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Son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica,

ver figura 1, 2 y 3.

reacciones catalizadas por enzimas tienen lugar con


velocidades de 1.000 a 1000.000 de veces ms
rpidas que si no esta catalizada la reaccin por la
enzima. Se calcula que la ruptura de las protenas
en el proceso digestivo tardara ms de 50 aos, en
lugar de pocas horas sin la accin enzimtica.

Cmo se realizan todas las actividades celulares?

Pueden ser:

Mediante las enzimas, sustancias presentes en las


clulas en cantidades muy bajas y capaces de
efectuar cambios propios de los procesos celulares.
Responsables de todas las reacciones qumicas de
la clula.

-Enzimas extracelulares o exoenzimas (funcionan


fuera de la clula)
-Enzimas intracelulares o endoenzimas (funcionan
dentro de la clula)

Clase III
Enzimas

Propiedades Fsicas y Qumicas de los enzimas


Son protenas (secuencias de aminocidos) que
pueden tener unidos otros grupos qumicos, se
desnaturalizan con calor al igual que las protenas,
se precipitan en presencia de etanol o de aumento
en la concentracin de sales inorgnicas como
sulfato amnico, no se difunden a travs de
membranas semipermeables o selectivas, ver figura
2 y 3.

Figura 1. Transcripcin, transduccin y sntesis de


protenas (1).

El comercio de enzimas para uso industrial y


domstico asciende a centeneres de millones de
dolares anualmente. Los enzimas industriales se
utilizan en la produccin de productos qumicos y
farmacuticos. Recientemente su aplicacin de
enzimas inmovilizadas esta creciendo.

Figura 2. Naturaleza de los enzimas (1).

Propiedades generales de los enzimas


a)

Tienen la especial capacidad de acelerar las


reacciones
qumicas,
sin
alterarse
como
consecuencia de la reaccin, son especficos y solo
actan en un determinado tipo de reaccin. Como
todos los catalizadores funcionan en una
concentracin molar mucho menor que la del
reactivo sobre el cual funciona. Un mol de enzima
facilita la conversin de muchos moles de reactivo
en
producto.
Una
molcula
enzimtica
generalmente cataliza la conversin de 10 a 1.000
molculas de sustrato/s. Con frecuencia estas
LEOQ

c)
b)
Figura 3. a) Estructura secundaria b) Estructura
terciaria c)Estructura cuaternaria o funcional.

Son molculas muy grandes, su peso molecular


oscila entre 10.000 y 1000.000. Muchas estn
integradas a otra molcula orgnica de menor
tamao llamada coenzima, algunas coenzimas
estn integradas por una vitamina ejemplo las del
grupo B, la parte proteca se denomina apoenzima ,
unidas forman una haloenzima. A veces el grupo no
proteico de un enzima es un metal, ejemplo el hierro
de la catalasa, requiere de su adicin para que se
active. Estos iones constituyen coenzimas
inorgnicas o cofactores. A veces se requiere de un
cofactor y una coenzima para que actu un enzima.
Se han extrado de la clula un buen nmero, son
de eficiencia extrema al acelerar la transformacin
del sustrato en producto final, ver figuras 2,3,4 y 5.
Figura 5. Catlisis (1)

Figura 3. Sustrato entrando en la enzima (1).

Figura 6. Formacin del producto (1).

1.000 molculas de sustrato / s pueden


transformarse por la accin de una molcula de
enzima.
Actividad molecular: nmero de molculas de
sustrato transformadas por molcula de enzima por
minuto.
Unidad de enzima: Cantidad de enzima g, mg, g,
capaz de catalizar la transformacin de una
cantidad de sustrato por minuto, a unas condiciones
dadas de temperatura, pH, fuerza inica.
Katal: cantidad de enzima capaz de convertir una
mol de sustrato en un segundo a unas condiciones
dadas.
No se gastan ni se alteran como consecuencia de la
reaccin, ver figura 6. Son inestables su actividad
puede reducirse o desaparecer, dependiendo de

Figura 4. Complejo enzima-sustrato (1).

LEOQ

diferentes condiciones fsico-qumicas, algunas se


inactivan por pequeos cambios como la exposicin
a temperatura ambiente por corto tiempo.
Caractersticas
1. Su alta eficiencia como catalizadores
2. Su alto grado de especificidad al sustrato,
un enzima determinado solo puede
reaccionar con determinado sustrato o si
acaso con un grupo de sustancias muy
relacionadas qumicamente.
Como los enzimas aceleran las reacciones
La funcin principal de una enzima es rebajar el
nivel de energa de activacin necesario para que
tenga lugar una reaccin qumica. La energa de
activacin es la cantidad de energa necesaria para
inducir en una sustancia un estado de reactividad.
El enzima se combina con la sustancia (S)
inducindole una situacin transitoria que requiere
una menor energa de activacin, para que tenga
lugar la reaccin, ver figura 7.

Figura 7.
Como puede verse una reaccin
catalizada por un enzima tiene una energa de
activacin ms baja y por tanto se necesita menos
energa para que tenga lugar (2).

Los estudios sistemticos del efecto de la


concentracin inicial del sustrato sobre la actividad
enzimtica comenzaron a realizarse a finales del
siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del
complejo enzima-sustrato como intermediario del
proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor
Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten
(foto de la derecha) desarrollaron esta teora y
propusieron una ecuacin de velocidad que explica
el comportamiento cintico de los enzimas. Para
explicar la relacin observada entre la velocidad
inicial (v0) y la concentracin inicial de sustrato ([S]0)
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones
catalizadas enzimticamente ocurren en dos
etapas: En la primera etapa se forma el complejo
enzima-sustrato y en la segunda, el complejo
enzima-sustrato da lugar a la formacin del
producto, liberando el enzima libre:

Ley de rapidez para una reaccin simple


catalizada por un enzima.
Considrese una reaccin con un reactivo, el
sustrato S, y un producto, P.
S

(1)

Si es catalizada por un enzima los sustratos y


productos as como su concentracin permanecen
iguales. Lo que significa que la enzima acelera la
reaccin en dos sentidos
E
S

(2)

Es por su unin con el sustrato que la enzima


efecta la conversin a producto, y esto puede
expresarse como dos equilibrios

K1

K3

K2

K4

E + S
ES E + P

(3)

Las mediciones cinticas ms comunes de las


reacciones catalizadas por enzimas son las de
incremento uniforme en la concentracin del
producto que ocurre en una solucin diluida de la
enzima, a la cual se ha aadido un exceso de
sustrato. Inmediatamente despus de que E y S se
mezclan , el producto comienza a formarse a una
LEOQ

rapidez constante. Este incremento constante en la


concentracin del producto, d[P]/dt, se designa
como v0, la velocidad inicial en estado estacionario
. Se considera que v0 es una velocidad inicial
porque solo se consume una proporcin muy
pequea del sustrato mientras se estn haciendo
las mediciones, la [S] prcticamente es constante y
la v0 que se mide corresponde al valor inicial de la
[S].

Si se evala ES en trminos de E0, [S] y las


constantes cinticas, la ecuacin (6)
dar el
resultado esperado por Briggs y Haldane.

La concentracin de producto [P], ser muy


pequea en las condiciones antes descritas. De
esta manera puede pasarse por alto la reaccin
inversa de E con P para formar ES, luego la
ecuacin (3) se convierte en:
K1

K3

E + S
E+P
ES

(4)

K2

En ambas ecuaciones (3) y (4) esta implcita la


recirculacin de E. por definicin un catalizador no
es consumido por la reaccin que cataliza,
explcitamente se representa en la ecuacin (5)

E+S

K1

ES

3
K

E+P

Figura 8 Modelo cintico de estado estacionario (3)


Un valor constante para [ES] requiere que las
velocidades de formacin y degradacin de ES
sean iguales. La velocidad de formacin de ES esta
dada por k1[E][S]. Puesto que ES puede perderse
en dos reacciones, desdoblndose en E+S E+P,
la velocidad de degradacin de ES est dada por la
expresin
k [ES ]+ k [ES ]. Al igualar las

(5)

habr una fase de induccin con una duracin de


una fraccin de segundo antes de que se alcance la
v0 en estado estacionario. Por lo general se ignora
en la cintica de estado estacionario.

velocidades de formacin y degradacin se tiene


que:

La concentracin total de E se define como E0,


antes de que se aada el S E0=[E], una vez se ha
aadido E0=[E] + [ES]. [ES] durante la breve fase
de induccin aumenta hasta alcanzar su valor de
estado estacionario y permanece constante,
durante esta etapa de la reaccin, cuando v0 se
mide y es constante. Briggs y Haldane utilizaron la
condicin de estado estacionario de [ES] constante
y la condicin de concentracin inicial de [S]
constante para formular ecuaciones que relacionan
con
las
constantes
cinticas
y las
v0
concentraciones de enzima y de sustrato.

Despejando las variables de las constantes y


combinando estas ltimas se tiene que:

Debido a que el P solo puede formarse por


desdoblamiento de ES, gobernado por la constante
de velocidad K3, puede concluirse que la velocidad
en las condiciones de velocidad inicial es:

Este modelo cintico adopta la hiptesis del


estado
estacionario,
segn
la
cual
la
concentracin del complejo enzima-sustrato es
pequea y constante a lo largo de la reaccin
(Figura 8)

V
LEOQ

= k 3 [ES ]

k [E ][S ] = (k + k )[ES ]
1

[E ][S ] = k 2 + k 3 =
km
[ES ]
k1

(7)

Donde km se designa como la constante de


Michaelis, en honor a quin desarrollo las primeras
formas de la ecuacin simple de cintica
enzimtica.

(6)

mxima se alcanzar cuando esencialmente toda la


enzima este es forma es decir, cuando
ES E0. Cuando la [S]=Km en la ecuacin (10) el
denominador de la ecuacin ser 2[S] y el
numerador [S]Vmx. Esto significa que la V0 ser
igual a 1/2Vmx. cuando [S]=km.
En esta situacin [ES]=0.5E0, como lo ndica la
ecuacin (8). En la figura 5 se muestra la hiprbola
rectangular caracterstica que se obtiene al graficar
la ecuacin (10).
Figura 9 Maud Menten, Leonor Michahelis

Conforme [S] aumenta hasta varias veces el valor


de Km, se aproxima a un valor de saturacin, el cual
es indicado por V0 que se aproxima a Vmx. Dicha
concentracin de sustrato 20 100 veces Km, se
dice que es la concentracin de saturacin del
sustrato debido a que virtualmente toda la enzima
debe estar en la forma [ES]. En la velocidad de la
reaccin no es posible obtener ningn incremento
adicional debido a que la concentracin de E libre
en estado estacionario, [E], es bastante pequea.

Dado que en la ecuacin (6) aparece [ES] y no [E],


se sustituye E0 - [ES] por E en la ecuacin (7) para
obtener

(E [ES ])[S ] =
k
0

[ES ]

A las concentraciones de saturacin del sustrato, la


ecuacin (6) se convierte en:

Resolviendo la ecuacin para [ES] se tiene que:

[S ]
[ES ] = E 0
[S ]+ k m

(8)

k (E [S ])
[S ] + k
3

(9)

Esta ecuacin es una forma del resultado de Briggs


y Haldane.

Km, definida por la ecuacin (7) para una reaccin


de un solo sustrato, es una relacin de constantes
de velocidad. Para la gran mayora de enzimas que
carecen de nmeros de recambio muy grandes, K3
ser ms pequeo que K1 y K2. En esta condicin
Km ser aproximadamente igual a Ks=K2/K1. De esta
forma valores muy pequeos de Ks ndican una
gran afinidad de la enzima por el sustrato, es decir
la formacin del complejo [ES] se ve
termodinmicamente favorecida. Los valores tpicos
-2
-7
de Km estn dentro de los lmites de 10 a 10 M, la
velocidad
de
la
reaccin
catalizada
enzimticamente ser, en efecto, muy pequea,
como se ndica en la figura 5, y ser casi
proporcional al concentracin de sustrato [S]. Se
espera
que
una
reaccin
catalizada
enzimticamente sea de primer orden en cuanto a
concentracin de sustrato a una baja [S], pero de

Las reacciones catalizadas enzimticamente


presentan cintica de saturacin
En algunos experimentos, puede no conocerse la
concentracin de enzima E0, por lo que es
conveniente sustituir el producto k3E0 por Vmx,
velocidad mxima.

[S ]
V =V
[S ]+ k
mx

(10)

La justificacin de esta versin modificada de la


ecuacin de Briggs y Haldane es que la velocidad

LEOQ

= k 3 E 0 V mx (11)

De esta forma K3 es el cociente de Vmx/E0, el cual


es el nmero de moles de sustrato que se
convierten en producto por unidad de tiempo
dividido entre el nmero de moles de enzima. Este
es el nmero de recambio para una reaccin de un
solo sustrato y un solo producto, generalmente esta
4
dentro del intervalo de 1 x 10 por segundo.

Sustituyendo en (6)

V0=

orden cero en el caso de una gran [S], como se


indica en la figura 10.

Figura 10. Grfica de las velocidades iniciales en


estado estacionario de una serie de reacciones
catalizadas por la misma concentracin de enzimas,
variando la concentracin del sustrato [S], para
cada reaccin. La velocidad de reaccin se
aproxima a Vmx cuando los valores de [S] son muy
grandes (3).

Figura 11. Grfica de Lineweaver y Burk. Todos los


puntos de los datos correspondern por supuesto a
valores positivos de 1/v y 1/[S] pero con frecuencia,
la lnea se extrapola a valores negativos de 1/[S]
para dar una estimacin de Km (4).

Experimentalmente, la Km puede estimarse


utilizando una grfica de V0 contra [S], como en la
figura 10, estimando un valor de Vmx y encontrando
despus el valor de [S] que corresponde a una v
igual a 1/2Vmx. para una reaccin simple catalizada
por enzimas, Km es este valor de [S]. Sin embargo
Vmx es un valor asinttico y, por tanto, difcil de
estimar con exactitud. La grfica de Lineaweaver y
Burk es uno de los varios tipos de anlisis que
pueden hacerse para estimar Km y Vmx. En estos
anlisis se utilizan todos los datos de v contra [S],
en lugar de aquellos puntos que estn prximos a a
Vmx y Km. Esta grfica se basa en la ecuacin (10)
que se ha modificado utilizando el recproco de
ambos lados de la ecuacin. El resultado es:

En la mayora de los anlisis, es importante utilizar


valores de [S] que sean significativamente tanto
mayores como menores que Km. Adems se debe
tener en cuenta que los valores de Km y Vmx
derivados de las grficas de Lineweaver y Burk y
otros anlisis sern incorrectos a menos que las
condiciones y el mtodo experimental correspondan
con la teora que fundamenta el anlisis. Por
ejemplo las velocidades iniciales deben ser
velocidades iniciales reales, no debe haber algn
inhibidor a una concentracin que cause algn
efecto, etc.
Nomenclatura y Clasificacin de los enzimas

1
1
1
= km +
V V mx [S ] V mx

La nomenclatura enzimtica se ha establecido


mediante acuerdo internacional bajo los auspicios
de la Comisin de Enzimas de la Unin
Internacional de Bioqumica. El sufijo asa identifica
a una enzima y se debe utilizar para enzimas
nicos. Para complejos enzimticos en base a sus
reacciones se utiliza la palabra sistema, por ejemplo
el sistema succinato oxidasa, oxida cido succnico
por el oxgeno en varios pasos catalizados por
enzimas concretos.

que tiene la forma de una ecuacin lineal simple,


y=mx + b, donde m=Km/Vmx y b= 1/ Vmx. En la
figura 11 se muestra una grfica de Lineweaver y
Burk, 1/v contra 1/[S]. Un inconveniente es que los
puntos para valores pequeos de [S] tienden a
influir ms marcadamente en los resultados
obtenidos.

LEOQ

La base de la clasificacin y nomenclatura esta en


el tipo de reaccin qumica que catalizan. De
acuerdo con la clasificacin Internacional, los
enzimas se agrupan en seis clases principales, ver
tabla 1.

se incluso el monitoreo continuo de algunos


compuestos biolgicamente importantes. Se ha
desarrollado el electrodo de glucosa.
Puesto que una molcula de enzima convierte
muchas molculas de sustrato en producto, es
posible detectar cantidades muy pequeas del
enzima utilizando una prueba sensible para el
producto. Por lo general muchos mtodos para
anlisis cualitativos y cuantitativos sensibles para
sustancias biolgicamente importantes depende de
agentes acoplados qumicamente. El acoplamiento
qumico de enzimas a matrices insolubles es la
base de procedimientos preparatorios y analticos
de laboratorio. Con dichas enzimas inmovilizadas
puede lograrse produccin a escala industrial. Ver
figura 12.

Tabla 1. Clasificacin de enzimas (4)

Naturaleza
enzimtica

mecanismos

de

la

accin

La mayor parte de las reacciones enzimticas


pueden representarse por la siguiente ecuacin
general:
E+S

Complejo ES

Figura 12. Tcnicas


biocatalizadores (5)

producto P + enzima E

El enzima no se utiliza en la reaccin, sino que se


libera de nuevo para reaccionar con otra molcula
de sustrato, este proceso se repite hasta que se
agotan las molculas del sustrato. La activacin de
una molcula de sustrato tiene lugar por su elevada
afinidad qumica para determinadas reas de la
enzima llamados centros activos .Casi todas las
enzimas intracelulares tienen un centro activo por
molcula. La lactato deshidrogenasa tiene 4, la
quimiotripsina, enzima extracelular tiene un centro
activo.

inmovilizacin

de

Factores que afectan la actividad enzimtica


Entre los factores que afectan la actividad de
enzimas estn los siguientes:
1.
2.
3.
4.

Concentracin de enzima
Concentracin de sustrato
pH
Temperatura

Generalmente se puede decir que existe un ptimo


para la relacin de concentraciones enzima, figura
13, y de sustrato en el cual la actividad es mxima,
figura 14. Igualmente cada enzima tiene un ptimo
de pH, figura 15 y de temperatura para su
funcionamiento, figura 16.

Usos analticos y preparatorios de los enzimas


La especificidad de los enzimas y su capacidad
para catalizar reacciones que de otra manera seran
inmensamente
lentas,
permite
analizar
cuantitativamente sangre u otras mezclas compleja
LEOQ

de

Figura 13. a) Efecto sobre la concentracin de


enzima sobre la velocidad de la reaccin enzimtica
(4)

Figura 16. Efecto de la temperatura sobre la


actividad enzimtica. A bajas temperaturas la
actividad crece al incrementarse la temperatura
hasta que se alcanza un ptimo. El posterior
incremento de la temperatura provoca un descenso
de actividad y la eventual destruccin de la enzima
(4).
La desviacin de estas condiciones ptimas
conduce a una reduccin significativa de la actividad
enzimtica.
Cintica de reacciones que utilizan sustratos
mltiples

Figura 14. Efecto de la concentracin del sustrato


sobre la actividad enzimtica. Incrementos muy
grandes de sustrato no afectan a la velocidad; esta
se hace independiente de la concentracin de
sustrato.

Entre todas las enzimas, las de un solo sustrato


constituyen un caso raro. Se reconocen tres
mecanismos
generales
para los sistemas
enzimticos que emplean sustratos mltiples:
1)Mecanismo ordenado
Existe un orden preciso en el cual los sustratos se
asocian con los sitios activos de la enzima. Todos
los productos son liberados siguiendo un orden
preciso y despus de reaccionar los sustratos, en la
reaccin:

Se dice que este tipo de reaccin tiene un


mecanismo ordenado Bi, Bi, que indica dos
sustratos,
dos
productos,
ejemplo,
la
deshidrogenasa alcohlica, los dos sustratos son
+
etanol y NAD y los dos productos son acetaldehdo
y NADH.

Figura 15. Efecto del pH sobre la actividad


enzimtica, la actividad mxima se da a un pH
determinado y las desviaciones de este determinan
menor actividad (4)

Deshidrogenasa alcohlica

LEOQ

CH3CH2OH + NAD

Pueden ser frmacos, antibiticos, txinas y


antimetabolitos. Se reconocen dos grupos de
inhibidores, de acuerdo a su accin inhibitoria son
reversible e irreversible.

CH3CHO + NADH + H

Los sustratos siempre se desinan: A, B, C y D, los


productos como P, Q y R y las enzimas como E, F y
G.

Inhibidores Irreversibles
La inhibicin irreversible implica la modificacin de
uno o ms grupos funcionales del enzima. Se une
en otro punto del sitio activo y evitan el
funcionamiento de la enzima. Su efecto no se
revierte al aumentar la concentracin del S, [S],
comparable con los inhibidores reversibles o
competitivos, ejemplo la tosil-fenilalanil-clorometilcetona TPCK de la quimiotripsina, a muy bajas
concentraciones la inactiva, la amida o ester usual
del cido carboxlico es sustituido por el grupo
clorometil.

2) Mecanismo aleatorio
Cuando dos sustratos A y B se aaden a una
enzima en forma aleatoria y los dos productos P y Q
se liberan de la misma forma, dicha secuencia se
libera como un mecanismo aleatorio Bi, Bi, la
reaccin general sera:

Inhibidores Reversibles
Estos inhibidores solo se asocian transitoriamente a
la enzima, implica un equilibrio entre la enzima y el
inhibidor, K1, es una medida de afinidad del inhibidor
por la enzima. Se conocen tres tipos de inhibicin
reversibles.

Ejemplo, la enzima glucogeno oxidasa.


3) Mecanismo ping pong

1) Inhibicin competitiva
2) Inhibicin no competitiva
3) Inhibicin incompetitiva

Para dos sustratos y dos productos el mecanismo


se presenta como:

1)
Compuestos que pueden estar relacionados
estructuralmente con el sustrato se combinan
reversiblemente con la enzima o cerca del sitio
activo. Se forman los complejos ES y EI pero nunca
se forma el complejo EIS, altas concentraciones de
los sustratos, superarn la inhibicin al hacer que la
secuencia de reaccin se desplace hacia la
derecha, de acuerdo con la ecuacin

En esta secuencia F representa una enzima


modificada, (es decir, una enzima X, donde X
podra ser un grupo fosforilado o carboxilado o
cualquier otro grupo funcional transitoriamente
unido a la enzima) F se combina con B y,
subsecuentemente, X es transferido a B para
formar el segundo producto Q y regenerar la forma
original de la enzima E. Un ejemplo de esta
reaccin es la catalizada por la enzima acetil CoA
carboxilasa
Acetil CoA + ATP +HCO3

Malonil CoA + ADP + Pi

La Acetil CoA cataliza una reaccin acoplada, es


decir, actua como mediador en la formacin
energticamente desfavorable de un enlace C-C al
acoplar la reaccin a la reaccin de hidrlisis,
estructuralmente
no
relacionada,
pero
energticamente favorable del ATP y el ADP.

En la inhibicin por retroalimentacin, el producto de


una reaccin que esta 1 o ms pasos acta como
inhibidor de la enzima, importante metablicamente
y suele ser de tipo competitivo. En la figura 7, se
muestran las curvas cinticas tpicas observadas en

Inhibicin de la actividad enzimtica

LEOQ

este tipo de inhibicin. En la tabla 2 se resumen los


parmetros de inhibicin.
Un ejemplo clsico de Inhibicin competitiva es el
efecto del cido malnico sobre la succnico
deshidrogenasa, la cual oxida rpidamente el cido
succnico en cido fumrico. Si se agregan
cantidades crecientes de cido malnico, que se
asemeja al succnico en estructura, la actividad de
la
succnico
deshidrogenasa
disminuye
considerablemente. A su vez esta inhibicin puede
rervertirse aumentando la concentracin del
sustrato cido succnico.

2) Inhibicin no competitiva: los compuestos se


unen reversiblemente con la enzima o con el
complejo enzima sustrato. las reacciones son:

Tabla 2. Parmetros cinticos de los inhibidores (4).

Figura 17. Efectos de un inhibidor competitivo


sobre la velocidad de reaccin como funcin de la
concentracin de sustrato. Ntese el valor sin
cambios de Vmx y el valor incrementado de Km que
son caractersticos de la inhibicin competitiva y que
se observan tanto en la grfica directa (a) como en
la grfica de Lineweaver y Burk (b) (4).

LEOQ

Figura 18. Efectos de un inhibidor no competitivo


sobre la velocidad de la reaccin como una funcin
de la concentracin de sustrato. Ntese el valor
10

disminuido de Vmx y el valor sin cambios de Km, los


cuales son caractersticos de la inhibicin no
competitiva y que se observan tanto en la grfica
directa (a) como en la grfica de Lineweaver y Burk
(b) (4).
Por tanto difiere de la competitiva en que el inhibidor
puede combinarse con ES y S con EI, en ambos
casos para formar el complejo EIS. Dado que el
sitio de unin del inhibidor no es idntico al sitio
activo, ni modifica a este directamente, la Km no se
altera, en la tabla 2 se observa la ecuacin que
define la inhibicin no competitiva, y la figura 18,
muestra los grficas directa y reciproca para este
tipo de inhibicin enzimtica. Las ecuaciones que
predicen estos resultados aparecen en la tabla 2.

Enzimas constitutivos: producidos por las clulas en


todo momento.

3) Inhibicin Incompetitiva: Los compuestos que se


combinan reversiblemente solo con el complejo ES,
pero no con la enzima libre.

Figura 19. Efectos de un inhibidor incompetitivo


sobre la velocidad de la reaccin como una funcin
de la concentracin de sustrato. Notese la
disminucin del Km aparente que da Km (llamada
tambin S0.5. La Vmx tambin ha disminuido. Estoa
resultados pueden observarse tanto en la grfica
directa (a) como en la grfica de Lineweaver y Burk
(b) (4).

No es superado por altas concentraciones de


sustrato, la Km, en presencia del inhibidor es
consistentemente ms pequea que el valor de Km
de la reaccin no inhibida. Esto implica que S se
une ms firmemente a la enzima en presencia del
inhibidor. La figura 19, muestra los grficas directa
y reciproca para este tipo de inhibicin enzimtica.
Las ecuaciones que predicen estos resultados
aparecen en la tabla 2.

Enzimas Inducibles: Se producen en la clula


nicamente como respuesta a la presencia de un
determinado sustrato, es decir, cuando se
necesitan, este proceso se llama induccin
enzimtica y el sustrato recibe el nombre de
inductor. La -galactosidasa es un ejemplo de
enzima inducible; su inductor es el azcar lactosa.

Factores que afectan la formacin de enzimas


El contenido enzimtico de las clulas de los tejidos
es relativamente constante. Sin embargo, la clula
bacteriana est expuesta a un ambiente en continuo
cambio. Por ejemplo E. coli puede crecer a un pH
cido o alcalino (4.5-9.5), a temperatura ambiente o
por encima de la temperatura corporal, aerbica o
anaerobicamente. Las clulas de E coli que han
crecido en condiciones que corresponden a uno u
otro extremo, no contienen las mismas cantidades
de enzimas. Por lo que respecta a la influencia del
sustrato especfico en la formacin de enzimas, se
pueden establecer dos grupos:

LEOQ

Determinacin de la actividad enzimtica


Puede medirse por diversas tcnicas. Algunos
procedimientos requieren instrumentos especiales,
mientras que otros un tubo de ensayo y reactivos.
Se debe conocer lo siguiente:
1. Naturaleza de la reaccin que cataliza
2. Cofactores y coenzimas requeridos

11

3. Concentraciones necesarias de sustrato y


de cofactor o coenzima
4. pH ptimo
5. Temperatura ptima
6. Un procedimiento analtico sencillo para
medir desaparicin de sustrato o aparicin
de productos de la reaccin.

Propiedades de fijacin de enzimas


regulatorios: los enzimas regulatorios estan
sujetos a la accin del metabolito regulador
que puede ser activador o inhibidor.
Disminuye
la
actividad
enzimtica,
disminuye la afinidad de la enzima por el
sustrato que se fija a un sitio diferente del
sitio cataltico, estos enzimas tienen dos o
ms sitios de reconocimiento, se les llama
enzimas alostricos ya que donde acta el
efector es diferente del sitio cataltico por
tanto el sitio alostrico regula la actividad
enzimtica.

La concentracin del sustrato ha de estar por


encima del nivel de saturacin al objeto de que la
velocidad inicial de la reaccin sea proporcional
nicamente a la concentracin de enzima. Los
cofactores y coenzimas deben aadirse en exceso.
Todo esto asegura que el verdadero factor limitante
sea la concentracin de enzima (a su pH
temperatura ptimos). Generalmente es ms exacto
medir formacin de producto de reaccin que
desaparicin de sustrato.

Cuando la clula se adapta a un ambiente diferente


los mecanismos de induccin y represin entran en
juego.
2) Control gentico de induccin y represin
enzimtica: Se lleva a cabo por la induccin y la
represin de la sntesis de enzimas. Cuando se
requiere una sustancia inductora el proceso recibe
el nombre de induccin. Cuando otras sustancias
actan como correpresores el fenmeno recibe el
nombre de represin. Los correpresores se unen a
el represor, formamdo un complejo activo capaz de
actuar sobre el gen operador y bloquear la sntesis
del RNAm o unirse al inductor y formar un complejo
inactivo incapaz de unirse al gen operador y se lleva
a cabo la sntesis de RNAm. La secuencia de
aminocidos la determinan los genes estructurales
y la velocidad de sntesis de los genes reguladores.
Jacob-Monod, denominaron operon a un grupo de
genes consecutivos, que forman una unidad
operacional. Cuando se aaden inductores como la
lactosa, se produce un incremento en la velocidad
de sntesis de la -galactosidasa (hidroliza la
lactosa a glucosa y galactosa), la -galactsido
permeasa (transporta la lactosa al interior de la
clula) y la tiogalactsido transacetilasa (de funcin
fisiolgica desconocida), los genes se designan
como z, y y a respectivamente. La velocidad de
sntesis esta regulada por los genes reguladores,
que se denominan i, p y o, tal como muestra la
figura 20, i es el gen represor, p el gen promotor y o
el gen operador. En el gen promotor p, donde se fija
la RNA polimerasa, que cataliza la sntesis de
RNAm.

Naturaleza y mecanismos de la regulacin


enzimtica
La actividad enzimtica se puede regular de dos
maneras: 1) control directo de la accin cataltica,
puede realizarse sobre el mecanismo cataltico
como tal, o bien a travs de su acoplamiento con
otros procesos y 2) control gentico, incluye los
procesos de induccin y represin enzimtica.
1) Control directo de la accin cataltica: Se ejerce
por alteracin de las concentraciones de sustrato o
de sustancias que reaccionan, por ejemplo al
aumentar un sustrato aumenta la velocidad hasta
alcanzar un valor lmite.
Control directo por acoplamiento con otros
procesos: Implica la regulacin por ligandos
(molculas capaces de fijarse a la enzima)
Retroinhibicin: El ligando que ejerce la
regulacin es el producto final de una ruta
metablica, puede bloquear su propia
sntesis inhibiendo la actividad de los
primeros o de enzimas que actan en dicha
ruta.
Activacin por precursores: El ligando
regulatorio es el precursor del primer
metabolito de una ruta, activa o estimula la
actividad del ltimo enzima de la secuencia
de reaccin.

El control negativo lo ejerce el represor lac, en union


del correpresor, forma un complejo represorcorrepresor (puede ser glucosa o galactosa), el cual
se fija al gen o y bloquea la transcripcin. Los
inductores estimulan la sntesis de RNAm lac,
fijndose al represor y disminuyendo la afinidad
para el operador. Tanto la represin como la

Control dependiente de energa: Los


adenilatos son los ligandos de reaccin
dependientes de energa, ATP, ADP y AMP.

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induccin representan sistemas de control negativo,


ya que la sntesis de enzima solo puede tener lugar
cuando el represor se separa del operador. Se dice
que tiene lugar un control positivo de la sntesis de
enzima cuando se requiere una asociacin entre
una protena y una parte de la regin regulatoria de
un opern, para la expresin de genes estructurales
asociados.

Figura 20. Operon lac (1)

Bibliografa
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