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PRACTICA 2

DIAGNOSTICO DE INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR


Aspectos tericos
El tracto respiratorio (TR) est en contacto directo con el medio ambiente y se encuentra expuesto
continuamente a los microorganismos suspendidos en el aire que respiramos. El aparato
respiratorio est divido anatmicamente en superior (TRS) e inferior (TRI). EL TRS comprende: la
boca, fosas nasales, orofaringe, nasofaringe y senos paranasales. Otra clasificacin incluye al odo
medio por la comunicacin estrecha que existe entre ste y la nasofaringe a travs de la trompa
de Eustaquio, sin embargo, los procesos infecciosos de odo medio sern considerados en un
captulo separado.(1)
Diversos mecanismos no especficos protegen el tracto respiratorio de las infecciones, entre ellos,
se sealan: los pelos, pasaje contorneado, mucus, inmunoglobulina A secretora y sustancias
antibacterianas como la lisozima presente en las secreciones respiratorias. Los reflejos mecnicos
como la tos, el estornudo y la deglucin contribuyen con la eliminacin de agentes extraos; por
otra parte, la microbiota normal de la nasofaringe y orofaringe previene la colonizacin del
tracto respiratorio por microrganismos patgenos (Tabla1). (2)
Las infecciones de vas respiratorias superiores (ITRS) afectan a la poblacin en general, son causa
frecuente de consulta mdica, sobre todo en la edad peditrica, provocando ausentismo escolar y
laboral. Las ITRS involucran a la cavidad nasal, faringe y senos paranasales. El 80% de estas
infecciones son de etiologa viral, en segundo lugar son producidas por bacterias y un reducido
nmero de casos son de origen mictico.(2)
Tabla 1 Microbiota normal y patgenos respiratorios
Microbiota normal
Posibles patgenos
Estreptococos del grupo Estreptococos betaviridans
hemolticos
Estafilococos coagulasa
Haemophilus influenzae
negativo
Micrococos
Haemophillus parainfluenzae
Corynebacterium sp.
Streptococcus pneumoniae
Lactobacillus sp.
Neiserias patgenas
Veillonella sp.
Moraxella catarrhalis
espiroquetas
Enterobacterias
Fusobacterium sp
Bacteroides sp.
Actinomyces sp.
Tomado de Koneman y col., 2001; Murray y col., 2002

Manifestaciones clnicas

Patgenos definitivos
Corynebacterium diphtheriae
Bordetella pertusis
Mycoplasma pneumoniae

Rinitis: es la manifestacin clnica caracterstica del resfro comn, se presenta con aumento de
la secrecin nasal, la cual suele ser clara y acuosa al inicio, conforme avanza el cuadro puede
sobreagregarse una infeccin bacteriana; en estos casos la secrecin se vuelve espesa o purulenta,
requiriendo tratamiento con antibiticos. La rinitis alrgica cursa igualmente con aumento de
secrecin nasal, necesitndose el diagnstico diferencial que oriente el tratamiento adecuado.(3)
Faringitis o amigdalitis: se manifiestan con dolor farngeo, eritema y edema de los tejidos
afectados; puede existir exudado, petequias hemorrgicas y placas de clulas inflamatorias,
presentes frecuentemente en la infeccin bacteriana. La observacin de vesculas y lesiones
ulcerativas son comunes en las infecciones virales y la formacin de aftas o placas blanquecinas
con base erosionada son compatibles con candidosis farngea.(3)
Sinusitis: Posterior a una infeccin nasofarngea, por contigidad puede afectarse una o mas
cavidades paranasales. La sintomatologa cursa con obstruccin nasal, rinorrea, dolor facial,
cefaleas y fiebre. En los nios el sntoma caracterstico es la rinorrea, que simula un resfriado
comn. Se debe sospechar de una sinusitis cuando los sntomas perduran por ms de 10 das.(1)
Epiglotitis: es una inflamacin difusa de la epiglotis y de las estructuras adyacentes, de
progresin rpida; en nios la obstruccin es brusca, completa y fulminante de la va area (en un
lapso de 30 min.), se acompaa de disnea y cianosis que pone en riesgo la vida del paciente. La
epiglotis se visualiza edematosa y de color rojo cereza.(1) Otras manifestaciones menos frecuentes
incluyen la formacin de pseudomembranas, constituidas por tejido necrtico, clulas
inflamatorias y bacterias. Estas formaciones pueden orientar el diagnstico de la difteria farngea o
hacia una Angina de Vincent.(3)
Etiologa de las infecciones del tracto respiratorio superior
El 80% de las ITRS son de etiologa viral. El resfriado comn es causado principalmente por el
grupo de los rinovirus y coronavirus. La faringitis aguda en su gran mayora es causada por
rinovirus, adenovirus, parainfluenza y coxsackie. La causa bacteriana ms frecuente de
faringoamigdalitis y, por lo tanto, susceptible de ser tratada con antimicrobianos es Streptococcus
pyogenes, responsable de 15 a 30% de las faringitis agudas en nios y de 5 a 10% en adultos.(1)
En la tabla 2 se sealan otras bacterias causantes de faringitis, entre stas tenemos a los
Estreptococos beta-hemolticos de los grupos C y G que se han asociado a brotes epidmicos de
faringitis transmitidas por alimentos, a faringitis endmica en comunidades cerradas donde
concurren jvenes y adultos.(4) Otros agentes etiolgicos poco frecuentes lo constituyen:
Arcanobacterium haemolyticum, Yersinia enterocolitica, Franciscella tularensis y Neisseria
gonorrhoeae, esta ltima debe ser considerada entre los jvenes y adultos como consecuencia del
contacto buco-genital.(1) Existen microorganismos que forman parte de la microbiota habitual de
la faringe, algunos participan en la etiologa de infecciones del tracto respiratorio bajo, sin
embargo, no se consideran patgenos en faringoamigdalitis aguda en pacientes
inmunocompetentes; es el caso de H. influenzae, S. pneumoniae, M. catarrhalis y S. aureus. H.
influenzae es un agente causal de faringitis en nios.(1) En pacientes inmunocomprometidos, se

debe informar el hallazgo de Candida sp., bacilos gramnegativos y S. aureus.(1) Tanto en la


sinusitis como en otitis media, entre los microorganismos etiolgicos frecuentemente implicados
se seala a: S. pneumoniae, H. influenzae y, en menor proporcin M. catarrhalis.(1) La Angina de
Vincent es producida por una mezcla de bacterias anaerbicas y espiroquetas. Estos cuadros son
muy raros y se producen en adultos jvenes.(4)
Tabla 2. Principales causas infecciosas del tracto superior
Diagnstico clnico
Etiologa
Virus
Bacterias y hongos
Rinitis
Virus Coxsackie A, virus parainfluenza e
Raros
influenza, virus sincitial respiratorio,
rinovirus, adenovirus, coronavirus
Faringitis
Virus Coxsackie A o B, virus parainfluenza Streptococcus pyogenes, estreptococos
e influenza, Herpes simple, adenovirus,
beta-hemolticos grupo B,C y G,
rinovirus, Epstein-Barr
Neisseria gonorrhoeae
Arcanobacterium haemolyticum
Sinusitis
Raros
Streptococcus pneumoniae
Haemophylus influenzae
Moraxella catarrhalis
Streptococcus pyogenes
Bacterias anaerbicas
Pseudomembranas farngeas
Ninguno
Corynebacterium diphtheriae
Fusobacterium nucleatum
Borrelia viscenti
Epiglotitis
Ninguno
Haemophilus influenzae serotipo b
Estomatitis
Virus Coxsackie A, Herpes simple
Especies de Candida, Fusobacterium sp.
Y espiroquetas
Abscesos periamigdalino o
ninguno
Streptococcus pyogenes
retrofarngeo
Anaerobios bucales (Fusobacterium sp.)
Staphylococcus aureus
Tosferina o coqueluche
Bordetella pertussis

Tomado de Ryan y Ray, 2004; Braun, 2003.

Diagnstico
El objetivo primordial del diagnstico de los ITRS consiste en distinguir los casos de etiologa viral
(80-90% de los casos) de los producidos por bacterias para los que se dispone de tratamiento. La
investigacin de agentes virales involucrados en ITRS no se practica de rutina, debido a los altos
costos y como no son susceptibles de tratamiento no se justifica su diagnstico, el cual se reserva
para la investigacin de brotes epidmicos.(5)
En la tabla 3 se presentan las muestras tiles para el diagnstico de los diferentes cuadros
respiratorios.

Tabla 3. Muestras clnicas y consideraciones para el cultivo segn cuadro clnico


Cuadro clnico
Muestra a cultivar
Indicaciones para el cultivo
Rinitis
Exudado nasal
Recomendado para la bsqueda de S.
Hisopado nasofarngeo
aureus y para el diagnstico diferencial de
una rinitis alrgica
Investigacin de virus
Faringitis
Exudado farngeo
Se justifica en pacientes sintomticos para
la bsqueda de S. pyogenes. Algunas
excepciones de esta conducta se
relacionan con la condicin del hospedero
como inmunosupresin, hospitalizacin,
etc)
Sinusitis
Secrecin obtenida por puncin de
Indicado en pacientes
senos paranasales
inmunocomprometidos, en infecciones
nosocomiales, mala respuesta al
tratamiento y en casos de complicaciones
como meningitis, celulitis periorbitaria,
osteomielitis
Epiglotitis
Sangre
Se recomienda la toma de hemocultivos
seriados (3 muestras) est contraindicada
la toma de muestras farngeas o
nasofarngeas
Difteria y Angina de Vincent Exudado farngeo
Se cultivarn si existen las caractersticas
Raspado de pseudomembrana
clnicas y epidemiolgicas que orienten a
su investigacin.
Tosferina
Hisopado nasofarngeo
Son muy raros los casos, de rutina no se
realiza su investigacin salvo sospecha
clnica

Tomado de Braun, 2003 y Koneman, 2001

Etapa pre-analtica
Los antecedentes del paciente y los factores epidemiolgicos son tiles para orientar el
diagnstico etiolgico. Entre stos se deben considerar los datos filiatorios: nombre, edad,
ocupacin, residencia; la evolucin clnica del proceso (ver manifestaciones clnicas), estado
inmunolgico del paciente, procedencia (hospitalizacin o de la comunidad), condiciones socioeconmicas, estilo de vida, exposicin reciente a un caso clnico de ITR, tratamientos previos con
antimicrobianos, entre otros.(5)
Etapa analtica
La validez de los resultados del diagnstico microbiolgico depende entre otros factores, de que se
sigan correctamente las normas de obtencin y transporte de la muestra y que la solicitud del
estudio, sea acompaada de un breve informe con los datos clnicos y epidemiolgicos, que
orienten al bioanalista en la seleccin de las tcnicas ms adecuadas, segn el microorganismo
que se vaya a investigar. Tanto la obtencin como el transporte de las muestras al laboratorio
constituyen un punto clave para conseguir un resultado satisfactorio.
I. Obtencin y procesamiento de exudado nasal

Condiciones previas del paciente:


No debe estar recibiendo antibiticos, ni antiinflamatorios, ni antialrgicos.
Procedimiento:
1. Elevar la punta de la nariz con el dedo pulgar.
2. En caso de ausencia de secrecin, humedecer la punta del hisopo en solucin salina estril e
introducirlo hasta la base de la fosa nasal, donde se rota suavemente. (Fig. 1)
3. Retirar el hisopo con cuidado de evitar la contaminacin del mismo con las bacterias de la piel,
proceder a realizar los extendidos finos sobre lminas portaobjetos nuevas y limpias para teir con
Gram y Hansel.
4. Proceder de igual forma con un segundo hisopado para la siembra en medios de cultivo: agar
sangre (AS) y agar manitol salado (AMS) (Fig. 2).
5. Incubar los medios de cultivo a 36 C, en condiciones de aerobiosis por 18 a 24 horas.
Observacin: Para la obtencin de secrecin nasofarngea, se sugiere utilizar hisopos flexibles de
alginato de calcio. Esta muestra es til para la deteccin de portadores de patgenos como: N.
meningitidis, C. diphtheriae y B. pertussis.(5)

Fig. 1 Toma de muestra para exudado nasofarngeo


Interpretacin del examen directo:
Gram: no es til para el diagnstico, ya que no es representativo del proceso infeccioso en
nasofaringe ni en senos paranasales. Informar la cantidad de leucocitos o clulas inflamatorias
presentes: 1-4xc escaso; 5-10xc moderado; >10xc abundantes.(6)
Hansel: esta coloracin es muy til para la investigacin de eosinfilos en moco nasal, la cual
permite confirmar el diagnstico de una rinitis alrgica. Para ello se realiza un recuento diferencial
con objetivo de 40X, se cuentan 50 clulas por campo, si se observan 10 eosinfilos se considera la
prueba positiva. Es importante tener presente que la ausencia de eosinfilos no descarta el cuadro
alrgico ya que hasta el 70% de los pacientes puede mostrar recuentos menores de eosinfilos o
ausencia de stos, segn el momento en que se recolecte la muestra y la severidad de la rinitis.(7)

Revisin de los cultivos para la investigacin de portadores nasales de S. aureus:


La siembra realizada en los medios de cultivo AS y AMS se revisarn en busca de colonias
sugestivas de S. aureus, y se proceder a la identificacin bioqumica y determinacin de la
susceptibilidad antimicrobiana por el mtodo de Kirby-Bauer (algoritmo para ID de CGP y S.
aureus).

Fig. 2 Proceso de muestras de exudado nasofarngeo

II. Obtencin y procesamiento de exudado farngeo


El cultivo farngeo es el mtodo estndar para documentar la presencia de S. pyogenes en la
faringe, esta prueba alcanza una sensibilidad del 90 a 95%.(1)
Condiciones previas del paciente
El paciente no debe haber recibido antibiticos en los ltimos 8 das, previos a la obtencin de la
muestra.

El paciente debe acudir en ayunas al laboratorio.


Debe cepillarse los dientes y no practicar gargarismo
Procedimiento
1. Inspeccin de la faringe: ubicar al paciente en una posicin cmoda y con buena iluminacin,
deprimir la lengua con el abatelengua, visualizar la fosa amigdalina y faringe en busca de exudado
posterior, presencia de pseudomembrana o placas. (Fig. 3)
2. Indicar al paciente que abra la boca y que pronuncie un largo ah, el cual sirve para elevar la
vula y evitar las nuseas.
3. Introducir el hisopo y frotar enrgicamente ambas amgdalas y la pared posterior de la faringe
con movimientos de barrido.
4. Retirar el hisopo cuidando de no tocar las paredes laterales de orofaringe, vula, lengua, encas
y dientes.
5. Extender la muestra con suaves movimientos sobre la superficie de los portaobjetos para
realizar los frotis que sern teidos al Gram y con la tcnica de Hansel.
6. Obtener un segundo hisopado de fauces para la siembra en AS de carnero, siguiendo la tcnica
de estriado sobre superficie, realizando siembras de profundidad con el asa para la deteccin de
hemolisinas estreptoccicas (Fig.4).
7. Incubar el AS a 36C, en condiciones de 5-7% CO2, por 24-72 horas. Observacin: En caso de ser
necesario, la muestra se podr transportar en medio de Stuart o Amies, realizando el cultivo de la
misma en el menor tiempo posible (menos de 2 horas).

Fig. 3. Toma de muestra de exudado farngeo

Interpretacin del examen directo


Gram: describir los hallazgos de clulas inflamatorias y de alteracin de la flora habitual, como es
el caso del aumento de bacilos gramnegativos fusiformes y espiroquetales que orientan el
diagnstico hacia una Angina de Vincent; as mismo reportar la presencia de clulas
levaduriformes, hifas y pseudohifas.
Hansel: observacin de eosinfilos, permite el diagnstico diferencial de una faringitis alrgica,
muy comn en pacientes alrgicos.(7)
Revisin de los cultivos
Inspeccionar las placas de AS en busca de colonias pequeas de 1 a 1,5 mm de dimetro,
rodeadas de un halo de hemlisis completa (beta-hemlisis).
A partir de las colonias sugestivas realizar extendidos para teir al Gram; si se observan cocos
grampositivos dispuestos en cadenas, se repican de 4 a 6 colonias en AS y en tubos de caldo ToddHewitt e incubar a 36 C por 24 h. Del cultivo en Tood-Hewitt o AS practicar coloracin con el
mtodo de Gram, para confirmar morfologa, reaccin y disposicin caractersticas de los
Streptococcus.
Realizar pruebas de identificacin (ver algoritmos para ID de CGP, S. pyogenes, ID CGP catalasanegativos, beta-hemolticos)

Fig. 4 Proceso de muestras de exudado farngeo


Para diferenciar S. pyogenes de otros beta-hemolticos, se pueden utilizar diferentes pruebas,
siendo la de uso comn la prueba de la bacitracina (ver algoritmo para ID S. pyogenes). Esta
prueba se basa en la susceptibilidad de S. pyogenes frente a una concentracin relativamente baja
de bacitracina. Para ello se inocula la cepa pura en AS, mediante hisopo estril extendiendo en
cuatro direcciones; se coloca el taxo A (bacitracina 0,04 U) y el disco de trimetoprimsulfametoxazol (SXT) sobre el cultivo. Al cabo de 18-20 h de incubacin a 36C, se detectar la
presencia de un halo de inhibicin del crecimiento de cualquier tamao, que indica la
susceptibilidad del microorganismo.(7)
Esta tcnica tiene un 5% de falsos negativos y entre 10 y 20% de falsos positivos ya que otros
Streptococcus (grupos C y G) tambin pueden dar sensibles.(1) Otra prueba disponible en muchos
laboratorios es la hidrlisis del PYR, sta se fundamenta en la actividad de la enzima pirrolidonil
aminopeptidasa producida por S. pyogenes, sobre un sustrato el L-pirrolidonil-beta-naftilamida
(PYR), con formacin de beta-naftilamida libre, que se combina con el reativo cinamaldehdo
formando un producto final de color rojo.(6) Los laboratorios que utilizan las pruebas bacitracina o
PYR deben informar: Hubo desarrollo presuntivo de Streptococcus pyogenes
La identificacin definitiva se lleva a cabo mediante la deteccin del antgeno especfico de grupo,
tambin llamado carbohidrato de Lancefield; sta se realiza a travs de mtodos de aglutinacin
con partculas de ltex o coaglutinacin, directamente sobre la colonia aislada. Solo los
estreptococos beta-hemolticos, A , B , C , F , G y los alfa o no hemolticos del grupo D pueden
clasificarse con esta prueba. Para su realizacin se procede a una extraccin previa de los
antgenos de pared, que dependiendo del mtodo, se emplear: cido, calor o enzimas. Luego se
hace reaccionar la cepa pura de 24 h de desarrollo con cada uno de los antisueros para cada
serogrupo. La reaccin positiva se evidenciar dependiendo de la interpretacin de cada
protocolo: ya sea por aglutinacin, coaglutinacin, entre otros.(6)
Deteccin directa de Streptococcus del grupo del A en hisopado de garganta
Estas pruebas permiten detectar directamente el carbohidrato de la pared de S. pyogenes, a partir
de un hisopado farngeo, con la ventaja de obtener resultados inmediatos. La mayora de las
pruebas rpidas tienen excelente especificidad (> 95%) comparado con el cultivo, sin embargo, la
sensibilidad alcanza entre 80 y 90%. Por lo que se recomienda que una prueba negativa sea
confirmada con el cultivo.(1,2) Entre los mtodos de deteccin rpida de antgenos se emplean las
pruebas de aglutinacin con ltex y los mtodos de enzimoinmunoanlisis (ELISA), estos ltimos
con una mayor sensibilidad y especificidad. Actualmente se ha desarrollado la prueba de
inmunoensayo ptico y sondas de ADN quimioluminiscentes. Los datos sugieren que son ms
sensibles aunque ms costosos, por lo cual no estn disponibles para uso rutinario.(1)
Las desventajas de estos mtodos de deteccin directa se basan en:
Solo detectan Streptococcus grupo A, no detecta otros serogrupos.

Bajo valor predictivo positivo, esto es, que no diferencia eficientemente los portadores de un
individuo infectado con un reducido nmero de S. pyogenes.
El elevado costo, sobre todo de los ltimos mtodos.
Investigacin de otros patgenos
1. Bsqueda de Arcanobacterium haemolyticum: Se recomienda el uso de AS humana o de
caballo para el aislamiento primario a partir de exudado farngeo. En su defecto se puede utilizar
el AS de carnero convencional con incubacin hasta por 72 h para lograr evidenciar la betahemlisis. Realizar Gram a todas las colonias - hemolticas aisladas sospechosas de S. pyogenes
para hacer diagnstico diferencial con A. haemolyticum que se presenta como un bacilo corto
pleomrfico grampositivo.(5) Para su identificacin remtase al Anexo 21.
2. Investigacin de Corynebacterium diphtheriae: Se solicitar cuando exista la sospecha clnica y
epidemiolgica de un caso de difteria, el cual debe ser orientado por el mdico (Anexo 24).
3. Cuando la historia clnica y el examen fsico orienten hacia una faringitis por N. gonorrhoeae,
debe seleccionarse el medio Thayer-Martin, adems del AS. Otras especies de Neisseria tambin
pueden estar presentes en cultivos de garganta y deben diferenciarse bioqumicamente de N.
gonorrhoeae, tales como: N. meningitidis y las especies no patgenas.(1) Las colonias sospechosas
son pequeas, traslcidas y brillantes, a las cuales se les practicar la tincin al Gram, prueba de la
oxidasa y fermentacin de azucares (Anexo 12,13).(5,6)
4. La investigacin de B. pertussis, se practicar en caso de sospecha clnica de tos ferina. El
cultivo se lleva a cabo en medio enriquecido de Bordet-Gengou con el agregado de 10% de sangre
de caballo y como agente inhibidor meticilina (2,5ug/ mL) o cefalexina (40ug/mL) (Anexo 25).(5,8)
Etapa post-analtica
El informe al mdico tratante debe incluir la identificacin del paciente, tipo de muestra
recolectada, estudio microbiolgico realizado, fecha de recepcin de la muestra, emisin de los
resultados y cualquier otro dato que el bioanalista considere necesario, por ejemplo, las
condiciones en que se traslad la muestra o las caractersticas de la misma, hora de llegada al
laboratorio, entre otros.
En Examen directo. Indique la tcnica utilizada y describa la morfologa, reaccin al Gram de los
diferentes morfotipos con importancia clnica, tomando en cuenta los aspectos mencionados
anteriormente, dependiendo del tipo de muestra y el o los patgenos a investigar. Sealar en
forma semicuantitativa la presencia de clulas inflamatorias.(6)
En el tem Cultivo: Registre el microorganismo aislado tomando en cuenta su significancia clnica y
los aspectos relacionados con el paciente, considerados en el contenido terico de esta prctica.
Si estn presentes microorganismos indgenas y se ha determinado que son contaminantes para
el caso, incluir el siguiente comentario Desarrollo de microbiota habitual de la regin.

En el caso de cultivos negativos, indicar No hubo crecimiento bacteriano en 48 ( 72) horas de


incubacin
Reporte el Antibiograma (en los casos que aplique)*.
En Observaciones, se debe sealar la lista de microorganismos investigados y otros datos que se
consideren de inters para la interpretacin clnica del resultado.
Datos y firma de la persona encargada de la investigacin: Nombre y apellido en forma legible.
Nmero de registro ante el Ministerio de Salud y ante el Colegio de Bioanalistas. Firma y sello del
laboratorio o institucin de adscripcin.
*Nota a incluir en los casos de cultivos positivos para Streptococcus pyogenes (beta hemoltico
Grupo A):
No se efectu sensibilidad pues el fenmeno in vitro no corresponde con la respuesta clnica.
Este germen es siempre sensible a betalactmicos, eritromicina y clindamicina.
3 ACTIVIDAD PRCTICA
Primer perodo: Obtencin y siembra de secrecin nasal y exudado farngeo
Materiales
Hisopos estriles
Bajalenguas estriles
Lminas porta objetos
Medios de cultivo: Agar Sangre de carnero (AS) y agar manitol salado (AMS)
Coloracin de Gram
Coloracin de Hansel
Asa de platino
Solucin salina fisiolgica
Procedimiento
1. Elaborar la ficha clnico-epidemiolgica del paciente (Anexo 1).
2. Preparar todo el material necesario para la obtencin y siembra de las muestras. Rotule las
placas, caldo de cultivo y las lminas portaobjeto con el cdigo asignado al paciente.
3. Obtener las muestras de exudado nasal y farngeo como se explic previamente (fig 1 y 3).
Observe la demostracin del docente.
4. Practicar la siembra de las muestras en los medios respectivos: secrecin nasal en AS y AMS, el
exudado farngeo en AS (Fig. 2y 4)

5. Incubar los medios de AS, a 36 C, en microaerofilia por espacio de 24 a 48 horas. Con revisin
peridica cada 24 h y el AMS en aerobiosis.
6. Realizar 1 frotis con cada muestra para teir con la tcnica de Gram. Prepare el frotis, aplicando
al hisopo movimientos rotativos sobre la lmina portaobjeto, procurando que el extendido quede
fino. Deje secar al aire.
7. Fijar los extendidos y siga los pasos para las tcnicas de Gram. Observar al microscopio.
Segundo perodo: Revisin de los cultivos
Materiales
Lminas portaobjeto
Asa de platino
Gotero con solucin salina fisiolgica
Placas de AS y caldo Tood-Hewitt (TH) o infusin cerebro corazn (BHI)
Agua oxigenada 3% (traer 1 frasco por mesa)
Plasma citratado (obtener un tubo por mesa)
Palillos de madera
Pipetas Pasteur
Propipeteador
Coloracin de Gram
Procedimiento
1. Evaluar cada placa de cultivo segn las caractersticas morfolgicas de las colonias, la presencia
o no de hemlisis y valorar el desarrollo bacteriano en escaso, moderado o abundante. En el caso
de AMS observe si hubo la fermentacin del manitol. Registre todas las caractersticas observadas.
2. Realizar el anlisis microscpico de las colonias de inters microbiolgico, segn el tipo de
muestra. Para ello preparar frotis con las colonias a investigar y teir con la coloracin de Gram.
Observar y registrar los resultados.
3. Las colonias de valor diagnstico deben ser purificadas, en AS y en caldo TH o BHI.
4. A partir del crecimiento en AMS, se procede a la investigacin de S. aureus, siguiendo el
esquema de identificacin propuesto (Algoritmo ID CGP, S. aureus).
5. Incubar los medios AS, TH, las pruebas bioqumicas inoculadas y el antibiograma para S. aureus.
Tercer perodo: Identificacin bacteriana
Materiales
Placas de AS

Placas de Mueller Hinton


Solucin salina fisiolgica estril
Patrn de Mc Farland 0.5
Viales con discos de antibiticos
Asa de platino
Agua oxigenada al 3%
Palillos de madera
Lminas portaobjeto
Taxos de bacitracina
Coloracin de Gram

Procedimiento
1. Revisar y verificar la pureza de los repiques realizados en el perodo anterior mediante la tcnica
de Gram.
2. A partir de este repique realizar un inculo con las colonias sospechosas de S. pyogenes sobre
un AS fresco. Aplicar un taxo de bacitracina sobre la siembra e incubar en microaerofilia.
3. Realizar la prueba de la catalasa a partir del caldo TH. Registre el resultado.
4. Interpretar las pruebas bioqumicas inoculadas en el perodo anterior e identificar el
microorganismo.
5. Realizar la prueba de sensibilidad antimicrobiana, en el caso que aplique.
Cuarto perodo: Continuacin con la identificacin bacteriana
1. Observar la presencia de un halo de inhibicin alrededor del taxo de bacitracina. Registre el
resultado.
2. Identificar el microorganismo.
3. Dar lectura al antibiograma.
4. Registrar y elaborar el reporte respectivo.

Autoevaluacin
1. Por qu en el cultivo de un exudado farngeo se debe utilizar sangre de carnero?
2. Clasifique los medios de cultivo empleados en la prctica segn su utilidad en el laboratorio.
3. Cul es la importancia de los portadores nasales de S. aureus?

4. Enumere los patgenos respiratorios y los cuadros clnicos que producen.


5. Explique el fundamento de las pruebas: catalasa, coagulasa y PYR.
6. Cul es la utilidad de la coloracin de Hansel en una faringitis?
7. Mencione las pruebas no convencionales para el diagnstico de una faringitis estreptoccica y
discuta sus ventajas y desventajas.
Bibliografa
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(2) Murray P, Rosenthal K, Kobayashi G, Pfaller M. Microbiologa mdica. Texto Atlas Color. 4 ed.
Espaa: Mosby Elsevier Science; 2002.
(3) R yan K, Ray C. Sherris Microbiologa mdica. 4 ed. Mexico: McGraw-Hill Interamericana; 2004.
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Mdica Panamericana; 2002.
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Atlas Color. 5 ed. Espaa: Mdica Panamericana; 2001.
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(7) R eyes M. Rinitis alrgica en nios. Su relacin con alergenos en el ambiente. (serial on line)
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(8) Universidad Central de Venezuela. Gua de Trabajos prcticos de microbiologa. Caracas:
FEPUVA-UCV; 2000.