes en las fermentaciones?
4. Discuta el significado y los objetivos de los procesos de
incremento en escala.
5. Qu parmetros pueden controlarse en la moderna
fermentacin industrial a gran escala?
6. Adems del fermentador con agitacin de qu otras
alternativas se dispone para el cultivo masivo de
microorganismos en los procesos industriales? Mediante
qu principio funciona el sistema de cultivo en dilisis?

42.3

Principales productos
de la microbiologa industrial

La microbiologa industrial ha proporcionado productos que

han impactado significativamente en nuestras vidas, directa

(a) Fermentador con aspiracin

La diferencia de densidad de
las burbujas de gas atrapadas
en el medio da lugar a la
circulacin del fluido

o
o

00
o

1"1"

o.
o

.\..

Entrada de aire

(b) Fermentacin en estado slido

Crecimientodel cultivo en
ausencia de agua libre
adicional

Entrada

de flujo

(c) Reactor de lecho fijo

Los microorganismos sobre
las superficies del material de
soporte pueden ascender o
descender segn el flujo

Material
de soporte
fijado

Salida de flujo

L-

(d) Reactor de lecho fluidizado

Los microorganismos
localizados sobre las
partculas suspendidas en el
lquidoo gas, siguen la
corriente ascendente del flujo

,. . ,
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~

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Partculas

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de soporte
suspendidas

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Flujode---.
entrada
(e) Unidad de cultivo en dilisis
Los productos de desecho se
separan del cultivo por
difusin. Elsustrato puede
difundiral cultivoa travs de
la membrana

Medio
o bfer

Entrada---.

~'

del medio
(1)Unidad de cultivo
Mediofresco entra en la
unidad, y salen el exceso de
medio y algunas clulas ya
utilizadas

'.' ,.

.:>

.'

l<J.

o indirectamente, en ocasiones desapercibidamente, e incluso nuestra esperanza de vida. Entre estos productos se
encuentran productos industriales y agrcolas, aditivos de
alimentos, productos mdicos para la salud animal y humana, y biofueles (Tabla 42.9). Particularmente, en los ltimos
aos, compuestos no-antibiticos empleados en medicina
han hecho grandes contribuciones para mejorar el bienestar
de los animales y el hombre. En esta seccin se tratarn nicamente algunos de los compuestos ms importantes de
cada categora.

Salida del medio

y de las clulas

Figura 42.8 Mtodos alternativos de

cultivo masivo. Adems de los
fermentadores con agitacin, pueden
utilizarse otros mtodos para cultivar
microorganismos en procesos industriales.
En muchos casos estos mtodos
alternativos tendrn un menor coste
operativo y pueden proporcionar las
condiciones de crecimiento especficas
necesarias para la sntesis del producto.

Antibiticos
Muchos antibitico s son producidos por microorganismos,
principalmente actinomicetos del gnero Streptomyces, y
hongos filamentosos (vase la Tabla 35.2). En este captulo se discutir la sntesis de algunos antibiticos importantes para ilustrar el papel fundamental de la formulacin del
medio y el control ambiental en la produccin de estos
importantes compuestos. Antibiticosen medicina(Captulo 35).

456

Captulo 19 Taxonoma microbiana

estructuracin u orden; y nomos, ley, o nemein, distribuiro

Conceptos
1. Para poder comprender la gran diversidad de organismos existentes es
preciso agrupar los organismos similares y organizar estos grupos en una
estructura jerrquica sin superposiciones. La taxonoma es la ciencia de la
clasificacin biolgica.
2. Los grupos de los procariotas (Arquea y Bacteria) parecen haber sido los
primeros en desarrollarse, seguidos de los eucariotas. Esto dio lugar a tres
dominios: Bacteria, Archaea y Eucarya. Estos dominios se diferencian entre
s en sus secuencias de rRNA y en muchos otros aspectos.
3. El grupo taxonmico bsico es la especie, que se define en trminos de
reproduccin sexual o bien de semejanza general.

gobernar] se define como la ciencia de la clasificacinbiol&

gica. En un sentido ms amplio, se compone de trespartes
independientes pero interrelacionadas: clasificacin,nomenclatura e identificacin. La clasificacin es la organiza~
cin de los organismos en grupos o taxones en funcin,de
sus semejanzas o de su parentesco evolutivo. La nomencJa.
tura es la rama de la taxonoma que se ocupa de la asig,nacin de nombres a grupos taxonmicos de conformidadc,on
normas publicadas. La identificacin constituye el lado
!

4. Las clasificaciones se basan en un anlisis de posibles relaciones evolutivas

(clasificacin filogentica o filtica) o en la semejanza de caractersticas
observables (clasificacin fentica). Los resultados de estos anlisis a
menudo se resumen en diagramas similares a rboles, denominados
dendrogramas.
5. Las caractersticas morfolgicas, fisiolgicas, metablicas, ecolgicas,
genticas y moleculares son todas tiles en taxonoma puesto que reflejan la
organizacin y la actividad de:l"genoma.Las secuencias de cidos nucleicos
son probablemente los mejores indicadores de la filogenia y el parentesco
microbianos, ya que los cidos nucleicos constituyen el propio material
gentico o productos de la transcripcin gnica.
6. La primera edicin del Manual Bergey de sistemtica microbiana (Bergey' s
Manual of Systematic Bacteriology) fue principalmente fenotpica, y divida
las bacterias en grupos en funcin de caractersticas de fcil determinacin,
como son la forma, la tincin de Gram, las relaciones con el oxgeno y la
motilidad. La segunda edicin; desarrollada en 5 volmenes se organiza
desde el punto filogentico y distribuye los procariotas en 2 dominios y
25 phyla.
7. La taxonoma bacteriana est experimentando rpidos cambios debido a la
incorporacin de nuevos datos, en particular los derivados del uso,de
tcnicas moleculares tales como la comparacin de la estructura del RNA
ribosmico y las secuencias cromosmicas. Esto est Originando nuevas
clasificaciones filogenticas.

Qu importa el nombre? Una rosa, como quiera que la

llamramos, olera igual de bien...
W Shakespeare.

prctico de la taxonoma,

el proceso de determinar qu~un

i

aislamiento en particular pertenece a un taxn reconocido.

A menudo, se tiende a pensar en la taxonoma comoaJ~
banal y aburrido, cuestin nicamente

de hilar muy fInoen

la asignacin de nombres a organismos. En realidad, la taxo-

noma es muy importante por diversos motivos. En primer

lugar, nos permite organizar cantidades ingentes de conoeimiento s sobre los organismos, ya que todos los miembros
d~
un grupo especfico comparten numerosas caracterst~as.
En cierto sentido es similar a un sistema gigante de archivo
o a un catlogo de biblioteca que proporciona un fcilaCC~i1
so a la informacin. Cuanto ms precisa sea la clasificaci~
mayor informacin contiene y mayor es su utilidad.~n
I

segundo lugar, la taxonoma nos permite hacer prediccioll~

'
y formular hiptesis para nuevas investigaciones sobr@o
la
base de los conocimientos existentes acerca de organismos
similares. Si un microorganismo afn tiene cierta propiedad,
"el microorganismo en cuestin puede tener tambinla
misma caracterstica. En tercer lugar, la taxonoma ubicaa
los microorganismo s en grupos tiles y signficativosQon
nombres precisos que permiten a los microbilogos trabajw
con ellos y comunicarse de forma eficiente. Al igual queuna
comunicacin escrita eficaz no es posible sin un vocabulario
suficiente, una ortografa correcta y una buena gramtica,la

microbiologa no es posible sin la taxonoma. En cuartp

lugar, la taxonoma es esencial para la identificacinexacij
no de los aspectos ms fascinantes y atractivos del
mundo microbiano es su extraordinaria diversidad.
Parece que la naturaleza ha probado prcticamente
cualquier experimento posible de forma, tamao, fisiologa
y estilo de vida. La Parte VII del libro se centra en esta
diversidad. El Captulo 19 presenta una introduccin a los
principios generales de la taxonoma microbiana. Los cinco
captulos siguientes (20-24) estudian los grupos procariotas
ms importantes. Finalmente, la Parte VII realiza una extensa introduccin a los principales tipos de microorganismos
eucariotas: los hongos, las algas y los protozoos.

19.1 Introduccin y descripcin general

Debido a la desconcertante diversidad de los organismos
vivos es deseable clasificados u ordenarlos en grupos en
funcin de sus semejanzas. La taxonoma [del griego taxis,

de los microorganismos. Nunca se insistir lo bastanteac@f'''

ca de su importanciaprctica en este sentido. Por ejemplo,

resulta esencial para la microbiologa clnica (vaseel Cap.,

tulo 36); el tratamiento a menudo es excepcionalmentedif~
cil cuando el patgeno causal es desconocido.
El trmino sistemtica a menudo se emplea pararef@~
rirse a la taxonoma. Sin embargo, muchos taxonomistasla
definen en trminos ms generales como el estudio cientt...
fico de los organismos cuyo objetivo final es caracterizados
y agruparlos de forma ordenada. Cualquier estudio dela
naturaleza de los organismos, cuando los conocimientos
adquiridos se aplican a la taxonoma, forman parte de la sis..
temtica. Por consiguiente, sta abarca disciplinas tal(}s
como morfologa, ecologa, epidemiologa, bioqumica,bio."
loga molecular y fisiologa.
La taxonoma microbiana es un tema demasiado amplio
como para ser tratado adecuadamente en un solo captulo.
Por tanto, este captulo se centra en los principiosgenerales
y utiliza ejemplos principalmente de taxonoma bacteriana.
La taxonoma de los principales grupos microbianos euca::

19.2 Evolucin y diversidad microbianas

riotasserevisa cuando se introduce cada uno de dichos gru-

posen los captulos posteriores.

La taxonoma microbiana se encuentra actualmente en
plenaebullicin. Esto se debe a la aplicacin de nuevas tcnicasmoleculares para la clasificacin de los microorganismas.Aun cuando estos nuevos avances han generado gran
excitaciny estn modificando profundamente la taxonoma
microbiana,los enfoques ms tradicionales siguen siendo
valiososy tambin se describirn en este texto. El captulo
quenos ocupa comienza con una descripcin general de la
taxonomay posteriormente pasa a describir brevemente las
principalescaractersticas empleadas en taxonoma microbiana.Seguidamente, se discute la valoracin de la filogenia
microbiana,y a continuacin se describen las principales
divisionesde los seres vivos y del Manual Bergey de sistemticabacteriolgica (Bergey' s Manual oi Systematic Bacteriology).El captulo concluye con una breve descripcin
generalde la filogenia y la diversidad procariotas.

19.2

Evolucin ..y diversidad microbianas

Seha calculado que nuestro planeta tiene una antigedad de

unos4600millones de aos. Se han descubierto restos fosi-

lizadosde clulas procariotas de unos 3500 a 3800 millones

deaosen estromatolitos y rocas sedimentarias (Figura 19.1).

457

Los estromatolitos son rocas laminadas o estratificadas, a

menudo abovedadas, que se forman por la incorporacin de
sedimentos minerales en comunidades microbianas laminadas (Figura 19.2). Los estromatolitos modernos estn formados por cianobacterias; cabe suponer que al menos algunos estromatolitos fosilizados se formaron de la misma
manera. Por consiguiente, la vida procariota surgi muy
poco despus del enfriamiento terrestre. Es muy probable
que los primeros procariotas fueran anaerobios. Las cianobacterias y la fotosntesis productora de oxgeno se de,sarrolIaron probablemente hace unos 2500 a 3000 millones de
aos. La diversidad microbiana aument de forma notable a
medida que el oxgeno fue hacindose ms abundante.
Los estudios de Carl Woese y sus colaboradores sopre
las secuencias de rRNA en clulas procariotas sugieren que
los procariotas se separaron muy precozmente en dos grupos
bien diferenciados. La Figura 19.3 muestra un rbol filogentico universal que refleja este punto de vista. El rbol se
divide' en tres ramas principales, que representan los tres
grupos primarios: Ba.cteria,Archaea y Eucarya. Las arqueas
y las bacterias fueron las primeras en separarse, y posteriormente se desarrollaron los eucariotas. Estos tres grupos primarios se denominan dominios y se ubican por encima del
nivel de reino (los reinos tradicionales se distribuyen entre
estos tres dominios). Los dominios difieren
notablemente
"
entre s. Los organismos eucariotas con lpidos de membra,

458

Captulo 19 Taxonoma microbiana

-.:

r"

(\;-

t.4

na formados fundamentalmente por acil disteres de glic,

rol y rRNA eucaritico pertenecen a Eucarya. El dominio
Bacteria corresponde a las clulas procariotas con rRNt
bacteriano y lpidos de membrana constituidos princip~
mente por diacil disteres de glicerol. Los procariotas cuyar
membranas estn compuestas por lpidos isoprenoides d~l,
tipo diter de diglicerol o tetrater de diglicerol (vanse
1~,1
pp. 489-490) YrRNA arqueano componen el tercer dominio1i
Archaea.
Parece probable que las clulas eucariotas modernass~
originaran de los procariotas hace 1400 millones de aos.S~

ha especulado considerablementeacerca de cmo podran;

los eucariotas haberse desarrollado de sus antecesores prb~
cariotas. No se sabe con exactitud cmo tuvo lugar estepFOil
ceso, pero se han propuesto dos hiptesis. Segn la primer~,
los ncleos, las mitocondrias y los cloroplastos se origin~

ron por invaginacin de la membrana plasmtica para fOIJ!

mar estructuras de doble membrana que contenan material

gentico y eran capaces de sufrir un desarrollo y una esp(!fl

cializacin adicional. Las semejanzas entre los cloroplastos;
las mitocondrias y las bacterias actuales se deben a queIQ~
orgnulos, que estn sometidos a un lento proceso de cam~
bio, han conservado caractersticas procariticas primitivas:
De acuerdo con la hiptesis endosimbitica, m$.~

popular que la anterior, el primer acontecimiento fue la fora

macin de un ncleo en la clula proeucariota. La clul~

eucariota ancestral pudo haberse desarrollado de la fusin"

de antiguas bacterias y arqueas. Posiblemente una clula.
Figura 19.2 Estromatolitos. Estas estructuras son estromatolitos de
la baha Shark de Australia Occidental. Los estromatolitos modernos
son rocas laminadas o estratificadas formadas por la incorporacin de
sulfatos clcicos, carbonatos clcicos y otros minerales en las
comunidades microbianas. Las lminas estn formadas por
cianobacteriasy otros microorganismos.

Bacteria

husped bacteriana Gram negativa que haba perdido su

pared celular incorpor a su interior una arquea para form3J;

una asociacin endosimbitica. La arquea perdi subs~
guientemente su pared y su membrana plasmtica, mientras'
la bacteria husped desarrollaba pliegues interiores de la

Archaea

Eucarya
Animales

Bacterias verdes
no del azufre

Espiroquetas

Bacterias
Gram
positivas

Entamoeba

Mohos

~
Halobacterias

mucosos

,\,

,,"

~~

Thermotoga

Aquifex

~~
'

Flagelados
Tricomonas

Microsporidia

DIp " omonas

Figura 19.3 rbol filogentico universal. Las relaciones se determinaron a partir de comparaciones'de las secuencias del rRNA. Fuente:
Adaptado de G. J. Olsen y C. R. Woese. Ribosomal RNA: A key to phylogeny en The FASEBJournal, 7:113-123,1993.

20.1

El mRNA de las arqueas parece ser ms similar al de las

bacteriasque al de

los eucariotas. Se ha descubierto mRNA

polignico,y no hay pruebas de la existencia de maduracin

porcortey empalme del DNA. Los promotores en las arqueassonsimilares a los de las bacterias.
A pesar de stas y de otras semejanzas, existen tambin
numerosasdiferencias entre las arqueas y otros organismos.
Adiferenciatanto de las bacterias como de los eucariotas, el
brazon,C (vase la p. 286) del tRNA de las arqueas carece
detiminay contiene pseudouridina o l-metilpseudouridina.
ltRNAiniciador de las arqueas contienen metionina, como
eltRNAiniciador bacteriano. Aunque los ribosomas de las
son 70S como los bacterianos, los estudios de
arqueas
microscopaelectrnica demuestran que su forma es muy
variabley que en ocasiones difiere de la de los ribosomas
tantoeucariticos como

bacterianos. Por otra parte, s se

asemejan
a los ribosornas eucariticos en su sensibilidad a la
anisomicinay en su insensibilidad al cloranfenicol y a la
kanamicina.Adems, su factor de elongacin 2 (EF- 2) reaccionacon la toxina diftrica de la misma forma que el EF-2
(mcaritico.Algunas arqueas, como numerosos metangenosdelreino Euryarchaeota, difieren de otros procariotas en
lapresenciade protenas histonas que se unen al DNA para
formarestructuras semejantes a nucleosomas. Finalmente,
lasRNApolimerasas dependientes de DNA se asemejan a
susortlogoseucariticas y no a la RNA polimerasa bactenana.Sonprotenas complejas de gran tamao e insensibles
alosfrmacos rifampicina y estreptolidigina. stas y otras
diferenciasdistinguen las arqueas de las bacterias y los
(mcariotas. Ribosomasy el mecanismo de la sntesis de protenas(pp.284-293); Transcripcin del DNA (pp. 280-283).

Introduccin a Archaea

491

nos. Todas las arqueas que han sido estudiadas tienen la

capacidad de oxidar el piruvato a acetil-CoA. Carecen del
complejo piruvato deshidrogenasa presente en los eucariotas
y las bacterias respiradoras, y utilizan para este propsito la
enzima piruvato oxidorreductasa. Los halfilos y el termfilo extremo Thermoplasma s parecen tener un ciclo de los
cidos tricarboxlicos funcional. No se ha encontrado todava un metangeno con un ciclo de los cidos tricarboxlicos
completo. Se han obtenido pruebas de cadenas de citocromos funcionales en los halfilos y los termfilos. Ruta de
Embden-Meyerhof y ciclo de los cidos tricarboxlicos (pp. 189,
194-196YApndice II).

Se conoce con muy poco detalle las rutas biosintticas

en las arqueas. Los datos preliminares sugieren que las rutas
de sntesis de aminocidos, purinas y pirimidinas son simi1ares a las de otros organismos. Algunos metangenos son
capaces de fijar el dinitrgeno atmosfrico. No slo muchas
arqueas utilizan una inversin de la ruta de Embden-Meyerhof para sintetizar la glucosa, sino que al menos algunos
metangenos y termfilos extremos emplean glucgeno
como su principal material de reserva.
El autotrofismo est muy extendido entre los metangenos y los termfilos extremos, y la fijacin de CO2,se produce de ms de una manera. Thermoproteus y posiblemente
Sulfolobus incorporan CO2por medio del ciclo reductor de
los cidos tricarboxlicos (Figura 20.6a). Esta ruta tambin
est presente en las bacterias verdes del azufre (vanse las
pp. 508-509). Las bacterias metangenas y probablemente la
mayora de los termfilos extremos incorporan CO2mediante la ruta reductora del acetil-CoA (Figura 20.6b). Una ruta
similar est presente tambin en las bacterias acetognicas y
en las bacterias autotrofas reductoras del sulfato.

Metabolismo

Taxonoma de Archaea
Teniendo
en cuenta la diversidad de sus estilos de vida, no
msultasorprendenteel hecho de que
Archaeavarenotablemente entre los

el metabolismo de las
miembros de los diferentesgrupos.Algunas arqueas son organotrofas; otras son
autotrofas.
Unas pocas llevan a cabo una forma poco comn
defotosntesis.

Elmetabolismo de los hidrato s de carbono en las arqueasseconocecon una mayor exactitud. La enzima fosfofructoquinasano se ha encontrado en las arqueobacterias, y
stasno parecen degradar la glucosa mediante la ruta de
Untner-Doudoroff.Los halfilos extremos y los termfilos
catalizanla glucosa utilizando una forma modificada de la
rutadeEntner-Doudoroff(vase la p. 179 Y el Apndice IJ)

nlaquelos productos intermediarios iniciales no estn fosforilados.

Los halfilos presentan ligeras modificaciones de
larutarespecto de la de los termfilos extremos, pero tambinproducenpiruvato

y NADH o NADPH. Los metangenos no catabolizan la glucosa de forma significativa. A

diferencia
de lo que sucede con la degradacin de la glucosa,la gluconeognesis se produce por una inversin de la
rutadeEmbden-Meyerhof en los halfilos y los metange-

Como se muestra en las Figuras 19.3 y 19.13 Y en la Tabla 19.8 (vase la p. 472), las arqueas constituyen un grupo
muy bien diferenciado de otros tipos de organismos vivos.
Dentro de su grupo, sin embargo, existe una gran diversidad
(vanse las Figuras 19.13 y 19.14). La primera edicin del
Manual Bergey divide las arqueas en cinco grupos principales en base a las diferencias fisiolgicas y morfolgicas. La
Tabla 20.1 resume algunas de las principales caractersticas
de estos cinco grupos y cita representantes de cada uno de
ellos.
Sobre la base de los datos del rRNA, la segunda edicin del Manual Bergey dividir las arqueas en los phyla
Euryarchaeota [del griego eurus, amplio; y archaios, antiguo o primitivo] y Crenarchaeota [del griego crene, fuente
o manantial; y archaios]. Los euriarqueotas reciben este
nombre por el amplio nmero de nichos ecolgicos que
ocupan y presentan diversos patrones metablicos. El phylum Euryarchaeota es muy diverso con cinco clases (Methanobacteria, Methanococci, Halobacteria, Thermoplasmata, Thermococci, Archaeglobi y Methanopyri), nueve

6.4

rabia. 6.3

Solutosy actividad del agua

Osmotolerante
Halfilo

pH
Acidfilo
Neutrfilo
A1calfilo
Temperatura
Psicrfilo
Psicrotrofo
Mesfilo
Termfilo
Hipertermfilo

Concentracin de oxgeno
Aerobioobligado
Anaerobio facultativo
Anaerobio aerotolerante

Anaerobioobligado
Microaerfilo

129

Respuestas microbianas a factores ambientales

Factory trminodescriptor

Presin
Barfilo

Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento

Definicin

Microorganismos representativos

Capaz de crecer en un amplkio rango de actividad

del agua o presin osmtica
Requiere altas concentraciones de cloruro sdico
para crecer, normalmente por encima de 0.2 M

Staphylococcus aureus, Saccharomyces rouxii

Halobacterium, Dunaliella, Ectothiorhodospira

Sulfolobus, Picrophilus, Ferroplasma, Acontium, Cyanidium

caldarium
Escherichia, Euglena, Paramecium
Bacillus alcalophilus, Natronobacterium

ptimo de crecimiento entre pH OY5.5

ptimo de crecimiento entre pH 5.5 Y8.0
ptimo de crecimiento entre pH 8.5 Y 11.5

Crece bien a Oc y tiene una temperatura ptima

de 15C o inferior
Puede crecer a O-7C; ptima entre 20
y 30C; mxima alrededor de 35 c
Temperartura ptima alrededor de 20-45 c
Puede crecer a 55C o superior; la ptima a
menudo entre 55 y 65C
Temperatura ptima entre 80 y 113C

Bacillus psychrophilus, Chlamydomonas nivalis

Listeria monocytogenes, Pseudomonas fluorescens
Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis
Bacillus stearothethermophilus, Thermus aquaticus, Cyanidium
caldarium, Chaetomium thermophile
Sulfolubus, Pyrococcus, Pyrodictium

Completamente dependiente del O2atmosfrico

para crecer
No requiere O2para crecer, pero crece mejor en su
presencIa
Crece igualmente bien en presencia como en
ausencia de O2
No tolera el O2y muere en su presencia
Requiere niveles de O2por debajo de 2-10 % para
crecer, y es daado por el O2atmosfrico (20 %)

Micrococcus luteus, Pseudomonas, Mycobacterium; la mayora

de las algas, hongos y protozoos
Escherichia, Enterococcus, Saccharomyces cerevisiae

Crece ms rpido a altas presiones hidrostticas

Photobacterium profundum, Shewanella benthica,

Methanococcus jannaschii

La mayora de las bacterias, algas y hongos poseen una

paredcelularrgida que mantiene la forma e integridad celular, pero cuando se colocan microorganismo s con pared
Gelularrgida en ambientes hipertnicos, disminuye el nivel
deaguacelular, la clula se contrae, y la membrana plasmticase separa de la pared celular. Este proceso se denomina
plasmolisis. Esta situacin deshidrata la clula y puede
daarla membrana plasmtica; normalmente, la clula no
muere,aunquees inactiva metablicamente y deja de crecer.
Muchos microorganismo s conservan la concentracin
osmticade su protoplasma por encima del correspondient~ a su hbitat utilizando 80]ut08 compatibles, de manera
que aunque estn en medios tericamente hipotnicos, no
~ntraagua a la clula. Estos solutos son compatibles con el
Itabolismoy el crecimiento aun cuando se encuentren en
concentracionesintracelulares elevadas. As, por ejemplo,
la mayorade las bacterias eleva su concentracin osmtiGainternamediante la sntesis o captacin de colina, betana,prolina, cido glutmico y otros aminocidos; tambin
participan, en cierto grado, cantidades elevadas de ion

Streptococcus pyogenes
Clostridium, Bacteroides, Methanobacterium, Trepomonas agilis
Campylobacter, Spirillum volutans, Treponemapallidum

potasio. Con el mismo objetivo, algas y hongos utilizan

sacarosa y polioles -p. ej., arabitol, glicerol y manitol-.
Los polioles y aminocidos son solutos ideales para esta
funcin porque normalmente no alteran la estructura y funcin de las enzimas. Algunas bacterias como Halobacterium salinarium elevan su concentracin osmtica con
iones potasio (tambin aumentan los iones sodio, pero no
tanto). De hecho, las enzimas de Halobacterium son tan
peculiares que requieren concentraciones de sal elevadas
para poder desarrollar una actividad normal (vase la seccin 20.3). Como los protozoos no tienen pared celular,
deben utilizar vacuolas contrctiles (vase la Figura 27.3)
para eliminar el exceso de agua cuando habitan en entornos
hipotnicos.
smosis y funcin protectora de la pared celular
(p. 64).
La cantidad de agua disponible para el microorganismo
se puede reducir debido a las interacciones de la misma con
molculas de soluto (efecto osmtico) o por adsorcin a las
superficies de slidos (efecto matricial). Como la concentracin osmtica de un hbitat tiene efectos tan marcados sobre

11

:
./

122

Captulo 6

Crecimiento microbiano

bilogos. Los estudios sobre la velocidad de crecimiento.

contribuyen a la investigacin bsica en fisiologa y ecologa, y a la solucin de problemas aplicados industriales. En
consecuencia, se van a analizar los aspectos cuantitativos del
crecimiento de fase exponencial.
Durante la fase exponencial, cada microorganismo se
divide a intervalos constantes. Por ello, la poblacin duplicar su nmero durante un perodo determinado de tiempo,
denominado tiempo de generacin o de duplicacin. Esta
situacin puede ilustrarse con un ejemplo sencillo. Supongamos que se inocula un tubo de ensayo con una clula que se
divide cada 20 minutos (Tabla 6.1). La poblacin ser de 2
clulas despus de 20 minutos, de 4 clulas a los 40 minutos, y as sucesivamente. Como la poblacin se duplica en
cada generacin, el incremento de la poblacin ser exponencial o logartmico, igual a 2n, donde n es el nmero de
generaciones (Figura 6.3).
Estas observaciones pueden expresarse en ecuaciones
para determinar el tiempo de generacin.

90

80
1.500

70

-I

60

50

1.000

UJ

.!

U)

.!!! 40

:a>
()

()
el>
"C
O

'CI)

el>
"C
O
1..

30

el>

,E

E
,
Z

0.500
20

s::

<:>
...
O')

.2

Supongamos que No = Nmero inicial de clulas

= Poblacin en un tiempo t

Nt

n = Nmero de generaciones en un tiempo t

Entonces, el anlisis de los resultados de la Tabla 6.1 muestran que

Despejando n, nmero de generaciones, tras aplicar logaritmos en base decimal,

log Nt

20

60

40

80

100

0.000
120

Minutos de incubacin
Figura 6.3 Crecimiento microbiano exponencial. En esta figura se
han representado grficamente los datos de la Tabla 6.1 para seis
generaciones, en forma lineal (-) y logartmica (0-0). La curva de
crecimiento es exponencial, como muestra la linealidad de la grfica
logartmica.

= log No + n . log 2 y

n= log Nt -log No
log 2

log Nt -log No
0.301

velocidad de crecimiento (k). Equivale al nmero de generaciones por unidad de tiempo, expresado a menudo como
generaciones por hora.

La velocidad de crecimiento durante la fase exponencial en

un cultivo discontinuo puede expresarse por la constante de

Tabla 6.1

-I

exponencial

Si la poblacin se duplica en un tiempo t (t = g),

cin (g)-.

Tiempoa

de divisiones

Zn

Poblacin
(No x Zn)

O
20
40
60
80
100
120

O
1
2
3
4
5
6

2 = 1
i= 2
22 = 4
23 = 8
24 = 16
25 = 32
26 = 64

1
2
4
8
16
32
64

10gNt-logNo
0.301t

A partir de las frmulas anteriores se puede calcular el tiempo que tarda una poblacin en duplicar su nmero -esto es,
el tiempo medio de generacin o tiempo medio de duplica-

Ejemplo de crecimiento
Nmero

k=-=n
t

entonces, tras una generacin,

logloNt

0.000
0.301
0.602
0.903
1.204
1.505
1.806

El cultivo hipottico comienza con una clula con un tiempo de generacin de

20 minutos.

Se sustituye 2 No en la ecuacin de velocidad media de

crecimiento y se despeja k.

k= log (2 No) -log No

0.301 g

k=~

log 2 + log No-log No

0.301g

6.1

El tiempo medio de generacin es la inversa de la constante

de la velocidad media de crecimiento.

Tabla 6.2

= log 10

- log 103 9 - 3
(0.301)(10 h) = 3.01 h

= 2.0 generaciones (gen)/h

3.00

Fase
exponencial
(lag)

2.00

1.00

- - - - -...- ....- - - -

X
tn

1
1
I

:a>

I
1

T""

.!!!
CI)
'C

o
'CI)

------.-------

0.50

Bacterias
Beneckea natriegens
Escherichia coli
Bacillus subtilis
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Clostridium botulinum
Rhodospirillum rubrum
Anabaena cylindrica
Mycobacterium tuberculosis
Treponema pallidum

37
40
40
37
37
37
25
25
37
37

0.16
0.35
0.43
0.47
0.58
0.58
4.6-5.3
10.6
:::::: 12
33

Algas
Scenedesmus quadricauda
Chlorella pyrenoidosa
Asterionella formosa
Euglena gracilis
Ceratium tripos

25
25
20
25
20

5.9
7.75
9.6
10.9
82.8

Protozoos
Tetrahymena geleii
Leishmania donovani
Paramecium caudatum
Acanthamoeba castellanii
Giardia lamblia

24
26
26
30
37

2.2-4.2
10-12
10.4
11-12
18

Hongos
Saccharomyces cerevisiae
Monilinia fructicola

30
25

2
30

,E

1
I
1
1
I

Tiempo (horas)

6.4 Determinacin del tiempo de generacin. El tiempo de

generacin puede determinarse a partir de la curva de crecimiento
microbiano. Se representan los datos de la poblacin en un papel
cuadriculado semilogartmico, indicando el nmero de clulas en el
eje logartmico. Luego, se lee directamente el tiempo de duplicacin
de la poblacin a partir de la grfica. Tambin puede representarse en
ejes regulares utilizando ellogaritmo del nmero de clulas frente al
tiempo.
Figura

1
2.0 gen/h

= 0.5 h/gen

O30 min/generacin

Los tiempos de generacin cambian notablemente segn

la especie de microorganismo y las condiciones ambientales.
Los valores varan desde menos de 10 minutos (0.17 horas)
en algunas bacterias, hasta varios das, en algunos microorganismos eucariotas (Tabla 6.2). Los tiempos de generacin
en la naturaleza suelen ser ms largos que en cultivo in vitro.

1
1

0.10

g=

1
1
.1
1
I
1
1
1

-----.

Tiempo de
generacin (horas)

Fase de
latencia
(lag)

Temperatura
(OC)

Microorganismo

o.;;:;.

r--

123

Tiempos de generacin de algunos

microorganismo s seleccionados

g=T
El tiempo medio de generacin (g) puede determinarse
directamente a partir de una grfica semilogartmica con los
datos de la multiplicacin (Figura 6.4), y la constante de
velocidad de crecimiento se calcular a partir del valor g. El
tiempo de generacin puede tambin calcularse directamente a partir de las ecuaciones anteriores. Por ejemplo, supongamos que una poblacin bacteriana aumenta de 103a 109
clulas en 10 horas.

Curva de crecimiento

1. Defina crecimiento. Describa las cuatro fases de la curva

de crecimiento en un sistema cerrado y razone las causas
y caractersticas de cada una de ellas.
2. Defina crecimiento equilibrado, crecimiento
desequilibrado, experimento shift-up y experimento
shift-down.
3. Cmo afecta el incremento en un nutriente limitante sobre
el rendimiento celular y la tasa de crecimiento?
4. Qu son tiempo de generacin o duplicacin, y constante
de velocidad media de crecimiento? Cmo pueden
deducirse a partir de datos de crecimiento?