Está en la página 1de 34

QPNat 01

OBTENCIN DE CIDO SHIKMICO A PARTIR DE LIQUIDMBAR


STYRACIFLUA.
Rius Alonso Carlos Antonio1
Hernndez Flandes Atzin1
Gonzales Quezada Yolanda1
Mena Santos Luz Mara2
Alonso Salceda Nancy2
Gulias Prado Andrea2
Hernndez Delgado Pamela2
Margin Puig Evana2

RESUMEN
El cido shikmico es un componente esencial para la sntesis del Oseltamivir, uno de los
antivirales ms efectivos y de aplicacin oral, disponibles para el control del virus de la
influenza AH1N1. Inicialmente se ha obtenido a partir del rbol de ans estrella en China,
sin embargo la alta demanda que ha tenido en los ltimos aos ha despertado el inters de
encontrar fuentes alternativas para su obtencin. En este trabajo se parti del rbol
Lyquidmbar Styraciflua que crece en el sur de Estados Unidos y Mxico. El trabajo
consisti en analizar las diferentes partes del rbol como son las cpsulas, semillas viables,
semillas no viables, hojas verdes, hojas rojas y hojas secas. Tambin se inici el anlisis
del contenido de cido en diferentes etapas de crecimiento de las cpsulas y semillas,
iniciando 15 das despus de haber brotado las cpsulas hasta la maduracin completa de
las mismas. Esto es importante para poder determinar en que momento es el contenido
ms alto de cido. Queremos reportar los resultados preliminares de estos estudios.

ABSTRACT
Shikimic acid is an essential starting material in the Oseltamivir synthesis, this is one of the
most effective antiviral drugs available for the control of influenza virus AH1N1. The main
source of the Shikimic acid has been the star anise from China, but in the last years the
supply is very tight due to an increase in the demand, this is why the search of new
alternatives for the acid is important. In this work we used the tree Lyquidmbar Sturaciflua,
its grow in the southern part of USA and in Mexico. The work involved the analysis of
different part of the tree; as the capsule, the non-viable seeds, the viable seeds, green
leaves, red leaves, and dry leaves. Also the quantification of the acid in different steps of the
tree grow was assessed starting 15 days after the develop of the capsules until the complete
maturation of them. We will report the preliminary result of these studies.

Facultad de Qumica,Qumica Orgnica, UNAM. * riusal@hotmail.com.

Instituto Godwin-Mxico.

712


INTRODUCCIN
La Organizacin Mundial de la Salud alert, en abril del 2009, la existencia de una nueva
cepa del virus de la influenza, denominado AH1N1, y en junio del mismo ao, debido a su
propagacin global, la declar como pandemia. De acuerdo a los datos registrados por la
Secretaria de Salud de nuestro pas, al 14 de junio de 2010, en Mxico se haban
confirmado 72,541 casos, de los cuales 1 250 personas han fallecido.i
El frmaco que se utiliza para combatir dicha enfermedad es el oseltamivir,
comercialmente conocido como Tamiflu, cuya materia prima es el cido shikimico. Dicho
cido es importado de diversos lugares por los laboratorios Roche,ii

En la actualidad el cido shikmico se obtiene a partir del ans estrella chino; sin
embargo, su escasez ante el incremento de su demanda, a partir del ao 2005 a
consecuencia de la pandemia H5N1, y el consiguiente aumento de su precio, el
cual se ha quintuplicado en los ltimos meses, conlleva a la bsqueda de fuentes
alternativas de la materia prima iii requerida en la sntesis del frmaco oseltamivir.
En este proyecto se propone la extraccin del cido shikmico a partir del rbol
Liquidmbar styraciflua, el cual se produce de manera abundante y, en cualquier poca
del ao, en gran parte de la Repblica Mexicana iv: en la vertiente del Golfo a lo largo de
la Sierra Madre Oriental desde Nuevo Len y Tamaulipas, hasta el norte de Chiapas, en
la vertiente del Pacfico en la Sierra Madre del Sur en Oaxaca y en la Sierra del
Soconusco; especficamente en los estados de Chiapas, Distrito Federal, Hidalgo,
Michoacn, Morelos, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, San Luis Potos, Tamaulipas y
Veracruz.

La Influenza
La influenza es una enfermedad viral altamente infecciosa; su nombre lo adopt en el
siglo XV Italia, de una epidemia atribuida a la "influencia de las estrellas". La primera
pandemia o epidemia mundial debido a esta enfermedad se present en 1580. Se sabe
que al menos cuatro pandemias de influenza se presentaron en el siglo XIX, y tres en el
siglo XX. La pandemia de "Influenza Espaola" en 1918-1919 caus un nmero estimado
de 21 a 100 millones de muertes alrededor del mundo.
Los cientficos Smith, Andrews, y Laidlaw aislaron el virus de la influenza A en hurones en
1933, y posteriormente en 1936 el cientfico Francis repiti el experimento aislando el
virus de la influenza tipo B. En 1940 Burnet descubri que el virus de la influenza poda
crecer en huevos embrionados de gallina. Esto sirvi de gua para el estudio de las
caractersticas del virus y para el desarrollo de las vacunas inactivadas. La evidencia de la
eficacia protectora de las vacunas inactivadas fue producida en los aos 50s.

713

Virus de la Influenza

El virus de la influenza es de cadena simple de forma helicoidal, es un virus RNA de la


familia de los orthomyxovirus. Los antgenos bsicos tipos A, B y C son determinados por
el material nuclear. Influenza tipo A tiene subtipos que son determinados por antgenos de
superficie de hemaglutinina (H) y neuraminidasa (N). Tres tipos de hemaglutinina en
humanos (H1,H2 y H3) tienen un papel en el ataque de los virus a las clulas. Dos tipos
de neuraminidasa (N1 y N2) tienen un papel en la penetracin de los virus en las clulas.
La clasificacin del virus es la siguiente:

Influenza A causa enfermedad de moderada a severa, y afecta todos los grupos de


edades. El virus infecta humanos y otros animales, como los puercos y pjaros.

Influenza B generalmente causa enfermedad menos leve que el tipo A, y


primordialmente afecta a los nios. La Influenza B es ms estable que la influenza A,
con menor inestabilidad antignica y consecuencias en la estabilidad inmunolgica.
ste afecta solo a humanos. Puede ser asociado con el sndrome de Reye.

Influenza C es raramente reportada como causa de enfermedad humana,


probablemente porque la mayora de los casos son sub-clnicos. No ha sido asociada
con enfermedad epidmica.v

Influenza AH1N1
Este tipo de influenza caus un nmero inusual de muertes debido a que, causa una
reaccin de citocinas (protenas que regulan la funcin de las clulas que las producen u
otros tipos celulares) en el cuerpo. El virus (fig. 2) infecta clulas de pulmn, produciendo
una sobre-estimulacin del sistema inmune a travs de la liberacin de cantidades
importantes de citocinas en el tejido pulmonar. Esto causa una migracin importante de
leucocitos hacia los pulmones, lo cual ocasiona una destruccin del tejido pulmonar y la
secrecin de lquido hacia los mismos, dificultando as la respiracin del paciente. Debido
a la naturaleza de la infeccin, las personas con un sistema inmune saludable y normal
eran ms susceptibles a la enfermedad, tales como adultos jvenes, a diferencia de nios
pequeos y ancianos. La influenza o gripe tuvo una variante muy severa y mortal
denominada gripe espaola. Fue una enfermedad de infeccin viral, que caus la muerte
de entre 50 y 100 millones de personas en el mundo durante 1918 y 1919. Fue causada
por el virus de la gripe tipo H1N1.

714


Fig. 2. Imagen del virus.

Los virus de la gripe se muestran en tres gneros diferentes los cuales se llaman A, B y
C, dependiendo de sus caractersticas antignicas. Todos causan la enfermedad pero
solamente los de tipo A son los que pueden llegar a producir epidemias. Dentro de cada
gnero hay un apellido (H1N1) tiene que ver con la parte exterior del virus (fig. 3).

Fig. 3. Virus

La superficie est formada fundamentalmente por dos tipos de protuberancias: Unas en


forma de setas y otras en forma de conos.
Las que tienen forma de conos son las hemaglutininas, que son las protenas
responsables de que el virus se pegue a la clula o no. La razn por la que algunos virus
se contagian es porque tambin se pegan a las clulas objetivo muy fcilmente. En el
caso de la gripe, los objetivos son las clulas pulmonares. Para que se lleve a cabo la
mutacin del virus de la gripe se necesitan aproximadamente quinientos conos (la H,
hemaglutininas, del apellido). Las que tienen forma de setas son las neuraminidasas,
enzimas cuya misin principal es que el virus logre entrar en la clula que va a infectar.
Una cosa es pegarse a la superficie de la clula (funcin de la hemaglutinina) y otra el
ser capaz de penetrar la barrera de la superficie celular, que es de lo que se encargan las
neuraminidasas. Se necesitan aproximadamente cien setas para formar el virus (la N,
neuraminidasas, del apellido).

715

Fig. 4. Oseltamivir.

El oseltamivir (producido por los laboratorios Roche bajo la marca Tamiflu, fig. 4) es un
pro frmaco antiviral selectivo contra el virus de la influenza.vi ste es uno de los dos
antivirales que la Organizacin Mundial de la Salud recomienda para el tratamiento del
virus de la influenza y logra disminuir los sntomas una vez contrado el virus. Su
compuesto natural, cido shikmico, es extrado del rbol del ans estrellado (Illicium
verum), planta proveniente de China.vii El ans chino estrellado es un rbol, de 4-6 m de
altura, con corteza blanca y hojas lanceoladas enteras con flores amarillo-rosado y forma
de estrella.
Es originario de los bosques tropicales del sudeste asitico (sur de China y norte de
Vietnam), se cultiva en China, Filipinas y Jamaica,viii ste es procesado de una manera

especfica para poder obtener el cido shikmico (componente esencial del Tamiflu).
El cido shikmico se aisl por primera vez en 1885 de la planta japonesa SHIKIMI-NOKI
Ilicium religiosum por Eijkmanix. A partir de entonces se convirti en un compuesto muy
importante, ya que, ste da lugar a la sntesis de diversos compuestos, entre los que se
pueden encontrar aminocidos aromticos (fenilalanina y tirosina), indol (derivados del
indol y el aminocido aromtico triptfano), muchos alcaloides y otros metabolitos
aromticos, taninos, flavonoides, y lignina. Hoy en da, tras una serie de estudios, se ha
concluido que este cido se puede encontrar como metabolito de muchas plantas y
organismos no mamferos, a los que otorga un patrn de oxigenacinx. De acuerdo a la
nomenclatura de compuestos orgnicos el cido shikmico es cido 1 carboxil 3,4,5
trihydroxil cyclohexeno. Sus propiedades fsicas son: es un slido blanco cuyo punto de
fusin es de 190Cxi. Tiene una masa molecular de 174.15 g/mol.

Arbol Liquidambar Styraciflua


El Liquidmbar styraciflua (fig. 5) es un rbol proveniente de la familia liquidmbar, ste
se puede encontrar desde el este de Estados Unidos, hasta el Sur de Mxicoxii.
Las caractersticas de ste rbol son:

Rpido crecimiento en forma piramidal, puede alcanzar hasta los 41 m de alturaxiii.

716

Su tronco puede llegar a medir hasta 2 m de dimetro.

Sus hojas, en forma de palma y con 5 lbulos puntudos, tienen una longitud de 7 a 19
cm.

Su fruto es pesado y seco, mide desde 2.5 cm a 5 cm de dimetro, y contiene


numerosas cpsulas que al abrirse liberan 1 o 2 pequeas semillas cada una.

Fig. 5. rbol Liquidmbar styraciflua

Puede crecer en cualquier tipo de suelo, pues su especie no requiere ningn tipo de
tierra especfica.
Crece en lugares soleados o parcialmente nublados.
Es un rbol caducifolio, pues pierde la mayora de sus hojas durante otoo, y su
follaje cambia de color verde a naranja, rojo o morado.

PARTE EXPERIMENTAL, DESCRIPCIN DEL PROCEDIMIENTO:


El proceso de extraccin de cido shikmico a nivel laboratorio se realiz, bajo las
siguientes condiciones:

Temperatura de extraccin: 60C (agitador).

Temperatura para evaporacin de agua: 85C(al vacio) (mezcla shikmico con


impurezas disueltos en agua).

Tiempo total de extraccin: 48 hrs.

La experimentacin se realiz en el Laboratorio 204 de la Divisin de Estudios Superiores


de la Facultad de Qumica de la UNAM, del 25 de noviembre de 2009 al25 de junio de
2010
1. Se separaron los diferentes tipos de componentes del rbol:

717

Imagen 1. Separacin de semillas

Imagen 2. Hojas

Imagen. 3 Cpsula

Imagen 4. Componentes
Separados

Las estructuras utilizadas del rbol fueron:

Semillas no viables.
Hojas secas verdes (molidas).
Hojas secas cafs (molidas).
Hojas secas rojas (molidas).
Semillas viables.
Cpsulas.

Imagen 5. Semilla no
viable

Imagen 6. Hoja Verde Imagen 7. Hoja Seca Imagen 8. Semilla viable Imagen 9. Cpsula

2. Se suspendi cada uno de los componentes en agua como se indica y se mantuvo en


agitacin constante durante 20 horas a 60C en un agitador magntico:
a) 30 g de los componentes con 600 ml de agua.

Imagen 10. Semilla Corta en el agitador

Imagen 11. Filtracin a vaco con embudo Kitasato

718


Las especificaciones de los equipos e instrumentos utilizados en esta experimentacin
fueron:

Agitador magntico Cole-Parmer modelo 4803-00 de 115V de 60Hz, 4A.

3. El proceso de purificacin consisti en los siguientes pasos:


Se realiz la separacin de los residuos mediante la filtracin al alto vaco
utilizando un embudo Kitasato.
Se agregaron 5g de carbn activado con el propsito de eliminar las impurezas
restantes y se agit durante 15 minutos y filtr.

Imagen 12. Carbn


Activado

Imagen 13. 5g de Carbn

Imagen 14. Filtracin de


Carbn

Imagen 15. Filtracin a


vaco

4. Se evapor el agua remanente en un rotavapor hasta un volumen de 25 ml de agua.


Nota: Se coloc en la columna del rotavapor hielo con sal reduciendo la temperatura a 23C., para evitar la fuga de agua hacia el vapor y para lograr un mejor abatimiento el
punto de ebullicin.

Imagen 16. Carbn Activado

Imagen 17. Hielo y Sal

5. Se adicion resina Amberlite (resina inica intercambiable) para atrapar el cido


shikmico,se agit por 15 minutos, se filtr en un embudo de filtro de vidrio poroso 4060. Se lavo en dos ocasiones con 100 ml de agua destilada para eliminar impurezas.
resina bsica + cido sal ( neutralizacin)

719

Imagen 19. Adicin de Resina al

Imagen 18. Resina Amberlite

6. Se prepar una solucin de 25 ml de cido actico con 75 ml de agua y se le adicion


a la resina para recuperar el cido shikimico.

Imagen 20. Adicin de cido

Imagen 21. Filtracin en Vidrio

Imagen 21. 20 ml ms de Agua

7. Despus de obtener el residuo cido, se le agregaron 20 ml ms de agua.


8. Se pes un matraz de fondo redondo con el objetivo de que al final se calculara la
diferencia entre ste y el matraz con el producto obtenido.

Imagen 22. Matraz de Fondo


Redondo

Imagen 23. cido en el Rota vapor y


Cristalizacin

Imagen 24. Producto Final

9. Se evapor el extracto cido del cido en el rotavapor. Durante este proceso se


cristaliz el cido shikmico en las paredes del matraz de bola.
NOTA: En caso de que an haya muchas impurezas se adiciona nuevamente agua con
carbn activado y se filtra en el Kitasato y evapora en el rotavapor. El proceso se puede
repetir 2 veces hasta obtener la pureza deseada, y que el compuesto cristalice.

720


10.
El producto obtenido se analiz por medio de resonancia magntica nuclear
pudiendo calcular la pureza del cido mediante la integracin de las seales
correspondientes, de esta forma se comprob que efectivamente se obtuvo la
substancia deseada.
RESULTADOS
Las cantidades utilizadas tanto de la estructura de la planta como de la obtencin final de
cido shikmico, as como los rendimientos y las purezas del cido obtenidos xivfueron los
siguientes:
Tabla 1. Resultados y rendimiento obtenidos.
Estructura de la Planta

Masa Inicial (g)

Masa Final (g)

Rendimiento (%)

Pureza (%)

Semillas viables

35

0.180

0.51

95

Semillas No Viables+ viables

35

0.110

0.32

90

Semillas No viables

35

0.035

0.17

90

Cpsulas

35

0.100

0.29

95

Hojas Secas Cafs

35

0.087

0.25

75

Hojas Secas Verdes

35

0.108

0.31

95

Hojas Secas Rojas

35

0.101

0.29

95

Lo cual nos indica que la obtencin de cido shikimico a partir de Lyquidambar es


factible. Encontrndose presente en las diferentes partes del rbol. Se contina con el
estudio de cantidad de liquidmbar en base a la maduracin de las cpsulas y semillas.

BIBLIOGRAFA
i

http://portal.salud.gob.mx/sites/salud/descargas/pdf/influenza/situacion_actual_epidemia_
110110.pdfvisitado el 15 de junio de 2010
ii

Acuerdo entre Sanofi-Avntis y Roche para la produccin de cido Shikimico

iii

http://www.dancewithshadows.com/pillscribe/india-taps-own-trees-for-raw-materialshikimic-acid-to-make-swine-flu-drug-oseltamivir/
iv

Williams, G. & McMillan, C. (1971). Frost tolerance of Liquidambar styraciflua native to


the

721


United States, Mexico, and Central America. Canad. J. Bot. 49(3): 1551-1558.
VRuiXiuetalStructuralBasisofPreexistingImmunitytothe2009H1N1PandemicInfluenza

VirusScience16April2010,Vol.328.no.5976,pp.357360.
ViPenelopeWardetal.Oseltamivir(Tamiflu)anditspotentialforuseintheeventofan

influenzapandemic
J. Antimicrob. Chemother. 2005 55: i5-i21;
Vii

Yang Xiao-yong et al Study on extracting and determination of Shikimic acid in Illicium


verum Hook.f. China Condiment 2009-12
viii

Manuel Miro Jodral Ed. Illicium,Pimpinella and Foeniculum, Medicinal and aromatic
plants, Industrial profile, CRC press204, USA
ix

1. Eijkman, J. F. Recl. Trav. Chim. Pays-Bas 1885, 4, 32.

Enrich, B.; Stencel, Scheuermann .M. (2008). Liquidambar styraciflua: a renewable


source of shikimic acid. Tetrahedron Letters 49(5), 2503-2505
xi

Bruce a Bohm Shikimic Acid (3,4,5-Trihydroxy-1-cyclohexene-1-carboxylic Acid) Chem.


Rev., 1965, 65 (4), pp 435466
xii

Johnson, R. L. Sweetgum, an American Wood. FS-266. Washington,

DC: US Department of Agriculture, Forest Service, 1985.


xiii

Gilman, E. F.; Watson, D. G. Liquidambar styraciflua Sweetgum.

Fact Sheet ST-358. Gainesville, FL: University of Florida, Institute of


Food and Agricultural Sciences, 1993.
xiv

La pureza del compuesto se realizo mediante RMN 300 MHz.

722

QPNat 02

EXTRACTOS DE AMARANTO Y SU ACCIN CONTRA EL COLESTEROL


1

MirandaVelsquezLyliaGraciela
CruzVegaDeliaElva2
3
OrandayCrdenasAzucena

RivasMoralesCatalina4
RodrguezArzaveJuanAntonio5

RESUMEN
Desde muchos aos se conoce que la hipercolesterolemia es uno de los factores de riesgo
para enfermedades cardiovasculares como lo son la aterosclerosis y el infarto al miocardio
los cuales a su vez son la principal causa de muerte en Mxico, se estima que 180,000
personas fallecen cada ao por esta causa, debido a que esta es una problemtica que ha
ido en aumento a pesar de los tratamientos oficiales que existen, es importante el desarrollo
de alternativas de tratamiento ms eficaces, seguras a la salud y accesibles a la poblacin
en general. En la presente investigacin se determin la actividad hipocolesterolmica de
dos extractos de Amaranthus hypochondriacus en un modelo in vivo, utilizando ratones
Balb/c hipercolesterolmicos, encontrando que el extracto metanlico a 50 mg/Kg de peso
tuvo una disminucin significativa en la reduccin del colesterol cuando se le compar con
el control, por lo que proponemos el uso de esta planta como una alternativa de tratamiento
de esta enfermedad.

ABSTRACT
Itisknownformanyyears,thathypercholesterolemyisoneofriskfactorsforchardiovascular
diseasesaswellastheatherosclerosisandthemyocardiuminfartwhicharethemaincausesof
death in Mexico. It is considered that 180, 000 people die every year by this reason, this
problematic has increased in spite of the official treatments, it is important to develop more
effective alternat treatments, safe to the health, and affordable to the population. In this
research was determined hypocholesterolemic activity on two extracts of Amaranthus
hypochondriacus in an alive model, it was used hypercholesterolemic Balb/c mice, and it was
found that the methanolic extract at 50 mg/Kg of weight had a significant decrease in the
reductionofthecholesterolwhenitwascomparedwiththecontrol,forthisreasonwesuggest
theuseofthisplantasanalternativetreatmentforthisdisease.

Maestra de tiempo completo, UANL, lmirandavelazquez@yahoo.com.mx


Investigadoradora del ITESM, elva_cruz2000@yahoo.com
3
Maestra de tiempo completo, UANL, azucenaoranday@hotmail.com
4
Maestra de tiempo completo, UANL, catalinarivas@yahoo.com.mx
5
Maestro de tiempo completo, UANL, jarzave@hotmail.com
2

723

INTRODUCCIN
Elcolesterolesunodelosllamadosnutrientesnoesenciales,esdeciresimprescindibleperono
hacefaltaingerirloporqueelpropioorganismopuedesintetizarlo,dehechosetratadeunodelos
lpidosograsasmsimportantesquecirculanporlasangrejuntoconlostriglicridos(1,2).Esun
intermediarioclaveenlabiosntesisdeunnmerodeesteroidesimportantes,incluyendolos
cidosbiliares,hormonasadrenocorticalesyhormonassexuales.Tomarexcesivagrasaconla
comidaproduceunaumentodelasntesisdelipoprotenasLDLaumentandoelcolesterol
circulanteenlasangreycomoconsecuencia,esmayorlaprobabilidaddequeseacumuleen
arterias(3).Ennuestrosdas,elnmerodepersonascuyoniveldecolesterolensangreexcedede
losnivelesnormalessehaincrementadoconsiderablementeenlosltimosaos.Las
enfermedadescardiovascularessehanconsolidadocomolaprimeracausademuerteenMxico,
sonocasionadaspordiversascausas,destacandoentreellaslahipertensinarterial(4).Apesarde
lostratamientosoficialesyaestablecidos,staesunaproblemticaquehaidoenaumento.Se
estimaqueaproximadamente180milpersonasfallecencadaaoporestacausa.
En el Pas y en el Mundo entero se han utilizado por muchos aos las plantas
medicinales, desde tiempos ancestrales es conocido que las plantas tenan efectos
curativos y se han utilizado para una gran variedad de padecimientos (5). En la presente
investigacin se estudiaron extractos de
A. hypochondriacus., determinando su
actividad hipocolesterolmica en un modelo in vivo. Esta planta es utilizada en la
medicina tradicional mexicana como remedio potencial para disminuir niveles de
colesterol.

RESULTADOSY/OANLISIS
MaterialBiolgico:
Paralarealizacindelpresenteestudiosecomprelgranodeamarantoqueseexpendeenlos
comerciosdelreametropolitanadelaCiudaddeMonterreyN.L.Elmaterialvegetalsetrituryse
realizaronextraccionesporlatcnicademaceracinatemperaturaambiente,paraobtener
extractosmetanlicoyetanlico(6).Losextractosobtenidosseevaporaronasequedadenun
rotavaporapresinreducida.

Ensayoinvivodeactividadhipocolesterolmica
SeutilizelmtodopropuestoporCruzycol.(7)modificado.Seformarongruposde6ratones
machosBALB/cconunpesoaproximadode25a28g.Seprobaronlosdosextractosadosisde100
y50mg/Kgdepesoengruposderatonesquesealimentaronconunadietaricaencolesterol

724


durante5das.Elextractoseadministrdiariamenteporvaoralmediantesondagstrica.Se
formaronotrosdosgruposutilizadoscomocontrol;unodeellossealimentconlamismadieta
ricaenlpidosyrecibilaadministracindiariadelvehculoempleadoparaladisolucindelos
extractos,estegruposeconsidercomocontrolhipercolesterolmico,elsegundogrupose
alimentcondietaordinaria(noenriquecidaenlpidos)eigualmenterecibilaadministracin
diariadelvehculoempleadoenlaformulacindelosextractos,estegruposeconsidercomo
controlnegativo.Alfinaldeloscincodaslosanimalessepusieronenayunopor12horas.Se
colectaronmuestrasdesangreporpuncinoculardec/ratnysedeterminelcolesterolsrico
totalenunanalizadorautomatizadoBeckmanCoulterSynchronCx7ClinicalSystem.
Identificacin de metabolitos:
Se realizaron pruebas qumicas los extractos obtenidos para determinar la presencia de
los siguientes metabolitos secundarios: esteroides, triterpenos, sesquiterpenlactonas,
flavonoides, alcaloides, cumarinas y oxhidrilos fenlicos (8).
Ensayo de letalidad sobre Artemia salina:
Se prepar una disolucin acuosa de sal de mar a una concentracin de 40 g/L con 1 g/L de
levadura de cerveza. 100 mL de esta solucin se colocaron en un recipiente parcialmente cubierto
de la luz y se aadieron 100 mg de huevecillos de A. salina. Posteriormente se coloc una lmpara
al lado expuesto a la luz para atraer a las larvas ms fuertes. A las 24 h las larvas que emigraron
hacia la luz se colocaron en un recipiente con disolucin nueva para ser incubadas nuevamente por
24 h. Posteriormente se succionaron con una micropipeta 100 l del medio salino con larvas y se
depositaron en los pozos de una microplaca a los cuales se les adicion el extracto. Para cada
extracto se prepararon concentraciones de 1000, 500 y 100 mg/ml. Adicionalmente se corrieron un
control negativo (solo medio salino) y un control positivo (100% de mortandad) con dicromato de
potasio a 600 ppm. Las larvas sobrevivientes se contaron a las 24 horas (9).
Resultados:
En cuanto a los resultados tenemos que los rendimientos de extraccin de A.
hypochondriacus a partir de material vegetal seco fueron: 3.60% etanlico y 1.66%
metanlico. En la determinacin del colesterol srico, los resultados obtenidos se
muestran en la Figura 1, en ella podemos observar que el extracto metanlico a
50
mg/kg de peso disminuy el colesterol 35.3% con respecto al control hipercolesterolmico
y a la dosis de 100 mg/Kg no mostr dicho efecto. Por otro lado, el extracto etanlico a las
mismas dosis no presento la actividad antes mencionada.

725

Figura 1. Actividad hipocolesterolmica de extractos de A. hypochondriacus, en ratones


machos Balb/c con hipercolesterolemia inducida (*p<0.01 vs. control hipercolesterolmico)
Serealizlaidentificacincualitativademetabolitossecundariosenlosextractos,evidencindose
lapresenciadeinstauraciones,carbohidratos,esterolesyalcaloidesenambos.Laspruebasparala
deteccindetriterpenos,sesquiterpenlactonas,cumarinasyflavonoidesmostraronlaausenciade
estosmetabolitosenlosdosextractos(Tabla1).

Tabla1.GruposfuncionalespresentesenextractosdeA.hypochondriacus
Extracto
Etanlico

Metanlico

Alcaloides

Carbohidratos

Esteroles

Insaturaciones

SeproblatoxicidadutilizandoelEnsayodeLetalidadsobreArtemiasalinaobtenindoseunaDL50
>1000mg/mlparalosextractos.

726

CONCLUSIONES

Enlospasesoccidentalessehaincrementadoconsiderablementelamortalidadpor
padecimientoscardiovasculares,principalmenteporlesindelasarteriascoronariasy
especficamenteenMxicolasenfermedadescardiovascularessehanconsolidadocomola
principalcausademuerte(4).Existendiversosestudiosconplantasmedicinalesquepersiguen
unaactividadhipocolesterolemiante(10,13).A.hypochondriacusesunaplantaqueseaprovecha
toda,susemillatieneunaltocontenidodeprotenas,vitaminasyminerales,existenreportesdeA.
esculentusyA.cruentusenloscualesseevidencialautilidaddelosmismosenelcontroldel
colesterol(14,15).Enelpresenteestudioseevalulaactividadhipocolesterolmicadedos
extractosdeA.hypochondriacus:metanlicoyetanlico,enratonesmachosBalb/caloscualesse
lesindujoauncuadrohipercolesterolmico.Elextractometanlicosolamentealadosisde50
mg/Kg.depesoindujounareduccinenlosnivelesdecolesterolsricode35.3%,siendoesta
actividadaltamentesignificativaconrespectoalgrupocontrolhipercolesterolmico(p<0.01
Tukey).Porelcontrarioelextractoetanliconopresentdichaactividadalasdosdosis
empleadas.Losresultadosobtenidosenladeterminacindelosmetabolitossecundarios
concuerdanconloreportadoporotrosautorescomoresponsablesdeactividad
hipocolesterolmicaenotrasespeciesdeamarantoyenotrasplantas.(16)
EnelensayodeLetalidadenArtemiasalinaningunodelosextractosresulttxicoaeste
organismoalasdosisempleadas,porloqueconlosresultadosobtenidossedemuestraquela
plantamedicinalA.hypochondriacusposeecompuestosconposibleactividadhipocolesterolmica
locualjustificaelusodeestaplantaenmedicinatradicional.Actualmenteserealizaelanlisis
qumicodelextractoacuosoafindedeterminarloscompuestosresponsablesdelaactividad
mencionada.
BIBLIOGRAFA

1. Valcrcel, J. M. (2000). Las plantas medicinales. Dsalud, No 17 pg 71-4.


2. Valcrcel, J. M. (2001). Plantas para regular colesterol y triglicridos. Dsalud, No 25 pg
36-4
3. Mahan, L. K., Escott-Stump. (1998). Nutricin y Dietoterapia de Krause. Mc. Graw-Hill.
9a. Edicin, Espaa. 525-553 pp.
4.SSA,ComunicadodeprensaNo.006,10/Enero/2002;http://www.salud.gob.mx/
5. Gonzlez, M.M. (1998). Plantas Medicinales del Noreste de Mxico. IMSS. Monterrey
Mxico. 5-6 pp.
6. Domnguez, X. A. (1973)Mtodos de Investigacin
Editorial LIMUSA. 33 pp.

Fitoqumica. Primera Edicin.

7. Cruz, A., Garduo, L., Salazar, M., Martnez, E., Daz, F., Chamorro, G., Tamariz, J.
(2001). High Hypolipidemic Activity of Saturated Side-Chain -asarone Analogs.

727


8. Domnguez, X. A. (1982).Qumica Orgnica Experimental. Primera Edicin. Editorial
LIMUSA. 1982; 76-86.
9. Mc. Laughlin J. L., Chang Ch., Smith D. L. (1988). Simple bioassays for the detection
and isolation of bioactive natural products. Departament of Medicinal Chemestry and
Pharmacognosy. School of Pharmacy and Pharmacal Sciences. Pardue University, West
Lafayette. IN 47907, USA.
11. Galati. E..M., Monforte. M.T., Forestieri. A. M., Miceli, N., Bade, A., Trovato, A. (1999).
Salvadora prsica L.: Hypolipidemic activity on experimental hypercholesterolemia in rat.
Phytomedicine. 6(3): 181-185.
12. Dwivedi, S., Gupta, D., Sharma, K. (2000). Modification of coronary risk factors by
medicinal plants. J. of Medicinal and Aromatic Plant Sciences. 22(1B): 616-620.
13. Abe, I., Seki, T., Noguchi, H., Kashiwada, Y. (2000). Gallolyl esters from rhubarb are
potent inhibitors of squalene epoxidase, a key enzyme in cholesterol biosynthesis. Planta
Medica. 66(8). 753-6.
14. Berrada, Y., Settaf, A., Baddouri, K., Cherrah, A., Hassar, M. (2000). Experimental
evidence of an antihypertensive and hypocholesterolemic effect of oil of argan, Argania
sideroxylon. Therapie. 55(3). 375-8.
15. Chaturvedi, A., Sarojini, G., Devi, N. L. (1993 ). Hypocholesterolemic effect of
Amaranth seed (Amaranthus esculentus). Plant Foods Hum Nutr. 44(1):63-70
16. Berger, A., Gremaud, G., Baumgarther, M., Rein, D. (2003). Cholesterol lowering
properties of Amaranth grain and oil in hamsters. Int. J. Vitam. Nutr. Res. 73(1):39-47
17.Wang,H.X.,Ng,T.,B.(1999).NaturalProductswithhypoglycemic,hypotensive,
hypocholesterolemic,antiatheroscleroticandantithromboticactivities.LifeSciences.65(25):2663
2677.

728


QPNat 04

CONSTITUYENTES QUMICOS Y ACTIVIDAD ANTIFNGICA DE CUATRO


ESPECIES DE LA FLORA CUBANA

Pupo Blanco Yoannia Gretel1


Malheiros Dinis de Mendona Dina Isabel2
Herrera Isla Lidcay3
Oviedo Chvez Ibeth4
Burgueo Tapia Eleuterio4

RESUMEN
La rica diversidad florstica de Cuba representa un gran potencial de compuestos
bioactivos. Sin embargo, an son limitados los estudios que proponen la integracin de
aspectos biolgicos y qumicos que avalen el empleo de antifngicos de origen vegetal para
el control de agentes causales de enfermedades destructivas en diversos cultivos
hortcolas. En este trabajo se aislaron e identificaron los metabolitos secundarios
mayoritarios (1-14) de los extractos no polares de flores de Lippia dulcis Trev. y Lantana
camara L, de hojas de Coleus amboinicus Lour. y de planta completa de Cleome viscosa L.,
cuatro especies de la flora cubana seleccionadas por su potencial antifngico en estudios
realizados previamente. Se evalu la actividad de los compuestos aislados en la
germinacin de esporas de los hongos Alternaria solani y Alternaria porri, y se determin su
concentracin inhibitoria mnima.

ABSTRACT
The Cuban flora represents a vast source of active substances, but there are few proposals
that integrate biological and chemical aspects in order to promote the use of botanical
fungicides to control causal agents of destructive illness in horticultural crops. From Lippia
dulcis Trev. and Lantana camara L flowers, and from Coleus amboinicus Leur. leaves and
Cleome viscosa L. whole plants, four species from the Cuban flora with antifungal potential,
the natural products (1-14) were isolated and identifying by spectroscopic techniques. In
addition, the antifungal properties of 1-14 were evaluated against Alternaria solani and
Alternaria porri using the fungi spore germination model, and it was stimated the minimun
inhibitory concentration.

729

INTRODUCCIN

La flora cubana posee unas 1700 especies, muchas de ellas con propiedades bioactivas
reconocidas en el campo de la medicina (Gonzlez et al., 2007). Sin embargo, su
aplicacin en la agricultura ha sido muy limitada, de manera que actualmente no se
emplea algn producto vegetal como alternativa al uso desmedido de fungicidas sintticos
para el control de hongos fitopatgenos foliares.
Alternaria solani (Ellis y Martin) Jones y Grout y Alternaria porri Ell. y Cif. son los agentes
causantes de las enfermedades ms importantes, desde el punto de vista econmico, que
atacan al tomate (Solanum lycopersicum L.) y a la cebolla (Allium cepa L.) en Cuba
(Almndoz et al., 2004; Gonzlez et al.; 2003).

Fac. Ciencias Agrcolas. Univ. Granma, Cuba. 2Dpto. Qumica. Univ. Beira Interior, Portugal. 3Fac. Ciencias
Agrcolas. Univ. Central de las Villas, Cuba. 4Dpto. de Qumica Orgnica, Postgrado en Ciencias QumicoBiolgicas ENCB-IPN, Mxico D. F.
eleuterio@woodward.encb.ipn.mx

Luego de un trabajo de prospeccin (Pupo, 2008) se encontr que los extractos


hidroalcohlicos de las flores de Lippia dulcis Trev y de Lantana camara L., de las hojas
de Coleus amboinicus Lour y de la planta completa de Cleome viscosa L. eran
promisorios en la bsqueda de antifngicos de origen botnico frente a los citados
patgenos. Con el fraccionamiento biodirigido de estos extractos se determin que las
fracciones hexnica y clorofrmicas de L. dulcis, C. viscosa y C. amboinicus, as como la
fraccin clorofrmica de L. camara presentaron una actividad antifngica sobresaliente,
segn los resultados de experimentos realizados en condiciones in vitro, semicontroladas
y de campo.
Estos elementos no son suficientes para avalar el uso de estos extractos en la produccin
hortcola, pues segn establece la Resolucin Conjunta de los Ministerios de Agricultura y
Salud Pblica de Cuba (MINAGRI-MINSP, 2007) se debe conocer, entre otros aspectos,
el ingrediente activo y la efectividad biolgica. La combinacin de la determinacin
qumica con el ensayo biolgico proporciona un conocimiento extenso sobre el efecto de
los compuestos y juega un papel decisivo en el desarrollo y modernizacin de las
preparaciones de origen vegetal (Sharapin, 2000). El objetivo de este trabajo consisti en
aislar e identificar espectroscpicamente los metabolitos secundarios principales
presentes en las fracciones activas de los extractos de Lippia dulcis Trev, Lantana camara
L., Coleus amboinicus Lour y de Cleome viscosa L., y determinar su actividad antifngica.

730

RESULTADOS Y ANLISIS

El material vegetal se colect en el mes de abril de 2009 en la provincia Granma, Cuba;


se prepararon ejemplares que fueron depositados en la coleccin del laboratorio de
Botnica de la Universidad de Granma (No. de depsito C 13, L 22, V 54 y V 55). El
material vegetal se sec en estufa (Labolen, SL) a 35 0C, luego se moli y se tamiz el
tamao de las partculas a 2.5 mm. Los extractos se prepararon al 10% en masa a partir
de 85, 170, 150 y 190 g de hojas de C. amboinicus, flores de L. dulcis, flores de L. camara
y planta completa de C. viscosa, respectivamente; por el mtodo de percolacin con
etanol al 70% durante siete das. El extracto hidroalcohlico se concentr en evaporador
rotatorio (Kika Werke) y se fraccion sucesivamente con hexano, cloroformo, acetato de
etilo y agua destilada con el empleo de un embudo de separacin de 4 L de capacidad.
Las fracciones seleccionadas previamente por su actividad antifngica fueron sometidas a
un proceso de separacin y purificacin de los principales metabolitos secundarios.
La separacin de los compuestos se realiz mediante el uso de cromatografa en columna
(CC) y cromatografa de capa delgada (CCD). Para la CC se emple como soporte slica
gel (100-200 Mesh, Aldrich-Sigma), y placas semi-preparativas de slica gel GF (20 x 20
cm, 1500 m de tamao de partcula, 2 mm de espesor del adsorbente, Analtech) para la
CCD. El seguimiento de la separacin de los compuestos se llev a cabo mediante CCD,
con la utilizacin de placas analticas de slica gel 60 F254 (1500 m de tamao de
partcula; 0.2 mm de espesor del adsorbente, Merck) a travs de la observacin de los
perfiles cromatogrficos bajo la luz ultravioleta (= 254 y 365 nm) y luego reveladas con
una solucin cida de sulfato de cerio amoniacal y calor.
Los espectros de Resonancia Magntica Nuclear (RMN) de 1H y de 13C fueron medidos
en un espectrmetro Varian, que oper a 500 y 125 MHz, respectivamente, usando
tetrametilsilano (TMS) como referencia interna.
De la separacin por CC con gradientes de hexano y AcOEt de la fraccin clorofrmica
(0.59 g) se obtuvieron 3.1 mg de 1; 4.2 mg de 2; 17.3 mg de 3 y 4.7 mg de una mezcla de
4 y 5. A partir de 2.0 g de la fraccin hexnica del extracto de la misma planta se
obtuvieron 191.0 mg de aceites que desde el anlisis de su espectro de RMN de 1H
mostr seales de una mezcla compleja de cidos grasos, y 121.0 mg de una mezcla de
6 y 7.
De la fraccin clorofrmica (4.5 g) de L. dulcis se obtuvieron 36.1 mg de 4 y 46.0 mg de 8;
y a partir de los 4.7 g de la fraccin hexnica se separaron 0.9 g de aceites; 5.0 mg de 9;
4.2 mg de 10 y 9.1mg de 4.
A partir 2.0 g de la fraccin clorofrmica de L. camara se obtuvieron 15.3 mg de una
mezcla de 11 y 12.
El trabajo de separacin de la fraccin clorofrmica (4.0 g) de C. viscosa condujo a 37.1
mg de 13 y 5.2 mg de 14. Mientras que desde la fraccin hexnica (6.9 g) se obtuvieron
30.3 mg de 6; 5.2 mg de 13 y 69.6 mg de 14.
Todos los compuestos fueron identificados por comparacin de sus datos de RMN con
aquellos descritos en la literatura. 5,4-dihidroxi-6,7-dimetoxiflavona (cirsimaritina) (1)

731


(Mesquita et al., 1986); carvacrol (2) (Exarchou et al., 2003), 5,7-dihidroxi-6,4dimetoxiflavona (Pectolinaringenina) (3) (Liu et al., 2007); 5-hidroxi-4,6,7-trimetoxiflavona
(salvigenina) (4) (Saednia et al., 2009); 5,4-dihidroxi-6,7,8-trimetoxiflavona (xantomicrol)
(5) (Sahn et al., 2006); -sitosterol (6) (Saednia et al., 2009); estigmasterol (7) (Xie et al.,
2000); 5-hidroxi-4,3,6,7-tetrametoxiflavona (santoflavona) (8) (Saednia et al., 2009); (+)hernandulcn (9) y (-)-epihernandulcn (10) (Kaneda et al., 1992); 4,5,7-trihidroxiflavona
(apigenina) (11) (Exarchou et al., 2003); 4,5-dihidroxi-7-metoxiflavona (genkuanina) (12)
(Mesquita et al., 1986), 5,3-dihidroxi-3,7,8,4',5-pentametoxiflavona (13) (Wollenweber et
al., 2007) y cleomeolide (14) (Burke et al.,1980).
R4
R1
8

R2
R3

O1

1'
2

OH

1
3
4
5
8
11
12
13

R5

2'

R1 R2
H
OMe
H
OH
H
OMe
OMe OMe
H
OMe
H
OH
H
OMe
OMe OMe

6'

OH

R6

R7

R3
OMe
OMe
OMe
OMe
OMe
H
H
H

R4
H
H
H
H
OMe
H
H
OH

R5
OH
OH
OMe
OH
OMe
OH
OH
OMe

R 6 R7
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
OMe OMe

22
23

OH

H
HO

6
7

9 6H
10 6H

H
OH
14

Figura 1. Estructura qumica de los compuestos aislados de L. dulcis, C. viscosa y C.


amboinicus y L. camara.

732


En condiciones in vitro y mediante el uso de la tcnica de gota colgante sobre
portaobjetos excavados (Kumaresan et al., 2005) se evalu el efecto de los compuestos
1-14, y de las subfracciones aceitosas de olor penetrante obtenidas de las fracciones
hexnicas de los extractos de hojas de C. amboinicus y de flores de L. dulcis en la
germinacin de las esporas de A. solani y A. porri. Se emplearon dosis de 25, 50, 100,
200, 400 gmL-1 y una concentracin de 5 x 104 esporas mL-1. Se utiliz como control de
actividad antifngica el Zineb (etilen-bis-ditiocarbamato de zinc) a 0.2 mgmL-1
Para la preparacin de las dosis se tom 1 mg de la sustancia a evaluar y se disolvi en 5
L de dimetilsulfxido (DMSO); con pipeta Pasteur se aadi ADE hasta completar el
volumen de 2.5 mL, obtenindose una solucin madre de 0.4 mg mL-1 (400 g mL-1) de
concentracin msica y 0.2% de DMSO (v/v). A partir de sta se tomaron alcuotas de
100, 50, 25 y 12.5 L, y se aadi agua destilada estril hasta obtener un volumen final de
200 L en las dosis de 200, 100, 50 y 25 gmL-1, respectivamente. Se determin la
concentracin inhibitoria mnima (CIM) segn Rahman et al. (2001) como la mnima
concentracin a la que no se observ germinacin del patgeno en las muestras
evaluadas. Los resultados se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1. Concentracin inhibitoria mnima (CIM) de los compuestos 1-14.
Compuestos

CIM
(gmL-1)
A. porri

Cirsimaritina

400

400

Carvacrol

100

100

Pectolinaringenina

400

400

Salvigenina

400

400

5y4

Xantomicrol y salvigenina

400

400

-sitosterol

7y6

Estigmasterol y -sitosterol

400

400

Santoflavona

25

25

(+)-Hernandulcn

A. solani

733


10

(-)-Epihernandulcn

11 y 12

Apigenina y genkuanina

50

50

13

5,3-Dihidroxi-3,7,8,4,5-pentametoxiflavona

400

400

14

Cleomeolide

200

200

Aceite

De la fraccin hexnica de C. amboinicus

50

50

Aceite

De la fraccin hexnica de L. dulcis

50

50

Leyenda: 400: La CIM es superior a la mayor dosis evaluada.


a

: No se observ actividad en las dosis evaluadas.

El DMSO a 0.2% (v/v) no provoc cambios significativos en el porcentaje de germinacin


de las esporas, por lo que se asume que los resultados observados corresponden
fundamentalmente a los compuestos evaluados.
-sitosterol (6), (+)-hernandulcn (9) y (-)-epihernandulcn (10) no mostraron actividad
antifngica a ninguna de las dosis evaluadas. La mezcla de estigmasterol (7) y -sitosterol
(6), a 400 g mL-1 mostr un 7 y 10% de inhibicin de las esporas de A. solani y A. porri,
respectivamente. Otra mezcla que ejerci mayor efecto que cada uno de los compuestos
por separado fue la combinacin de xantomicrol (5) y salvigenina (4); esta ltima a 400 g
mL-1 disminuy el poder germinativo de las esporas de A. solani en un 25% y de A. porri
en un 22%; mientras que, la mezcla evaluada a esta misma dosis, inhibi la germinacin
del 94% de los conidios de A. solani y la totalidad de las esporas utilizadas de A. porri. Lo
anterior permite suponer que el xantomicrol es ms activo que la salvigenina; y que
poseen una accin conjunta de tipo sinrgico.
El flavonoide cirsimaritina (1) a la mayor dosis evaluada provoc un 20 y 24% de
inhibicin de la germinacin de las esporas de A. solani y A. porri, respectivamente.
Pectolinaringenina (3) a una dosis de 400 gmL-1 inhibi la germinacin de las esporas de
A. solani en un 88%, y totalmente las de A. porri. El compuesto 5,3-dihidroxi-3,7,8,4,5pentametoxiflavona (13) evaluado a esta misma dosis impidi la germinacin de la
totalidad de las esporas de los dos patgenos.
Cleomeolide (14), carvacrol (2) y la mezcla de los flavonoides apigenina (11) y
genkuanina (12) redujeron completamente la capacidad de germinacin de las esporas de
los hongos a 200, 100 y 50 g mL-1, respectivamente. Es importante puntualizar que la
mezcla apigenina-genkuanina, a 25 g mL-1, logr inhibir ms del 50% de la germinacin

734


de los conidios de ambos hongos (61% en A. solani y 52% en A. porri). Los aceites de las
fracciones hexnicas de los extractos de hojas de C. amboinicus y de flores L. dulcis
mostraron un valor de CIM de 50 g mL-1. La santoflavona (8) es el compuesto que
mostr una mayor actividad antigerminativa, con un 100% de inhibicin a la dosis de 25
gmL-1.
Es importante mencionar algunas caractersticas distintivas en la actividad de algunos de
los compuestos ms activos. El diterpeno 14 mostr una extraordinaria capacidad para
reducir la longitud del tubo germinativo de las esporas. A una dosis de 25 gmL-1, aunque
germinan el 90% de las esporas, la longitud de sus tubos germinativos es muy inferior a la
observada en el control. El aceite de L. dulcis, la santoflavona (8) y la mezcla apigeninagenkuanina (11 y 12) provocaron daos morfolgicos importantes en los conidios, como
hipertrofia de algunos de sus segmentos y una coloracin ms oscura.

120
Compuesto 1

100
80
(%)

Inhibicin de la germinacin

La relacin concentracin-inhibicin de los flavonoides 1, 3, 4, 4-5, y 13 se muestra en las


Figuras 2 y 3.

Compuesto 3

60

Compuesto 4

40
Compuestos 4
y 5

20
0

Compuesto 13
25

50

100

200 400

Concentracin (g mL-1 )

Figura 2. Efecto de los flavonoides 1, 3, 4, 4-5 y 13 en la germinacin de los conidios


de A. solani

735

120
100

Compuesto 1

80
(%)

Inhibicin de la germinacin

Compuesto 3

60

Compuesto 4

40
20

Compuestos 4
y 5

0
25

50

100

200 400

Compuesto 13

Concentracin (g mL-1 )

Figura 3. Efecto de los flavonoides 1, 3, 4, 4-5 y 13 en la germinacin de los conidios


de A. porri.
La respuesta de los dos hongos frente a cada compuesto evaluado fue similar.
Salvigenina (4) fue el flavonoide menos activo pues slo mostr actividad a partir de los
200 gmL-1, mientras que cirsimaritina (1) lo hizo con la mitad de esta concentracin. No
obstante, a 200 y 400 gmL-1 fue semejante la inhibicin de la germinacin provocada por
estos compuestos en ambos hongos. La pendiente de las curvas que describen el efecto
de los otros flavonoides fue mucho mayor, lo que indica que los efectos de inhibicin de la
germinacin de los conidios en estudio son dependientes de las dosis evaluadas de los
compuestos. La zona de meseta observada en la curva que describe el compuesto 13
entre los 200 y 400 gmL-1 es indicativa de que la MCI puede ser inferior a los 400 gmL1
.
Esta es la primera vez que el xantomicrol (5) se aisla de C. amboinicus, aunque se ha
descrito de otras especies de la familia Lamiaceae (Grayer et al., 2001 y Sahn et al.,
2006). Tambin es la primera vez que la apigenina (11) y la genkuanina (12) se aislan de
L. camara, aunque se han identificado como componentes en extractos de otras especies
de la familia Verbenaceae (Toms-Barbern, 1988). En cuanto a la actividad biolgica de
los flavonoides (1, 3-5, 8, 11-13) y del diterpeno (14), esta es la primera vez que se
relaciona con actividad antifngica.
Con respecto a las especies vegetales, adems de los fitosteroles aislados de tres de las
cuatro plantas estudiadas, los resultados aqu obtenidos y los referidos por otros autores
indican que existe cierta similitud qumica entre L. dulcis, C. amboinicus y L. camara.
Salvigenina (4) es un compuesto comn a las dos primeras. La cirsimaritina (1) y la
pectolinaringenina (3) fueron aisladas de C. amboinicus. Ono et al. (2005) refieren la
existencia de estos compuestos en L. dulcis, mientras que, Romeo et al. (2004) aislaron la
flavona glucosilada 7-O--D-pectolinarigenina (derivado glucosilado del flavonoide
pectolinaringenina) de plantas cubanas de L. camara. Nuestros resultados y los descritos

736


por otros autores fortalecen lo sealado por Toms-Barbern (1988), que menciona que el
patrn de los flavonoides de los gneros Lamiaceae y Verbenaceae es muy similar.

CONCLUSIONES Y/O RECOMENDACIONES


El estudio qumico de las fracciones no polares de los extractos hidroalcohlicos de flores
de Lippia dulcis Trev. y Lantana camara L, de hojas de Coleus amboinicus Leur. y de
planta completa de Cleome viscosa L. permiti el aislamiento e identificacin de ocho
flavonoides (1, 3-5, 8, 11-13) y de seis terpenoides conocidos (2, 6, 7, 9, 10, 14).
Se encontraron compuestos comunes entre las plantas estudiadas: el flavonoide
salvigenina (4) y los esteroles estigmasterol (7) y -sitosterol (6) se aislaron de C.
amboinicus y L. dulcis; adicionalmente 6 se aisl del extracto hexnico de C.viscosa.
Los flavonoides aislados de las especies en estudio presentan similitudes estructurales,
con un grupo hidroxilo en C-5, C-7 y C-4 y diferente grado de metoxilacin en otras
posiciones.
Se aisl por primera vez el flavonoide xantomicrol (5) de C. amboinicus, y apigenina (11) y
genkuanina (12) de L. camara.
El diterpeno cleomeolide (12) y los flavonoides (1, 3-5, 8, 11-13) mostraron actividad
contra A. solani y A. porri. Siendo el ms activo la santoflavona (8) que present una
concentracin inhibitoria mnima de 25 gmL-1. Tambin mostraron actividad antifngica
los aceites esenciales obtenidos de las fracciones hexnicas de los extractos de flores de
L. dulcis y hojas de C. amboinicus.
Se recomienda determinar la composicin qumica de los aceites esenciales obtenidos de
las fracciones hexnicas de los extractos de flores de L. dulcis y hojas de C. amboinicus.

737

BIBLIOGRAFA

Almndoz, J.; Muio, B. & Stefanova, M. (2004). Evaluacin de nuevos fungicidas de


origen qumico y biolgico para el control del tizn temprano, causado por Alternaria
solani Sorauer. Trabajo presentado en Evento Internacional CENSAV, 2004. La Habana,
Cuba.
Burke, A.; Chan, W. & Hanken, V. (1980). The structure of cleomeolide, an unusual biciclic
diterpene from Cleome viscosa L. (Capparaceae). Tetrahedron 36, 3489-3493.
Exarchou, V.; Godejohann, M.; Van Beck, T.; Gerothanasis, J. & Vervoot, J. (2003). LCUV-solid-phase extraction-NMR/MS combined with a cryogenic flow probe and its
application to the aidentification of compounds present in Greek oregano. Analitical
Chemestry 75, 6288-6294.
Gonzlez, J.; Prieto, S.; Garca, M.; Gonzlez, K. & Monteagudo, R. (2007). Perspectivas
en el tratamiento de procesos virales con plantas medicinales. LabCiencia con Noticias
Tcnicas del Laboratorio 15 (3), 11-14
Gonzlez, Y.; Santos, B.; Herrera, L.; Hernndez, R. & Rojas, X. (2003). Influencia de la
temperatura sobre la actividad biolgica de filtrados crudos de Alternaria porri (Ellis)
Ciferri. Centro Agrcola 30 (4), 21-24.
Grayer, J.; Veitch, N.; Kite, G.; Price, A. & Kokubun, T. (2001). Distribution of 8-oxigenated
leaf-surface flavones in the genus Ocimum. Phytochemistry 56, 559-567.
Kaneda, N.; Lee, I.; Gupta, M.; Soejarto, D. & Kinghorn, D. (1992). (+)-4
hydroxyhernandulcin, a new sweet sesquiterpene from the leaves and flowers of Lippia
dulcis. Journal of Natural Products 55 (8),1133-1141.
Kumaresan, K., Subramanian, M., Vaithiyanatan, S., Sevagaperumal, N., Gopal, C. &
Dilantha, G. (2005). Broad spectrum action of phenazine against active and dormant
structures of fungal pathogens and root knot nematode. Archives of Phytopathology and
Plant Protection 38 (1), 69-76.
Liu, S.; Zhang, J.; Li, D.; Liu, W.; Luo, X.; Zhang, R.; Li, L. & Zhao, J. (2007). Anticancer
activity and quantitative analysis of flavone of Cirsium japonicum DC'. Natural Product
Research 21(10), 915-922.
Mesquita, A.; Corra, D.; Pdua, A.; Guedes, M.& Gottieb, O. (1986). Flavonoid from four
Compositae species. Phytochemistry 25 (5), 1255-1256.
MINAGRIMINSAP (2007). Reglamento de uso de formulados plaguicidas. Resolucin
Conjunta. Gaceta Oficial de la Repblica de Cuba. Ao CV (16), 77-84.

738


Ono, M.; Morinaga, H.; Masuoka, Ch.; Ikeda, T.; Okawa, M.; Kinjo, J. & Nohara, J. (2005).
New bisabolanetype sesquiterpenes from the aerial parts of Lippia dulcis. Chemical.
Pharmaceutical. Bulletin 53 (9), 1175-1177.
Pupo, Y. (2008). Seleccin en condiciones in vitro de extractos vegetales promisorios para
el control de Alternaria solani (E. y M.) J. y G. y Alternaria porri Ell. y Cif. Tesis en opcin
al grado acadmico de Master en Ciencias Agrcolas. Universidad de Granma. Cuba.
78pp.
Rahman, A. & Thomson, W. (2001). Bioassay techniques for drug development. Harwood
Academic Publisher, USA.
Romeu, C.; Nogueiras, C. & Pino, J. (2004). Estudio qumico y bioactividad de Lantana
camara L. para el control de plagas. Centro Nacional de Sanidad Vegetal, La Habana,
Cuba.
Saeidnia, S.; Moradi-Afrapolo, F.; Gohari, A. & Malmir, M. (2009). Cytotoxic flavonoids
from Achillea talagonica Bioss. Journal of Medicinal Plants 8 (5), 52-56.
Sahn, P.; Ezer, N. & alis, J. (2006). Terpene and phenolic compounds from Sideritis
satricta. Turkish Journal of. Chemistry 30, 495-504.
Toms-Barbern, F.; Grayer, R.; Gil, M. & Harborne, J. (1988). Distribution of 6hydroxy6-methoxy, and 8-hydroxyflavone glycosides in the Labiatae, the Scrophulariacaeae and
related families. Phytochemistry 27 (8), 2631-2645.
Wollenweber, E.; Valant-Vetschera, K. & Roitman, J. (2007). Chemodiversity studies on
exudate flavonoids of Cleomaceae species (Brassicales). Natural Product
Communications 2 (10), 997-1002.
Xie, D.; Wang, L.; Ye, H. & Li, G. (2000). Isolation and production of artemisin and
stigmasterol in hairyt root cultures of Artemisia annua. Plant cell, Tissue and Organ
Culture 63, 161-166.

739


QPNat 06

QUMICA DE LOS BAMBES Bambusa vulgaris var. vittata, Bambusa


oldhamii Munro Y Guadua angustifolia Kunth PROVENIENTES DEL
MUNICIPIO DE HUATUSCO, VERACRZ
Fernndez Garca Gabriel 1
2
vila Caldern Luz Elena A
3
Herrera Ferreyra Marco Antonio

RESUMEN
En la actualidad el bamb es considerado un recurso forestal no maderable con alto
potencial. Las investigaciones a esta gramnea de caracterstica leosa ha permitido una
evolucin en su aprovechamiento, de lo tradicional a nuevos usos tecnolgicos e
industriales. En diversos pases se cataloga como madera dura que sustituye, de manera
alternativa, a madera arbrea en diversas aplicaciones, generando nuevas economas y
contribuyendo al ahorro y restauracin de sus bosques. Mxico es catalogado como el
segundo pas con mayor diversidad de bamb leoso en Centroamrica. Sin embargo, el
que menos ha estudiado este recurso en comparacin a otros pases. Por lo que la presente
investigacin esta dirigida a determinar las caractersticas qumicas elementales de las
especies de bamb denominadas Bambusa vulgaris var. Vittata, Bambusa oldhamii Munro y
Guadua angustifolia Khunt cultivadas en el municipio Huatusco, Veracruz, con la finalidad
de obtener datos relevantes para posibles usos y aprovechamiento tecnolgico.

ABSTRACT
Today bamboo is considered a non-timber forest resources with high potential. Research
this woody grass feature has allowed an evolution of its use, from traditional to new
technological and industrial uses. In several countries is classified as hardwood replaced,
alternatively, a timber tree in various applications, creating new economies and contributing
to saving and restoring forests. Mexico is ranked as the second greatest diversity of woody
bamboo in Central America. However, the least studied this resource compared to other
countries. As this research is aimed at obtaining basic chemical characteristics of bamboo
species called Bambusa vulgaris var. Vittata, Bambusa oldhamii Munro, and Guadua
angustifolia Khunt grown in Huatusco Veracruz, in order to obtain relevant data for possible
use and technology utilization.

1
Estudiante de maestra de la Facultad de Ingeniera en Tecnologa de la Madera, Universidad Michoacana
de San Nicols de Hidalgo. fdzgabriel@hotmail.com
2
Profesora investigadora. Facultad de Ingeniera en Tecnologa de la Madera. Universidad Michoacana de
San Nicols de Hidalgo. lavila@umich.mx
3

Profesor investigador. Facultad de Ingeniera en Tecnologa de la Madera. Universidad Michoacana de San


Nicols de Hidalgo. mherrerf@umich.mx

740

INTRODUCCIN
El bamb es cada vez ms un activo econmico importante en la erradicacin de la
pobreza, el desarrollo econmico y medioambiental. Siempre ha desempeado un
importante papel econmico y cultural a travs de Asia. Ahora la utilizacin del bamb
crece rpidamente en Amrica Latina y frica. En algunos pases, la transformacin del
bamb se ha desplazado de una gama menor de utensilios de artesana de calidad, a
productos de mayor valor aadido, como paneles laminados, tableros, pulpa, papel,
esteras, casas prefabricadas, brotes de bamb comestible y tela. Esto fue sealado en
marco del Encuentro para la Evaluacin Global de Recursos Forestales No Maderables
2005, efectuado por la Organizacin de las Naciones Unidas para la agricultura y la
alimentacin (FAO) y la Red Internacional de Bamb y Ratn (INBAR) en Roma
(Lobovikov y col. ,2007).
En Asia el bamb representa un recurso muy importante para la economa de sus pases;
de los 10 millones de toneladas que se producen anualmente en el mundo, la mayor parte
se produce en esa regin. Solamente en China se estima que el crecimiento de los
bosques de bamb, anualmente es de 3.5 millones de toneladas (Sharma 1980).
En Tailandia debido a la veda total impuesta en el ao 1989 a causa de la explotacin de
madera en los bosques del
pas, se ha dado impulso al aprovechamiento y
comercializacin de los productos forestales no maderables (PFNM) como el bamb y el
ratn, gomas y resinas, plantas comestibles como setas, plantas medicinales y especias,
insectos comestibles, taninos y otros cultivos que han beneficiado a las comunidades
dependientes de los bosques (Soriano, 2008).
En Mxico un estudio realizado en 2001 por la Secretaria de Agricultura, Ganadera,
Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin (SAGARPA) identifica el mercado mundial de
bamb, seala que los principales pases exportadores de bamb, con grado de
procesamiento, son China y la India. Ambos pases controlan alrededor del 80 % de la
produccin mundial. China, Taiwan, Tailandia, Sudfrica, Israel, Indonesia y Japn son
predominantemente los que exportan el bamb como materia prima. Estados Unidos es
uno de los mayores consumidores de bamb, sus importaciones alcanzan los tres
millones de dlares anuales. De ellas, el 71 %, proviene de China; y el resto de Taiwan,
Tailandia, Sudfrica, Israel, Indonesia y Japn. El comercio exterior mexicano de bamb
es deficitario. En 1995 las importaciones, provenientes de Taiwan, superaron a las
exportaciones en casi 4 veces. Su posicin es como comprador, importador de estos
productos. En nuestro pas, debido a que no se ha considerado al bamb como un
recurso natural aprovechable, se le destruye en vez de aprovechar su potencial. Este
estudio destaca a Mxico como productor potencial, cuya situacin geogrfica podra
favorecer comercialmente debido a la cercana y fcil acceso a los Estados Unidos y
Canad, dos de los mayores consumidores de bamb en el mbito mundial. (SAGARPA,
2001).
El objetivo de este trabajo es conocer las caractersticas qumicas bsicas de tres
especies de bamb: Bambusa vulgaris var. vittata, Bambusa oldhamii Munro y Guadua

741


angustifolia Kunth cultivadas en el municipio Huatusco, Veracruz, mediante obtencin de
porcentaje de componentes inorgnicos (cenizas), pH, solubilidad en sosa al 1%,
solubilidad mediante extraccin sucesiva, determinar el contenido de holocelulosa , celulosa y lignina de las especies,
datos relevantes para posibles usos y
aprovechamiento tecnolgico.

RESULTADOS
Se selecciono 3 culmos de Bambusa vulgaris var. vittata , Bambusa oldhamii Munro y
Guadua angustifolia Kunth procedentes de las parcelas demostrativas de la Asociacin
Bambuver fueron marcados, derribados y dimensionados conforme a Norma ISO 22157 y
suministrados bajo las siguientes condiciones especificadas: edad de maduracin 5 aos,
sanas y en estado verde. Se extrajo la seccin internodal mas cercana a la altura de
pecho (SIMAP) (figura 1) para someterla a astillado manual y fase de molienda en molino
Willey conforme a la norma T 257 om-85 (TAPPI, 2000) hasta obtener harina de madera
de bamb, la cual fue tamizada para obtener partcula de 420m, retenida en malla 60
como lo muestra la imagen 1.
Una vez obtenida la muestra, se someti al proceso experimental mostrado en figura 2
apegado a normas ASTM (American Society for Testing and Materials) mediante una
replica, reportando los primeros resultados.

Figura 1. Culmo y seccin internodal


ms cercana a la altura del pecho.
Fuente: Hidalgo 1981.

742

Imagen 1. Fases del proceso


de astillado y molienda para
obtener harina de bamb.

Figura 2. Secuencia general de anlisis qumico de las especies.

Tabla 1. Composicin qumica bsica de tres especies de bamb sometidos a la


secuencia general de anlisis qumico de las especies maderables.

Especie
Anlisis
Qumico

Bambusa Vulgaris

Bambusa

Guadua

var.vittata

oldhamii Munro

angustifolia Kunth

(%)

(%)

(%)

ContenidosdeHumedad
pH
Contenidodecenizas
Potasio
Slice
Magnesio
Calcio
Fosforo

8.2439
6.3
3.75
34.22
7.46
0.68
0.83
0.32

11.0145
5.894
2
32.15
4.56
6.28
1.76
1.73

Solubilidad
alaSosa1.0%
Extraccintotalsucesiva
deextrables
Ciclohexano

23.30
8.99

26.33

17.29

15.1322
5.833
2.21
35.83
7.69
0.33
ND
0.81

24.78

9.88

0.33

0.44

0.57

743

Acetona
Metanol
AguaCaliente

4.74
10.12
1.98

15.64

10.56

2.77
4.26
2.27

15.77

25.28

24.05

24.41

Contenidodehumedaden
harinalibredeextrables

Lignina

1.27
5.28
2.10

ND= no detectado
El contenido de cenizas representa un aproximado medible de minerales contenidos en la
madera, estos componentes inorgnicos de cenizas varan de 0.8% a 9.7% con un mayor
contenido en la regin nodal que en el internodo. Estos consisten en slice, cobre, zinc,
hierro, potasio, calcio, magnesio, manganeso (Tamolang y col. 1980). El contenido de
cenizas se mantiene en rangos bajos por realizarse el anlisis de la seccin internodal. Se
realiz el anlisis de cenizas mediante microscopio electrnico de barrido encontrando
niveles predominantes en potasio, slice, magnesio, calcio y fosforo reportados en la tabla
1.
La prueba de solubilidad en sosa al 1.0% se aplica para determinar parmetros del grado
de deterioro fngico o degradacin por calor, luz u oxidacin. La especie 2 reporta 26.33%
siendo la de mayor sensibilidad el deterioro comparada a las otras dos especies. Chao y

col. (1971) reporta 22.77 % para la misma especie.


La extraccin sucesiva de extrables permite determinar un porcentaje de material soluble
no considerado como parte de la substancia madera, y son principalmente ceras, grasas,
resinas, aceites, as como taninos, gomas, materia colorante, azucares y almidones. La
especie 2 presenta un mayor porcentaje de material extrable en su fase polar con
metanol (6.6 de ndice de polaridad). Lo anterior puede indicar la presencia de
compuestos tipo flavonoide (familia de los polifenoles) que son compuestos vegetales no
nitrogenados, muchas veces estos compuestos son la respuesta adaptativa de las plantas
para protegerse de los nocivos efectos de la radiacin ultravioleta (Hernndez, 2008).
Los rangos reportados por Tamolang (1980) para porcentajes de contenido de lignina en
bamb se encuentra en 20 a 25%, mantenindose las especies 2 y 3 dentro de este
rango.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Los resultados obtenidos de este estudio buscan mostrar datos bsicos de la qumica del
bamb procedente de Huatusco Veracruz y forman parte de una investigacin ms
robusta que considera caractersticas anatmicas, fsicas y mecnicas de las especies
Bambusa vulgaris var. vittata, Bambusa oldhamii Munro y Guadua agustifolia Kunth para
obtener, en su anlisis y relaciones, datos relevantes que permitan establecer parmetros
de aprovechamiento tecnolgico.

744


La integracin de una red de investigacin para el bamb es necesaria en nuestro pas
para as establecer criterios, procedimientos experimentales y bancos de informacin
accesible que faciliten desarrollar el potencial tan amplio de este recurso.

BIBLIOGRAFA
ASTM (American Society for Testing and Materials). 2000. Standard test metods for
evaluating propieties of wood-base fiber and particle panels meterials. D 1037-99.
Mannual book of ASTM standars. Seccin 4: construction. Volumen 04.10: Wood .
Conshohocken, pp. 145 -156
Chao, S.C., Y.C. Ku, S.J.Lin and T.T. Pan. Measurements of fiber dimensions and
analysis of chemical composition on Taiwan hardwoods. Bulletin of Taiwan For. Res. Inst.,
no. 14, June 1971, 26pp.
Hernndez, A. 2008. Propuesta para el desarrollo de un Nuevo aprovechamiento
industrial de la Guadua angustifolia Kunth mediante la utilizacin de sus extractos
vegetales. Universidad Technological de Pereira. Colombia.
SAGARPA. 2001. El bamb estudio del mercado mundial. Direccin General de
Desarrollo de Mercados pp. 5-20,
ISO 22157-1:2004 . Bamboo -- Determination of physical and mechanical properties Parte 1: Requirements. Parte 2: Laboratory manual. International Organization for
standardization. [Internet] Ginebra, Suiza. Disponible en:
<http://www.iso.org/iso/iso_catalogue/catalogue_tc/catalogue_detail.htm?csnumber=3615
0> [Consulta: Agosto 3, 2009]
Lobovikov, M; Paudel S; Piazza M; Ren H; Wu J. 2007. Word bamboo resourses. A
thematic study prepared in the framework of the Global Forest Resources Assessment
2005. Non-wood forest products. FAO-INBAR. Roma.
Soriano, F.P. 2008. Utilizacin sostenible del bamb en Tailandia. Actualidad forestal
tropical. Organizacin Internacional de maderas tropicales. OIMT. 16(2):15-17.
Tamolang, F.; Lopez, F.; Semana, J.;Casin, R.; Espiloy,Z. 1980. In Lesserd, G.;Chouinard,
A. ed., Bamboo research in Asia. Procedings of workshop held in Singapore, 28-30 May
1980. International Development Research Center. Ottawa, Canad. Pp 189-200.
Sharma, Y.M.L. 1980. Bamboo in Asia Pasific region. Bamboo research in Asia:
Procedings of a workshop held in Singapore. Ottawa, Ont. Canad. p: 99-120.

745