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de
Ciencias
Biologicas
Universidad
Andres
Bello
Tipos
de
experimentos
In vivo (en el organismo viviente): Experimentos que se llevan a cabo en organismos
completos.
In vitro (en vidrio): Experimentos que se realizan en cultivos celulares,
1. Clulas de cultivo primario
2. Lneas clulares
3. Hibridomas
4. Clulas madres (stem cells)
Fibroblastos
Mioblastos
Celulas nerviosas
Celulas tabaco
Diseccin
Manual
1. Mecnico
Lser
Diseccin
1. Mecnico
2. Enzimtico
Enzimas
proteolcas
- Tripsina
- Colagenasa
1. Cul@vo
primario
Separacin
de
los
dis5ntos
5pos
celulares
Se
pueden
u7lizar
varios
mtodos
para
separar
los
diferentes
@pos
celulares
de
la
suspensin
celular,
segn
sus
propiedades:
1.
La
diferencia
de
tamao
de
las
clulas
permite
separarlas
por
centrifugacin.
2.
La
capacidad
que
7enen
algunos
7pos
celulares
de
adherirse
al
vidrio
o
al
pls@co,
permite
separarlos
de
otras
clulas
que
se
adhieren
dbilmente.
3.
Algunos
an@cuerpos
se
unen
especcamente
a
sustancias
presentes
en
determinadas
clulas.
Luego,
se
emplea
diferentes
matrices
(como
colgeno,
bolitas
de
polisacridos,
pls7co)
a
la
cuales
slo
las
clulas
reconocidas
por
los
an7cuerpos
podrn
adherirse.
4.
Se
emplean
an@cuerpos
acoplados
a
colorantes
uorescentes
para
marcar
clulas
especcas
adheridas
a
ellos.
Las
clulas
marcadas
por
interaccin
con
el
an7cuerpo
pueden
ser
separadas
de
las
no
marcadas
en
un
separador
de
clulas
ac7vado
por
uorescencia
o
cell
sorter
1. Cul@vo
primario
Separador
de
clulas
ac5vado
por
uorescencia
2. Lneas celulares
Tabla 8-1 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Hoescht
- Replicacin indefinidamente: immortal
- Hasta hoy >80.000 publicaciones con HeLa
-10-20% otras lneas clulares estan contaminados con HeLA
3.
Hibridomas
Secretan
an@cuerpos
monoclonales
contra
un
anOgeno
en
par@cular.
An@cuerpos
Produccin de An@cuerpos
Produccin
de
hibridomas
4.
Clulas
Madre
Clulas
madre
embrionarias
Fuente
inagotable
de
material
que
a
futuro
podra
se
usada
para
terapia
celular
Aun
no
son
del
todo
seguras
(tumores)
Rechazo
si
son
de
otra
persona
(terapias
personalizadas)
4.
Clulas
Madre
Transplante
de
ncleo
de
clula
som5ca
ES personalizada
Figura 8-6 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
4. Clulas Madre
Mtodos
para
inducir
reprogramacin
4.
Clulas
Madre
Proyecciones
cul5vo
de
clulas
madre
Fraccionamiento subcelular
Centrfuga
Centrfuga
Centrifugacin
diferencial
Centrifugaciones repetidas a velocidades cada vez ms elevadas fraccionan los
homogenizados celulares en sus componentes
Separan los componentes en base a su tamao y su densidad:
mayor tamao mayor fuerza centrfuga, forman precipitado mientras
componentes mas pequeos y menos densos se mantienen en suspensin
(sobrenadante).
Gradiente de sacarosa
Equilibrio de sedimentacin
Separacin de Protenas
Cromatogra^a
Mtodo
mediante
el
cual
se
separan
molculas
basado
en
las
diferencias
existentes
entre
su
estructura
y/o
composicin.
Generalmente,
los
compuestos
a
separar
(protenas)
se
7enen
en
solucin
y
se
hacen
pasar
por
un
soporte
estacionario
(columna
que
con7ene
matriz
slida
porosa).
Los
dis7ntos
niveles
de
interaccin
entre
el
soporte
estacionario
y
las
molculas
permi7rn
a
estas
ul7mas
migrar
lenta
o
rpidamente
a
travs
del
soporte.
Separaciones
cromatogrcas
se
pueden
realizar
u7lizando
una
variedad
de
soportes:
silica
inmovilizada
en
placas
de
vidrio
(cromatograca
de
capa
na),
gases
vol7les
(cromatograca
de
gases),
papel
(cromatograca
de
papel),
lquidos
(cromatograca
liquida).
Las
protenas
se
pueden
separar
en
base
a
su
carga
(c.
de
intercambio
inico),
hidrofobicidad
(c.
hidrofbica),
de
su
tamao
(c.
de
ltracin),
capacidad
de
unin
a
determinados
grupos
qumicos
(c.
de
anidad)
Cromatogra^a en columna
Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Tipos
de
matrices
Cromatogra^a
de
intercambio
inico
Figure 8-13 and 8-14 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Tipos
de
matrices
Cromatogra^a
de
ltracin
en
gel
Figure 8-13 and 8-14 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Tipos
de
matrices
Cromatogra^a
de
anidad
Figure 8-13 and 8-14 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
Electroforesis
Las
protenas
suelen
tener
carga
neta
posi7va
o
nega7va
debido
a
los
aminocidos
cargados
Si
se
aplica
un
campo
elctrico
la
protena
migrar
a
una
velocidad
que
depende
de
su
carga
neta,
su
tamao
y
su
forma
Se
u7liza
un
detergente
cargado
nega7vamente
(dodecil
sufato
sdico,
SDS)
que
permite
la
disociacin
de
las
protenas
de
otros
componentes
proteicos
o
lipdicos
y
enmascara
la
carga
intrnseca
de
la
protena
hacindola
migrar
hacia
el
electrodo
posi7vo
Se
utliza
un
agente
reductor
para
romper
puentes
disulfuro
para
separar
los
polipp7dos
cons7tu7vos
de
molculas
de
varias
subunidades
Electroforesis
Figura 8-18 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Figura 8-20 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Figura 8-39 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Figura 8-38 Biologa molecular de la clula, quinta edicin ( Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)