Inmunohistoquimica

La inmunohistoqumica (IHC) se refiere al proceso en el que se usan anticuerpos para

detectar antgenos en un corte o seccin de tejido biolgico. Utilizando la unin especfica
de los anticuerpos con los antgenos especficos marcados con fluorforos
(inmunofluorescencia) o enzimas.
Mtodo de Deteccin Directo VS. Indirecto

Con la deteccin directa, el marcador se une a travs de un enlace covalente al

anticuerpo primario que reacciona directamente con el antgeno en secciones de
tejido.

Con el mtodo indirecto, el marcador se une covalentemente a un anticuerpo

secundario, que se une al anticuerpo primario durante el inmunoensayo.

Preparacin de la muestra:

Existen dos mtodos para la preparacin:

1. Procesado sobre portaobjetos: unen cortes de tejido a superficie de portaobjetos

pueden ser gelatinizados o con carga positiva
2. Procesado por flotacin: las muestras se recogen y procesan en recipientes
especiales en forma de cilindro abierto con una malla. Asegura una mxima
penetracin y homogeneidad en la tincin.
Pre-incubacin:

Facilita la penetracin de Ac.

Disminuye el marcaje inespecfico.

Reactivos: Tampn fosfato o tris-HCl

Permeabilizacin del tejido: Mtodos que facilitan el acceso de Ac al interior del tejido

Solucin detergente: triton x-100, Tween 20 de 0.1-1%

Congelamiento y descongelamiento de tejido.
Tratamiento con proteasas.
Escala creciente de detergente.

Bloqueo de uniones inespecficas:

Bloquear radicales libres y saturar la unin Ac-protenas.

-Para bloqueo de radicales libres: se satura tejido de molculas de bajo peso

molecular que reaccionan con R.L. Borohidruro de Sodio o cloruro de amoniaco.

Inmunofluorescencia
La inmunofluorescencia es una tcnica utilizada para visualizar la distribucin de una
protena o antgeno especfico en clulas o secciones de tejido utilizando la
especificidad de los anticuerpos por su antgeno para dirigir marcadores fluorescentes
a las biomolculas dianas de forma especfica.
Hay dos tipos principales de mtodos de marcaje en inmunofluorescencia:

1) el marcaje directo en el que el anticuerpo primario est marcado con un

marcador fluorescente.

2) el marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado con un

fluorocromo se utiliza para reconocer un anticuerpo primario.

Preparacin de la muestra:

Mtodos de conjugacin: conjugacin de protenas en el suero completo o en

fracciones luego de concentrar los Ac.

Procedimiento:

- Amortiguador de carbono-bicarbonato (pH=9)

- Agitacin en bao de hielo aade fluorocromo.

Purificacin del conjugado: eliminacin por dilisis de las sales amortiguadoras.

Eliminacin de substancias fluorescentes que no reaccionan, se lleva a cabo por
medio de filtracin con carbn o filtracin en columna.