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Irina Tamaracca Ruiz

Grupo n: 1
Compaero:

PRCTICA N 10
PRUEBAS BIOQUMICAS
Fecha: 4-11-2014
OBJETIVO: Identificacin de MOs aplicando distintas pruebas BQ
consistentes en someter a los MOs aislados en colonias, a diferentes medios
de cultivo y reactivos especficos para estudiar su comportamiento BQ y la
presencia de determinadas enzimas.
MATERIALES:
- Los de preparacin de medios de cultivo slido y lquido (Visto en
prctica de preparacin de medios)
- Los de siembra en medio slido y lquido (Visto en prctica de siembras)
- Los de tincin de Gram y tincin de esporas (Visto en prcticas de
tinciones)
MUESTRA: 1.2 en tubo
MEDIOS DE CULTIVO: Agar nutritivo, suero fisiolgico estril, agar Mc
Conkey, agar urea de Christensen, agar DNA, medio TSB con 6,5% de NaCl,
KIA, caldo nutritivo + con agar al 5%, agua de peptona, caldo RM/VP, Citrato
de Simmons
REACTIVOS: H2O2 al 30%, tiras con p-fenilendiamina, discos ONPG, HCl 1N,
reactivo indol de Kovacs, indicador de pH rojo de metilo, solucin alfa-naftol
al 5%, solucin KOH al 40%
PROCEDIMIENTO:
1. CLCULOS: de los distintos medios lquidos, slidos y semislidos a
utilizar en las pruebas
Agar nutritivo (AN): 23 g/L
Preparar 2 placas/alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 2 placas
x 4 alumnos = 8 placas + 2 placas por grupo = 10 placas x 25 mL =
250 mL
23 gramos en 1000 mL
X gramos en 250 mL
X = 5,75 gr de AN pesados
Medio Mc Conkey (Mc): 50 g/L
Preparar 1 placa/alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 1 placa x
4 alumnos = 4 placas + 2 placas por grupo = 6 placas x 25 mL = 150
mL
50 gramos en 1000 mL
X gramos en 150 mL
X = 7,5 gr pesados
Medio Kliger (KIA): 52 g/L

Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1


tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL =
60 mL
52 gramos en 1000 mL
X gramos en 60 Ml
X = 3,12 gr de KIA pesados
Agar Citrato Simmons: 24,2 g/L
Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1
tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL =
60 mL
24,2 gramos en 1000 mL
X gramos en 60 Ml
X = 1,45 gr pesados
Agar DNA: 42 g/L
Preparar 1 placa /alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 1 placa x
4 alumnos = 4 tubos + 2 placas por grupo = 6 placas x 25 mL = 150
mL
42 gramos en 1000 mL
X gramos en 150 mL
X = 6,3 gr pesados
Caldo RM/VP: 17 g/L
Preparar 2 tubos/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 2 tubo x 4
alumnos = 8 tubos + 2 tubos por grupo = 10 tubos x 10 mL = 100 mL
17 gramos en 1000 mL
X gramos en 100 Ml
X = 1,7 gr pesados
Agua de peptona: 25,5 g/L
Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4
alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL
25,5 gramos en 1000 mL
X gramos en 60 Ml
X = 1,53 gr pesados
Triptona de soja: 30 g/L
Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4
alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL
30 gramos en 1000 mL
X gramos en 60 Ml
X = 1,8 gr pesados
Agar Urea: 15 g/900mL H2O; 29 g/100 mL urea
Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 1 tubo/grupo (10 mL x tubo) => 1
tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 1 tubo por grupo = 5 tubos x 10 mL = 50
mL
- Agar bacteriolgico: 1000 mL . 900 mL
50 mL . X
X = 45 mL de agar a preparar
900 mL . 15 g agar
45 mL .. X g agar
2

Solucin Urea:

X = 0,75 g de agar bacteriolgico a pesar


1000 mL . 100 mL
50 mL . X
X = 5 mL de solucin urea a preparar

100 mL . 29 g de agar
5 mL .. X g de agar
X = 1,45 g agar a pesar
Medio motilidad: 8 g/L caldo + 5% agar
Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4
alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL
- CN: 8 g 1000 mL
X g
60 mL
X = 0,4 g de CN a pesar
- AN 5%:
2,5 g de AN a pesar para prepara 60 mL de AN
semislido
HCl 1N: (25 mL):
N = n equiv/V (L) disolucin; n eq. = masa soluto/peso eq.; P eq. =
Mm/v
Mm HCl = 36,5 g/mol; Valencia 1; Riqueza 37%, densidad 1,19
P equiv = 36,5/1 = 36,5 P eq.
1N = n equiv/0,025 L => n equiv = 1 x 0,025 = 0.025 n eq.
0,025 = m soluto/36,5 => m soluto = 0,025 x 36,5 = 0,9125 gr de HCl
puros
100 gr comerciales 37 gr puros
X gr comerciales 0,9125 gr puros
X = 2,47 gr comerciales de HCl
d = m/v => 1,19 = 2,47gr/X => X = 2,47/1,19 = 2,07 mL de HCl
2,1 mL
2. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
- La
3.
4.

DA 2 DE LA PRCTICA N 7
LECTURA (OBSERVACIONES Y RESULTADOS) DE LAS SIEMBRAS
Fecha: 20-10-2014
RESULTADOS/OBSERVACIONES:
1. Se ha dejado todas las siembras 72 horas en incubacin
3

2. Examinamos todos los cultivos de las placas para identificar la


distribucin de las colonias
- Estra simple y cuatro cuadrantes (Muestra 2):
Crecimiento claro
Al final de la estra se observan colonias asiladas, planas, de
forma circular, borde entero, color blanquecino y de apariencia
cremosa
- Tres giros y estra mltiple (Muestra 10):
No se observa crecimiento de colonias
Se vuelven a incubar en la estufa y tras unos das (27/10/10)
siguen sin observarse crecimiento. Aparentemente no se realiz
correctamente las tcnicas con esta muestra.
ESPACIO PARA CORRECCIONES: