ESTUDIOS DEL AGUA

Donde toda agua potable es aquella que rene condiciones organolpticas,

fsicas qumicas y microbiolgicas que puedan ser consumidas por la poblacin
humana sin producir cualquier tipo de efecto adverso.
El estudio del agua es un proceso de naturaleza fsico qumica y biolgica,
que tiene como objetivo la supresin o ajuste de una serie de sustancias y
microorganismos que implican riesgos y peligros para el consumo o comunican
al agua un aspecto o cualidad organolptica indeseable; para finalmente
obtener un agua apta para el adecuado uso/consumo humano.
1. Objetivo
Es obtener una muestra representativa del agua de inters sanitario.La toma
de muestras debe respetar, por consiguiente la composicin microbiolgica del
agua captada.
2. Ambito de aplicacin
REQUISITOS DE CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO (Segn
la NORMA OS.0.20)
A). Agua apta para el consumo humano
Es toda agua inocua para la salud que cumple los requisitos de calidad
establecidos en el presente Reglamento.
B). Parmetros microbiolgicos y otros organismos
Toda agua destinada para el consumo humano, como se indica en el Anexo I,
debe estar exenta de:
1. Bacterias coliformes totales, termotolerantes y Escherichia coli,
2. Virus;
3. Huevos y larvas de helmintos, quistes y ooquistes de protozoarios
patgenos;
4. Organismos de vida libre, como algas, protozoarios, coppedos, rotferos y
nemtodos en todos sus estadios evolutivos; y
5. Para el caso de Bacterias Heterotrficas menos de 500 UFC/ml a 35C.
C). Parmetros de calidad organolptica
El noventa por ciento (90%) de las muestras tomadas en la red de distribucin
en cada monitoreo establecido en el plan de control, correspondientes a los

parmetros qumicos que afectan la calidad esttica y organolptica del agua

para consumo humano, no deben exceder las concentraciones o valores
sealados en el Anexo II del presente Reglamento. Del diez por ciento (10%)
restante, el proveedor evaluar las causas que originaron el incumplimiento y
tomar medidas para cumplir con los valores establecidos en el presente
Reglamento.
D). Parmetros inorgnicos y orgnicos
Toda agua destinada para el consumo humano, no deber exceder los lmites
mximos permisibles para los parmetros inorgnicos y orgnicos sealados en
la Anexo III del presente Reglamento.
E). Parmetros de control obligatorio (PCO)
Son parmetros de control obligatorio para todos los proveedores de agua, los
siguientes:
1. Coliformes totales;
2. Coliformes termotolerantes;
3. Color;
4. Turbiedad;
5. Residual de desinfectante; y
6. pH.
En caso de resultar positiva la prueba de coliformes termotolerantes, el
proveedor debe realizar el anlisis de bacterias Escherichia coli, como prueba
confirmativa de la contaminacin fecal.
http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/toma_muestra/toma_muestras.
html
http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/FiltraMembColiT_auto.html
http://www.cerper.com/lab_microbiologia.html
https://www.google.com.pe/search?q=UNE-EN+ISO+6222:1999+
(Recuento+de+Bacterias+Viables)&biw=1280&bih=675&source=lnms&sa=X&
ei=gcNzVNKkKI2TsQSd9YKwDQ&ved=0CAUQ_AUoAA&dpr=1#q=limites+maxi
mos+permisibles+de+parametros+microbiologicos+y+parasitologicos
http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/reglamento_calidad_a
gua.pdf

http://www.vivienda.gob.pe/Direcciones/Documentos/RNE_Actualizado_Solo_Sa
neamiento.pdf
http://www.aenor.es/aenor/normas/normas/fichanorma.asp?
codigo=N0022196&tipo=N#.VHPDkiKG9zY
http://www.watersolutionsperu.com/pdf/analisis_cerper.pdf
http://sistemas.indecopi.gob.pe/crtacre/index.html

Tipos de muestras:
En el caso de anlisis microbiolgicos de aguas, la muestra para analizar debe
ser siempre simple, sin que se puedan obtener muestras compuestas ni
integradas, de modo que la muestra para el laboratorio sea la obtenida en el
punto de muestreo.
3. Material
Exceptuando el material o aparatos especficos que puedan utilizarse para
determinadas tomas especiales, los frascos ms adecuados son los de vidrio
neutro con tapn esmerilado o roscado, muy limpios y esterilizados en
autoclave a 120C durante treinta minutos o en horno de Pasteur a 180C
durante dos horas.
Tambin pueden utilizarse frascos de material macromolecular con tapn
roscado, esterilizados mediante etileno xido, radiaciones gamma u otros
sistemas adecuados. El tapn y el cuello del frasco se protegern con una
cubierta de papel, papel de aluminio u otro similar.

Los recipientes empleados han de tener una capacidad mnima de 250 ml, si
bien es til disponer de otros de mayor capacidad cuando la tcnica analtica
as lo exija.
4. Tcnica de muestreo
Las operaciones que comporta la toma de muestras varan segn la naturaleza
del agua a analizar y el punto de muestreo elegido.

Grifos
Una vez retirados filtros u otros accesorios se
proceder a una cuidadosa limpieza con agua o
alcohol.
Con el grifo cerrado se flamear el extremo del
mismo, mediante la llama obtenida con un poco
de algodn empapado de alcohol y sostenido con
unas pinzas o bien una lmpara de soldar.
Se abrir el grifo para que el agua fluya
abundantemente y se renueve la contenida en la
tubera que la alimenta. Se destapar el frasco
esterilizado sin tocar la boca del mismo ni el
interior del tapn.
Todos los movimientos debern realizarse sin
interrupciones, al abrigo de corrientes de aire y
con las mximas precauciones de asepsia.
Pozos y depsitos
Si se dispone de bomba de captacin se opera
como se ha indicado en el caso del grifo.
Si no existe sistema de bombeo, no es posible
obtener una muestra representativa.
Con esta salvedad se introducir en la masa de
agua el frasco de muestreo o un cubo lo ms
limpio posible, sostenidos con una cuerda y
tomando la muestra tras haber agitado la
superficie del agua con el mismo recipiente.
Tambin podrn utilizarse aparatos especiales
lastrados que permiten introducir el frasco
esterilizado y destaparlo a la profundidad
deseada. En estos casos debern utilizarse
frascos con tapn a presin.
Lagos, ros
En ros o cursos de agua ser preciso considerar
diversos factores, tales como: profundidad,
caudal, distancia a la orilla, etc. La muestra se
tomar lo ms lejos posible de la orilla,
procurando no remover el fondo y evitando los
remansos o zonas de estancamiento.
Para tomar una muestra del agua de un lago o de
un ro se sujetar el frasco por el fondo en
posicin invertida, sumergindolo completamente
y dndole la vuelta en sentido contrario a la
corriente (ro) o desplazndolo horizontalmente
en la direccin de la boca del frasco (lago).

Manantiales
En manantiales naturales, o fuentes de caudal
continuo, sin dispositivos de intermitencia, se
tomar la muestra directamente sin adoptar
medidas especiales de drenaje.

Bocas de riego
Para el muestreo en bocas de riego se utilizarn
acoplamientos especiales que permitan operar
como en el caso de un grifo.

En todos los casos la muestra de agua no deber llenar totalmente el frasco, siendo
necesario dejar un espacio interior a fin de facilitar su homogenizacin en el momento de
iniciar los anlisis.

Bibliografa
EDU, A. (2014). Capacidad Portante de los Suelos. Recuperado el 19 de
setiembre de 2014, de Capacidad Portante de los Suelos:
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MEF. (Setiembre de 2004). Parametros de diseo de infraestructura de agua y
saneamiento . Recuperado el 20 de Octubre de 2014, de Parametros de
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de setiembre de 2014, de RNE Actualizado Solo Saneamiento:
http://www.vivienda.gob.pe/Direcciones/Documentos/RNE_Actualizado_S
olo_Saneamiento.pdf

PRACTICAANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUAINTRODUCCINDentro de

las necesidades bsicas, y quizs una de las ms importantes que requieretoda poblacin,
est relacionada con el acceso al agua de buena calidad, es decir, alagua potable. Es as
como el agua, su accesibilidad y su calidad han comenzado acondicionar directamente el
tipo de vida de una comunidad y por lo tanto su calidadde vida.Directamente asociado a la
salud est el consumo, calidad y disponibilidad del agua.Estos tres componentes, separada
o conjuntamente, han determinadouna grancantidad de problemas de salud que afectan a
vastos sectores de la poblacin mundial.Un ejemplo de esto lo da el hecho que,
aproximadamente, el 40% de la poblacinmundial sufre en la actualidad por falta de agua, y
se ha comprobado que en los pasesdel tercer mundo o en vas de desarrollo, ms del 80%
de las enfermedades tienen suorigen en esta carencia o en las condiciones insalubres del
agua que utilizan.Los recuentos de bacterias heterotrficas en placa son tiles para

determinar lapotabilidad de un agua; as como tambin la eficiencia de las operaciones para

eliminarmicroorganismos, como la sedimentacin, filtracin y cloracin.La evaluacin
rutinaria del agua en busca de microorganismos patgenos, comoSalmonellaspp. y Shigella
spp. puede ser difcil de realizar ya que el nmero de estasbacterias es relativamente
escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebasbacteriolgicas del agua potable que
demuestren la presencia de microorganismosindicadores que siempre estn presentes en
materia fecal, fcil de demostrar y quesirva de gua para conocer el grado de contaminacin
fecal.El grupo Coliforme ha sido adoptado como el indicador de contaminacin fecal
msdigno de confianza. El microorganismo indicador ms comnmente utilizado
esEscherichia coli, considerando la OMS preferible emplear la expresin Coliformefecal
que comprende un nmero ligeramente mayor de variedades, todas ellas declaro origen
fecal e indicadores de contaminacin fecal reciente.OBJETIVOS-Realizar el recuento en
placa de bacterias heterotrficas y la tcnica del NMP usandotubos mltiples para
coliformes en muestras de agua potable-Determinar si la muestra analizada es apta para el
consumo humano.MATERIALES-Muestras de agua potable de diferente origen (grifo,
purificada y embotellada,cisterna u otro)-Frascos Shott de 500 mL. estril y con Tiosulfato
de sodio al 3%.-3 tubos de ensayo conteniendo c/u 9 ml de agua de dilucin estril

2. -6 tubos de 20 x 180 mm conteniendo c/u 15-20 ml de agar Plate count

estril,mantenidos a 45-47 C en bao mara-5 tubos de 20 x 180 mm con campana de
Durham, conteniendo 10 ml de caldo lauriltriptosa de doble concentracin.-10 tubos de 18 x
150 mm con campana de Durham, conteniendo 10 ml de caldo lauriltriptosa de simple
concentracin-10 tubos de 18 x 150 mm con campana de Durham, conteniendo 10 ml de
caldoLactosa bilis verde brillante de concentracin sencilla.-10 tubos de 18 x150 mm con
campana de Durham, conteniendo 10 ml de caldo E.C.(Escherichia coli) de simple
concentracin.-6 cajas Petri estriles-Gradillas para tubos de 18 x 150 mm y de 20 x 180
mm-Pipetas estriles de 10 ml y de 1 ml graduadas en dcimas, estriles.-Mechero BunsenAsa bacteriolgica-Agitador de tubos Vortex-Contador de colonias Quebec.-Incubadora a
35C.-Bao mara para c. fecales a temperatura constante de 44,5
C.PROCEDIMIENTORecoleccin de muestrasLas muestras que se tomarn para el
anlisis deben ser representativas para poderdeterminar as su calidad microbiolgica. Hay
normas para la toma de muestras deaguas segn sus distintas procedencias (grifos, pozos,
depsitos, lagos, ros,manantiales, etc.). Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y
deberecolectarse cantidades comprendidas entre 200, 500 y 1000 ml.Muestreo de un
GrifoAbrir el grifo, hasta que alcance su flujo mximo y dejar correr el agua durante
dosminutos. Este procedimiento limpia la salida y descarga el agua que ha
estadoalmacenada en la tubera.Abrir el frasco de muestreo. Llenar el frasco dejando un
espacio de aire(aproximadamente un tercio del frasco) para facilitar la agitacin de la
muestra antesdel anlisis bacteriolgico.Cuando se estime probable que el agua a analizar
contenga trazas de cloro, cloraminauozono, sernecesario neutralizar su efecto bactericida
en el momento del muestreo.Para ello se aadiruna cantidad suficiente de tiosulfatosdico.
Para un volumen de250 mlson suficientes 0,2 mlde una solucin acuosa al 3% de
tiosulfatosdico.Procedimiento analticoSu anlisis debe comenzar antes de que hayan

transcurrido 6 horas desde el momentode la toma de muestras. En circunstancias

excepcionales, las muestras puedenconservarse a una temperatura de 4Cdurante un
periodo mximo de 24 h antes de suanlisis.Homogeneizar agitando un nmero no menor
de25 veces, inclinando el frasco y formando un
3. ngulo de aproximadamente 45 entre el brazo y el antebrazo.Recuento de
bacterias heterotrficas1. Realizar diluciones decimales de la muestra de agua, hasta la
dilucin 10-3. Depositar1ml de cada dilucinen cada placa Petri, por duplicado.2. Verter 1520 ml del medio agar Plate count contenido en tubos en cada placa yhomogeneizar cada
caja mediante movimientos de translacin y rotacin en unasuperficie plana
aproximadamente 1 minuto evitando que se mojen la tapa y loscostados de la caja, de esta
manera el agua y el agar son mezclados ntimamente.3. Dejar solidificar (5-10 min), invertir
las placas y colocarlas en la estufaa 37C(+/-1C),incubar durante24- 48h. Si se desea
conocer la flora bacteriana total de la muestra, seemplean placas con medio agarextracto de
levadura y las condiciones sern:22Cdurante 72 horas.4. Transcurrido el tiempo de
incubacin contar las colonias que se han desarrollado encada una de las placas, usando
un cuenta colonias para efecto de facilitar la lectura.Seleccionar las placas que contengan
entre 30 y 300 colonias y descartar las otras.5. Si la cantidad de agua sembrada ha sido de
1ml la expresin del resultado es directa.Si la cantidad de agua sembrada ha sido de 0.1 ml,
el nmero de colonias contadashabr de dividirse por el volumen de muestra sembrada, es
decir, por 0.1, paraobtener el nmero de colonias por mililitro.6. Los resultados se
expresarn as:NMERO DE BACTERIAS MESFILAS AEROBIAS:
________ufc/mlNOTA:Si no se observan colonias en ninguna de las cajas sembradas, el
resultado no ser 0(cero) UFC/ml, sino que ser referido al menor grado de dilucin
sembrado. Si lamenor dilucin sembrada fue de 10-1, el resultado sera: <10
UFC/ml.Numeracin de Coliformes por el Mtodo del Nmero Ms Probable por
tubosmltiplesLa tcnica del NMP comprende siempre una prueba presuntiva y otra
confirmativaSe sembrar 10, 1 y 0,1 ml de la muestra, en tres series de 5 tubos cada una.A)
Prueba presuntiva1. Inocular la primera serie de tubos con caldo Lauril triptosa a
dobleconcentracin con10 mililitros de muestra. A continuacin, inocular un mililitrode
muestra en cada unode los 5 tubos correspondientes a la siguiente serie. Finalmente
sembrar 0,1 mililitrosde la muestra en cada uno de los 5 tubos.2.Despus de la inoculacin
de todos los volmenes de muestra, agitar la gradilla conlos tubos inoculados. Hacerlo en
forma horizontal y evitando que el medio sembradollegue a la tapa de los tubos.3. Despus
de la incubacin a 35 0,5 C por 24 3 horas, retirar los tubos de laincubadora para
efectuar la primera lectura de los resultados. Agitar suavemente cadatubo y examinar la
produccin de gas. Retirar los tubos con resultado positivo(produccin de gas, retenida en
el tubo Durham; no es importante la cantidad de gas)y anotar los resultados.4. Devolver a la
incubadora (35 0,5 C) todos los tubos con resultados negativos, porun periodo adicional
de 24 1 hora. La segunda lectura (a las 48 3 horas) ser hechaen las mismas
condiciones, despus de esta ltima lectura. Los tubos con resultado
4. positivo sern separados para continuar la marcha analtica y los que
resultennegativos sern descartados.5. Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se
da por terminado, reportando laAUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la

muestra analizada.B) Prueba confirmativaa) Prueba confirmativa para Coliformes

totalesTodos los tubos positivos de la prueba presuntiva son confirmados.Agitar cada tubo
positivo de la prueba presuntiva con un asa de siembra estril parahomogeneizar e inocular
con tres asadas tubos conteniendo 10 mililitros de caldoverde brillante lactosa bilis 2%
(CLVBB 2%) correspondiente. Evitar tomar la pelculasuperficial.b) Prueba confirmativa para
coliformes termotolerantesLa prueba confirmativa para coliformestermotolerantes se
realizar sembrando 3 asadas detodos los tubos positivos de la prueba presuntiva entubos
conteniendo 10 mililitros de caldoE.C.La siembra para la confirmacin de coliformestotales y
termotolerantes puede hacerse en formaparalela.Despus de la siembra, agitar la gradilla
conlos tubos inoculados. Hacerlo en forma horizontal yevitando que el medio
sembradollegue a la tapa delos tubos.1.Incubar los tubos de caldo verde brillante lactosa
bilis 2% sembrados a 35 0,5 Cdurante 24 3 horas.Despus de la incubacin, retirar los
tubos para efectuar la primera lectura. Agitarsuavemente cada tubo y examinar la
produccin de gas. Retirar los tubos conresultado positivo (produccin de gas en el tubo
Durham; no es importante la cantidadde gas) y anotar los resultados.Volver a incubar los
tubos negativos a 35 0,5 C durante 24 1 horas y repetir elprocedimientode lectura.
Anotar losresultados.2. Incubar todos los tubos de caldo EC inoculados (no ms de 30
minutos despus de lainoculacin) en bao Mara a 44,5 0,2 C durante 24 2
horas.Proceder a la lectura considerando como resultado positivo para la prueba todos
lostubos que presentaron formacin de gas en eltubo Durham.Con los datos obtenidos en la
prueba confirmativa, calcular elNMP de coliformestotales y termotolerantesPara este
clculo, se seleccionan los tubos con resultados positivos en las pruebasconfirmativas de
coliformes totales y termotolerantes, obtenidos en las tres seriesconsecutivas inoculadas.
Con los tubos positivos de cada serie se forma unacombinacin de nmeros (tambin
denominada cdigo), que corresponde a un valorde Nmero Ms Probable de coliformes.