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por qu el estudio de la inhibicin enzimtica?

Investigacinbsica:

Losinhibidoresenzimticossonunaherramientatilpara
distinguirentrelosposiblesmecanismosquepuedeseguir
unareaccin,enespecialenelcasodelasmultisustrato.

Elestudiodelasafinidadesrelativasdedistintosinhibidores
competitivosdeunaenzimaproporcionainformacinsobrela
estructuradelcentroactivoycontribuyeacomprenderel
mecanismocataltico.

Lainhibicinenzimticaconstituyeunadelasformasde
regulacindelafisiologaydelmetabolismocelular,
fundamentalmentelainhibicinalostrica.

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Investigacinaplicada:

Aplicacionescomerciales(agricultura):insecticidas,herbicidas.

Aplicacionesbiomdicas:frmacos,omedicamentos,engeneral.

Blancosmolecularesdelaaccindelosfrmacos

enzimas 47%

DNA 1%
integrinas 1%
otras dianas 2%
otros receptores 4%

GPCRs 30%

canales inicos 7%

transportadores 4%
receptores nucleares
de hormonas 4%

Distribucin por familias de los blancos de frmacos comerciales de pequeo tamao (<500 Da)
Nature Reviews Drug Discovery (2002)

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

INHIBIDORES REVERSIBLES la unin del inhibidor a la enzima es


dbil.
INHIBIDORES PSEUDOIRREVERSIBLES la unin del inhibidor a la
enzima es fuerte.
INHIBIDORES IRREVERSIBLES la unin del inhibidor a la enzima es
prcticamente irreversible, generalmente covalente (inhibidores
suicidas).

2. INHIBICIN REVERSIBLE
Los inhibidores reversibles son sustancias que forman complejos dinmicos o
reversibles con la enzima ( interacciones de tipo dbil) y que presentan propiedades
catalticas diferentes a las de la enzima libre.

Cumplen las condiciones impuestas al Substrato para la deduccin de la ecuacin


cintica de M&M:
La concentracin inicial de inhibidor

[I0] >> [E0]

Inhibicin Reversible

Ejemplos representativos de inhibidores


reversibles con aplicacin farmacolgica:
(Fuente:R.A.Copeland Evaluation of Enzyme Inhibitors inDrugDiscovery,2005)

COMPETITIVOS
Compuesto

Enzimablanco

Indicacinclnica

Estatinas
Captoprilo,enalaprilo
Saquinavir,indinavir
Viagra,levitra
Acetazolamida
Gleevec
Metotrexato(THF)

HMGCoA reductasa
ACE*
ProteasaVIH
FosfodiesterasaGMPc
Anhidrasa carbnica
BcrAblquinasa
Dihidrofolato reductasa

Hipercolesterolemia
Hipertensin
SIDA
Disfuncinerctil
Glaucoma
Cncer
Cncer

*enzimaconvertidoradeangiotensina

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

ACOMPETITIVOS
Compuesto

Enzimablanco

Indicacinclnica

cidomicofenlico

IMPdeshidrogenasa

Inmunosupresin,cncer

Finasterida
Metotrexato(NADPH)
cidovalproico
Campotecina
Ciglitazona

Esteroide5reductasa
Dihidrofolato reductasa
UDPglucuronosiltransferasa
Topoisomerasa I
15hidroxiprostaglandina
deshidrogenasa

Hiperplasiabenignadeprstata
Cncer,infeccionesbacterianas
Metabolismodexenobiticos
Cncer
Enfermedadesinflamatorias

Compuesto

Enzimablanco

Indicacinclnica

Nevirapina,efavirenza

TranscriptasainversaVIH

SIDA

TF505
Etopsido
Tacrina
PO0325901,CI1040

Esteroide5reductasa
Topoisomerasa II
Acetilcolinesterasa
MAPquinasa quinasa (MEK)

Hiperplasiabenignadeprstata
Cncer
EnfermedaddeAlzheimer
Cncer

MIXTOS

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

%inhibicin:
dependedeKi y[I]

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid


[I ]
= 1 +

Ki

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Vmax [ S ]
v=
K M + [S]

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

- Algunos inhibidores de este tipo suelen tener aplicaciones medico-farmacuticas.

Cules sern los mejores?


aquellos que tengan un valor de KI pequeo

Clculo del grado de inhibicin,

i:

Grado de inhibicin es un valor entre 0-1


- Razn entre la velocidad en presencia de I y en ausencia.

[I ]
i =

[S ]
[I ] + K i 1 +

KM

Vi
a=
V
i = 1 a

Segel, Enzyme Kinetics, Captulo III

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Hanes-Woolf: rectas
paralelas inhibidor
competitivo

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Km frente a [I]
Vmax

Km
Ki
Vmax

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

KI: constante de

disociacin del
complejo ESI

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Identificacin del tipo de inhibicin y


determinacin de parmetros cinticos:

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Hanes-Woolf: ordenada
en el origen comn
inhibidor acompetitivo

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Representaciones secundarias:

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Hanes-Woolf:
pendientes y
ordenadas en el
origen crecen con [I]
inhibidor mixto

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Inhibidor mixto,
no-competitivo

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Representaciones secundarias:

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Enzyme Inhibition (Mechanism)

Equation and Description

Cartoon Guide

Competitive

Non-competitive

Substrate

Compete for
Inhibitor active site

Uncompetitive
E

X
I

Different site

E + S
ES E + P
+
I

EI

E + S
ES E + P
+
+
I
I

EI + S EIS

E + S
ES E + P
+
I

EIS

[I] binds to free [E] only,


and competes with [S];
increasing [S] overcomes
Inhibition by [I].

[I] binds to free [E] or [ES]


complex; Increasing [S] can
not overcome [I] inhibition.

[I] binds to [ES] complex


only, increasing [S] favors
the inhibition by [I].
Juang RH (2004) BCbasics

Enzyme Inhibition (Plots)


I

Competitive

Non-competitive

Direct Plots

Vmax

vo

vo
I

Double Reciprocal

Km Km

[S], mM

Km = Km

Uncompetitive

Vmax

Vmax

Vmax

Vmax

[S], mM

Km Km

[S], mM

Vmax unchanged
Km increased

Vmax decreased
Km unchanged

Both Vmax & Km decreased

1/vo

1/vo

1/vo

Intersect
at Y axis

1/Km

Two parallel
lines

1/ Vmax
1/[S]

Intersect
at X axis

1/Km

1/ Vmax
1/[S]

1/ Vmax
1/Km

1/[S]

Juang RH (2004) BCbasics

http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/animations/
enzyme_inhibition/index.html

http://biology-animations.blogspot.com/2011/12/enzyme-inhibitionanimation.html